Đang tải... (xem toàn văn)
Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm đánh giá tác dụng bảo vệ gan của viên nang cứng kaviran trên mô hình gây tổn thương gan chuột nhắt trắng bằng paracetamol. Đối tượng nghiên cứu là chuột nhắt trắng.
Tạp chí y - dợc học quân số 9-2016 NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG BẢO VỆ GAN CỦA VIÊN NANG CỨNG KAVIRAN TRÊN MƠ HÌNH GÂY TỔN THƯƠNG GAN CHUỘT NHẮT BẰNG PARACETAMOL Nguyễn Trọng Điệp*; Nguyễn Tùng Linh* TÓM TẮT Mục tiêu: đánh giá tác dụng bảo vệ gan viên nang cứng kaviran mơ hình gây tổn thương gan chuột nhắt trắng paracetamol Đối tượng phương pháp: chuột nhắt trắng chia làm lô: lơ chứng sinh học, lơ mơ hình, lơ uống silymarin, lô uống kaviran liều 0,72 g/kg, 2,16 g/kg 4,32 g/kg Ngày thứ 8, chuột lô - gây độc paracetamol liều 400 mg/kg Sau 48 giờ, lấy máu chuột để đo hoạt độ enzym AST, ALT, hàm lượng MDA dịch đồng thể gan, quan sát đại thể vi thể gan Kết quả: kaviran liều 2,16 g/kg 4,32 g/kg làm giảm hoạt độ AST ALT huyết thanh, giảm hàm lượng MDA dịch đồng thể gan, giảm tổn thương mô bệnh học gan chuột Kết luận: kaviran liều 2,16 g/kg 4,32 g/kg có tác dụng bảo vệ gantrên mơ hình gây tổn thương gan chuột nhắt trắng paracetamol * Từ khóa: Kaviran; Chống oxy hóa; Bảo vệ gan; Paracetamol Evaluate the Hepatoprotective Effects of Kaviran Hard Capsule on Mouse Model of Paracetamol - Induced Liver Damage Summary Objectives: To evaluate the hepatoprotective effects of kaviran hard capsule on mouse model of paracetamol - induced liver damage Methods: Mice are divided into groups: control group, paracetamol - induced liver damage group, paracetamol - induced liver damage group administrated with silymarin, paracetamol - induced liver damage group administrated with kaviran at dosages of 0.72 g/kg, 2.16 g/kg and 4.32 g/kg On the 8th day of experiment, group - were administrated orally with paracetamol (400 mg/kg) 48 hours after administrating paracetamol, plamsa AST, ALT and hepatic MDA were determined, macro- and microhepatohistology was observed Results: 2.16 g/kg and 4.32 g/kg dosages of kaviran caused plasma AST, ALT and hepatic MDA reduced, reduced the damage of liver on hepatohistology Conclusion: Kaviran at dosages of 2.16 g/kg and 4.32 g/kg exert hepatoprotective effects on mice model of paracetamol - induced liver damage * Key wods: Kaviran; Antioxydants; Hepatoprotective effects; Paracetamol ĐẶT VẤN ĐỀ Một số nghiên cứu gần cho thấy Nhàu Cúc hoa vàng (CHV) có nhiều tác dụng sinh học quý như: tăng cường miễn dịch, chống oxy hoá, ức chế khối u, kháng khuẩn, chống nấm, chống viêm [1, 2, 6, 7] Sâm Ngọc Linh sinh khối (NLSK) tạo công nghệ sinh khối tế bào thực vật, có chất lượng ổn định * Học viện Quân y Người phản hồi (Corresponding): Nguyễn Trọng Điệp (diepvmmu@gmail.com) Ngày nhận bài: 06/09/2016; Ngày phản biện đánh giá báo: 10/11/2016 Ngày báo đăng: 21/11/2016 Tạp chí y - dợc học quân số 9-2016 Các nghiên cứu bước đầu cho thấy sâm NLSK có số tác dụng sinh học tương tự với sâm tự nhiên như: tăng lực, tăng trình nhận thức ghi nhớ, chống oxy hóa, bảo vệ gan [3] Tuy nhiên, nghiên cứu chiết xuất, bào chế chế phẩm từ dược liệu đơn giản chưa có chế phẩm thuốc bào chế phối hợp từ ba dược liệu Do vậy, nghiên cứu bào chế viên nang cứng kaviran với thành phần hoạt chất bột cao khô sâm NLSK (60 mg/viên), bột cao khô Nhàu (180 mg/viên) bột cao khô CHV (180 mg/viên) Tuy nhiên, qua trình chiết xuất, bào chế việc phối hợp thành phần dược liệu công thức bào chế làm thay đổi tác dụng chế phẩm so với dược liệu ban đầu Do vậy, việc đánh giá tính an tồn tác dụng chế phẩm cần thiết Trong báo này, công bố: Kết nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan viên nang kaviran mơ hình gây tổn thương gan chuột nhắt trắng paracetamol NGUYÊN VẬT LIỆU, ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU - Thiết bị: máy xét nghiệm sinh hóa XC - 55 Chemistry analyzer (Trung Quốc) Máy nghiền dịch đồng thể Stomater 80 (Anh) Máy quang phổ Elisa Lx 800 (Mỹ) - Động vật thí nghiệm: chuột nhắt trắng, chủng Swiss, hai giống, khỏe mạnh, trọng lượng 20 ± g Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương cung cấp Động vật ni điều kiện phòng thí nghiệm với đầy đủ thức ăn nước uống Bộ môn Dược lý, Trường Đại học Y Hà Nội Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan mơ hình gây độc paracetamol liều cao [1, 4, 5] Chuột nhắt trắng chia ngẫu nhiên thành lơ, lơ 10 - Lơ (đối chứng): uống nước cất, 0,2 ml/10 g - Lơ (mơ hình): uống nước cất 0,2 ml/10 g + paracetamol 400 mg/kg - Lô (chứng dương): uống silymarin 140 mg/kg + paracetamol 400 mg/kg - Lô 4: uống kaviran liều 0,72 g/kg + paracetamol 400 mg/kg - Lô 5: uống kaviran liều 2,16 g/kg + paracetamol 400 mg/kg Nguyên liệu, thiết bị động vật nghiên cứu - Lô 6: uống kaviran liều 4,32 g/kg + paracetamol 400 mg/kg - Nguyên vật liệu: viên nang cứng kaviran Học viện Quân y nghiên cứu sản xuất đạt tiêu chuẩn sở Efferalgan (paracetamol) viên sủi 500 mg (Hãng Bristol-Myers Squibb, Pháp) Viên nén legalon (silymarin) 70 mg (Hãng Madaus GmbH, Đức) Kít định lượng enzym chất chuyển hóa máu (AST, ALT) (Hãng DIALAB) Các hóa chất khác đạt tiêu chuẩn phòng thí nghiệm Cho chuột uống thuốc thử nước cất liên tục vào buổi sáng ngày liên tục Đến ngày thứ 8, sau uống thuốc thử (chuột nhịn đói 16 - 18 trước đó), tiến hành gây tổn thương tế bào gan cách cho chuột từ lô đến lô uống paracetamol liều 400 mg/kg Sau 48 gây độc paracetamol, lấy máu động mạch cảnh chuột để đo hoạt enzym AST, ALT, Tạp chí y - dợc häc qu©n sù sè 9-2016 đồng thời lấy gan cân trọng lượng gan, xác định hàm lượng malonyl dialdehyd (MDA) 100% chuột quan sát đại thể gan, 30% gan chuột lô làm mô bệnh học gan - Các số đánh giá: trọng lượng gan chuột tương đối Hoạt độ AST ALT huyết chuột Nồng độ MDA dịch đồng thể gan chuột Mức độ tổn thương gan đánh giá đại thể vi thể gan * Xử lý số liệu: Phân tích liệu phần mềm Microsoft excel 2007 Đánh giá khác biệt giá trị trung bình lô chuột Duncan’s multiple range test, mềm SAS (α = 0,05) Quy ước: so sánh nhóm giá trị cột có ký tự (biểu thị theo a, b, c, d ) khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Ảnh hưởng kaviran trọng lượng gan tương đối chuột nhắt trắng Bảng 1: n Trọng lượng gan tương đối (g/10 g thể trọng) Mức giảm so lơ mơ hình (%) 10 0,572 ± 0,045ab 10,90 Lô nghiên cứu Lô 1: chứng sinh học a Lơ 2: mơ hình 10 0,642 ± 0,099 Lô 3: chứng dương 10 0,636 ± 0,147 Lô 4: kaviran liều 0,72 g/kg Lô 5: kaviran liều 2,16 g/kg Lô 6: kaviran liều 4,32 g/kg 10 10 10 a 0,93 ab 6,07 ab 9,50 b 11,6 0,603 ± 0,083 0,581 ± 0,035 0,524 ± 0,100 Trọng lượng gan tương đối (TLGTĐ) chuột lô uống paracetamol 400 mg/kg (lơ 2, 3, 4, 5, 6) có xu hướng tăng so với lô chứng (lô 1), chưa có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) TLGTĐ chuột uống kaviran liều giảm so với lơ mơ hình (lơ 2) Tuy nhiên, liều 4,32 g/kg (lơ 6), khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Ảnh hưởng kaviran lên hoạt độ AST, ALT huyết chuột Bảng 2: Lô nghiên cứu n AST (UI/l) ALT (UI/l) d 53,40 ± 8,47d Lô 1: chứng sinh học 10 103,20 ± 10,27 Lơ 2: mơ hình 10 505,50 ± 78,89a 293,70 ± 39,79a Lô 3: chứng dương 10 271,00 ± 28,62b 211,50 ± 37,66b Lô 4: kaviran liều 0,72 g/kg 10 494,60 ± 113,89a 292,80 ± 67,35a Lô 5: kaviran liều 2,16 g/kg 10 309,40 ± 94,87b 233,80 ± 61,24b Lô 6: kaviran liều 4,32 g/kg 10 185,30 ± 47,09c 114,10 ± 37,81c T¹p chÝ y - dợc học quân số 9-2016 Hot AST, ALT lơ mơ hình tăng rõ rệt so với lơ chứng sinh học (p < 0,05) Silymarin liều 140 mg/kg có tác dụng giảm rõ hoạt độ AST, ALT so với lơ mơ hình (p < 0,05) Kaviran liều làm giảm hoạt độ AST ALT, liều 2,16 g/kg (lô 5) liều 4,32 g/kg (lơ 6) mức giảm có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình (p < 0,05) Đặc biệt, kaviran liều 4,32 g/kg thể tác dụng tốt silymarin liều 140 mg/kg (p < 0,05) Ảnh hưởng kaviran lên số MDA gan chuột nhắt trắng Hình 1: Hàm lượng MDA gan lô chuột nghiên cứu Hàm lượng MDA lơ mơ hình tăng cao rõ rệt so với lơ chứng sinh học (p < 0,05) Các lô chuột uống silymarrin kaviran có xu hướng làm giảm hàm lượng MDA dịch đồng thể gan so với lô mô hình, chưa có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) So với lô chứng sinh học, hàm lượng MDA dịch đồng thể gan lô chuột uống silymarrin kaviran cao hơn, khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Kết đánh giá đại thể gan chuột Bảng 3: Tóm tắt nhận xét đại thể gan nhóm chuột Lô nghiên cứu Nhận xét đại thể Lô 1: chứng sinh học Gan màu đỏ, mặt nhẵn, mật độ mềm, không phù nề, không xung huyết Lô 2: mơ hình Gan số màu đỏ thẫm, phù nề, xung huyết, bề mặt sần sùi, có nhiều chấm xuất huyết Một số có màu bạc, phù nề, bề mặt sần sùi, không rõ chấm xuất huyết Lô 3: silymarin 140 mg/kg Gan màu đỏ, xung huyết nhẹ, có vài điểm xuất huyết, khơng nhìn rõ điểm tổn thương Lô 4: kaviran 0,72 g/kg Gan màu đỏ thẫm, xung huyết, có chấm xuất huyết số điểm bạc màu Lô 5: kaviran 2,16 g/kg Gan màu đỏ thẫm, xung huyết, có chấm xuất huyết Lơ 6: kaviran 4,32 g/kg Gan màu đỏ, xung huyết, số có ớt chm xut huyt Tạp chí y - dợc häc qu©n sù sè 9-2016 Kết đánh giá mô bệnh học gan chuột Bảng 4: Đánh giá mơ bệnh học gan nhóm chuột nghiên cứu Lơ Hình ảnh mơ bệnh học gan đại diện nhóm chuột (HE x 400) Chứng Gan bình thường, khơng xuất huyết, khơng có xâm nhập viêm Mơ hình Gan thối hóa nặng, xuất huyết hoại tử rộng Có xâm nhập viêm nặng khoảng cửa thối hóa nhẹ tế bào gan Có vi áp xe gan, thối hóa nhẹ tế bào gan Có xâm nhập viêm nhẹ khoảng cửa thối hóa nhẹ tế bào gan Gan có xâm nhập viêm nhẹ khoảng cửa thối hóa mức độ vừa Gan thối hóa mức độ nhẹ đến vừa Silymarin 140 mg/kg Kaviran liều 0,72 g/kg Kaviran liều 2,16 g/kg Gan có xâm nhập viêm nhẹ thối hóa mức độ vừa Gan thối hóa mc va Tạp chí y - dợc học qu©n sù sè 9-2016 Kaviran liều 4,32 g/kg Gan gần bình thường, khơng có xâm nhập viêm BÀN LUẬN Để đánh giá tác dụng chống oxy hoá tác dụng bảo vệ gan kaviran, mơ hình gây tổn thương gan paracetamol lựa chọn, paracetamol gây tổn thương gan chế sinh gốc tự (tương tự CCl4), bên cạnh paracetamol liều cao làm cạn kiệt hệ thống chống oxy hoá thể, làm tăng hoạt độ AST, ALT, MDA huyết tương làm biến đổi cấu trúc gan [5] Bảng cho thấy: kaviran liều làm giảm hoạt độ AST ALT, liều 2,16 g/kg 4,32 g/kg mức giảm có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình (p < 0,05) Đặc biệt, kaviran liều 4,32 g/kg thể tác dụng tốt silymarin liều 140 mg/kg (p < 0,05) Khi thuốc có tác dụng chống oxy hóa làm giảm hàm lượng MDA, góp phần bảo vệ tế bào, có tế bào gan Do vậy, MDA số đánh giá tác dụng bảo vệ gan thuốc thử Hình cho thấy: silymarin kaviran có tác dụng làm giảm MDA dịch đồng thể gan chuột nhắt so với lơ mơ hình Kaviran liều cao làm giảm nồng độ MDA, chưa có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Sylimarin hợp chất chiết xuất từ Cúc gai (Sylimarin marianum, L) 10 Gan thối hóa nhẹ, khơng có xuất huyết xâm nhập viêm Nghiên cứu thực nghiệm cho thấy sylimarin có tác dụng bảo vệ gan theo chế chống oxy hoá ức chế q trình peroxy hố lipid, dọn gốc tự do, giảm giáng hoá glutanthion tế bào gan; ổn định màng tế bào điều hồ tính thấm màng tế bào, từ ngăn cản hấp thu số chất độc vào tế bào gan; ức chế trình xơ hố tế bào gan; phục hồi màng tế bào bị tổn thương làm tăng trình phân bào, kích thích tái tạo tế bào [8] Vì vây, nghiên cứu này, sylimarin lựa chọn làm thuốc đối chứng dương Về đại thể gan, chuột gây độc paracetamol kết hợp dùng kaviran liều cao không thay đổi so với lô chứng sinh học, lô không dùng thuốc gan nhạt màu, phù nề, xung huyết, bề mặt khơng nhẵn, có chỗ bị hoại tử bạc màu, có nhiều chấm xuất huyết Trên hình ảnh vi thể, gan chuột lơ uống kaviran bình thường mức độ tổn thương nhẹ so với lô gây độc paracetamol không dùng thuốc Viên nang kaviran chiết xuất bào chế từ CHV, Nhàu sâm NLSK Kết nghiên cứu tác dụng chống oxy hóa bảo vệ gan chế phẩm phù hợp với nghiên cứu nguyên liệu công bố CHV cú hot tớnh Tạp chí y - dợc học qu©n sù sè 9-2016 chống oxy hóa, nhờ tác dụng dọn gốc tự do, ngăn cản mạnh phá hủy ADN oxy hóa khơng gây độc tế bào gan [6], ức chế phản ứng peroxy hóa lipid màng tế bào gan, hạn chế giảm hoạt độ enzym SOD chuột gây độc CCl4 ức chế sinh gốc tự anion superoxid sinh NO in vitro nồng độ tương đối thấp [2] Nước ép Nhàu có khả bảo vệ tế bào lipid từ thay đổi oxy hóa thúc đẩy gốc tự anion superoxid (SAR) lipid peroxid (LPO), làm giảm mức SAR LPO gan với tỷ lệ 20% 50% so với nhóm chứng sau uống CCl4 [1, 7] Sâm NLSK có tác dụng chống oxy hóa bảo vệ gan nhờ tác dụng làm giảm ALT, AST huyết tương, giảm MDA tăng GSH gan chuột nhắt trắng gây độc CCl4 [3] Như vậy, việc phối hợp dược liệu tạo nên tác dụng hiệp đồng chống oxy hóa, bảo vệ gan chế phẩm KẾT LUẬN Kaviran liều 2,16 g/kg 4,32 g/kg có tác dụng bảo vệ gan mơ hình gây tổn thương gan chuột nhắt trắng paracetamol liều cao, thể tác dụng làm giảm hoạt độ AST ALT huyết thanh, làm giảm hàm lượng MDA dịch đồng thể gan, giảm tổn thương mô bệnh học gan Kaviran liều 2,16 g/kg có tác dụng tương đương với silymarin liều 140 mg/kg, kaviran liều 4,32 g/kg có tác dụng tốt silymarin liều 140 mg/kg TÀI LIỆU THAM KHẢO Phạm Thị Vân Anh Nghiên dụng kích thích miễn dịch chống cao nhàu thực nghiệm Tiến sỹ Y học Trường Đại học Y 2011 cứu tác oxy hóa Luận án Hà Nội Trần Vân Hiền, Trần Thanh Loan, Nguyễn Đặng Dũng CS Tác dụng chống oxy hóa, chống gốc tự flavonoid chiết xuất từ cúc hoa vàng (Chrysanthemum indicum L.) Tạp chí Y - Dược học Quân 2008, số 3 Nguyễn Văn Long Nghiên cứu quy trình tạo sinh khối tế bào đánh giá số tác dụng sinh học sâm NLSK Luận án Tiến sỹ Y học Học viện Quân y 2011 Sener G, Toklu HZ, Sehirli AO et al Protectiveeffects of resveratrolagainstacetaminopheninducedtoxicity in mice Hepatology Research 35 2006, pp.62-68 Chun LJ, Tong MJ, Busuttil RW et al Acetaminophen hepatoxicity and acute live failure J Clin Gastroenterol 2009, (43), pp.342-349 Debnath T, Jin HL, Hasnat MA et al Antioxidant potential and oxidative DNA damage preventive activity of chrysanthemum indicum extracts Journal of Food Biochemistry 2006, ISSN 1745-4514 Blanco YC, Vaillant F, Perez AM et al The noni fruit (Morinda citrifolia L.): A review of agricultural research, nutritional and therapeutic properties Journal of Food Composition and Analysis 2006, 19, pp.645-654 Pradhan SC et al Hepatoptotective herbal drug, silymarin from experimental pharmacology to clinical medicine J Pharm pharmacol 2006, 52 (4), pp.437-440 11 ... đánh giá tác dụng chống oxy hoá tác dụng bảo vệ gan kaviran, mơ hình gây tổn thương gan paracetamol lựa chọn, paracetamol gây tổn thương gan chế sinh gốc tự (tương tự CCl4), bên cạnh paracetamol. .. đồng chống oxy hóa, bảo vệ gan chế phẩm KẾT LUẬN Kaviran liều 2,16 g/kg 4,32 g/kg có tác dụng bảo vệ gan mơ hình gây tổn thương gan chuột nhắt trắng paracetamol liều cao, thể tác dụng làm giảm hoạt... tác dụng chế phẩm so với dược liệu ban đầu Do vậy, việc đánh giá tính an tồn tác dụng chế phẩm cần thiết Trong báo này, công bố: Kết nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan viên nang kaviran mơ hình gây