Đang tải... (xem toàn văn)
Bài viết nghiên cứu quy trình công nghệ chiết tách hoạt chất sinh học từ lá của cây Thông đỏ và cây Dừa cạn Việt Nam phục vụ sản xuất thuốc chống ung thư và xuất khẩu. Thuộc Chương trình Khoa học Công nghệ trọng điểm cấp Nhà nước.
TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2014 - KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CHƢƠNG TRÌNH KHCN KC.10/11-15 NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT, TINH CHẾ 10-DEACETYL BACCATIN III, TAXOL VÀ CÁC TAXOID KHÁC TỪ THÔNG ĐỎ LÁ DÀI (TAXUS WALLICHIANA ZUCC) TRỒNG Ở ĐÀ LẠT TRÊN QUY MÔ PILOT Trần Cơng Luận*; Bùi Thế Vinh*; Vương Chí Hùng**; Nguyễn Tiến Hùng** TĨM TẮT X©y dùng quy trình chiết xuất, tinh chế taxoid từ Thông đỏ kỹ thuật chiết ngấm kiệt, sắc ký trao đổi diaion HP-20, sắc ký cột silica gel pha thường Phương pháp đơn giản, hiệu 10-deacetyl baccatin III (10-DAB) taxoid khác thu có độ tinh cao, hiệu suất thu nhận đáng kể (10-DAB 0,072% taxol 0,0014%) Quy trình áp dụng quy mô lớn (25 kg nguyên liệu/mẻ) để sản xuất 10-DAB, taxol taxoid khác từ nguyên liệu Thơng đỏ trồng Lâm Đồng * Từ khố: 10-deacetyl baccatin III; Taxol; Taxoid; Thông đỏ dài PROCESS OF extraction AND PURIFICATION OF 10-DEACETYL BACCATIN III AND TAXOL OF TAXUS WALLICHIANA CULTIVATED IN LAMDONG PROVINCE SUMMARY The process for isolation of taxoids from Taxus wallichiana Zucc was developed by the effective and simple technique as diaion HP-20 ion exchange and silica gel normal phase chromatography By using general extraction and chromatography method, 10-deacetyl baccatin III (10-DAB) and related taxoid were isolated with the high purity and remarkable yield (0,072 % for 10-DAB and 0,0014 % for taxol) This process can be applied for large-scale to produce 10-deacetyl baccatin III and tatxol as well as the other derivatives from the leaf of Taxus wallichiana cultivated in Lamdong province * Key words: Taxus wallichiana; Taxol; Taxuspine F; Baccatin III; Baccatin III derivatives ĐẶT VẤN ĐỀ Paclitaxel (taxol), loại thuốc chữa ung thư hành, phân lập từ Thơng đỏ Thái Bình Dương (Taxus brevifolia Nutt) Năm 1969, Wani CS xác định cấu trúc lập thể (1971) ứng dụng lâm sàng Mỹ, Nhật, Pháp để điều trị ung thư buồng trứng, ung thư vú, ung thư phổi Cục Quản lý Dược Thực phẩm Hoa Kỳ (FDA) cấp phép sử dụng từ năm 1992 Hãng Bristol-Myers Squibb (BMS) sớm có hợp tác với Viện Ung thư Quốc gia (National Cancer Institute-NCI) để phát triển thương mại hóa taxol * Công ty Dược Vimedimec ** Đại học Y-Dược TP HCM Ng-êi ph¶n håi: (Corresponding): Trần Cơng Luận (congluan53@gmail.com) Ngày nhận bài: 25/12/2013; Ngày phản biện đánh giá báo: 14/1/2014 Ngày báo đ-ợc đăng: 17/1/2014 16 TP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2014 - KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CHƢƠNG TRÌNH KHCN KC.10/11-15 Mỹ số nước châu Âu thành công việc sản xuất taxol (hợp chất trị bệnh ung thư), lại chiết từ vỏ Thông đỏ Công nghệ làm nhanh lão hóa gây cạn kiệt nguồn cung cấp Do đó, xu hướng chiết tách taxol, đồng thời tận dụng taxoid khác để bán tổng hợp taxol cành, loài Thơng đỏ Ở nước ta, lồi Thơng đỏ dài (Taxus wallichiana Zucc.) xem nguồn nguyên liệu tiềm để sản xuất thuốc trị bệnh ung thư, taxoid có Thơng đỏ có hàm lượng cao [2, 4, 7] Hiện nước chưa có nghiên cứu nµo cơng bố quy trình pilot thu nhận taxoid từ Thông đỏ dài Báo cáo thơng báo quy trình chiết tách, tinh chế taxoid Thông đỏ dài quy mô pilot với mục tiêu cung cấp nguyên liệu taxol tiền chất bán tổng hợp taxol cho sản xuất thuốc điều trị ung thư Đây mét phÇn kết đề tài “Nghiên cứu quy trình cơng nghệ chiết tách hoạt chất sinh học từ Thông đỏ Dừa cạn Việt Nam phục vụ sản xuất thuốc chống ung thư xuất Thuộc Chương trình Khoa học Cơng nghệ trọng điểm cấp Nhà nước NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Nguyên liệu Nguyên liệu: cành Thông đỏ dài trồng Lâm Đồng Trung tâm Trồng Chế biến thuốc Đà Lạt cung cấp Nguyên liệu sau thu hái, rửa sạch, phơi khô, xay thành bột bảo quản nhiệt độ phòng đến chiết xuất Phƣơng pháp nghiªn cøu - Chiết xuất: làm ẩm bột nguyên liệu ngâm 24 giờ, chiết ngấm kiệt MeOH (tỷ lệ 1:6), thu dịch chiết Cô giảm áp dịch chiết đến dạng cao sệt, thu cao MeOH thô Dùng cao MeOH thơ hòa với nước, lắc với dichloromethan, sau cô giảm áp dịch dichloromethan thu cao CH2Cl2 Nạp cao CH2Cl2 vào cột diaion HP20 (15 cm x 110 cm), rửa giải với dung môi: nước, MeOH 10%, MeOH 60%, MeOH 80%, MeOH 100% - Phân lập hợp chất: + Phân đoạn cột diaion HP-20 MeOH 60%: s¾c ký cét (SKC) silica gel phân đoạn MeOH 60% với hệ dung môi giải ly ete dầu hỏa-aceton có độ phân cực tăng dần, thu phân đoạn (III1 → 3) chất kết tinh T1 SKC silica gel phân đoạn III2 với hệ dung mơi CHCl3-MeOH có độ phân cực tăng dần (100% CHCl3 → CHCl3-MeOH 100:5), thu ba phân đoạn III2-1, III2-2, III2-3 Phân đoạn III2-2 có hai vết chính, tiếp tục tiến hành SKC silica gel pha đảo với hệ dung môi MeOH-H2O (40:60), phân lập hai chất tinh sạch, ký hiệu T2, T3 SKC silica gel phân đoạn III3 với hệ dung mơi CHCl3-MeOH có độ phân cực tăng dần (100% CHCl3 → CHCl3-MeOH 95:5), thu phân đoạn III3-1 (100% CHCl3), III3-2 kết tinh màu trắng, ký hiệu T4 Phân đoạn III3-1 tiếp tục qua SKC silica gel với hệ dung môi giải ly ete dầu hỏaaceton có độ phân cực tăng dần thu mét kết tinh trắng tinh sạch, ký hiệu T5 + Phân đoạn cột diaion HP-20 MeOH 60%: SKC silica gel phân đoạn MeOH 100% với hệ dung môi giải ly ete dầu hỏa-aceton có độ phân cực tăng dần thu kết tinh hình kim trắng, ký hiệu T6 - Phương pháp phân tích: phổ IR đo máy IR FTIR 8201 (Shimadzu) Phổ 1H, 13C NMR đo máy Bruker AM500 FT-NMR JEOL JNM GX-400, đo 18 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2014 - KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CHƢƠNG TRÌNH KHCN KC.10/11-15 CDCl3 vµ MeOD với tetramethyl silan (TMS) làm chất chuẩn nội Sắc ký lớp mỏng thực mỏng tráng sẵn silica gel 60F254 (Merck) Hệ khai triển CHCl3MeOH Diaion HP-20 (Misubishi) silica gel 60 F254 (0,063-0,200 mm) (Merck) dùng SKC KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BN LUN Kết chiết xuất phân lập Chiết ngấm kiệt 25 kg bột nguyên liệu Thông đỏ MeOH (1:6), thu khoảng 150 lít dịch chiết Sau cô giảm áp, thu kg cao MeOH Hòa lít nước vào kg cao MeOH, lắc phân đoạn với khoảng 12 lít CH2Cl2, giảm áp dịch trích ly thu 200 g cao CH2Cl2 Nạp 200 g cao CH2Cl2 vào cột diaion HP-20, rửa giải dung mơi nước (30 lít), MeOH 10% (60 lít), MeOH 60% (150 lít), MeOH 80% (60 lít), MeOH 100% (60 lít) Phân đoạn cột diaion HP-20 MeOH 60% (42 g) thực SKC hấp phụ silica gel pha thường pha đảo với nhiều hệ dung mơi giải ly có độ phân cực khác nhau, phân lập chất, ký hiệu: chất T1 (500 mg; 0,012%), T2 (160 mg; 0,0038%), T3 (50 mg; 0,0012%), T4 (3 g; 0,072%) T5 (93 mg; 0,0022%) Phân đoạn cột diaion HP-20 MeOH 100% (45 g), thực SKC hấp phụ silica gel pha thường thu T6 (60 mg; 0,0014%) Kết xác định cấu trúc hóa học chất chiết đƣợc - Chất T1 + Được phân lập dạng bột màu trắng, tan MeOH, tan hệ dung môi CHCl3-MeOH, sắc ký lớp mỏng hệ dung mơi CHCl3-MeOH (9:1) cho vết tắt quang bước sóng UV 254 nm Hiện hình H 2SO4 10%/EtOH, xuất vết tròn màu hồng nhạt với Rf = 0,48 Hiệu suất thu nhận 0,012% Dựa vào phổ NMR chiều chiều, đối chiếu tài liệu tham khảo [9] nhận định T1 taxuspine F + Phổ 1H NMR cho tín hiệu cộng hưởng H [1,74 (3H, s, 16-Me); 1,12 (3H, s, 17-Me); 2,31 (3H, s, 18-Me) 0,97 (3H, s, 19-Me)]; H [2,05 (3H, s, 2-OAc), 2,05 (3H, s, 7-OAc), 2,06 (3H, s, 9-OAc) 2,01 (3H, s, 10-OAc)], proton oxymetin H [5,60 (1H, m, H-2); 4,20 (1H, m, H-5), 5,53 (1H, m, H-7), 5,91 (1H, d, H-9) 6,26 (1H, d, H-10)], proton metylen H [1,63, m; 1,94, m, (H-6a H-6b); 2,31, m; 2,78, dd, (H-14a H-14b) proton metylen gắn carbon olefin H [4,81 (1H, s, H-20a) 5,21 (1H, s, H-20b)], proton metin H [2,19 (1H, dd, H-1)] H [3,53 (1H, d, H-3)] + Phổ 13C NMR cho tín hiệu 28 C gồm: carbon methyl, carbon methylen carbon tứ cấp [C 37,7 (C-15)] vùng trường cao, carbon carbonyl [C 199,4 (C-9)], carbon carbonyl ester [C 169,7 (10-OAc), 169,3 (2-OAc), 169,1 (7-OAc) 169,1 (9-OAc)], carbon olefin bậc bốn [C 144,7 (C-4); 149,8 (C-11) 139,1 (C-12)], carbon olefin bậc hai [C 115,4 (C-20)], carbon bậc ba mang oxygen [C 68,9 (C-2), 74,5 (C-5), 69,5 (C-7), 75,1 (C-9) 72,7 (C-10)], carbon bậc ba [C 48,8 (C-1) 39,7 (C-3)] carbon bậc bốn [C 144,7 (C-4)] Hình 1: Cấu trúc hóa học taxuspin F (T1) 19 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2014 - KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CHƢƠNG TRÌNH KHCN KC.10/11-15 - Chất T2: + Được phân lập dạng bột màu trắng, tan MeOH, tan hệ dung môi CHCl3-MeOH, sắc ký lớp mỏng hệ dung môi CHCl3-MeOH (9:1) cho vết tắt quang bước sóng 254 nm Hiện hình H2SO4 10%/EtOH xuất vết tròn màu nâu với Rf = 0,18 Hiệu suất thu nhận 0,0038% Dựa vào phổ NMR chiều, đối chiếu tài liệu tham khảo [10] nhận định T2 19-hydroxybaccatin III + Phổ 1H-NMR cho tín hiệu cộng hưởng H [1,09 (3H; s; 16-Me); 1,29 (3H; s; 17Me); 1,99 (3H; s; 18-Me)]; H [2,30 (3H; s; 4OAc) H [2,24 (3H; s; 10-OAc)], proton oxymethin H [6,43 (1H; d; 6,5 Hz; H-2); 5,05 (1H; d; 9,0 Hz; H-5); 4,40 (1H; m; H-7); 6,43 (1H; s; H-10) 4,80 (1H; m; H-13)], proton methylen H [2,54 (m); 1,78 (m) (H6a H-6b) 2,14 (m, 2H-14)], proton methin H [3,89 (1H; d; H-3)], proton methylen gắn carbon mang oxygen H [4,35 (m; H-20)] proton methylen -CH2-OH H [4,64 (2H; m; H-19)] Phổ 13C-NMR cho tín hiệu 31 carbon với tín hiệu đặc trưng gồm: carbon carbonyl C [204,5 (C-9)], carbon carbonyl ester C [170,7 (4-OAc); 170,8 (10-OAc); 166,9 (2-OBz)], carbon vòng benzen C [129,2 (C-2′,6′); 128,8 (C-3′,5′); 133,7 (C-4′); 129,9 (C-1′)], carbon olefin bậc bốn C [131,5 (C-11) 146,5 (C-12)]; carbon bậc ba mang oxygen C [75,6 (C-2); 84,4 (C-5); 71,1 (C-7); 76,7 (C-10); 66,7 (C-13)], carbon bậc bốn mang oxygen C 78,0 (C-1) 80,4 (C-4)] - Chất T3: + Phân lập dạng bột màu trắng, tan MeOH, tan hệ dung môi CHCl3-MeOH, sắc ký lớp mỏng hệ dung môi CHCl3-MeOH (9:1) cho vết tắt quang bước sóng 254 nm Hiện hình H2SO4 10%/EtOH, xuất vết tròn màu nâu với Rf = 0,29 Hiệu suất thu nhận 0,0012% Dựa vào phổ NMR chiều, đối chiếu tài liệu tham khảo [3] nhận định T3 baccatin III + Phổ 1H- NMR cho tín hiệu cộng hưởng H [1,07 (3H, s, 16-Me); 1,25 (3H, s, 17-Me); 1,99 (3H, s, 18-Me) 1,57 (3H, s, 19-Me)]; H [2,22 (3H, s, 10-OAc) 2,37 (3H, s, 4-OAc)], proton oxymetin H [6,26 (1H, d, H-2); 4,99 (1H, d, H-5); 4,45 (1H, dd, H-7); 6,86 (1H, s, H-10) 4,82 (1H, m, H-13)], proton metylen [H 2,35, 2,41 (H-6a H-6b) 2,28 (2H, H-14)], proton metin [H 4,01 (1H, d, H-3)], proton metylen gắn carbon có mang oxygen [H 4,38 (1H, d, H-20a) 4,23 (1H, H-20b)] + Phổ 13C- NMR cho tín hiệu 31 carbon với tín hiệu đặc trưng gồm carbon carbonyl [C 205,5 (C-9)], carbon carbonyl ester [C 172,4 (10-OAc), 169,3 (4-OAc) 167,1 (s, 2-OBz)], carbon hương phương [C 129,5 (C-1′), 130,1 (C-2′,6′), 132,1 (C-3′,5′) 133,6 (C-4′)], carbon olefin bậc bốn [C 129,5 (C-11) 144,2 (C-12)], carbon bậc hai mang oxygen [C 74,8 (C-20)], carbon bậc ba mang oxygen [C 77,8 (C-2), 82,2 (C-5), 72.3 (C-7), 78,7 (C10), 68,0 (C-13)] carbon bậc bốn mang oxygen [C 79,2 (C-1) 81,5 (C-4)] - Chất T4: Được phân lập dạng bột màu trắng, tan MeOH, tan hệ dung môi CHCl3-MeOH Sắc ký lớp mỏng hệ dung môi CHCl3-MeOH (9:1), cho vết tắt quang UV 254 nm Hiện hình H2SO4 10%/EtOH, xuất vết tròn màu nâu với Rf = 0,06 Hiệu suất thu nhận 0,072% Dựa vào phổ NMR chiều, đối chiếu tài liệu tham khảo [2] nhận định T4 10-deacetyl baccatin III 20 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2014 - KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CHƢƠNG TRÌNH KHCN KC.10/11-15 + Phổ 1H- NMR cho tín hiệu cộng hưởng H [1,06 (3H, s, 16-Me); 1,09 (3H, s, 17-Me); 2,05 (3H, s, 18-Me) 1,72 (3H, s, 19-Me)]; H [2,32 (3H, s, 4-OAc)], proton oxymetin H [5,62 (1H, d, H-2); 5,00 (1H, d, H-5); 4,25 (1H, dd, H-7); 5,28 (1H, s, H-10) 4,81 (1H, m, H-13)], proton metylen [H 1,86; 2,52 (H-6a H-6b) 2,21; 2,29 (2H, H-14)], proton metin [H 3,98 (1H, d, H-3)], proton metylen gắn carbon có mang oxygen [H 4,31 (1H, d, H-20a) 4,21 (1H, H-20b)] + Phổ 13C- NMR cho tín hiệu 29 carbon với tín hiệu đặc trưng gồm: carbon carbonyl [C 211,6 (C-9)], carbon carbonyl ester [C 171,2 (4-OAc) 167,2 ( 2-OBz)], carbon hương phương [C 129,9 (C-1′), 130,2 (C-2′,6′), 128,8 (C-3′,5′) 133,7 (C-4′)], carbon olefin bậc bốn [C 134,2 (C-11) 144,0 (C-12)], carbon bậc hai mang oxygen [C 76,9 (C-20)], carbon bậc ba mang oxygen [C 75,1 (C-2), 84,9 (C-5), 71.7 (C-7), 75,3 (C10) 67,2 (C-13)], carbon bậc bốn mang oxygen [C 78,8 (C-1) 81,0 (C-4)] T2 (19hydroxybaccatin III) T3 (baccatin III) T4 (10 deacetyl baccatin III) T6 (taxol) R H R1 OAc R2 CH2OH H H OAc OH CH3 CH3 C6H5-CH(NH-COC6H5-CH(OH) OAc CH3 Hình 2: Cấu trúc hóa học T2, T3, T4, T6 - Chất T5 Được phân lập dạng kết tinh hình kim, tan MeOH, tan hệ dung môi CHCl3-MeOH Sắc ký lớp mỏng hệ dung môi PE-Ac2O (6:4) hình H2SO4 10%/EtOH, xuất vết tròn màu nâu xám với Rf = 0,56 Hiệu suất thu nhận 0,0022% Dựa vào phổ NMR chiều, đối chiếu tài liệu tham khảo [5] nhận định T4 taxchin A + Phổ 1H-NMR cho tín hiệu cộng hưởng H [1,68 (3H, s, 16-Me); 1,16 (3H, s, 17-Me); 2,21 (3H, s, 18-Me) 0,95 (3H, s, 19-Me)] nhóm -OAc H [1,96 (3H, s, 5-OAc); 2,02 (3H, s, 7-OAc); 2,05 (3H, s, 9-OAc); 2,05 (3H, s, 10-OAc); 2,11 ( 3H, s, 13-OAc); 2,23 (3H, s, 20-OAc)] Proton oxymethin H [4,24 (1H, m, H-2)], proton methylen H [1,9 (H-6a; H-6b); 1,47 2,63 (H-14a, H-14b); 3,94 4,53 (H-20a, H-20b)] Proton methin H [2,62 (1H,H-3); 2,21 (1H, H-4); 5,01 (1H, H-5); 5,39 (1H, H-7); 5,77 (1H, H-9); 6.15 (1H, H-10); 5.95 (1H, H-13)] + Phổ 13C-NMR cho tín hiệu 32 carbon, có tín hiệu đặc trưng gồm carbon carbonyl ester C [171,4 (5-OAc); 170,4 (7-OAc); 170,4 (9-OAc); 170,1 (10-OAc); 169,8 (13-OAc); 169,1 (20-OAc)] carbon olefin bậc bốn C [133,6 (C-11) 137,8 (C-12)]; cacbon bậc ba mang oxygen C [68,74 (C-2)] 21 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2014 - KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CHƢƠNG TRÌNH KHCN KC.10/11-15 Hình 3: Cấu trúc hóa học taxchin A (T5) - Chất T6 Được phân lập dạng kết tinh hình kim, tan MeOH, tan hệ dung môi CHCl3-MeOH Sắc ký lớp mỏng hệ dung mơi CHCl3-MeOH (9:1) hình H2SO4 10%/EtOH xuất vết tròn màu nâu xám với Rf = 0,70 Hiệu suất thu nhận 0,0014% Dựa vào phổ NMR chiều, đối chiếu tài liệu tham khảo [5] nhận định T6 taxol + Phổ 1H- NMR cho tín hiệu cộng hưởng H [1,20 (3H, s, 16-Me); 1,22 (3H, s, 17-Me); 1,80 (3H, s, 18-Me) 1,65 (3H, s, 19-Me)]; H [2,15 (3H, s, 10-OAc) 2,42 (3H, s, 4-OAc)], proton oxymetin H [5,68 (1H, d, H-2); 4,49 (1H, d, H-5); 4,40 (1H, dd, H-7); 6,39 (1H, s, H-10) 6,19 (1H, m, H-13)], proton metylen [H 1,79 2,46 (H-6a H6b); 2,20 2,38 (2H, H-14)], proton metin [H 3,83 (1H, d, H-3)], proton metylen gắn carbon có mang oxygen [H 4,16 (1H, d, H-20a) 4,23 (1H, H-20b)] với tín hiệu proton ba nhân thơm vùng trường thấp - ppm + Phổ 13C- NMR cho tín hiệu 47 carbon với tín hiệu đặc trưng gồm carbon carbonyl [C 203,7 (C-9)], carbon carbonyl ester [C 171,1 (10-OAc); 170,6 (4-OAc); 173,6 (C-1’); 166,6 (C-2’’-OBz) 167,6 (C-2-OBz)], 18 tín hiệu carbon hưíng phương vùng trường thấp 120-140 ppm, hai carbon olefin bậc bốn [C 134,0 (C-11) 142,1 (C-12)], carbon bậc hai mang oxygen [C 76,8 (C-20)], carbon bậc ba mang oxygen [C 75,9 (C-2); 85,0 (C-5), 72,4 (C-7); 76,2 (C10) 71,9 (C-13)] carbon bậc bốn mang oxygen [C 78,8 (C-1) 81,7 (C-4)] Có nhiều quy trình cơng bố chiết tách, thu nhận 10-DAB taxoid khác Thơng đỏ Các giai đoạn quy trình tóm tắt sau: (1) sử dụng dung môi để chiết hoạt chất khỏi nguyên liệu ban đầu, (2) loại tạp chất dịch chiết phương pháp hóa học (lắc phân đoạn, dùng tác nhân loại màu, chất nhày (3) dùng phương pháp sắc ký cột với nguyên liệu silica gel pha thuận hay pha đảo để thu nhận taxoid tinh khiết Trong đó, quy trình KV Rao (1995, Mỹ) [5] đề cập đến việc thu nhận taxoid chính: taxol, 10-DAB, baccatin III, cephalomannin quy mơ cơng nghiệp Sử dụng phương pháp chiết hồn lưu liên tục MeOH, chiết phân đoạn lỏng, áp dụng phương pháp sắc ký cột áp suất trung bình pha đảo pha thuận Kết thu taxol (0,04%, tính khối lượng nguyên liệu vỏ), 10-DAB (0,02%) taxoid khác Việc thu nhận taxoid từ Thông đỏ dài sử dụng vật liệu sắc ký nhựa diaion HP-20 hạt silica gel pha thường đơn giản, có giá thành rẻ Với pha tĩnh diaion HP-20, pha động hệ dung mơi MeOH:H2O, thu hồi dung môi, tái sử dụng pha tĩnh pha động, điều có ý nghĩa lớn mặt sản xuất Mặt khác, cột sử dụng thép không gỉ, dễ thiết kế, áp dụng quy mô lớn Quy trình có nhiều ưu điểm quy trình nghiên cứu KV Rao CS (sử dụng cột sắc ký pha đảo có áp suất, thiết bị tốn kém, pha tĩnh sau sử dụng phải rửa nhiều lần trước tái sử dụng…) 22 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2014 - KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CHƢƠNG TRÌNH KHCN KC.10/11-15 KẾT LUẬN Quy trình thu nhận taxoid từ Thơng đỏ dài Taxus wallichiana Zucc khảo sát quy mô pilot (tương đương kg khô/mẻ) với thiết bị nguyên liệu sắc ký giá thành rẻ, đơn giản dễ dàng nâng cấp trªn quy mô công nghiệp Hiệu suất thu nhận taxoid tương đối cao (0,072% 10-DAB; 0,0014% taxol) so với hàm lượng có nguyên liệu (0,1 - 0,2% 10-DAB 0,004% taxol) [3] TÀI LIỆU THAM KHẢO Trần Công Luận, Ngơ Thiện Tú Khanh, Phan Văn Đệ, Vương Chí Hùng Nghiên cứu đặc điểm vi học thành phần hóa học Thông đỏ (Taxus wallichiana Zucc.), trồng Lâm Đồng Tạp chí Y học TP HCM 2008, 12 (4), tr.98-104 Nguyễn Thị Thanh Tâm, Nguyễn Trung Nhân Nghiên cứu thành phần hóa học Thơng đỏ (Taxus wallichiana Zucc), họ Thơng đỏ (Taxaceae) Tạp chí Phát triển KH&CN 2009, 12 (10), tr.57-63 Nguyễn Ngọc Song Trâm, Bùi Thế Vinh, Nguyễn Hoàng Quỳnh Hương, Trần Cơng Luận Xây dựng quy trình định lượng 10-DAB taxol Thơng đỏ (Taxus wallichiana Zucc.) Tạp chí Y học TP HCM 2008, tập 12, phụ số 4, tr.105-111 Gwendolyn N Chmurny, Bruce D Hilton, Susan Brobst, Sally A Look, Keith M Witherup, John A Beutler 1H- and 13C-NMR assignments for taxol, 7-epi-taxol and cephalomannine Journal of natural products 1992, 55 (4), pp.414-423 Koppaka V Rao, Jampani B Hanuman, Claudio Alvarez, Mark Stoy, John Juchum, Richard M Davids, Ronald Baxley A new large-scale process for taxol and related taxanes from Taxus brevifolia Pharmaceutical Research 1995, 12 (7) Mroczek T, Glowniak K Solid-phase extraction and simplified high-performance liquid chromatographic determination of 10-deacetylbaccatin III and related taxoids in yew species Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 2001, 26, pp.89-102 Horiguchi T, Cheng Q, Oritani T Two novel taxane diterpenoids from the needles of Japanese Yew, Taxus cuspidate Bioscience, Biotechnology and Biochemistry 2000, 64 (4), pp.894-898 Naotoshi Y, Sasaki T, Kobayashi J, Inubushi A, Hosoyama I and Shigemori H Taxuspines E ~ H and J, New Taxoids from the Japanese Yew Taxus cuspidate Tetrahedron 1995, 51 (21), pp.5971-5978 10 Mclaughlin JL, Miller RW, Powell RG, Smith CR 19-hydroxybaccatin III, 10 deacetylcephalomannine, and 10-deacetyltaxol: new antitumor taxanes from Taxus wallichiana Journal of Natural Products 1981, 44 (3), pp.312-319 Nguyen Huu Toan Phan, Nguyen Thi Dieu Thuan, Chau Van Minh, Nguyen Cong Hao Constituents of Taxus wallichiana Zucc in Vietnam Proceedings of the fourth Indochina Conference on Pharmaceutical sciences 2005, 1, pp.186-189 23 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2014 - KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CHƢƠNG TRÌNH KHCN KC.10/11-15 24 ... thư, taxoid có Thơng đỏ có hàm lượng cao [2, 4, 7] Hiện nước chưa có nghiên cứu nµo cơng bố quy trình pilot thu nhận taxoid từ Thơng đỏ dài Báo cáo thơng báo quy trình chiết tách, tinh chế taxoid. .. HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2014 - KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CHƢƠNG TRÌNH KHCN KC .10/ 11-15 KẾT LUẬN Quy trình thu nhận taxoid từ Thông đỏ dài Taxus wallichiana Zucc khảo sát quy mô pilot (tương đương kg khô/mẻ)... taxoid Thông đỏ dài quy mô pilot với mục tiêu cung cấp nguyên liệu taxol tiền chất bán tổng hợp taxol cho sản xuất thuốc điều trị ung thư Đây mét phÇn kết đề tài Nghiên cứu quy trình công nghệ chiết