Đang tải... (xem toàn văn)
Nghiên cứu được thực hiện với mục tiêu xác định tỉ lệ biểu hiện quá mức protein p53 trong bướu nguyên bào men, và phân tích sự liên quan giữa biểu hiện protein p53 với các dạng lâm sàng, X quang, giải phẫu bệnh của bướu nguyên bào men.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 BIỂU HIỆN PROTEIN P53 TRONG BƯỚU NGUYÊN BÀO MEN Đỗ Thị Thảo*, Đoàn Thị Phương Thảo**, Nguyễn Thị Hồng*** TÓM TẮT Mở đầu: Protein p53 thường biểu mức bướu có nguồn gốc biểu mơ, ung thư tế bào gai niêm mạc miệng người Việt Nam thường gặp với tỉ lệ cao Tuy nhiên, biểu protein p53 bướu nguyên bào men (BNBM) chưa rõ Mục tiêu: Xác định tỉ lệ biểu mức protein p53 BNBM, phân tích liên quan biểu protein p53 với dạng lâm sàng, X quang, giải phẫu bệnh BNBM Đối tượng phương pháp: Nghiên cứu cắt ngang mơ tả phân tích 33 ca BNBM xương hàm điều trị Bệnh viện Răng Hàm Mặt Trung Ương năm 2008 2009, khảo sát biểu protein p53 nhuộm hóa mơ miễn dịch Kết quả: Tỉ lệ biểu mức protein p53 BNBM 57,6%; đa số mức độ yếu trung bình Biểu mức protein p53 thường gặp người 20 tuổi (64%), nam (70%) nhiều nữ (52,2%), bướu dạng đặc (63,2%) cao bướu dạng nang (50%), bướu thấu quang dạng nhiều hốc (57,6%) dạng hốc (40%) Bướu dạng túi tuyến thường biểu protein p53 dương tính yếu; ngược lại bướu dạng đám rối thường biểu p53 dương tính trung bình mạnh Tuy nhiên, phân tích thống kê khơng thấy khác biệt có ý nghĩa biểu protein p53 dạng lâm sàng, X quang giải phẫu bệnh 33 ca BNBM (p>0,05) Kết luận: Có bất thường protein p53 BNBM, biểu mức protein p53 loại BNBM lành tính tương tự Từ khóa: Biểu mức protein p53, bướu nguyên bào men, dạng đặc, dạng nang, hốc, nhiều hốc, dạng túi tuyến dạng đám rối ABSTRACT EXPRESSION OF P53 PROTEIN IN AMELOBLASTOMA Do Thi Thao, Doan Thi Phuong Thao, Nguyen Thi Hong * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 16 - Supplement of No - 2012: 156 - 161 Background: Overexpression of p53 protein has frequently been demonstrated in human epithelial neoplasms In oral squamous cell carcinoma in Vietnamese patients, the high prevalence of p53 overexpression was reported In ameloblastoma, however, the significance of p53 overexpression is still unclear Objectives: To determine the prevalence of p53 protein overexpression in ameloblastoma, and to analyse the relationship between p53 expression and clinical, radiographic and histologic subtypes of ameloblastoma Materials and methods: A cross-sectional study was conducted on 33 ameloblastoma cases treated in the Ho Chi Minh city National Hospital of Odonto-Stomatology in 2008 and 2009 Immunohistochemical staining for p53 protein was performed * Khoa Răng Hàm Mặt, Đại học Y Dược Cần Thơ ** Khoa Y Đại học Y Dược Tp Hồ Chí Minh *** Khoa Răng Hàm Mặt - Đại học Y Dược Tp Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: ThS Đỗ Thị Thảo ĐT: 0919258731 Email: bs_thao77@yahoo.com.vn 156 Chuyên Đề Răng Hàm Mặt Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 Nghiên cứu Y học Results: p53 overexpression was detected in 57.6% of ameloblastomas, mostly at the weak and moderate levels The expression of p53 was more common in patients above 20 years old (64%), in males (70%) than in females (52.2%), in solid ameloblastomas (63.2%) than in cystic ones (50%), in multilocular radiolucency (57.6%) than in unilocular appearance (40%) The follicular pattern often showed a weak immunostaining, while the plexiform pattern was mainly moderately and strongly stained Nevertheless, statistical analysis did not detect significant differences (p>0.05) among clinical, radiographic and histologic subtypes of these 33 ameloblastomas Conclusion: Dysfunction of p53 protein might be implicated in tumorigenesis of ameloblastoma, and the overexpression of this marker seems to be similar in different subtypes of ameloblastoma Keywords: p53 protein overexpression, ameloblastoma, solid, (uni)cystic, unilocular, multilocular, follicular and plexiform types ĐẶT VẤN ĐỀ Bướu nguyên bào men (BNBM) loại bướu thường gặp loại bướu có nguồn gốc từ răng, lành tính dễ tái phát sau phẫu thuật(8) Bướu thường xảy tuổi trẻ, điều trị triệt để chủ yếu phẫu thuật cắt đoạn xương hàm nên thường để lại nhiều di chứng thẩm mỹ chức năng, thực tế cho thấy tất BNBM có diễn tiến giống Vì vậy, cần phải tìm yếu tố dự đốn diễn tiến sinh học bướu để chọn lựa điều trị thích hợp Hiện nay, định điều trị tùy thuộc chủ yếu vào dạng lâm sàng BNBM: bướu dạng đặc (hay đa nang) phải cắt đoạn xương hàm có tỉ lệ tái phát cao (55-90%) lấy bướu, bướu dạng nang (hay đơn nang) tái phát (10-40%) nên thường cần lấy bướu đủ(8) Các dạng X quang mô bệnh học có giá trị định điều trị tiên lượng(8) Trong thập niên qua, sinh học phân tử góp phần làm sáng tỏ bệnh sinh, diễn tiến bệnh ứng dụng chẩn đoán điều trị nhiều loại ung thư bướu lành Quá trình sinh bướu tiến trình tích lũy biến đổi di truyền khơng hồn ngun Đặc biệt, ung thư người, đột biến gen p53 thường gặp nhất, chiếm 50%(6) Gen đè nén bướu p53 nằm nhiễm sắc thể 17; sản xuất protein p53 giữ nhiều chức quan trọng tế bào, bao gồm kiểm sốt chu trình tế bào, sửa chữa DNA, thúc đẩy tế bào chết theo lập trình(6) Chuyên Đề Răng Hàm Mặt Đối với BNBM, có số chứng cho thấy bất thường gen protein p53 bướu Năm 1999, El-Sissy cs phát protein p53 biểu mức 18 ca BNBM với tỉ lệ 61%, đặc biệt tỉ lệ cao (75%) dương tính mạnh BNBM ác tính(3) Năm 2006, Al-Salihi cs phát đột biến gen p53 BNBM, đề nghị sử dụng liệu pháp đích kháng p53 để giảm bớt kích thước trước phẫu thuật BNBM lớn, để điều trị bướu cắt vị trí gần cấu trúc giải phẫu quan trọng(1) Với mong muốn góp phần việc chẩn đốn, điều trị tiên lượng loại BNBM, thực nghiên cứu nhằm mục tiêu sau: - Xác định tỉ lệ biểu mức protein p53 BNBM - Phân tích liên quan biểu protein p53 với dạng lâm sàng, X quang giải phẫu bệnh BNBM ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Mẫu nghiên cứu 33 trường hợp BNBM xương hàm điều trị Bệnh Viện Răng Hàm Mặt Trung Ương từ tháng 8/2008 đến tháng 2/2009 Thiết kế nghiên cứu Cắt ngang Các biến nghiên cứu bước thực hiện: Tuổi, giới tính bệnh nhân Các dạng X quang bướu phim toàn cảnh: gồm thấu quang dạng hốc dạng 157 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 nhiều hốc Đánh giá biểu hóa mơ miễn dịch Các dạng lâm sàng bướu: gồm dạng đặc dạng nang, dựa quan sát dạng đại thể bướu lúc mổ kiểm chứng giải phẫu bệnh Tế bào bướu biểu p53 dương tính nhân tế bào nhuộm màu nâu, cường độ màu đậm nhạt Mức độ biểu protein p53 bướu đánh giá dựa tỉ lệ % số tế bào bướu nhuộm dương tính tổng số tế bào bướu, tỉ lệ tính cách đếm số tế bào bướu nhuộm dương tính số tế bào bướu nhuộm âm tính vi trường x 200 kính hiển vi quang học Bướu biểu mức p53 có 5% số tế bào bướu nhuộm p53 dương tính, với mức độ dương tính yếu (+): 6-25%, trung bình (++): 26-50%, mạnh (+++): 51-100% Các dạng giải phẫu bệnh: gồm hai dạng dạng túi tuyến dạng đám rối, chẩn đốn dựa khảo sát vi thể mơ bệnh phẩm mổ Biểu protein p53 Qui trình nhuộm hóa mô miễn dịch Theo phương pháp miễn dịch men gián tiếp LSAB (labelled streptavidin-biotin) sử dụng kit LSAB-HRP kháng thể đơn dòng DO-7 kháng p53 nhà sản xuất Dakocytomation (Đan Mạch) Kháng thể DO-7 phản ứng với êpitốp có vị trí từ axít amin 35 đến axít amin 45 đầu N- protein p53 nguyên thủy protein p53 đột biến Mẫu mô cắt lát mỏng, dán lên phiến kính có tráng silane, khử paraffin, bộc lộ kháng nguyên cách đun nóng dung dịch đệm Tris-EDTA (pH 9) 20 phút Tiếp theo, rửa dung dịch TBS (pH 7,6), ức chế peroxidase nội sinh cách cho vào dung dịch hydrogen peroxide 3% 10 phút Sau đó, cho ủ với Protein Block kit LSAB, ủ với 100 µl kháng thể thứ (DO-7) giờ, rửa TBS, ủ với kháng thể thứ hai có gắn biotin kit LSAB 10 phút, rửa TBS, ủ với phức hợp Streptavidin-Peroxidase kit LSAB 10 phút, rửa TBS Cho tiếp xúc với chất sinh màu Diaminobenzidine (DAB), rửa TBS nước cất Cuối nhuộm chồng màu hematoxylin, rửa nước cất cồn, làm sáng mô dán lamelle Mỗi đợt nhuộm có tiêu chứng dương (lát cắt mơ carcinơm tuyến đại tràng biết có biểu p53 dương tính) tiêu chứng âm (thay kháng thể thứ dung dịch TBS) nhuộm kèm theo 158 Xử lý liệu Nhập xử lý liệu phần mềm SPSS 12.0 Phân tích liên quan test Chi bình phương test xác Fisher Liên quan có ý nghĩa p < 0,05 KẾT QUẢ Protein p53 biểu mức 19 ca tổng số 33 ca BNBM, chiếm tỉ lệ 57,6%; bao gồm ca (27,3%) dương tính yếu, ca (21,2%) dương tính trung bình ca (9,1%) dương tính mạnh Biểu mức protein p53 phổ biến người 20 tuổi (64%) người trẻ 20 tuổi (37,5%), nam (70%) nhiều nữ (52,2%), bướu thấu quang dạng nhiều hốc (57,6%) dạng hốc (40%) Tuy nhiên, khác khơng có ý nghĩa thống kê (p >0,05) (Bảng 1) Bảng Liên quan biểu protein p53 với lâm sàng, X quang BNBM BNBM Tuổi ≤ 20 > 21 Giới Nam Nữ Dạng X quang Một hốc Nhiều hốc Tổng Tổng Số Biểu protein p53 ca (%) Âm tính Dương tính (24,2) 25 (75,8) 10 (30,3) 23 (69,7) (62,5) (36,0) (30,0) 11 (47,8) (37,5) 16 (64,0) (70,0) 12 (52,2) (17,8) (60,0) 28 (82,2) 11 (42,4) 33 (100,0) 14 (42,4) (40,0) 19 (57,6) 19 (57,6) p 0,396 0,455 0,628 Chuyên Đề Răng Hàm Mặt Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 Biểu protein p53 bướu dạng đặc bướu dạng nang khác khơng có ý nghĩa (p>0,05), biểu phổ biến bướu dạng đặc (63,2%) bướu dạng nang (50%), dương tính yếu thường gặp bướu dạng đặc (31,6%) bướu dạng nang (21,4%) (Bảng 2) Nghiên cứu Y học BNBM dạng nang gồm dạng ống (14,3%) vách (85,7%), không gặp dạng ống; dạng tế bào bướu xếp thành dạng túi tuyến (57,2%) dạng đám rối (42,8%) Tổng cộng, dạng túi tuyến (60,6%) phổ biến dạng đám rối (39,4%) Bảng Biểu protein p53 BNBM dạng đặc dạng nang Trong 19 ca BNBM dạng đặc, tế bào biểu p53 dương tính thường phân bố ngoại vi BNBM Tổng Số ca (%) Biểu protein p53 p Âm Dương tính tính (-) (+) (++) (+++) Dạng 14 (42,4) (50,0) (21,4) 0,865 nang (21,4) (7,2) Dạng đặc 19 (57,6) (36,8) (31,6) (21,1) (10,5) Tổng 33 14 (27,3) (100,0) (42,4) (21,2) (9,1) đám tế bào bướu trung tâm đám tế bào bướu (Hình 1) Trong 14 ca BNBM dạng nang, p53 dương tính thường gặp tế bào biểu mơ lót bao nang Mơ bướu thâm nhập thành nang (dạng vách) hay nhơ lòng nang (dạng ống) có tế bào nhuộm p53 dương tính (Hình 2) BNBM dạng đặc có hai dạng dạng túi tuyến (63,2%) dạng đám rối (36,8%) x40 x100 x200 Hình Biểu mức protein p53 BNBM đặc dạng đám rối x40 x100 x200 Hình Biểu mức protein p53 BNBM dạng nang, vách, túi tuyến Biểu protein p53 BNBM dạng dạng túi tuyến thường biểu p53 đám rối dạng túi tuyến khác ý yếu (35%) (Bảng 3) nghĩa (p > 0,05) tỉ lệ biểu mức Bảng Biểu protein p53 BNBM dạng túi tuyến dạng đám rối protein p53 bướu đám rối (61,5%) cao dạng túi tuyến (55%), bướu dạng đám rối thường biểu p53 trung bình mạnh Chuyên Đề Răng Hàm Mặt BNBM Tổng Số ca (%) Biểu protein p53 Âm tính (-) p Dương tính (+) (++) (+++) 159 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 Dạng túi 20 (60,6) (5,0) tuyến (45,0) (35,0) (15,0) Dạng đám 13 (39,4) rối (38,5) (15,4) (30,8) (15,4) Tổng cộng 33 14 (9,1) (100,0) (42,4) (27,3) (21,2) 0,384 BÀN LUẬN Tỉ lệ biểu mức protein p53 BNBM cao 57,6%, thấp so với tỉ lệ 75,5% ung thư tế bào gai niêm mạc miệng(7) Như vậy, người Việt Nam thường có biến đổi protein p53 không ung thư hốc miệng mà bướu biểu mơ lành tính hốc miệng BNBM Kết cung cấp thêm chứng cho nhận định protein p53 thường biểu mức bướu người có nguồn gốc biểu mơ Theo y văn, tỉ lệ biểu mức protein p53 BNBM Nhật Bản 45% (13/29 ca)(5), 76% (26/34 ca))(9), 80% (24/30 ca)(4), Ai Cập 61% (11/18 ca)(3), Hà Lan 67% (6/9 ca)(12) Trong tế bào bình thường, lượng protein p53 thấp thời gian tồn ngắn (6-20 phút) nên phát hóa mơ miễn dịch(3) Đột biến gen p53 hay tương tác với protein khác bị biến đổi (như protein MDM2) làm cho protein p53 bền vững hơn, tích tụ nhiều nhân tế bào, phát qua nhuộm hóa mơ miễn dịch(3,6) Trong ung thư niêm mạc miệng người Việt Nam, biểu mức protein p53 thường đột biến gen p53 (44,4%) bất thường protein MDM2 (36,4%)(7) Tuy nhiên, BNBM, nghiên cứu giới cho thấy biểu mức protein p53 chủ yếu bất thường protein MDM2 Đột biến gen p53 dường có vai trò bệnh sinh BNBM(8) Sandra cs (2002) phát 88% BNBM biểu mức protein MDM2(9), Shibata cs (2002) phát có ca đột biến gen p53 12 ca BNBM(11) Kumamoto cs (2004) tìm thấy tăng biểu protein p53 MDM2 46 ca BNBM lành tính ca BNBM ác tính, khác biệt có ý nghĩa so với 16 160 biểu mô mầm bình thường, khơng thấy ca có đột biến gen p53(5) Sharifi-Sistani N (2011)(10) tìm thấy BNBM biểu mức p53 77,8% biểu mức MDM2 74,8% Trong BNBM, biểu p53 dương tính chủ yếu mức độ dương tính yếu (27,3%) trung bình (21,2%), gặp dương tính mạnh (9,1%) Kết tương tự khảo sát biểu p53 46 ca BNBM Kumamoto (2004) ghi nhận 20% dương tính yếu 43% trung bình, khơng có dương tính mạnh(5) Phải bướu NBM loại bướu lành tính nên thường biểu p53 dương tính yếu trung bình; bướu ác tính ung thư niêm mạc miệng hay BNBM ác tính có tỉ lệ p53 dương tính mạnh cao hơn? Nghiên cứu El-Sissy (1999) cho thấy 75% BNBM ác tính có mức độ dương tính mạnh(3) Ở người Việt Nam, tỉ lệ p53 dương tính mạnh ung thư niêm mạc miệng (28,2%)(7) cao BNBM (9,1%) Tỉ lệ mức độ biểu p53 bướu dạng đặc bướu dạng nang không khác biệt (p>0,05) Kết quán với nghiên cứu Hirayama (2004) cho thấy tỉ lệ trung bình biểu protein p53 BNBM dạng đặc 9,2% (± 4,9) tương tự bướu dạng nang 8,5% (± 11,1)(4) Từ kết này, thấy bất thường protein p53 giữ vai trò quan trọng q trình hình thành phát triển BNBM, cho dù bướu có dạng đặc hay dạng nang Tỉ lệ biểu mức protein p53 bướu thấu quang dạng nhiều hốc (57,6%) cao dạng hốc (40%) khơng có ý nghĩa (p>0,05), tương tự kết nghiên cứu Kumamoto(5) Tỉ lệ biểu mức p53 bướu dạng đám rối (61,5%) cao dạng túi tuyến (55%), khơng có ý nghĩa (p>0,05) Barboza (2005) tìm thấy tỉ lệ trung bình biểu mức protein p53 bướu dạng đám rối 46% (± 15,9) cao tỉ lệ 42,4% (± 14,1) bướu dạng túi tuyến Chuyên Đề Răng Hàm Mặt Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 khơng có ý nghĩa (p>0,05)(2) Kết nghiên cứu phù hợp với y văn, cho thấy dạng X quang dạng mơ bệnh học BNBM có biểu protein p53 tương tự Bước đầu tìm hiểu sinh học phân tử BNBM, nghiên cứu phát bất thường protein p53 Tuy nhiên, số ca chưa phải nhiều, thời gian theo dõi tái phát chưa đủ dài để đánh giá giá trị p53 dự đoán diễn tiến tiên lượng tái phát bướu, chưa so sánh với BNBM ác tính, nên khơng thể phân tích sâu ý nghĩa ứng dụng lâm sàng kết tìm thấy biểu protein p53 loại BNBM, chưa thể kết luận nguyên nhân gây biến đổi protein p53 liên quan với gen protein khác KẾT LUẬN Có bất thường protein p53 BNBM, với tỉ lệ biểu mức 57,6%; chủ yếu dương tính yếu trung bình Biểu protein p53 BNBM khơng liên quan với tuổi, giới tính, khơng có khác biệt có ý nghĩa dạng lâm sàng, dạng X quang dạng giải phẫu bệnh BNBM 10 11 TÀI LIỆU THAM KHẢO Al-Salihi KA (2006) p53 gene mutation and protein expression in ameloblastoma Braz J Oral Sci, 5: 1034-1040 Chuyên Đề Răng Hàm Mặt 12 Nghiên cứu Y học Barboza CAG, Pinto LP, Freitas RA, Costa ALL, Souza LB (2005) Proliferating cellular nuclear antigen (PCNA) and p53 protein expression in ameloblastoma and adenomatoid odontogenic tumor Braz Dent J, 16(1): 56-61 El-Sissy NA (1999) Immunohistochemical detection of p53 protein in ameloblastoma types Eastern Mediterranean Health J, 5(3): 478-489 Hirayama T, Hamada T, Hasui K, Semba I, Murata F, Sugihara K (2004) Immunohistochemical analysis of cell proliferation and suppression of ameloblastoma with special reference to plexiform and follicular ameloblastoma Acta Histochem Cytochem, 37(6): 391-398 Kumamoto H, Izutsu T, Ohki K, Takahashi N, Ooya K (2004) p53 gene status and expression of p53, MDM2, and p14ARF proteins in ameloblastomas J Oral Pathol Med, 33(5): 292-299 May P, May E (1999) Twenty years of p53 research: Structural and functional aspects of the p53 protein” Oncogene, 18(53): 7621-7636 Nguyễn Thị Hồng c.s (2006) Đột biến gen p53 biểu protein p53, MDM2, Ki67, MMP9 ung thư niêm mạc miệng người Việt Nam Tạp chí Y học TP.HCM, 3(4): 167176 Regezi JA, Seiubba JJ, Jordan RCK (2008) Oral pathology: Clinical pathologic correlation, 4th edition Saunders, 267-274 Sandra F, Nakamura N, Kanematsu T, Hirata M, Ohishi M (2002) The role of MDM2 in the proliferative activity of ameloblastoma Oral Oncol, 38(2): 153-157 Sharifi-Sistani N, Zartab H, Babakoohi S, Saghravanian N, Jamshidi S, Esmaili H, et al (2011) Immunohistochemical comparison of the expression of p53 and MDM2 proteins in ameloblastomas and keratocystic odontogenic tumors J Craniofacial Surgery, 22(5): 1652-1656 Shibata T, Nakata D, Chiba I, Yamashita T, Abiko Y, Tada M, Moriuchi T (2002) Detection of TP53 mutation in ameloblastoma by the use of a yeast functional assay J Oral Pathol Med, 31(9): 534-538 Slootweg PJ (1995) p53 protein and Ki-67 reactivity in epithelial odontogenic lesions An immunohistochemical study J Oral Pathol Med, 24: 393-397 161 ... nhạt Mức độ biểu protein p53 bướu đánh giá dựa tỉ lệ % số tế bào bướu nhuộm dương tính tổng số tế bào bướu, tỉ lệ tính cách đếm số tế bào bướu nhuộm dương tính số tế bào bướu nhuộm âm tính vi trường... 2012 Biểu protein p53 bướu dạng đặc bướu dạng nang khác khơng có ý nghĩa (p>0,05), biểu phổ biến bướu dạng đặc (63,2%) bướu dạng nang (50%), dương tính yếu thường gặp bướu dạng đặc (31,6%) bướu. .. luận nguyên nhân gây biến đổi protein p53 liên quan với gen protein khác KẾT LUẬN Có bất thường protein p53 BNBM, với tỉ lệ biểu mức 57,6%; chủ yếu dương tính yếu trung bình Biểu protein p53 BNBM