Đang tải... (xem toàn văn)
Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm đánh giá ảnh hưởng của điều trị hóa chất lên khả năng thực bào và diệt khuẩn của BCĐNTT ở bệnh nhân (BN) ULPNH. Đối tượng và phương pháp: 78 BN được chẩn đoán ULPNH, điều trị hóa chất tại Viện Huyết học và Truyền máu Trung ương trong 3 năm (2011 - 2013).
TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 8-2014 ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG THỰC BÀO VÀ DIỆT KHUẨN CỦA BẠCH CẦU ĐA NHÂN TRUNG TÍNH Ở BỆNH NHÂN U LYMPHO NON-HOGDKIN TRƢỚC VÀ SAU ĐIỀU TRỊ HÓA CHẤT Lê Xn Hải*; Vũ Đức Bình*; Nguyễn Hà Thanh** TĨM TẮT Trong điều trị u lympho non-Hodgkin (ULPNH) thường gặp biến chứng giảm số lượng bạch cầu, bạch cầu đa nhân trung tính (BCĐNTT) máu ngoại vi, làm tăng tỷ lệ biến chứng nhiễm trùng Mục tiêu: đánh giá ảnh hưởng điều trị hóa chất lên khả thực bào diệt khuẩn BCĐNTT bệnh nhân (BN) ULPNH Đối tượng phương pháp: 78 BN chẩn đốn ULPNH, điều trị hóa chất Viện Huyết học Truyền máu Trung ương năm (2011 - 2013) Kết quả: sau điều trị hóa chất tuần, BN ULKH có tượng: giảm mạnh số lượng BCĐNTT (trị số tương ứng 2,8 1,4 G/l); tỷ lệ thực bào BCĐNTT sau tuần giảm tương ứng 43,2% 44,0% Khả giết tụ cầu BCĐNTT sau điều trị hóa chất tuần 47,7% sau điều trị hóa chất tuần 45,3% Kết luận: sau điều trị hóa chất, có tình trạng giảm số lượng BCĐNTT, giảm khả thực bào diệt vi khuẩn * Từ khóa: U lympho non-Hodgkin; Thực bào; Diệt khuẩn; Bạch cầu đa nhân trung tính EVALUATE PHAGOCYTIC AND BACTERICIDAL CAPACITY OF NEUTROPHILS AFTER CHEMOTHERAPY N NON-HODGKIN LYMPHOMA SUMMARY Reduction of WBC count and opportunistic infection are common complications in nonHodgkin lymphoma (NHL) patients after chemotherapy Purpose: To evaluate influence of chemotherapy on phagocytic and bactericidal capacity of neutrophils in NHL patients Patients and methods: 78 NHL patients treated in NIHBT from 2011 to 2013 Results: There is a significant reduction of neutrophils counts (2.8 and 1.4 G/l after chemotherapy and weeks, respectively); There is a significant reduction of phagocytic capacity (43.2% and 44% after chemotherapy and weeks, respectively) There is a significant reduction of bactericidal capacity of neutrophils (47.7% and 45.3% after chemotherapy and weeks, respectively) Conclusion: Reduction of neutrophils count and phagocytic and bactericidal capacity has been seen in NHL patients after chemotherapy * Key words: Non-Hodgkin lymphoma; Phagocyte; Bactericidal capacity; Neutrophils * Viện Huyết học - Truyền máu Trung ương ** Đại học Y Hà Nội Người phản hồi (Corresponding): Lê Xuân Hải (hailexuan@yahoo.com) Ngày nhận bài: 31/07/2014; Ngày phản biện đánh giá báo: 20/09/2014 Ngày báo đăng: 29/09/2014 101 TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 8-2014 ĐẶT VẤN ĐỀ BCĐNTT Chúng tiến hành đề tài với U lympho non-Hodgkin 10 mục tiêu: Đánh giá ảnh hưởng điều trị bệnh ung thư phổ biến nhiều nước hóa chất lên khả thực bào diệt giới [1, 5] Đặc trưng bệnh khuẩn BCĐNTT BN ULPNH tăng sinh khơng kiểm sốt tế bào ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN dòng lympho tổ chức thể, chủ CỨU yếu hệ thống bạch huyết, phát sinh hệ thống bạch huyết Đối tƣợng nghiên cứu như: xương, dày, ruột Điều trị ULPNH 78 BN (42 nam, 36 nữ, tuổi trung bình 46) chủ yếu dựa phác đồ dùng hoá chẩn đốn ULPNH dựa vào tiêu chuẩn chất Hóa chất điều trị ung thư vừa diệt tế chẩn đoán lâm sàng dựa sở giải bào ác tính vừa diệt tế bào lành tính Do phẫu bệnh (theo phân loại mô bệnh học vậy, chúng gây độc đến nhiều quan Working Formulation for Clinical Usage thể gan, phổi, thận, thần kinh, 1982), chấp nhận điều trị hoá chất Viện đặc biệt quan tạo máu miễn dịch Huyết học Truyền máu Trung ương (lấy [1] Trong điều trị thường gặp biến chứng mẫu thuận tiện, không phân biệt phác đồ sử giảm số lượng bạch cầu, BCĐNTT dụng hóa chất đợt điều trị hóa máu ngoại vi, làm tăng tỷ lệ biến chứng chất) nhiễm trùng Phƣơng pháp nghiên cứu BCĐNTT chiếm số lượng nhiều Các tiêu nghiên cứu gồm: số lượng thành phần bạch cầu chung, có chức bạch cầu máu ngoại vi, số lượng BCĐNTT giúp thể chống lại bệnh nhiễm máu ngoại vi số thực bào (tỷ lệ % trùng, đặc biệt giai đoạn thực bào, số thực bào, tỷ lệ giết) Các trình nhiễm trùng Chức quan tiêu nghiên cứu thu thập vào thời trọng BCĐNTT thực bào tác nhân điểm: trước điều trị hóa chất, tuần sau gây bệnh, chúng di chuyển nhanh tới bắt đầu điều trị hóa chất tuần sau vị trí nơi vi khuẩn xâm nhập, bao bọc bắt đầu điều trị hóa chất (trong khoảng thời giết chúng Ngoài chức bảo vệ gian BN tiếp tục dùng hóa khơng đặc hiệu, BCĐNTT đóng vai trò chất) phản ứng miễn dịch đặc hiệu: vai trò hợp tác với tế bào khác [2] Thu thập số lượng bạch cầu số lượng BCĐNTT từ xét nghiệm tổng phân tích tế Ở Việt Nam, nghiên cứu vai trò bào máu Đánh giá số thực bào BCĐNTT phản ứng miễn dịch BCĐNTT (% thực bào, số thực bào tỷ thực người bình thường BN lệ giết) qua thực nghiệm cho BCĐNTT thực u lympho ác tính trước sau điều trị hoá bào tụ cầu trắng theo phương pháp chất…, tập trung nghiên mô tả nghiên cứu Vũ Triệu An cứu số lượng, hình thái tế bào, khả Vũ Dương Quý (1991) [2] Nguyên lý thực bào [3, 4] Chưa có nghiên cứu cách làm thực nghiệm sau: đánh giá khả diệt vi khuẩn 102 TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 8-2014 - BCĐNTT sau ăn vi khuẩn có tượng hồ màng bọng lysosome túi phagosome để tạo thành (phosphate buffered saline), pha loãng nồng độ x 108 tụ cầu/ml PBS túi * Chuẩn bị BCĐNTT: tách tinh phagolysosome Enzym từ lysosome tràn vào BCĐNTT từ ml máu tĩnh mạch chống phagosome tiêu diệt vi khuẩn Trong thực đông EDTA theo phương pháp nghiệm thực bào, vi khuẩn hay dùng tụ cầu gradient tỷ trọng qua bước Bước 1: loại trắng Khi nhuộm chất huỳnh quang AO bỏ tiểu cầu bạch cầu đơn nhân ly (acridin orange), kính hiển vi huỳnh tâm phân lớp với Ficoll (d = 1,077), giữ lại quang, dễ dàng nhận biết tụ cầu bị phần cặn hồng cầu lớp buffy coat nằm thực bào nằm bên bào tương tế bào sát lớp hồng cầu Bước 2: tách BCĐNTT Trong BCĐNTT BCĐNTT loại bỏ hồng cầu cách thấy đồng thời hình ảnh sau: tụ cầu bị pha loãng phần cặn hồng cầu lớp thực bào, sống bắt màu xanh cây; tụ buffycoat ml PBS, thêm 400 cầu bị thực bào bị enzym bạch cầu µl dung dịch dextran 6%, trộn đặt công làm suy yếu, thối hóa bắt màu nghiêng 450 30 phút 370C, để lắng vàng cam; tụ cầu bị thực bào bị enzym tự nhiên; thu lấy lớp BCĐNTT sát hồng cầu, thực bào giết chết bắt màu đỏ cam phá hồng cầu lẫn dung dịch ly giải - % thực bào số tế bào BCĐNTT có bắt hồng cầu (NH4Cl), ly tâm loại bỏ dịch nổi, giữ (có thực bào/nuốt) vi khuẩn vào bên thu cặn BCĐNTT Rửa cặn bạch cầu tế bào 100 tế bào BCĐNTT Hệ thống lần PBS pha thành huyền dịch miễn dịch không đặc hiệu hiệu x 106 tế bào/ml PBS số cao * Làm xét nghiệm thực bào: ủ 100 µl - Chỉ số thực bào số lượng vi khuẩn BCĐNTT (2 x 106 tế bào/ml) với 100 µl tụ trung bình bị bắt giữ BCĐNTT có thực cầu trắng (2 x 108 tụ cầu/ml) 370C 60 bào Tính số tổng số vi khuẩn phút Sau ủ, rửa bỏ tụ cầu thừa, thêm µl bị thực bào chia cho số BCĐNTT có thực hỗn hơp màu huỳnh quang AO, bào Chỉ số lớn chứng tỏ khả phút nhiệt độ phòng, đọc kết tiêu bắt giữ vi khuẩn BCĐNTT mạnh nhuộm AO kính hiển vi huỳnh ủ - Tính tỷ lệ giết tỷ lệ số vi khuẩn quang Đếm 100 BCĐNTT, bao gồn bạch bị thực bào chết (bắt màu đỏ nhuộm cầu ăn vi khuẩn bạch cầu không ăn vi huỳnh quang AO) tổng số vi khuẩn bị khuẩn; đếm số tụ cầu sống (bắt màu xanh) BCĐNTT thực bào Tỷ lệ giết cao chứng tụ cầu chết (bắt màu vàng đỏ cam) tỏ khả diệt khuẩn BCĐNTT bạch cầu tính: mạnh * Chuẩn bị tụ cầu: nuôi tụ cầu trắng môi trường canh thang 24 trước làm xét nghiệm Rửa tụ cầu lần PBS - Tỷ lệ thực bào: tỷ lệ % số BCĐNTT có thực bào tổng số tế bào BCĐNTT quan sát - Chỉ số thực bào: số tụ cầu trung bình có BCĐNTT có thực bào 103 TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 8-2014 - Tỷ lệ giết: tỷ lệ % tổng số tụ cầu chết (bắt màu vàng/đỏ cam) tổng số tụ cầu có BCĐNTT có thực bào quan sát Xử lý số liệu thuật toán thống kê y học với phần mềm Excel 2007 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN Số lƣợng bạch cầu BN ULPNH trƣớc sau điều trị hóa chất Bảng 1: Số lượng bạch cầu BCĐNTT BN ULPNH trước sau điều trị hóa cht (n = 78) Thời điểm Số l-ợng Số l-ợng đánh giá bạch cầu (G/l) BCNTT (G/l) Trc iu tr hóa chất (1) 5,7 ± 2,3 3,4 ± 1,6 Sau điều trị hóa chất tuần (2) 3,7 ± 2,2* Sau điều trị hóa chất tuần (3) 2,8 ± 1,9* 2,3 ± 1,5* 1,4 ± 1,4* (Ghi chú: * p < 0,05 so vi trc điều trị hóa chất) Trước điều trị hóa chất, số lượng trung bình bạch cầu máu ngoại vi 5,7 G/l, sau điều trị hóa chất tuần 3,7 G/l sau tuần 2,8 G/l So với trước điều trị hóa chất, số lượng bạch cầu giảm rõ rệt sau tuần điều trị (p < 0,05) Tương tự vậy, trước điều trị hóa chất, số lượng trung bình BCĐNTT máu ngoại vi 3,4 G/l, sau điều trị tuần 2,3G/l sau tuần 1,4 G/l So với trước điều trị, số lượng BCĐNTT giảm rõ rệt sau tuần điều trị với p < 0,05 Cũng nhận xét Phan Phương Anh (2002), số lượng bạch cầu BCĐNTT có chiều hướng giảm sau điều trị hóa chất Tuy nhiên, nghiên cứu Phan Phương 104 Anh (2002, n = 57) thấy số lượng bạch cầu BN ULKH trước (8,35 G/l ) sau điều trị hóa chất (6,34 G/l) [4] cao nghiên cứu chúng tơi Điều cách lấy mẫu khác Chúng không lựa chọn BN điều trị hóa chất lần đầu theo phác đồ điều trị định mà lấy tất BN có điều trị hóa chất (khơng phân biệt phác đồ hóa chất số đợt điều trị hóa chất) Khả thực bào BCĐNTT BN ULPNH trƣớc sau điều trị hóa chất Bảng 2: Khả thực bào BCĐNTT BN ULPNH trước sau điều trị hóa chất, n = 78 Thêi ®iĨm Tû lƯ thùc ChØ số đánh giá bào (%) thực bào Trc iu tr hóa chất (1) 59,8 ± 15,9 4,2 ± 2,0 tuần sau điều trị hóa chất (2) 43,2 ± 27,4* tuần sau điều trị hóa chất (3) 44,0 ± 23,7* Tû lÖ giÕt (%) 64,2 4,0 3,9 ± 1,8 47,7 3,7 ± 2,3 45,3 5,4* 7,3* (Ghi chú: *p < 0,05 so với trước điều trị hóa chất) BCĐNTT có vai trò hệ thống miễn dịch thể, chúng tham gia trực tiếp vào q trình chống nhiễm khuẩn chống viêm Ngồi ra, chúng tiết số chất hố ứng động có tác dụng thu hút tế bào miễn dịch đặc hiệu không đặc hiệu Trong ung thư, BCĐNTT bị thu hút tới khối u tiết số chất trung gian gây độc tế bào [6] BCĐNTT diệt tế bào ung thư phản ứng gây độc tế bào phụ thuộc kháng thể Thông qua số lượng chức TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 8-2014 thực bào BCĐNTT đánh BCĐNTT (khi BCĐNTT chết), làm tăng thêm giá sức đề kháng BN Chức nguy nhiễm khuẩn lan tràn BCĐNTT thể khả thực bào vi khuẩn khả diệt vi khuẩn [2, 6] KẾT LUẬN Qua nghiên cứu 78 BN (42 nam 36 Trong nghiên cứu này, so với trước điều nữ) tuổi trung bình 46 chẩn đốn u trị hóa chất, tỷ lệ thực bào BCĐNTT sau ULPNH điều trị hóa chất Viện Huyết điều trị hóa chất giảm rõ rệt sau tuần học Truyền máu Trung ương điều trị với p < 0,05 Kết tương năm (2011 - 2013), rút đồng với nghiên cứu Phan Phương Anh số kết luận: (2002): tỷ lệ thực bào BCĐNTT BN - Ở BN ULPNH, sau bắt đầu điều trị hóa ULPNH trước sau điều trị hóa chất lần chất tuần có tượng giảm số lượt 63% 42,9% [4] lượng bạch cầu nói chung BCĐNTT nói Tương tự vậy, trước điều trị hóa riêng chất, số thực bào trung bình - Chỉ số thực bào BCĐNTT giảm BCĐNTT khác biệt chưa có ý nghĩa thống ít, tỷ lệ BCĐNTT có thực bào kê so với sau điều trị (p > 0,05) Mặc dù sau khả diệt vi khuẩn BCĐNTT điều trị hoá chất, số lượng tỷ lệ thực bào giảm rõ rệt BCĐNTT giảm rõ rệt, số thực bào giảm chưa có ý nghĩa Tuy nhiên, TÀI LIỆU THAM KHẢO đánh giá sâu khả giết vi khuẩn Nguyễn Bá Đức Bệnh Hodgkin ULKH BCĐNTT chúng tơi thấy tiêu suy Hố chất điều trị bệnh ung thư NXB Y học giảm rõ rệt sau điều trị hóa chất Khả 2000, tr.163-190 giết tụ cầu BCĐNTT BN ULPNH giảm Vũ Dương Quý, Vũ Triệu An Đánh giá khả rõ rệt sau tuần điều trị hóa chất với p diệt khuẩn BCĐNTT kỹ thuật < 0,05 Chúng tơi sử dụng kỹ thuật thực bào có nhuộm huỳnh quang So với phương pháp truyền thống nhuộm Giêmsa, phương pháp việc đánh giá tỷ lệ thực bào, số thực bào đánh giá khả diệt khuẩn tế bào thực bào, tiêu chưa đề cập tới thực bào với nhuộm acridin orange Y học Việt Nam 1991, số 3, tập 158, tr.11-15 Vương Thị Ngọc Thịnh Nghiên cứu biến đổi tế bào máu ngoại vi, tuỷ xương BN ULKH trước sau điều trị hoá chất Luận văn Tốt nghiệp Bác sỹ Chuyên khoa II, Chuyên ngành Huyết học Truyền máu 2000 Phan Phương Anh Nghiên cứu chức nghiên cứu Phan Phương Anh đánh thực bào bạch cầu trung tính số lượng giá khả thực bào BCĐNTT BN nhiễm khuẩn BN u lympho ác tính trước ULPNH trước sau điều trị hóa chất Giảm sau điều trị hóa chất Luận văn Thạc sỹ Y học, khả giết vi khuẩn làm cho BCĐNTT cho Chuyên ngành Huyết học - Truyền máu 2002 dù bắt vi khuẩn không diệt UICC U lympho ác tính Ung thư học lâm vi khuẩn dẫn đến khả vi khuẩn sàng (bản tiếng Việt dịch từ nguyên sống phóng thích khỏi Mannual of Clinical on Clogy, 5th edition) NXB Y học 1995, tr 691-704 105 TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 8-2014 Bachner RL Chapter 38: Normal neutrophilstructure and function, hematology basic principles and pratice Third edition, Churchil Livingstone 2000, tr.672-674 106 ... c u Phan Phương Anh đánh thực bào bạch c u trung tính số lượng giá khả thực bào BCĐNTT BN nhiễm khuẩn BN u lympho ác tính trước ULPNH trước sau đi u trị hóa chất Giảm sau đi u trị hóa chất Luận... hóa chất) Khả thực bào BCĐNTT BN ULPNH trƣớc sau đi u trị hóa chất Bảng 2: Khả thực bào BCĐNTT BN ULPNH trước sau đi u trị hóa chất, n = 78 Thời điểm Tỷ lệ thực Chỉ số đánh giá bào (%) thực bào. .. Chức quan ti u nghiên c u thu thập vào thời trọng BCĐNTT thực bào tác nhân điểm: trước đi u trị hóa chất, tuần sau gây bệnh, chúng di chuyển nhanh tới bắt đ u đi u trị hóa chất tuần sau vị trí