Đang tải... (xem toàn văn)
Bệnh trĩ (hemorrhoid) được tạo thành do sự giãn quá mức các đám rối tĩnh mạch trĩ và là một trong những bệnh đứng đầu trong các bệnh lý về hậu môn-trực tràng. Do tỉ lệ mắc bệnh cao và ảnh hưởng trực tiếp đến chất lượng cuộc sống nên việc xây dựng các mô hình dược lý gây bệnh trĩ phục vụ cho các nghiên cứu trên là cần thiết. Với mục đích trên đề tài nghiên cứu nhằm “Xây dựng mô hình gây trĩ thực nghiệm bằng hỗn hợp dầu ba đậu và pyridine trên thỏ”.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 XÂY DỰNG MƠ HÌNH GÂY TRĨ THỰC NGHIỆM BẰNG HỖN HỢP DẦU BA ĐẬU VÀ PYRIDIN TRÊN THỎ Trần Mạnh Hùng*, Huỳnh Thị Hồng Phượng* TÓM TẮT Mục tiêu: Bệnh trĩ (hemorrhoid) tạo thành dãn mức đám rối tĩnh mạch trĩ bệnh đứng đầu bệnh lý hậu môn-trực tràng Do tỉ lệ mắc bệnh cao ảnh hưởng trực tiếp đến chất lượng sống nên việc xây dựng mơ hình dược lý gây bệnh trĩ phục vụ cho nghiên cứu cần thiết Với mục đích chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài “Xây dựng mơ hình gây trĩ thực nghiệm hỗn hợp dầu ba đậu pyridine thỏ” Phương pháp: Phương pháp gây trĩ thực nghiệm tiến hành cách bơi nhúng hỗn hợp hóa chất có khả gây kích ứng trực tràng Chỉ tiêu đánh giá gồm: mức độ thời gian sưng đỏ, tiết dịch, viêm loét hậu môn thời gian tạo thành búi trĩ kích thước búi trĩ Kết quả: Hỗn hợp thích hợp để gây trĩ thực nghiệm là: thể tích pyridin + thể tích diethyl ether + thể tích dầu ba đậu 10% diethyl ether, bôi nhúng lần lần 200 μL vòng 60 giây, kích ứng liên tục 10 ngày Với phương pháp này, sau xuất triệu chứng, sau 24 có biểu trĩ cấp trì khoảng 12-15 ngày Kết luận: Như vậy, mơ hình áp dụng để đánh giá hiệu điều trị trĩ thuốc hướng đến mục tiêu Từ khóa: Trĩ thực nghiệm, dầu ba đậu, pyridin ABSTRACT DEVELOPMENT OF AN EXPERIMENTAL MODEL FOR CHEMICAL-INDUCED HEMORRHOID IN RABBIT Tran Manh Hung, Huynh Thi Hong Phuong * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 15 - Supplement of No - 2011: 32 - 37 Objective: Hemorrhoids are dilated or bulging veins of the rectum and anus, and one of leading disorders of recto-anal diseases Due to high prevalence and direct influence of hemorrhoids on quality of life, development of animal models for screening therapeutic agents is necessary In this study, we investigated several hemorrhoid models induced by chemicals Method: Experimental hemorrhoid model was induced by a mixture of irritating chemicals applied to rabbit rectum Parameters for hemorrhoid evaluation included rectal swelling, exudates, inflammation and presence of sac-like protrusion Results: Mixture that could induce experimental hemorrhoid was: volumes of pyridine + volumes of diethyl ether + volumes of croton oil 10% in diethyl ether, 200 μL applied twice a day for 60 seconds This mixture could evoke hemorrhoid symptoms after 24 hours and remaining for 12-15 days Conclusion: Our model can be applied for screening anti-hemorrhoid agents Keywords: Experimental hemorrhoid, croton oil, pyridine *Khoa Dược, ĐH Y Dược TP Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: PGS.TS Trần Mạnh Hùng ĐT: 093.7746.596 32 Email: manhung1969@yahoo.com Chuyên Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh trĩ (hemorrhoid) tạo thành dãn mức đám rối tĩnh mạch trĩ Tuy khơng gây tử vong có biến chứng nặng nề lại trực tiếp ảnh hưởng đến chất lượng sống bệnh nhân Trĩ bệnh đứng đầu bệnh lý hậu môn-trực tràng Bệnh trĩ phổ biến nước ta giới với tỉ lệ người mắc bệnh cao(1) Do tỉ lệ mắc bệnh cao ảnh hưởng trực tiếp đến chất lượng sống nên nhu cầu chữa bệnh ln ln đòi hỏi việc nghiên cứu, phát triển hoàn thiện phương pháp chữa bệnh, nghiên cứu tìm thuốc Bên cạnh hạn chế tổn thương nâng cao chất lượng sống cho bệnh nhân quan tâm Vì vậy, việc xây dựng mơ hình dược lý gây bệnh trĩ phục vụ cho nghiên cứu cần thiết, đặc biệt việc phát triển thuốc chữa bệnh trĩ dược liệu nước ta Với mục đích chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài “Xây dựng mơ hình gây trĩ thực nghiệm hỗn hợp dầu ba đậu pyridine thỏ” PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Thú vật thử nghiệm Thỏ thí nghiệm thỏ giống New Zealand, trọng lượng từ 1,5-2 kg, khỏe mạnh, khơng dị tật, khơng có biểu bất thường, viện Pasteur TP.HCM cung cấp Thỏ ni riêng lồng kích thước 50 x 40 x 50 cm (cao x rộng x dài), cung cấp đủ thức ăn nước uống hàng ngày Thỏ thí nghiệm sau gây bệnh phân thành lô thử nghiệm sau: Lô chứng (6 con) để lành tự nhiên Lô điều trị thuốc trị trĩ thị trường (6 con) Hóa chất thử nghiệm Dầu ba đậu: thu từ dịch chiết ép hạt ba đậu Chuyên Đề Dược Khoa Nghiên cứu Y học Pyridin: hãng Sigma Chloroform: Merck Diethyether: Merck Phương pháp gây trĩ thực nghiệm Phương pháp gây trĩ thực nghiệm tiến hành cách bôi nhúng hỗn hợp hóa chất có khả gây kích ứng trực tràng Các hỗn hợp khảo sát liệt kê đây: Hỗn hợp cồn tuyệt đối + chloroform (tỉ lệ 1:1), bôi nhúng 100 μL vào hậu môn thỏ vòng 60 giây kích ứng cách ngày 14 ngày Hỗn hợp cồn tuyệt đối + chloroform (tỉ lệ 1:1), bôi nhúng 100 μL vào hậu môn thỏ vòng 60 giây kích ứng liên tục 14 ngày Chloroform (99%), bơi nhúng 100 μL vòng 60 giây, kích ứng cách ngày 14 ngày Chloroform (99%), bơi nhúng 100 μL vòng 60 giây, kích ứng liên tục ngày liên tiếp sau nghỉ ngày sau tiếp tục kích ứng ngày liên tiếp, tiếp tục vòng 24 ngày Chloroform (99%), bôi nhúng 100 μL vòng 60 giây, kích ứng liên tục 14 ngày Hỗn hợp: thể tích chloroform + thể tích dầu ba đậu 6% diethyl ether, bơi nhúng 100 μL vòng 60 giây, kích ứng liên tục ngày Hỗn hợp thể tích CHCl3 + thể tích diethyl ether + thể tích dầu ba đậu 6% ether, bôi nhúng 100 μL vòng 60 giây, kích ứng liên tục 14 ngày Hỗn hợp: thể tích pyridin + thể tích diethyl ether + thể tích dầu ba đậu 6% diethyl ether Kích ứng liên tục ngày liên tiếp sau nghỉ ngày sau tiếp tục kích ứng ngày liên tiếp, tiếp tục vòng 14 ngày Hỗn hợp: thể tích pyridin + thể tích diethyl ether + thể tích dầu ba đậu 6% diethyl ether, bơi nhúng 100 μL vòng 60 giây, kích ứng 14 ngày 33 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 10 Hỗn hợp: thể tích pyridin + thể tích diethyl ether + thể tích dầu ba đậu 10% diethyl ether, bơi nhúng 100 μL vòng 60 giây, kích ứng 14 ngày 11 Hỗn hợp: thể tích pyridin + thể tích diethyl ether + thể tích dầu ba đậu 10% diethyl ether, bôi nhúng lần lần 200 μL vòng 60 giây, kích ứng liên tục 14 ngày Chỉ tiêu đánh giá -Thời gian xuất sưng đỏ, mức độ sưng đỏ -Thời gian niêm mạc bị tổn thương, mức độ tổn thương niêm mạc, viêm loét -Xuất huyết, mức độ xuất huyết nặng hay nhẹ -Tiết dịch, hậu môn chảy nước… -Thời gian xuất mạch máu nhỏ xung quanh hậu mơn -Thời gian tạo thành búi trĩ, kích thước búi Phân tích thống kê Các số liệu thống kê trình bày dạng giá trị trung bình ± SEM (standard error of mean: sai số chuẩn giá trị trung bình) biểu diễn loại biểu đồ Sự khác xem có ý nghĩa thống kê giá trị p < 0,01-0,05 thực qua phép kiểm tStudent KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Kết khảo sát 11 hỗn hợp gây kích ứng Trong suốt q trình thử nghiệm, theo dõi kết gây trĩ thực nghiệm 11 hỗn hợp mô tả Phần lớn hỗn hợp khảo sát (từ hỗn hợp số đến hỗn hợp số 10) có khả gây xuất búi trĩ, nhiên thời gian xuất ngắn nên khó theo dõi đáp ứng thuốc thử nghiệm Chỉ có hỗn hợp số 11 (5 thể tích pyridin + thể tích ether + thể tích dầu ba đậu 10%/ ether) bơi nhúng lần lần 200 μL vòng 60 giây, kích ứng liên tục 10 ngày sau xuất triệu chứng, sau 24 có biểu trĩ cấp trì khoảng 13-15 ngày (Hình 1) Hình Quá trình gây trĩ thực nghiệm hỗn hợp dầu ba đậu, pyridin ether (Hình 2, phải) So với thỏ bình thường, hậu môn Các thông số đánh giá mức độ gây trĩ của thỏ gây trĩ sưng to có tĩnh mạch giãn hỗn hợp dầu ba đậu, pyridin ether rộng kèm theo sung huyết tĩnh mạch (Hình 2) Mức độ gây trĩ đánh giá độ sưng hậu mơn (Hình 2, trái) độ giãn tĩnh mạch 34 Chuyên Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học Hình Mức độ gây sưng viêm, giãn tĩnh mạch sung huyết hỗn hợp gây trĩ co thắt, dãn co thắt hậu mơn, Ruscogenins: Đáp ứng mơ hình gây trĩ thực nghiệm trợ tĩnh mạch bảo vệ mạch), Mastu (Bismuth với thuốc trị trĩ thị trường subgallate: bảo vệ niêm mạc), Hydrocotisone Do tổn thương sau gây trĩ có sưng, viêm (kháng viêm corticoid) để làm giảm nhanh loét, xuất huyết, tiết dịch, đóng vẩy cứng gây chóng tổn thương Kết thực nghiệm nứt hậu môn, nên tiến hành theo dõi cho thấy mơ hình đáp ứng tốt với thuốc đáp ứng lơ thí nghiệm sử dụng kết hợp điều trị (Hình 3, Bảng 1) thuốc với chế khác để điều trị triệu chứng bệnh: Proctolog (Trimebutine: chống Hình Mức độ đáp ứng số chế phẩm điều trị trĩ tổn thương viêm, loét, tụ máu) dẫn đến việc Bảng So sánh thời gian điều trị thỏ chứng hình thành búi trĩ Đa số mơ hình gây trĩ thỏ gây trĩ cấp theo dõi vòng 30 (đối với việc sử Thỏ điều trị Thỏ chứng dụng hóa chất) hay vòng 2-3 tuần (khi 8,0 ± 0,365** 13,7 ± 0,83 Thời gian hết sưng can thiệp sâu vào cấu trúc giải phẫu) Trong hồn tồn (ngày) (n=6) (n=6) nghiên cứu chúng tơi chọn hóa chất 5,3 ± 0,333* 6,83 ± 0,31 Thời gian hết viêm loét (ngày) CHCl3, pyridine, dầu ba đậu dựa tính (n=6) (n=6) 2,7 ± 0,211 3,33 ± 0,33 Thời gian hết xuất chất hóa học vật lý đặc trưng, khả gây huyết (ngày) (n=6) (n=6) kích ứng chất Việc sử dụng hỗn hợp 8,5 ± 0,847** 14,3 ± 0,33 Thời gian hết tiết pyridine, dầu ba đậu diethyl ether dịch (ngày) (n=6) (n=6) số nghiên cứu công bố, nhiên tỉ lệ Bàn luận chất hỗn hợp phương pháp thực Cho đến có số nghiên cứu xây không mô tả rõ, đồng thời thời dựng mơ hình gây trĩ đơng vật thí nghiệm gian gây bệnh ngắn (24-30 giờ) nên khó tiến hành với phương pháp khác đánh giá áp dụng mơ hình để sàng lọc chủ yếu gây mơ hình cách can thiệp thuốc Vì phương pháp này, sâu vào cấu trúc giải phẫu dùng hóa tiến hành khảo sát để đưa thông số chất gây kích ứng da niêm mạc, có khả thực nghiệm tiêu đánh giá nhằm tạo gây tụ máu gây phồng rộp (nhằm tạo mơ hình phù hợp với điều kiện phòng Chuyên Đề Dược Khoa 35 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 thí nghiệm nước ta Một số phương pháp gây trĩ thực nghiệm khác trình bày bảng Bảng Các mơ hình gây trĩ thực nghiệm động vật(2,3,4,5) Tác giả Đối tượng Phương pháp nghiên cứu Kết nghiên cứu Hélio Plapler Khỉ Gây mê sau tiến hành thắt tĩnh mạch Xuất búi trĩ sau ngày kéo dài sau 2-3 (2006) hậu môn tuần (Cebus Apella) Nishiki K cộng Chuột cống Bôi nhúng 0,16 ml hỗn hợp gồm nước Xuất phù nề, viêm, giãn mạch, tắc nghẽn (1998) khử ion, pyridine, diethyl ether, 6% dầu mạch máu, xâm nhập fibrin hoại tử biểu ba đậu pyridine ether (1:4:5:10) mô, sau kéo dài 24 vào hậu môn chuột 12 giây Chuột cống Bôi nhúng 100 μL hỗn hợp gồm Xuất phù nề, viêm, giãn mạch, sau Okumura Makoto cộng nước (khử ion), pyridine, diethyl ether, kéo dài 24 (1998) 3% dầu ba đậu pyridine ether (1:4:5:10) vào hậu môn chuột 10 giây Marrero Thỏ Bôi nhúng 800 μL hỗn hợp gồm Xuất phù nề, giãn mạch, tắt nghẽn cộng (2008) (NZ& SGB) pyridine, diethyl ether 6% dầu ba mạch máu, xâm nhập fibrin, viêm đậu diethyl ether vòng hoại tử biểu mơ sau 10 kéo dài 60 giây ổn định 30 So sánh với thí nghiệm chúng tơi với kết thí nghiệm nêu trên, chúng tơi có điểm tương đồng khác biệt sau: - Tỉ lệ, thành phần chất, chủng thú vật thí nghiệm: tiến hành thí nghiệm thỏ nên chúng tơi mơ lại thí nghiệm Marrero Miragaya, Maria Acelia cộng với 400 μL chia làm lần lần trì 60 giây Kết chúng tơi quan sát thấy có tượng sưng viêm xảy sau giờ, phù nề bắt đầu xuất sau sau 24 tượng phù nề, giãn mạch, có xuất mạch máu nhỏ quanh hậu môn, xuất huyết, viêm loét tăng tiết dịch Tuy nhiên mục tiêu thí nghiệm trì triệu chứng sau tuần để thử thuốc nên tiến hành kích ứng nhiều ngày tăng tỉ lệ dầu ba đậu lên 10% dầu ba đậu diethyl ether So sánh với thí nghiệm Nishiki K, Okumura Makoto, Marrero Miragaya, Maria Acelia cho thiết kế thời gian, liều thử nghiệm chủng thú vật thí nghiệm cho kết khác nhau, liều thử nghiệm cao, tần suất lập lại nhiều lần mức độ thương tổn khả trì thương tổn kéo dài Ngồi nhận thấy tác dụng gây nên búi trĩ chủ yếu tính chất 36 dầu ba đậu nên tăng tỉ lệ dầu lên khả xuất búi trĩ nhiều - Về phương pháp tiến hành: so sánh với thí nghiệm Hélio Plapler khả xuất búi trĩ, tỉ lệ đạt cao ổn định so với thí nghiệm chúng tơi Ngồi thí nghiệm Hélio Plapler trì búi trĩ sau 2-3 tuần Vì phương pháp can thiệp sâu vào cấu trúc giải phẫu hậu mơn cho kết tốt hơn, ổn định so với dùng hóa chất KẾT LUẬN Qua nghiên cứu “Xây dựng mơ hình gây trĩ thực nghiệm hỗn hợp dầu ba đậu pyridine thỏ”chúng thu số kết với nội dung tóm tắt sau: - Tỉ lệ thích hợp để gây trĩ là: thể tích pyridin + thể tích diethyl ether + thể tích dầu ba đậu 10% diethyl ether, bôi nhúng lần lần 200 μL vòng 60 giây, kích ứng liên tục 10 ngày Với phương pháp này, sau xuất triệu chứng, sau 24 có biểu trĩ cấp trì khoảng 12-15 ngày Về mặt thực nghiệm, mặt phương pháp, mô hình thích hợp cho điều kiện có phòng thí nghiệm Chun Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 - Các thú vật thử nghiệm có đáp ứng tốt với thuốc trị bệnh trĩ thị trường Proctolog, Mastu, Hydrocortison Như vậy, mơ hình áp dụng để đánh giá hiệu điều trị trĩ thuốc hướng đến mục tiêu TÀI LIỆU THAM KHẢO Lê Quang Nghĩa (2001), Bệnh trĩ, NXB Y học, Hà Nội Chuyên Đề Dược Khoa Nghiên cứu Y học Marrero M, et al (2008) “Formulation for the rectal administration of thrombolytically-acitive agents””, European Patent EP1576951 Nishiki K, Nishinaga K (1998) “Croton oil – induced hemorrhoid model in rat: comparison of anti-inflammatory activity of diflucortolone valerate with other glucocorticoid”, Nippon Yakurigaku Zarshi, 92(4), 215-225 Okumura M, Okuda T, Nakamura T, Yajima M (1998) “Preparation for treating wounds or hemorrhoids”, United States Patent 5852050 Plapler H (2006) “Hemorrhoids: an experimental model in monkeys”, Acta Cirúrgica Brasileira, 21(5), 354-356 37 ... thực nghiệm hỗn hợp dầu ba đậu, pyridin ether (Hình 2, phải) So với thỏ bình thường, hậu mơn Các thông số đánh giá mức độ gây trĩ của thỏ gây trĩ sưng to có tĩnh mạch giãn hỗn hợp dầu ba đậu, ... tơi tiến hành nghiên cứu đề tài Xây dựng mơ hình gây trĩ thực nghiệm hỗn hợp dầu ba đậu pyridine thỏ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Thú vật thử nghiệm Thỏ thí nghiệm thỏ giống New Zealand, trọng lượng... chất KẾT LUẬN Qua nghiên cứu Xây dựng mơ hình gây trĩ thực nghiệm hỗn hợp dầu ba đậu pyridine thỏ chúng thu số kết với nội dung tóm tắt sau: - Tỉ lệ thích hợp để gây trĩ là: thể tích pyridin +