Đang tải... (xem toàn văn)
Tình hình nghiên cứu và mục tiêu của đề tài trình bày về: U mô đệm đường tiêu hóa (GIST: Gastrointestinal stromal tumor) là u trung mô thường gặp nhất của đường tiêu hóa, thường có CD117 (+). Đột biến gen KIT gặp trong khoảng 60-80% trường hợp GIST, là đích điều trị của imatinib. Mặc dù thuốc này đã được chỉ định tại Việt Nam, nhưng chưa có nghiên cứu nào khảo sát đột biến gen KIT trong GIST.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học XÁC ĐỊNH ĐỘT BIẾN GEN KIT TRONG U MÔ ĐỆM ĐƯỜNG TIÊU HĨA BẰNG KỸ THUẬT GIẢI TRÌNH TỰ CHUỖI DNA Hồng Anh Vũ*, Hồng Đức Trình**, Ngơ Quốc Đạt***, Hứa Thị Ngọc Hà*** TÓM TẮT Giới thiệu: U mơ đệm đường tiêu hóa (GIST: Gastrointestinal Stromal Tumor) u trung mơ thường gặp đường tiêu hóa, thường có CD117 (+) Đột biến gen KIT gặp khoảng 60 – 80% trường hợp GIST, đích điều trị imatinib Mặc dù thuốc định Việt Nam, chưa có nghiên cứu khảo sát đột biến gen KIT GIST Đối tượng phương pháp nghiên cứu: 32 trường hợp GIST chẩn đốn Bộ mơn Giải Phẫu Bệnh, Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh từ tháng 1/2010 đến 3/2011 khảo sát đột biến KIT exon 9, 11, 13 17 Sau khuếch đại thành công PCR từ bệnh phẩm mô vùi nến, đột biến KIT xác định kỹ thuật giải trình tự chuỗi DNA Kết quả: 22 bệnh nhân có đột biến KIT (68,7%) Đột biến gặp vị trí GIST khảo sát bao gồm dày, ruột non, ruột già, mạc treo sau phúc mạc Cả trường hợp u lớn 10 cm có đột biến so với đột biến phát 10 trường hợp u nhỏ cm Đột biến nhạy với imatinib exon 11 thường gặp (17/22) đa dạng, bao gồm đột biến điểm, đột biến đoạn, chèn đoạn đột biến phức tạp Các đột biến nhạy với imatinib phát exon (1 bệnh nhân) exon 17 (4 bệnh nhân) Kết luận: Kỹ thuật giải trình tự chuỗi DNA ứng dụng chẩn đốn đột biến KIT, giúp lựa chọn bệnh nhân GIST định điều trị imatinib Từ khóa: đột biến gen c-kit, u mơ đệm đường tiêu hóa, giải trình tự chuỗi DNA ABSTRACT C-KIT GENE MUTATIONS IN GIST BY DNA SEQUENCING METHOD Hoang Anh Vu, Hoang Duc Trinh, Ngo Quoc Dat, Hua Thi Ngoc Ha * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 15 - Supplement of No - 2011: 66 - 73 Background: Gastrointestinal stromal tumor (GIST) is the most common mesenchymal tumor of the intestinal tract, often showing CD117 expression About 60 –80% of GISTs have activating mutations of the KIT gene, which are therapeutic targets for imatinib Although imatinib has recently been indicated for GIST patients in Vietnam, KIT mutations were not investigated Material and method: Tumors from 32 patients with GIST diagnosed at Department of Pathology from January 2010 to March 2011 were searched for mutations in KIT exons 9, 11, 13, and 17 PCR was used to amplify exons from DNA of paraffin-embedded tissue samples, followed by direct DNA sequencing Results: In total, 22 mutations were detected in all sites of GIST including stomach, small intestine, colon, mesentery, and retroperitoneum All tumors more than 10 cm in size have mutations, in comparison with of 10 tumors less than cm have mutations Imatinib-sensitive mutations in exon 11 are the most common mutations detected (17 out of 22), which include point mutation, deletion, insertion, and complex mutation In ** Bộ môn Giải Phẫu Bệnh, Trường Đại học Y Dược Cần Thơ Bộ môn Mô – Phôi, Đại học Y Dược TP.HCM *** Bộ môn Giải Phẫu Bệnh, Đại học Y Dược TP.HCM Tác giả liên lạc: TS.BS Hoàng Anh Vũ ĐT: 01222993537 Email: hoangvuxinh@yahoo.com * Chuyên Đề Giải Phẫu Bệnh 67 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 addition, mutation was found in exon and in exon 17 Conclusion: DNA sequencing can detect KIT mutations for selecting GIST patients benefit from imatinib therapy Key words: c-kit mutation, Gastrointestinal Stromal Tumor (GIST), direct DNA sequencing ĐẶT VẤN ĐỀ ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU U mơ đệm đường tiêu hóa (GIST: gastrointestinal stromal tumor) tương đối gặp, chiếm < 1% u ác tính đường tiêu hóa(2) U xuất phát từ tế bào kẽ Cajal, thường biểu CD117 bào tương bề mặt tế bào Ngoài phẫu thuật điều trị chuẩn cho trường hợp chưa di căn, u thường đề kháng với hóa trị liệu kinh điển xạ trị Đối tượng nghiên cứu Phần lớn GIST có mang đột biến gen KIT gen PDGFRA, hai gen thuộc gia đình receptor tyrosine kinase Trong tế bào bình thường gen KIT gen PDGFRA hoạt hóa có gắn với chất truyền tín hiệu ngoại bào (SCF: Stem Cell Factor) Đột biến KIT xảy 60 – 80% trường hợp GIST gen KIT hoạt hóa liên tục cách độc lập với SCF(14) Trong nhóm GIST khơng có đột biến KIT, khoảng phân nửa số bệnh nhân có đột biến PDGFRA Đột biến gen đích điều trị imatinib Tuy nhiên, mức độ nhạy với imatinib giống kiểu đột biến Đột biến KIT thường gặp exon 11 nhạy với imatinib; đột biến exon 9, 13 17 gặp nhạy với imatinib(5) Vì thế, việc xác định đột biến KIT có ý nghĩa điều trị imatinib cho bệnh nhân Tại Việt Nam, imatinib định điều trị cho GIST giai đoạn tiến xa với đáp ứng ban đầu đầy triển vọng báo cáo thời gian gần đây(17), chưa có nghiên cứu khảo sát đột biến KIT bệnh nhân GIST Nghiên cứu nhằm xác lập quy trình kỹ thuật giải trình tự chuỗi DNA để xác định đột biến KIT từ bệnh phẩm mô vùi nến mô tả đặc điểm đột biến KIT bệnh nhân Việt Nam 68 32 trường hợp GIST chẩn đốn Bộ mơn Giải Phẫu Bệnh – Đại học Y Dược TP.HCM thời gian từ tháng 1/2010 đến 3/2011 Chẩn đoán GIST xác định tiêu nhuộm Hematoxylin – Eosin nhuộm hóa mơ miễn dịch với dấu ấn CD117 dương tính (+++) Tách chiết genomic DNA Bệnh phẩm mô vùi nến dùng để chẩn đốn giải phẫu bệnh Vùng mơ ung thư đánh dấu lam giải phẫu bệnh để phân biệt với vùng mô lành xung quanh cạo vào tube ly tâm 1,5 mL nhằm tăng khả chẩn đoán đột biến Xylene (Merck, Đức) thêm vào tube ly tâm lần để khử nến, sau rửa lại ethanol tuyệt đối để khô trước ủ với proteinase K (Invitrogen, Mỹ) 480C 16 Tinh sản phẩm DNA sau ủ proteinase K thực phenol – chloroform (Invitrogen, Mỹ) Cuối cùng, kết tủa DNA ethanol tuyệt đối muối NH4OAC định nồng độ DNA spectrophotometer Khuếch đại exon PCR Các đoạn mồi thiết kế phần mềm Oligo 4.1 dựa trình tự chuẩn KIT mang accession number NG_007456 GenBank (Bảng 1) Trong tube PCR có tổng thể tích 50 µL, thành phần gồm có PCR buffer, dNTP (250 µM cho loại), loại mồi xi ngược (0,5 µM cho loại), 1,25 unit TaKaRa TaqTM HotStart Polymerase (Takara, Nhật Bản) 20 ng genomic DNA Chu kỳ luân nhiệt thực máy GeneAmp® PCR system 9700 (Applied Biosystems, Mỹ) bao gồm giai đoạn biến tính ban đầu 980C phút, theo sau 40 chu kỳ gồm biến tính 980C 10 giây, Chuyên Đề Giải Phẫu Bệnh Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 gắn mồi 600C 15 giây, tổng hợp chuỗi DNA 720C phút kết thúc giai đoạn kéo dài sản phẩm 720C phút Sản phẩm PCR phát điện di thạch agarose 2% có nhuộm ethidium bromide quan sát soi gel Pringraph (Atto, Nhật Bản) Sản phẩm PCR tinh QIAquick Gel Extraction kit (Qiagen, Mỹ) kiểm tra lại điện di thạch agarose 2% Bảng 1: Các đoạn mồi dùng nghiên cứu đột biến KIT Tên mồi Trình tự DNA (5’ -3’) KIT-9F KIT-9R KIT-11F KIT-11R KIT-13F KIT-13R KIT-17F KIT-17R AGTATGCCACATCCCAAGTG CAGAGCCTAAACATCCCCTTA CCAGAGTGCTCTAATGACTG ACCCAAAAAGGTGACATGGA CATCAGTTTGCCAGTTGTGC CAGCTTGGACACGGCTTTAC GAACATCATTCAAGGCGTAC TTTACATTATGAAAGTCACAGG Exon khuếch đại Sản phẩm PCR (bp) 317 11 236 13 182 17 392 Thực giải trình tự chuỗi DNA Sản phẩm PCR tinh thực phản ứng cycle sequencing với BigDye V3.1 từ Applied Biosystems, theo chiều xuôi ngược cho exon Sản phẩm sau kết tủa ethanol, hòa tan Hi-Di formamide, biến tính 950C phút trước làm lạnh đột ngột Trình tự DNA đọc máy ABI 3130 Genetic Analyzer, với POP-7 polymer capillary 50 cm (Applied Biosystems, Mỹ) Kết phân tích phần mềm SeqScape, so sánh với trình tự tham chiếu KIT mang accession number NG_007456 để chẩn đốn tình trạng đột biến exon KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Về giải trình tự gen KIT mô u vùi nến Gen KIT gồm 21 exon, mã hóa cho protein tên có 976 acid amin, thuộc gia đình thụ thể tyrosine kinase loại III Protein phát nhuộm hóa mơ miễn dịch Chun Đề Giải Phẫu Bệnh Nghiên cứu Y học với kháng thể kháng protein KIT, hay gọi kháng thể kháng CD117 GIST dương tính với dấu ấn CD117 trường hợp KIT đột biến KIT không đột biến(13) Đột biến KIT gặp nhiều loại ung thư khác bệnh bạch cầu cấp dòng tủy(6), u tế bào mầm tinh hoàn buồng trứng(3,11) Trong GIST, đột biến KIT chủ yếu xảy exon 9, 11, 13 17(8,16) Để giải trình tự chuỗi DNA, bước định phải khuếch đại exon muốn tìm đột biến từ mơ vùi nến Chúng thiết kế cặp mồi đặc hiệu cho exon, thành công việc khuếch đại exon PCR (Hình 1A) Trong điều kiện PCR thiết lập, nhiệt độ bắt cặp cặp mồi 600C, giúp khuếch đại lúc exon chương trình luân nhiệt thuận lợi Trong số trường hợp, kết điện di thạch agarose cho thấy băng có kích thước bất thường, tương ứng với đột biến thêm nucleic acid Bản chất đột biến xác định kỹ thuật giải trình tự chuỗi DNA Chúng tơi phát 22 trường hợp có đột biến 32 trường hợp khảo sát (68,7%), tương đương với số liệu hầu hết nghiên cứu khác có sử dụng mơ vùi nến(7,13,16) Bảng cho thấy đột biến có khuynh hướng thường gặp khối u lớn 10 cm (9/9), gặp u nhỏ cm (4/10) Tuy nhiên, số liệu nghiên cứu nhỏ, chúng tơi cần thêm nhiều trường hợp để rút kết luận mối liên quan đột biến kích thước u Về chất, đột biến phát đa dạng, bao gồm đột biến điểm, đột biến đoạn, chèn đoạn đột biến phức tạp (Hình 1B – D) Kết chứng tỏ kỹ thuật đáng tin cậy việc phát đột biến KIT từ bệnh phẩm giải phẫu bệnh qua thời gian dài lưu trữ Đây bệnh phẩm thường sử dụng chẩn đoán lâm sàng, nghiên cứu chúng tơi ứng dụng cho trường hợp cần xác định đột biến KIT 69 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 cho bệnh nhân GIST muốn điều trị imatinib Tỷ lệ đột biến số báo cáo cao hơn, thường khảo sát đột biến từ mơ tươi, khảo sát tồn exon KIT A M BN B BN khảo sát mức RNA(1) Tuy nhiên điều kiện không dễ thực thực hành lâm sàng N C D Hình 1: Phát đột biến KIT giải trình tự chuỗi DNA (A) Khuếch đại exon 9, 11, 13 17 (các giếng – 4) bệnh nhân PCR Bệnh nhân có băng thêm đoạn exon 11 (giếng 2) (B) Hình ảnh đột biến thêm đoạn exon (C) Đột biến điểm exon 17 (D) Các đột biến điểm đoạn exon 11 hướng hay gặp u có kích thước Về ý nghĩa lâm sàng – giải phẫu bệnh lớn, xuất đột biến không liên quan tới trường hợp đột biến KIT đặc điểm mô học u hay số phân bào Trong 22 trường hợp có đột biến, 17 đột Kết gợi ý đột biến exon 11 nên biến exon 11 – chiếm 53,1% (Bảng 3) khảo sát cho tất trường hợp GIST Trong tất nghiên cứu GIST, đột biến Bảng 2: Đặc điểm lâm sàng – giải phẫu bệnh đột exon 11 thường gặp đột biến KIT nghiên cứu biến nhạy với imatinib(7,10) Với bệnh Có đột biến Khơng nhân này, liều điều trị imatinib khuyến đột biến Exon Exon 11 Exon 17 cáo 400 mg/ngày(4) Bảng cho thấy đột Số trường hợp (n = 32) 17 10 biến exon 11 xuất với tỷ lệ tương Tuổi trung bình 76 58 55 52 đương bệnh nhân nam nữ, gặp Giới Nam (15) tính tất vị trí GIST khảo sát, bao Nữ (17) gồm dày, ruột non, ruột già, sau phúc mạc Vị trí Dạ dày (17) Ruột non (9) mạc treo Mặc dù đột biến có khuynh Mạc treo (4) 70 Chuyên Đề Giải Phẫu Bệnh Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Có đột biến Khơng Exon Exon 11 Exon 17 đột biến Sau phúc mạc 1 (2) Loại tế Hình thoi (24) 12 bào Dạng biểu mô (5) Hỗn hợp (3) Kích < cm (10) 2 thước u 5-10 cm (13) > 10 cm (9) Nghiên cứu Y học Có đột biến Khơng Exon Exon 11 Exon 17 đột biến Chỉ số < PB/50 QTL phân (17) bào 5-10 PB/50 QTL (5) > 10 PB/50 QTL (10) Bảng 3: Đặc điểm giải phẫu bệnh GIST có đột biến KIT nghiên cứu STT Mã số GPB Y10-624 Y10-11239 Y10-11281 Y10-25033 S11-337 S11-1367 Y10-4510 Y10-26257 Y10-8341 10 Y10-10920 11 Vị trí đột biến Exon Số ca Loại đột biến Vị trí u Y503_F504 ins AY RN Q556_V559 del Kích thước Loại mơ Phân Giai (cm) học bào đoạn u Thoi 21 KXD RN 10 SPM 11 ĐT TNAT Cao 17 DCPM Cao Thoi KKT Cao 21 DBM KKT Cao DD HH KT Thấp DD Thoi KKT Trung bình RN 20 Thoi 12 KKT Cao DD Thoi KKT Trung bình V559D V560E R586_N587ins14 RN Thoi KKT Trung bình Q549-V559 del DD 18 Thoi 18 KKT Cao Y10-17769 Q556_E561 del DD DBM KT Thấp 12 Y10-19655 W557_V559 ins NP (del K558 ins NP) MT 18 HH DCG Cao 13 Y10-19261 N566_P572 del DD 14 Thoi 53 KKT Cao 14 Y10-19656 W557C DD Thoi KT Trung bình 15 Y10-23494 N567_P577 del ĐT 15 HH 11 KKT Cao 16 Y10-23658 M552_K558 del DD Thoi KT Trung bình 17 Y10-24193 Y578_D579 ins DPPY DD Thoi 12 KT Cao 18 Y10-7896 Phức tạp RN 11 DBM KKT Cao 19 Y10-6182 RN Thoi KT Thấp 20 Y10-9250 DD Thoi KT Thấp 21 Y10-13755 MT Thoi KT Thấp 22 Y10-3509 DD 11 Thoi KKT Cao Exon 11 Exon 17 N822K A794T (DD: Dạ dày; RN: ruột non; ĐT: Đại tràng; MT: Mạc treo; DBM: Dạng biểu mơ; HH: Hỗn hợp; TNAT: Tiềm ác tính; KKT: Không khu trú; KT: Khu trú; DCPM: Di phúc mạc; DCG: Di gan) Tương quan tình trạng đột biến KIT với đặc điểm lâm sàng giải phẫu bệnh Về mối tương quan tình trạng đột biến KIT với đặc điểm lâm sàng giải phẫu bệnh giá trị tiên lượng, sau tổng hợp nhiều nghiên cứu khác nhau, tác giải Lasota có bảng nhận xét sau (Bảng 4)(13): Bảng 4: Tổng hợp y văn đặc điểm lâm sàng – giải phẫu bệnh GIST liên quan tới đột biến KIT Chuyên Đề Giải Phẫu Bệnh 71 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Vị trí đột biến Đột biến mức độ protein Biểu lâm sàng Exon Ala502_Tyr503dup >90% đột biến kiểu gặp GIST ruột non Exon 11 Exon 13 Exon 17 Giá trị tiên lượng Ưu loại tế Khơng có giá trị tiên lượng GIST bào hình thoi ruột Trp557_Lys558del Loại tế bào hình Biểu ác tính hơn, đặc biệt Mất đoạn GIST dày GIST nơi ống tiêu hóa thoi loại biểu Mất đoạn-Chèn đoạn mô Đột biến điểm Biểu ác tính u dày Nhân đoạn Thường GIST dày Biểu ác tính u dày Biểu ác tính nhiều u Lys642Glu GIST nơi ống tiêu hóa Ưu loại tế dày bào hình thoi Gặp GIST ruột gấp hai Asn822Lys Khơng có giá trị tiên lượng lần GIST nơi khác Về đột biến KIT exon 11 Hiện nay, nhiều bất đồng giá trị tiên lượng đột biến KIT exon 11 Các nghiên cứu trước ghi nhận đột biến thường gặp GIST kích thước lớn, có hoạt động phân bào mạnh, có mối liên quan với GIST ác tính Tuy nhiên, nghiên cứu sau ghi nhận đột biến exon 11 thấy GIST lành tính, GIST phát tình cờ ác tính, khơng có mối liên quan rõ rệt đột biến exon 11 tiềm ác tính(7,13) Theo Bảng 3, 17 ca đột biến exon 11 chúng tơi có ca đột biến điểm 12 ca đột biến điểm (mất đoạn, đảo đoạn, chèn đoạn, đột biến phức tạp) Trong ca đột biến điểm, có ca có tiềm ác tính cao, ca lại có tiềm ác tính thấp trung bình Ngược lại, 12 ca khơng phải đột biến điểm có ca có tiềm ác tính thấp trung bình, lại ca có tiềm ác tính cao Cũng theo Bảng 3, đặc điểm giai đoạn u, ghi nhận ca đột biến điểm có ca u giai đoạn không khu trú (thủng tạng xâm lấn quan lân cận), ca giai đoạn khu trú Trong 12 trường hợp khơng đột biến điểm có ca giai đoạn khu trú, ca giai đoạn khơng khu trú, ca có di (1 ca di gan, ca di khắp phúc mạc thành bụng), nghĩa trường hợp đột biến điểm có xu hướng xâm lấn mạnh Như nghiên cứu bước đầu ghi nhận kết phù hợp với y văn, 72 Loại mô học đột biến điểm exon 11 có tiên lượng tốt loại đột biến đoạn, chèn đoạn, đảo đoạn Về đột biến KIT exon exon 17 Đa số nghiên cứu trước cho thấy tỷ lệ đột biến exon 11 thấp, khoảng 10%(12,18) Tuy nhiên, nghiên cứu cho thấy phân bố tần suất đột biến thay đổi theo chủng tộc Đột biến thêm acid amin exon (Y503-F504 ins AY) gặp GIST dày bệnh nhân Âu – Mỹ, tương đối thường gặp (32%) bệnh nhân gốc châu Á(12) Trong nghiên cứu này, phát bệnh nhân có đột biến exon (3,1%), khơng có bệnh nhân đột biến exon 13, tỷ lệ đột biến exon 17 cao hẳn nghiên cứu khác (3 bệnh nhân có đột biến N822K bệnh nhân có đột biến A794T, 12,5%) Các số liệu bước đầu gợi ý đột biến gen ung thư quần thể khác mang đặc trưng riêng biệt cần khảo sát thêm Về ý nghĩa đột biến KIT với tình trạng nhạy imatinib Kể từ năm 2000, bệnh nhân GIST điều trị thành công với thuốc ức chế tyrosine kinase imatinib mesylate (Glivec, Norvatis), nhiều bệnh nhân GISTs điều trị thành cơng với liệu pháp nhắm trúng đích phân tử này(13) Tuy nhiên, đáp ứng điều trị với imatinib phụ thuộc nhiều vào tình trạng đột biến KIT (Bảng 5)(13) Chuyên Đề Giải Phẫu Bệnh Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Theo Bảng 5, thấy ý nghĩa lớn việc giải trình tự gen KIT với hiệu liệu pháp nhắm trúng đích phân tử imatinib, phương diện tiên đoán đáp ứng điều trị liều điều trị So với đột biến exon 11 đột biến exon nhạy với imatinib hơn, nên liều điều trị khuyến cáo 800 mg/ngày thay 400 mg/ngày, thay sunitinib(5,18) Tuy gặp, chẩn đoán đột biến exon thật cần thiết định điều trị imatinib Tỷ lệ đột biến cao exon 17 đáng ý bệnh nhân Việt Nam N822K đột biến kháng imatinib(9,13,15), bệnh nhân cần lựa chọn mơ thức điều trị thích hợp khác ngồi loại thuốc Bảng 5: Liên quan kiểu đột biến KIT với mức độ nhạy imatinib thực nghiệm đáp ứng với imatinib điều trị theo nghiên cứu thử nghiệm lâm sàng Mỹ Châu Âu Exon Kiểu đột biến KIT (n) Mức độ nhạy imatinib Ala502_Tyr503dup Nhạy với imatinib thực nghiệm Đáp ứng hoàn toàn (5%); đáp ứng phần (29%); bệnh ổn định (47%), bệnh tiến triển (17%) (nghiên cứu pha III EORTC) Liều cao gia tăng thời gian lui bệnh 11 Mất đoạn/mất đoạn- Là loại đột biến nhạy chèn đoạn imatinib thường gặp thực nghiệm Đột biến điểm Đột biến gặp Val559Ile Nhân đoạn kháng imatinib thực nghiệm Đáp ứng hoàn toàn (6%); đáp ứng phần (61%); bệnh ổn định (25%), bệnh tiến triển (3%) (nghiên cứu pha III EORTC) 13 Lys642Glu (8) Nhạy với imatinib thực nghiệm Glu635Lys (1) Đáp ứng phần bệnh ổn định ca 17 Asp820Tyr (1) Asn822Lys Asn822His nhạy imatinib thực nghiệm Asn822Lys (2) Đáp ứng phần (4 ca): Asn822His (2) Asn820Tyr, Asn822Lys, Asn822His Kháng imatinib nguyên phát: Asn822Lys Chuyên Đề Giải Phẫu Bệnh Nghiên cứu Y học Theo Bảng 5, GIST có KIT khơng đột biến có đáp ứng với điều trị imatinib không hiệu GIST có đột biến gen KIT exon 11 Nghiên cứu chúng tơi có 10 trường hợp KIT khơng đột biến, cần khảo sát thêm đột biến gen PDGFRA Các trường hợp khơng có đột biến gen dự báo đáp ứng không tốt với imatinib KẾT LUẬN Đột biến KIT gặp 68,7% trường hợp GIST đa dạng, bao gồm đột biến exon 11 nhạy với imatinib đột biến nhạy kháng imatinib ngồi exon 11 Giải trình tự chuỗi DNA để khảo sát đột biến KIT nên thực trước khởi đầu điều trị imatinib cho bệnh nhân GIST TÀI LIỆU THAM KHẢO Andersson J, Sjogren H, Meis-Kindblom JM, Stenman G, Aman P, Kindblom LG (2002) The complexity of KIT gene mutations and chromosome rearrangements and their clinical correlation in gastrointestinal stromal (pacemaker cell) tumors Am J Pathol;160(1):15-22 Antonescu CR (2011) The GIST paradigm: lessons for other kinase-driven cancers J Pathol;223(2):251-61 Biermann K, Goke F, Nettersheim D, Eckert D, Zhou H, Kahl P, et al (2007) c-KIT is frequently mutated in bilateral germ cell tumours and down-regulated during progression from intratubular germ cell neoplasia to seminoma J Pathol;213(3):311-8 Blanke CD, Rankin C, Demetri GD, Ryan CW, von Mehren M, Benjamin RS, et al (2008) Phase III randomized, intergroup trial assessing imatinib mesylate at two dose levels in patients with unresectable or metastatic gastrointestinal stromal tumors expressing the kit receptor tyrosine kinase: S0033 J Clin Oncol;26(4):626-32 Blay JY, von Mehren M, Blackstein ME (2010) Perspective on updated treatment guidelines for patients with gastrointestinal stromal tumors Cancer;116(22):5126-37 Cairoli R, Beghini A, Grillo G, Nadali G, Elice F, Ripamonti CB, et al (2006) Prognostic impact of c-KIT mutations in core binding factor leukemias: an Italian retrospective study Blood;107(9):3463-8 Corless CL, McGreevey L, Haley A, Town A, Heinrich MC (2002) KIT mutations are common in incidental gastrointestinal stromal tumors one centimeter or less in size Am J Pathol;160(5):1567-72 Gomes AL, Gouveia A, Capelinha AF, de la Cruz D, Silva P, Reis RM, et al (2008) Molecular alterations of KIT and PDGFRA in GISTs: evaluation of a Portuguese series J Clin Pathol;61(2):2038 Heinrich MC, Corless CL, Blanke CD, Demetri GD, Joensuu H, Roberts PJ, et al (2006) Molecular correlates of imatinib 73 Nghiên cứu Y học 10 11 12 13 14 74 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 resistance in gastrointestinal stromal tumors J Clin Oncol;24(29):4764-74 Heinrich MC, Maki RG, Corless CL, Antonescu CR, Harlow A, Griffith D, et al (2008) Primary and secondary kinase genotypes correlate with the biological and clinical activity of sunitinib in imatinib-resistant gastrointestinal stromal tumor J Clin Oncol;26(33):5352-9 Hoei-Hansen CE, Kraggerud SM, Abeler VM, Kaern J, RajpertDe Meyts E, Lothe RA (2007) Ovarian dysgerminomas are characterised by frequent KIT mutations and abundant expression of pluripotency markers Mol Cancer;6:12 Lasota J, Miettinen M (2006) KIT and PDGFRA mutations in gastrointestinal stromal tumors (GISTs) Semin Diagn Pathol;23(2):91-102 Lasota J, Miettinen M (2008) Clinical significance of oncogenic KIT and PDGFRA mutations in gastrointestinal stromal tumours Histopathology;53(3):245-66 Lasota J, Wozniak A, Sarlomo-Rikala M, Rys J, Kordek R, Nassar A, et al (2000) Mutations in exons and 13 of KIT gene are rare events in gastrointestinal stromal tumors A study of 200 cases Am J Pathol;157(4):1091-5 15 16 17 18 19 Liegl B, Kepten I, Le C, Zhu M, Demetri GD, Heinrich MC, et al (2008) Heterogeneity of kinase inhibitor resistance mechanisms in GIST J Pathol;216(1):64-74 Miettinen M, Makhlouf H, Sobin LH, Lasota J (2006) Gastrointestinal stromal tumors of the jejunum and ileum: a clinicopathologic, immunohistochemical, and molecular genetic study of 906 cases before imatinib with long-term follow-up Am J Surg Pathol;30(4):477-89 Nguyễn Duy Phúc, Phạm Xuân Dũng, Trần Nguyên Hà, Nguyễn Diệp Kiều Hạnh (2010) Khảo sát hiệu an toàn imatinib mesylate điều trị bướu mơ đệm đường tiêu hóa tái phát, di căn: cập nhật sau năm điều trị Y học TP Hồ Chí Minh;14(4):239-246 Pierotti MA, Tamborini E, Negri T, Pricl S, Pilotti S (2011) Targeted therapy in GIST: in silico modeling for prediction of resistance Nat Rev Clin Oncol;8(3):161-70 Sakurai S, Oguni S, Hironaka M, Fukayama M, Morinaga S, Saito K (2001) Mutations in c-kit gene exons and 13 in gastrointestinal stromal tumors among Japanese Jpn J Cancer Res;92(5):494-8 Chuyên Đề Giải Phẫu Bệnh ... nghiên c u khảo sát đột biến KIT bệnh nhân GIST Nghiên c u nhằm xác lập quy trình kỹ thuật giải trình tự chuỗi DNA để xác định đột biến KIT từ bệnh phẩm mô vùi nến mô tả đặc điểm đột biến KIT bệnh... với đột biến thêm nucleic acid Bản chất đột biến xác định kỹ thuật giải trình tự chuỗi DNA Chúng tơi phát 22 trường hợp có đột biến 32 trường hợp khảo sát (68,7%), tương đương với số li u h u hết... sánh với trình tự tham chi u KIT mang accession number NG_007456 để chẩn đốn tình trạng đột biến exon KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Về giải trình tự gen KIT mô u vùi nến Gen KIT gồm 21 exon, mã hóa cho