Đang tải... (xem toàn văn)
Nghiên cứu này nhằm chế tạo tấm vật liệu tương đương trung bì bằng cách cấy tế bào gốc trung mô từ dây rốn trên đĩa nhựa nuôi cấy và duy trì các tế bào trong môi trường có kích thích tổng hợp đệm gian bào. Mời các bạn cùng tham khảo đề tài nghiên cứu này.
Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 1 * 2013 Nghiên cứu Y học CHẾ TẠO VẬT LIỆU TƯƠNG ĐƯƠNG TRUNG BÌ TỪ TẾ BÀO GỐC TRUNG MƠ MÀNG DÂY RỐN TRONG ĐIỀU KIỆN NI CẤY KHƠNG GIÁ ĐỠ ĐỂ ĐIỀU TRỊ VẾT THƯƠNG BỎNG Phan Minh Hồng*, Đinh Văn Hân**, Nguyễn Gia Tiến**, Đồn Hồng Thu** TĨM TẮT Mục tiêu: Vật liệu tương ương trung bì đã được nghiên cứu phát triển dựa trên việc cấy ngun bào sợi da trên giá đỡ 3 chiều. Hiện nay, giá thành cao cộng với quy trình phức tạp trong chế tạo và sử dụng đã hạn chế tính ứng dụng của tấm vật liệu. Phương pháp: Trong nghiên cứu này, chúng tơi chế tạo tấm vật liệu tương ương trung bì bằng cách cấy tế bào gốc trung mơ từ dây rốn trên đĩa nhựa ni cấy và duy trì các tế bào trong mơi trường có kích thích tổng hợp đệm gian bào Kết quả. Chúng tơi đã khảo sát về hình thái cấu trúc tấm vật liệu cũng như ánh giá tác dụng của chúng trên mơ hình vết thương ộng vật. Kết luận: Từ nghiên cứu này, tấm vật liệu tương ương trung bì có thể tạo ra bằng ni cấy từ tế bào gốc màng dây rốn. Tấm vật liệu rất hữu ích trong thử nghiệm in vitro và trên động vật thực nghiệm Từ khố: Vật liệu tương đương trung bì, giá đỡ, tế bào gốc trung mơ màng dây rốn, vết thương bỏng. ABSTRACT PREPARATION OF DERMAL EQUIVALENT WITH CORD LINING MESENCHYMAL STEM CELLS WITHOUT SCAFFOLD Phan Minh Hoang, Dinh Van Han, Nguyen Gia Tien, Doan Hoang Thu * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 17 ‐ Supplement of No 1 ‐ 2013: 657 ‐ 663 Objective: The dermal equivalent is an in vitro model of the dermal layer of skin. It is constructed by seeding dermal fibroblasts into degradable or polymeric scaffold. It can be used for wound care to accelerate wound healing process. Due to high cost and lack of dermic components, the dermal equivalent has not been used popularly. Methods: In this study, we developed a new dermal equivalent by seeding cord lining mesenchymal stem cells in plastic culture substrate and maintaining in specific medium to stimulate cells to secrete extracellular matrix Results: The morphology of dermal equivalent was investigated, we also made evaluation in animal wound model. Conclusion: In this study, the dermal equivalent could be cultured from mesenchymal stem cells. The dermal equivalent is useful in in vitro and animal experiments. Keywords: dermal equivalent Scaffold, Cord lining mesenchymal stem cells, burn wound. cứu phát triển và chế tạo trong thực nghiệm từ ĐẶT VẤN ĐỀ vài thập kỷ trước đây(1,2). Đầu tiên là sự xuất hiện Vật liệu tương đương da đã được nghiên ni cấy chế tạo tấm vật liệu tương đương biểu * Khoa Thẩm mỹ, BV Chợ Rẫy; ** Viện Bỏng Quốc Gia, Hà Nội. Tác giả liên lạc: ThS.BS. Phan Minh Hồng, ĐT: 0908221738, Email: Drminhhoang2010@gmail.com. Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện Chợ Rẫy Năm 2012 657 Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 1 * 2013 bì và sau đó là sự ra đời của cơng nghệ chế tạo tấm biểu bì(3). Tuy nhiên, các vật liệu này đều có hạn chế trong sử dụng cũng như hiệu quả thành cơng trong điều trị là do thiếu thành phần của trung bì. Do đó một số vật liệu khác được chế tạo dựa trên công nghệ mơ tạo ra tấm vật liệu bao gồm cả thành phần tương đương biểu bì và thành phần tương đương trung bì bằng cách kết hợp các yếu tố trung bì và biểu bì, các yếu tố này được phát triển dựa trên nguyên lý cơ bản là ni cấy ngun bào sợi và tế bào biểu bì trên giá đỡ 3 chiều như tấm collagen. Từ khi có vật liệu thay thế da được chế tạo trong labo, chúng cũng đã được ứng dụng trong trong nhiều lĩnh vực khác nhau liên quan đến da như nghiên cứu dược độc học thậm chí được sử dụng trên lâm sàng đề ghép điều trị thay thế da người cho bệnh nhân bỏng hay tổn khuyết da(4). Một số vật liệu tương đương trung bì đã được sử dụng để phát triển nghiên cứu chế tạo vật liệu thay thế da. Tuy nhiên, các vật liệu này đều phải dùng thành phần đồng loại hay dị loại như collagen của bò(5,6) hoặc trung bì khơng còn tế bào sống lấy từ tử thi(7) hoặc các giá đỡ tổng hợp bằng polymer(8)… các thành phần này đều rất đắt và tiểm ẩn các nguy cơ lây bệnh truyền nhiễm… Trong da, nguyên bào sợi là tế bào chủ yếu được bao quanh bởi đệm gian bào. Chúng cũng tạo ra đệm gian bào bao gồm collagen, elastin và các protein đệm khác và chúng cũng tương tác qua lại với một số loại tế bào khác như tế bào sừng biểu bì, đóng vai trò cốt yếu trong điều tiết sinh lý da. Đặc biệt trong liền vết thương da, vai trò của ngun bào sợi tạo ra ECM đáng kể hơn nhiều so với da bình thường. Tương tự như điều kiện của da tự nhiên, các hormon và yếu tố tăng trưởng cũng được coi là yếu tố quan trọng trong việc tăng trưởng của tế bào và tổng hợp đệm gian bào của các tế bào nuôi cấy(9). Nguyên bào sợi da nuôi cấy được ghi nhận là tăng sinh và tổng hợp đệm gian bào khi có mặt một số hormon hay yếu tố tăng trưởng(10,11). Trong nuôi cấy đơn lớp, nguyên bào sợi da được cho là tạo nhiều thành phần đệm 658 gian bào hơn như collagen sau khi đạt 100% độ che phủ (postconfluent)(12,13). Gần đây chúng tôi nhận thấy rằng các ngun bào sợi có thể được biệt hóa từ tế bào gốc trung mơ màng dây rốn. Các tế bào này có khả năng nhân lên mạnh và nhiều hơn các ngun bào sợi da. Hơn nữa, dây rốn là rác thải y học nhưng lại là một nguồn mơ cung cấp tế bào lý tưởng bởi thơng thường mổ dây rốn đều có diện tích 3000 đến 4000 cm2, do đó chỉ cần một mẫu dây rốn là đã có thể cung cấp số lượng cực kỳ lớn tế bào trung mơ để chế tạo các tấm tế bào hay các tấm vật liệu tương đương trung bì để dùng trong các nghiên cứu in vitro và điều trị bệnh(14). Phát hiện này cùng với những hạn chế của tấm vật liệu tương đương trung bì hiện hành đã thúc đẩy chúng tơi phát triển loại vật liệu tương đương trung bì có tính ứng dụng và an tồn hơn. Trong điều kiện hiện nay, chúng tơi phát triển loại vật liệu tương đương trung bì mới bằng cách nuôi cấy tế bào gốc trung mô trong mơi trường đặc biệt có chứa một số yếu tố để tạo tấm tế bào sau đó thay mơi trường chun biệt cho ngun bào sợi và kích thích chúng tiết ra những thành phần đệm gian bào để tạo tấm vật liệu tương đương trung bì mà khơng cần giá đỡ hay các thành phần dị loại và đồng loại khác. Chúng tôi đánh giá loại vật liệu này bằng các nghiên cứu hình thái cấu trúc mơ ‐ tế bào trong tấm vật liệu. Đồng thời chúng tơi cũng đánh giá khả năng ứng dụng in vivo của vật liệu này bằng cách ghép chúng lên động vật với mơ hình điều trị vết thương vết bỏng thực nghiệm ở thỏ. NGUN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Tách tế bào trung mô dây rốn Mô dây rốn được thu từ sản phụ ngay sau khi sinh, mô được bảo quản trong môi trường dinh dưỡng. Sau khi cắt nhỏ thành các mẩu có kích thước 0,2 x 0,2 cm, đặt các mẩu mô trong đĩa nuôi cấy nhựa và bổ sung môi trường chuyên biệt được cung cấp từ Ngân hàng tế bào gốc Mekostem, đặt các đĩa mô vào tủ ấm 370C Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện Chợ Rẫy Năm 2012 Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 1 * 2013 với 5% CO2. Thay mơi trường ni cấy 2‐3 lần/ tuần và theo dõi đến khi các tế bào hình sao hay hình thoi tách ra khỏi mẫu mơ và phát triển đạt 50%‐70% bề mặt đĩa thì tiến hành tách tế bào bằng quy trình sử dụng trypsin. Các tế bào được nhân lên đến thế hệ cấy chuyển thứ 3‐4 dùng vào nghiên cứu chế tạo tấm vật liệu tương đương trung bì. (1) (2) (3) Nghiên cứu Y học và ghép điều trị vết thương bỏng thực nghiệm. Mười thí nghiệm được tiến hành sử dụng 5 dòng tế bào ở P3 và P4 thu được từ mơ dây rốn. Hình thái mơ Vật liệu tương đương trung bì được cố định trong dung dịch Boin trong 24 giờ, tiến hành khử nước và đúc tiêu bản trong paraffin, cắt thành các lát mỏng 5‐6 micromet và nhuộm haematoxyline – eosin, quan sát tiêu bản dưới kính hiển vi quang học. Gây vết thương bỏng thực nghiệm và ghép tấm vật liệu tương đương trung bì lên vết thương Gây bỏng 20 cm2 theo phương pháp của Halovec và Pocicado 1961. Sơ đồ 1. Cấu trúc mô dây rốn: Lớp tế bào biểu mô tương tự màng ối (1); lớp tế bào gốc trung mô màng dây rốn (2); lớp tế bào gốc trung mô lớp Wharton’ jelly (3). Các tế bào được sử dụng trong nghiên cứu này thuộc vị trí số 2. Tạo tấm vật liệu tương đương trung bì Tế bào trung mơ được ni cấy ở số lượng tương đương 5000 tế bào/ cm2 đĩa nuôi cấy d = 100mm. Sau khi đạt 100% độ che phủ (confluent), chúng tiếp tục được nuôi cấy thêm vài tuần nữa. Trong thời gian ni cấy, mơi trường được thay thế bằng biệt hóa ngun bào sợi để kích thích tiết đệm gian bào. Khi các tế bào mọc chồng lấn nhiều lớp lên nhau và có đệm gian bào, tấm vật liệu sẽ quan sát rõ bằng mắt thường và dưới kính hiển vi. Dấu hiệu thấy rõ là tấm vật liệu bắt đầu co và tách ra khỏi bề mặt ni cấy ở mép đĩa. Dùng dụng cụ là cell lifter gạt nhẹ để tách hoàn toàn tấm vật liệu khỏi bề mặt đĩa. Tấm vật liệu sau đó được sử dụng cho các nghiên cứu đánh giá hình thái cấu trúc Thay băng xử lý vết thương được tiến hành hàng ngày theo quy trình. Đặt tấm vật liệu tương đương trung bì lên vết thương, tránh để gấp mép, dịch, bọt khí bên dưới. Đặt một lớp gạc vaselin lên trên tấm vật liệu. Đặt 5‐6 lớp gạc vô khuẩn, băng ép nhẹ. Băng ép nhẹ bằng lớp vải may theo dạng áo để tránh thỏ làm tuột băng. Thay băng hàng ngày hoặc cách nhật tuỳ theo tình trạng vết thương. Trong trường hợp vết thương nhiễm khuẩn thì điều trị nhiễm khuẩn vết thương cho đến khi sạch vi khuẩn mới tiếp tục ghép. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Tấm vật liệu tương đương trung bì Hai tuần ni cấy tính từ sau khi tế bào đạt 100% độ che phủ, các tế bào trung mơ được duy trì trong mơi trường ni cấy biệt hóa đã bổ sung một số yếu tố, các tế bào hình thoi dài phát triển chồng lấn lên nhau khoảng 2‐3 lớp đan chéo nhau theo nhiều hướng và có sự liên kết với nhau (ảnh 1 a). Trong khi đó tế bào ni cấy trong điều kiện truyền thống khơng có yếu tố bổ sung cho thấy các tế bào vẫn phát triển đơn lớp, các tế bào nhiều hình dạng nằm cạnh nhau trong đó có các tế bào hình sao, hình thoi ngắn hơn (ảnh 1b). Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện Chợ Rẫy Năm 2012 659 Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 1 * 2013 A B Hình 1. Tế bào mọc thành hai lớp đan chéo nhau ở ngày thứ 5 trong mơi trường biệt hóa (A), trong khi tế bào vẫn duy trì 1 lớp ở mơi trường tăng trưởng cho tế bào gốc trung mơ (B), (hình ảnh soi trên kính hiển vi đảo ngược ‐ 50X) A B Hình 2. Duy trì mơi trường ni cấy 2 tuần, tế bào trong mơi trường biệt hóa tạo thành tấm vật liệu tương đương trung bì, các tế bào mọc thành hai ‐3 lớp đan chéo nhau, tấm vật liệu bắt đầu bong (A), lắc nhẹ đĩa ni thấy tấm vật liệu bong và bờ mép dịch chuyển về phía trung tâm đĩa (B). (Soi nổi ‐ 50X) A B Hình 3. Hình ảnh đại thể tấm vật liệu tương đương trung bì sau 2 tuần, tấm vật liệu dai và dễ tách ra khỏi bề mặt đĩa ni cấy. mơi trường biệt hóa, thấy tế bào mọc mạnh xếp Khi tế bào gốc trung mơ màng dây rốn phát chồng lấn lên nhau, khoảng ngày thứ 6‐8 có thể triển trong mơi trường ni cấy, tế bào cũng có nhìn thấy rõ bằng mắt thường. Ngày thứ 10, lớp xu hướng tạo ra 2 lớp chồng lấn lên nhau chứ tế bào có xu hướng bong bật khỏi bề mặt đĩa, lắc khơng phát triển hình cuộn xốy như nhẹ đĩa hoặc dùng đầu pipet gạt nhẹ là có thể Fibroblasts trung bì. Theo dõi các ngày sau thay 660 Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện Chợ Rẫy Năm 2012 Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 1 * 2013 tạo ra tấm tế bào. Tấm tế bào chỉ co nhỏ hơn diện tích đáy đĩa một chút, còn khoảng = 2/3 Nghiên cứu Y học diện tích đĩa ni. A B Hình 4. Hình thái cấu trúc trên kính hiển vi quang học nhuộm HE của tấm vật liệu tương đương trung bì, tấm vật liệu có chứa khơng chỉ tế bào đơn thuần mà còn bao gồm cả đệm gian bào, tấm vật liệu cho thấy trong thành phần của chúng chứa rất nhiều tế bào dạng ngun bào sợi và đệm gian bào tương đối dày. HE, 50X (ảnh a ); HE, 100X (ảnh b). phần của chúng chứa rất nhiều tế bào dạng Về khía cạnh mơ học, tấm vật liệu có chứa ngun bào sợi. Hình ảnh mơ học tấm tế bào gợi khơng chỉ tế bào đơn thuần mà còn bao gồm cả ý đây là vật liệu tương đương trung bì. đệm gian bào, tấm vật liệu cho thấy trong thành Kết quả ghép điều trị vết thương thực nghiệm A C B D Hình 5. Vết bỏng được cắt hoại tử tồn lớp, nền vết thương là mơ dưới da (a); tấm vật liệu được dàn đều che phủ bề mặt vết thương (b). Ngày thứ 5 sau ghép, tấm vật liệu bám và che phủ tốt vết thương (c). Ngày nghiên cứu thứ 14 ghép tấm vật liệu tương đương trung bì, vết thương gần liền hồn tồn bằng cả hai hình thức là biểu mơ hóa từ bờ mép và co hẹp diện tích vết thương, bề mặt sẹo nhẵn và phẳng so với bề Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện Chợ Rẫy Năm 2012 661 Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 1 * 2013 mặt da lành xung quanh, sẹo vẫn thiếu thành phần phụ của da (d). (Thỏ số 1). hoặc là các polymer tổng hợp(8). Trong đó, có mơ Với 05 thỏ thí nghiệm được ghép tấm vật hình chế tạo bằng trộn lẫn đệm collagen với liệu tương đương trung bì vào thời điểm ngày ngun bào sợi. Với mơ hình này, các nhà khoa thứ 2 sau cắt hoại tử sớm làm sạch hoại tử và học đã có sản phẩm được tạo ra bởi sự kết hợp cầm máu tốt. giữa nguyên bào sợi da trong đệm collagen và Tấm vật liệu được dàn đều lên vết thương đã được sử dụng rộng rãi như một hình mẫu ưu (ảnh 5b) nhanh chóng bám vào vết thương. việt. Tuy nhiên, trong nghiên cứu của chúng tơi, Ngày nghiên cứu thứ 5, bề mặt vết thương được chúng tơi kiến tạo ra vật liệu tương đương trung che phủ một lớp màng mỏng, bám chắc vào vết bì mới bao gồm đệm gian bào và cả các tế bào có thương làm vết thương khơng chảy máu lúc hình dạng của nguyên bào sợi bằng cách ni thay băng nhưng cơ bản vẫn quan sát thấy nền cấy đơn độc tế bào gốc trung mơ tách từ màng vết thương màu đỏ hồng và sạch. Tại những chỗ dây rốn và khơng cần giá đỡ. Về hình thái mơ, lớp màng bám vào gạc và bị bong khi thay băng tấm vật liệu theo mơ hình này cho thấy một số quan sát thấy tổ chức hạt sạch, đỏ và rớm máu đặc tính tương tự như trung bì bình thường. (ảnh 5 c). Trong nghiên cứu của chúng tơi, đặc tính giống Vết thương cũng chưa thấy rõ hiện tượng trung bì được xác định cả bằng cả đặc điểm đại biểu mơ hóa từ bờ mép. Quan sát vết thương từ thể và vi thể. Về đại thể, tấm vật liệu quan sát rõ ngày thứ 7 thấy biểu mơ hóa mạnh ở bờ mép vết bằng mắt thường có màu trắng ngà như trung bì thương tiến dần vào phía trung tâm để làm lành da bình thường, tấm vật liệu tương đối chắc khi vết thương. Kèm theo hiện tượng biểu mơ hóa dùng các dụng cụ để dịch chuyển, thậm chí có mạnh là dấu hiệu vết thương co nhỏ. Đến ngày thể gấp làm 2 lớp (ảnh 3 a) và ngay cả khi ghép thứ 15, cơ bản các vết thương liền da bằng biểu lên vết thương thì vẫn thấy rõ tấm vật liệu dạng mơ hóa. Về chất lượng sẹo thấy bề mặt sẹo bằng màng mỏng (ảnh 5 b). Tấm trung bì của chúng phẳng, nhẵn, sờ có cảm giác cứng cộm hơn da tơi cũng tương tự như mơ hình tấm trung bì tạo lành xung quanh, khơng thấy dấu hiệu mọc lơng ra bằng cách trộn ngun bào sợi với collagen vì trở lại (ảnh 5 d). Khơng thấy có dấu hiệu kích thấy rõ cả nhân tế bào và đệm gian bào là thích gây viêm ở vết thương hay phản ứng dị khoảng cách rất rộng trên tiêu bản nhuộm HE ứng ở vùng da lành quanh vết thương ở cả 5 thỏ của tấm vật liệu mặc dù đã tách hồn tồn ra trong suốt q trình nghiên cứu. khỏi bề mặt đĩa ni (ảnh 4a, 4b) ngay cả khi đã BÀN LUẬN tách ra khỏi bề mặt đĩa ni cấy. Tuy mơ hình chế tạo sản phẩm này có chứa cả đệm gian bào Đối với da bình thường, trung bì là lớp hỗ cả tế bào dạng ngun bào sợi nhưng rất có thể trợ cho biểu bì bao gồm thành phần sợi như độ dày sản phẩm của chúng tôi chưa thể đạt collagen và elastin và cũng bao gồm thành phần được như khi trộn nguyên bào sợi với collagen. tế bào. Tế bào chủ yếu của trung bì là ngun Bởi với mơ hình chế tạo tấm trung bì này việc bào sợi đây là dạng tế bào nguồn gốc trung mơ tạo ra tấm trung bì có độ dày bao nhiêu là do mà có khả năng tổng hợp và giáng hóa thành người chế tạo có thể chủ động được bằng cách phần protein đệm sợi và khơng sợi của mơ liên dàn nhiều hay ít hỗn dịch nguyên bào sợi – kêt và các yếu tố hòa tan khác. collgen gell. Còn trong thí nghiệm của chúng tơi, Có vài vật liệu tương đương trung bì được việc tạo ra tấm vật liệu dựa trên khả năng của tế chế tác theo khn mẫu tạo trung bì trên labo. bào dạng ngun bào sợi biệt hóa từ tế bào gốc Trong các mơ hình này, ngun bào sợi được trung mô tạo ra đệm gian bào của chính nó ni cấy trên giá đỡ ba chiều có các thành phần trong điều kiện ni cấy. Cùng với điều đó, kết trung bì như collagen và glycosaminoglycan(5,6) quả nghiên cứu gợi ý rằng sản phẩm của chúng 662 Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện Chợ Rẫy Năm 2012 Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 1 * 2013 tơi có thể hữu ích như vật liệu tương đương trung bì và có những đặc điểm gần gũi với sản phẩm trung bì ni cấy khác. Nghiên cứu của chúng tơi cũng chỉ ra rằng, vật liệu tương đương trung bì mới này có thể thích hợp với các mục đích thí nghiệm và lâm sàng. Bổ sung cho những thí nghiệm in vitro liên quan đến loại vật liệu tương đương trung bì mới này chúng tơi thấy nó có khả năng kích thích liền vết thương ở thỏ gây vết thương thực nghiệm bằng cách làm nhanh hình thành tổ chức hạt đẹp, kích thích biểu mơ hóa từ bờ mép vết thương. KẾT LUẬN Từ nghiên cứu này, tấm vật liệu rất giống với trung bì da bình thường có thể được tạo ra bằng ni cấy đơn độc tế bào dạng ngun bào sợi biệt hóa từ tế bào gốc trung mô màng dây rốn. Tấm vật liệu cũng hữu ích trong các thử nghiệm in vitro và các mục địch lâm sàng như kiến tạo vật liệu tương đương da và ghép trên động vật. 10 11 12 TÀI LIỆU THAM KHẢO Lee DY, Ahn HT, Cho KH. (2000). A new skin equivalent model: use of a dermal substrate which combines de‐ epidermized dermis with fibroblast‐populated collagen matrix. J Dermatol Sci.;23:132—7. Lee DY, Cho KH. (2005). The effects of epidermal keratinocytes and dermal fibroblasts on the formation of cutaneous basement membrane in three‐dimensional culture systems. Arch Dermatol Res.;296:296—302. Green H, Kehinde O, Thomas J. (1979). Growth of cultured human epidermal cells into multiple epithelia suitable for grafting. Proc Natl Acad Sci USA;76:5665‐8. 13 14 Nghiên cứu Y học Ehrlich HP. (2004). Understanding experimental biology of skin equivalent: from laboratory to clinical use in patients with burns and chronic wounds. Am J Surg.;187: 29s‐33s. Boyce ST, Michel S, Reichert U, Schroot B, Schmidt R. (1990). Reconstructed skin from cultured human keratinocytes and fibroblasts on a collagen‐glycosaminoglycan biopolymer substrate. Skin Pharmacol.;2:136—43. Maruguchi T, Maruguchi Y, Suzuki S, Matsuda K, Toda KI, Isshiki N. (1994). A new skin equivalent: keratinocytes proliferated and differentiated on collagen sponge containing fibroblasts. Plast Reconstr Surg.;93:537‐44. Regnier M, Prunieras M, Woodley D. (1994). Growth and differentiation of adult human epidermal cells on dermal substrates. Front Matrix Biol. ;9: 4 ‐ 35. Cooper ML, Hansbrough JF, Spielvogel RL, Cohen R, Bartel RL, Naughton G. (1991). In vivo optimization of a living dermal substitute employing cultured human fibroblasts on a biodegradable polyglycolic acid or polyglactin mesh. Biomaterials; 12: 243 ‐ 8. Goldstein RH, Poliks CF, Pilch PF, Smith BD, (1989). Fine A. Stimulation of collagen formation by insulin and insulin‐like growth factor I in cultures of human lung fibroblasts. Endocrinology; 124: 964 ‐ 70. Russell SB, Russell JD, Trupin KM. (1981). Collagen synthesis in human fibroblasts: effects of ascorbic acid and regulation by hydrocortisone. J Cell Physiol.;109: 121 ‐ 31. Hata R, Sunada H, Arai K, Sato T, Ninomiya Y, Nagai Y, et al. (1988). Regulation of collagen metabolism and cell growth by epidermal growth factor and ascorbate in cultured human skin fibroblasts. Eur J Biochem.;173: 261 ‐ 7. Booth BA, Polak KL, Uitto J. (1980). Collagen biosynthesis by human skin fibroblasts. I. Optimization of the culture conditions for synthesis of type I and type III procollagens. Biochim Biophys Acta.;607: 145 ‐ 60. Minor RR, Sippola‐Thiele M, McKeon J, Berger J, Prockop DJ. (1986). Defects in the processing of procollagen to collagen are demonstrable in cultured fibroblasts from patients with the Ehlers‐Danlos and osteogenesis imperfecta syndromes. J Biol Chem.; 261: 10006 ‐ 14. Katsuhiro Kita,1 Gerd G. Gauglitz,1,2 Thang T. Phan,3 David N. Herndon,1 and Marc G. Jeschke1. (2009). Isolation and Characterization of Mesenchymal Stem Cells from the Sub‐ Amniotic Human Umbilical Cord Lining Membrane. Stem cells and Development, V 20, N0 20 : 1‐ 11. Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện Chợ Rẫy Năm 2012 663 ... 1. Cấu trúc mô dây rốn: Lớp tế bào biểu mô tương tự màng ối (1); lớp tế bào gốc trung mô màng dây rốn (2); lớp tế bào gốc trung mô lớp Wharton’ jelly (3). Các tế bào được sử dụng trong nghiên cứu này thuộc vị trí số 2. ... bằng cách ghép chúng lên động vật với mơ hình điều trị vết thương vết bỏng thực nghiệm ở thỏ. NGUN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Tách tế bào trung mô dây rốn Mô dây rốn được thu từ sản phụ ... phát triển loại vật liệu tương đương trung bì mới bằng cách nuôi cấy tế bào gốc trung mô trong mơi trường đặc biệt có chứa một số yếu tố để tạo tấm tế bào sau đó thay mơi trường chun biệt