Đang tải... (xem toàn văn)
Luận văn được thực hiện với 2 mục tiêu: Nghiên cứu xây dựng và áp dụng các phương pháp đánh giá chất lượng kháng nguyên trong quy trình sản xuất vắcxin cúm; xây dựng tiêu chuẩn đánh giá chất lượng kháng nguyên trong quy trình sản xuất vắcxin cúm.
ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN o0o NGUYỄN THỊ KIM DUNG NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG KHÁNG NGUYÊN TRONG QUY TRÌNH SẢN XUẤT VẮCXIN CÚM LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC Hà Nội – 2015 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN THỊ KIM DUNG NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG KHÁNG NGUYÊN TRONG QUY TRÌNH SẢN XUẤT VẮCXIN CÚM Chuyên ngành: Vi sinh vật học Mã số: 60420107 LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS. Đỗ Tuấn Đạt PGS.TS. Bùi Thị Việt Hà Hà Nội – 2015 LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng kính trọng và biết ơn sâu sắc đến: TS. Đỗ Tuấn Đạt, Cơng ty TNHH MTV Vắcxin và Sinh phẩm số 1 PGS. TS. Bùi Thị Việt Hà, Bộ mơn Vi sinh vật học – Khoa Sinh học, trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Là những người Thầy đã tận tình quan tâm dạy bảo cùng những kinh nghiệm q báu và tạo mọi điều kiện giúp tơi hồn thành khóa luận này Tơi xin chân thành cảm ơn đến các thầy cơ trong khoa Sinh học trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội, đã giảng dạy và dìu dắt tơi trong suốt q trình học tập vừa qua Nhân dịp này tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới gia đình, đồng nghiệp, bạn bè đã động viên, giúp đỡ và chia sẻ để tơi có đủ nghị lực hồn thành nhiệm vụ học tập của mình Tơi xin trân trọng cảm ơn ! Hà Nội, ngày 18 tháng 11 năm 2015 Học viên Nguyễn Thị Kim Dung MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH MỞ ĐẦU Bệnh cúm đã và đang đe dọa tồn cầu. Trong ba thế kỷ qua, cứ khoảng 10 đến 40 năm, thế giới lại chứng kiến một đại dịch cúm. Trước khi có vắcxin, mỗi đợt dịch có hàng triệu người chết. Năm 1918 chứng kiến đại dịch cúm nghiêm trọng nhất lịch sử thế giới, thậm chí cịn được cho là đại dịch kinh hồng nhất trong các loại bệnh dịch. Tác nhân gây dịch là vi rút cúm A/H1N1 đã gây tổn thất chưa từng thấy. Dịch cúm gia cầm A/H5N1 xuất hiện từ giữa tháng 12/2003 tại Hàn Quốc, sau đó lan rộng ra một số nước châu Á trong đó có Việt Nam. Từ đầu tháng 4/2009, Mexico đã thơng báo trường hợp nhiễm cúm A/H1N1. Vi rút này nhanh chóng lan ra rất nhiều quốc gia trên thế giới và đã có thời điểm Tổ chức Y tế Thế giới (TCYTTG) phải đưa ra các cảnh báo coi đây như là một đại dịch cúm mới. Gần đây nhất, vào năm 2013, trường hợp nhiễm cúm A/H7N9 đầu tiên được thơng báo Trung Quốc và đang tiếp tục dấy lên một mối lo ngại cho châu Á nói riêng cũng như tồn Thế giới nói chung về một căn ngun cúm mới nguy hiểm đối với sức khoẻ con người Bệnh cúm là một trong những bệnh nhiễm trùng đường hơ hấp tạo nên gánh nặng lớn đối với sức khỏe của cộng đồng, TCYTTG và hơn 40% quốc gia trên Thế giới khuyến cáo sử dụng vắcxin phòng vi rút cúm. Do vậy, phát triển các vắcxin cúm cho người đang đặt ra như là một yêu cầu rất cấp bách hiện nay. Là một cơ sở nghiên cứu và sản xuất vắcxin cho người Việt Nam, Cơng ty TNHH MTV Vắcxin và sinh phẩm số 1 đã tiến hành xây dựng các quy trình cơng nghệ sản xuất vắcxin cúm A/H5N1, cúm A/H1N1 và tiến tới là vắcxin cúm A/H7N9 trên ni cấy tế bào. Một trong những thơng số rất quan trọng để đánh giá chất lượng vắcxin trong phịng thí nghiệm đó là đặc tính của kháng ngun vi rút cúm có mặt trong các sản phẩm của q trình sản xuất vắcxin. Xây dựng các phương pháp để đánh giá, từ đó đưa ra các tiêu chuẩn về chất lượng kháng ngun là một việc làm hết sức cần thiết. Điều này giúp cho việc đánh giá được chất lượng vắcxin và kiểm tra độ ổn định của quy trình sản xuất. Do vậy, chúng tơi đã tiến hành thực hiện đề tài : “Nghiên cứu xây dựng phương pháp đánh giá chất lượng kháng ngun trong quy trình sản xuất vắcxin cúm” trên sản xuất vắc xin cúm A/H5N1 và cúm A/H1N1, với 2 mục tiêu : Nghiên cứu xây dựng và áp dụng các phương pháp đánh giá chất lượng kháng nguyên trong quy trình sản xuất vắcxin cúm Xây dựng tiêu chuẩn đánh giá chất lượng kháng nguyên trong quy trình sản xuất vắcxin cúm 10 Hình 3.14. Xác định hàm lượng kháng nguyên HA bằng SRID 1.Kháng nguyên chuẩn 2.Loạt 0112 3. Loạt 0512 4. Loạt 0113 Thử nghiệm SRID là một thử nghiệm vơ cùng quan trọng trong kiểm tra vắcxin cúm. Theo quy định của TCYTTG, đối với vắcxin cúm mùa thơng thường thử nghiệm cơng hiệu chính là thử nghiệm SRID với u cầu hàm lượng mỗi loại kháng ngun HA phải đạt 15 µg/liều. Thử nghiệm SRID là thử nghiệm đặc hiệu tính kháng ngun đảm bảo chính xác hơn thử nghiệm ngưng kết hồng cầu để định lượng HA. Thử nghiêm SRID khơng bị ảnh hưởng của sự phân giải vi rút cũng như quy trình tinh khiết kháng ngun bề mặt trong khi sản xuất vắcxin Để thực hiện thử nghiệm SRID, các nhà sản xuất đều phải nghiên cứu phát triển kháng ngun và kháng huyết thanh chuẩn. Chính vì vậy để tạo nguồn 78 huyết thanh chuẩn đặc hiệu cho thử nghiệm SRID, chúng tơi đã tiến hành gây miễn dịch trên khỉ Maccaca mulatta (nguồn khỉ sạch đã kiểm tra vi rút ngoại lai), trên thỏ và trên dê bằng kháng ngun HA tinh khiết qua 4 mũi tiêm, mỗi mũi cách nhau 3 tuần. Sau đó tiến hành thử nghiệm HI để xác định hiệu giá kháng thể của động vật thí nghiệm. Kết quả cho thấy sử dụng huyết thanh khỉ cho hiệu giá HI cao nhất và khi sử dụng huyết thanh khỉ nồng độ 1,2 µg/ml agarose trong thử nghiệm SRID có kết quả định lượng HA cao nhất, hệ số tương quan của cả kháng ngun chuẩn và mẫu thử đều đạt tiêu chuẩn (≥0,95), đảm bảo độ tuyến tính khi pha lỗng, độ rõ nét vịng ngưng kết đạt u cầu Để xây dựng tiêu chuẩn hàm lượng kháng ngun HA trong quy trình sản xuất vắcxin cúm, chúng tơi đã dựa trên kết quả hàm lượng kháng ngun HA của 9 loạt BTP vắcxin cúm A/H5N1 và 10 loạt BTP vắcxin cúm A/H1N1 Phân tích xu hướng hàm lượng SRID Hàm lượng SRID 300.0 250.0 200.0 150.0 100.0 50.0 0.0 0112 SRID X+2SD 0212 0312 0412 X X-3SD 0512 0113 X-SD X+3SD 0213 0313 X+SD 0413 Loạt X-2SD Hình 3.15. Đồ thị phân tích xu hướng hàm lượng kháng ngun HA bằng SRID trong quy trình sản xuất vắcxin cúm của 9 loạt BTP vắcxin cúm A/H5N1 79 Hàm lượng SRID Phân tích xu hướng hàm lượng SRID 180.0 170.0 160.0 150.0 140.0 130.0 120.0 110.0 100.0 90.0 80.0 0113 0213 0313 0413 0114 0214 0314 0414 0115 0215 SRID X+2SD X X-3SD X-SD X+3SD X+SD Loạt X-2SD Hình 3.16. Đồ thị phân tích xu hướng hàm lượng kháng ngun HA (SRID) trong quy trình sản xuất vắcxin cúm của 10 loạt BTP vắcxin cúm A/H1N1 Qua đồ thị trên, các kết quả đều nằm trong khoảng (± 2SD), chứng tỏ các loạt BTP đều có kết quả hàm lượng kháng ngun HA bằng SRID ổn định. Từ các phân tích trên chúng tơi đưa ra tiêu chuẩn hàm lượng kháng ngun HA bằng SRID trong quy trình sản xuất vắcxin cúm phải đạt từ 100 µg/ml trở lên 3.2.4. Tiêu chuẩn hàm lượng protein tổng số Đối với vắcxin cúm sản xuất từ trứng gà có phơi, tiêu chuẩn của Protein tổng số khơng được vượt q 6 lần hàm lượng HA [17]. Riêng về vắcxin cúm sản xuất trên tế bào, hiện nay chưa có tiêu chuẩn về Protein tổng số vì u cầu giới hạn về Protein và ADN tồn dư của tế bào chủ khơng nghiêm ngặt như trứng gà có phơi chứa nhiều Albumin. Tuy nhiên hàm lượng Protein tổng số của các loạt vắcxin cúm sản xuất theo quy trình của chúng tơi đều khơng vượt q 4 lần so với hàm lượng kháng ngun HA. 80 Hàm lượng Protein Phân tích xu hướng hàm lượng Protein 600 500 400 300 200 100 Loạt 0112 Protein X+2SD 0212 0312 X X-3SD 0412 0512 0113 X-SD X+3SD 0213 0313 X+SD 0413 X-2SD Hình 3.17. Đồ thị hàm lượng Protein tổng số trong quy trình sản xuất vắcxin cúm của 9 loạt BTP vắcxin cúm A/H5N1 Hàm lượng Protein Phân tích xu hướng hàm lượng Protein 600 580 560 540 520 500 480 460 440 420 400 Loạt 0113 0213 0313 0413 0114 0214 0314 0414 0115 0215 Protein X-2SD X X+2SD X-SD X-3SD X+SD X+3SD Hình 3.18. Đồ thị hàm lượng Protein tổng số trong quy trình sản xuất vắcxin cúm của 10 loạt BTP vắcxin cúm A/H1N1 81 Qua đồ thị trên, các kết quả hàm lượng Protein tổng số đều nằm trong khoảng (± 2SD), chứng tỏ các loạt BTP đều có kết quả hàm lượng Protein tổng số ổn định. Từ các phân tích trên và dựa vào tiêu chuẩn protein tổng số của vắc xin sản xuất trên trứng gà có phơi, chúng tơi đưa ra tiêu chuẩn hàm lượng Protein tổng số trong quy trình sản xuất vắcxin cúm đạt từ 200 µg/ml đến 600 µg/ml 3.2.5. Tiêu chuẩn của điện di trên gel SDSPAGE Sản phẩm sau siêu ly tâm tinh sạch hơn nhiều so với trước siêu ly tâm, khơng cịn lẫn các tạp chất, sản phẩm chỉ cịn các băng protein của vi rút cúm 3.2.6. Tiêu chuẩn kính hiển vi điện tử Vi rút cúm sau siêu ly tâm cịn ngun vẹn với các kháng ngun bề mặt đặc hiệu của vi rút KẾT LUẬN Nghiên cứu xây dựng và áp dụng các phương pháp đánh giá chất lượng kháng ngun trong quy trình sản xuất vắcxin cúm: Tìm ra các điều kiện tối ưu cho phương pháp chuẩn độ hiệu giá vi rút cúm CCID50 (liều vi rút gây hủy hoại 50% tế bào) là: + Nhiệt độ ni cấy vi rút: 32oC + Mơi trường ni cấy vi rút: mơi trường MEM 82 + Thời gian ni cấy vi rút: 4 ngày Đã áp dụng được các phương pháp đánh giá chất lượng kháng nguyên cúm như phương pháp chuẩn độ hiệu giá vi rút cúm CCID50 (liều vi rút gây hủy hoại 50% tế bào), phương pháp chuẩn độ kháng nguyên HA bằng kỹ thuật ngưng kết hồng cầu, phương pháp xác định hàm lượng kháng nguyên HA bằng SRID, phương pháp xác định hàm lượng protein tổng số, phương pháp điện di trên gel SDSPAGE, phương pháp kính hiển vi điện tử cho 9 loạt vắcxin cúm A/H5N1 và 10 loạt vắcxin cúm A/H1N1 Xây dựng tiêu chuẩn đánh giá chất lượng kháng ngun trong quy trình sản xuất vắcxin cúm nhằm đảm bảo tính ổn định cũng như chất lượng của sản phẩm Hiệu giá vi rút trong quy trình sản xuất vắcxin cúm đạt từ 106,5 CCID50/ml trở lên Hiệu giá kháng ngun HA bằng phương pháp ngưng kết hồng cầu trong quy trình sản xuất vắcxin cúm đạt từ 128 HAU/50µl trở lên Hàm lượng kháng ngun HA bằng SRID trong quy trình sản xuất vắcxin cúm đạt từ 100 µg/ml trở lên Hàm lượng Protein tổng số trong quy trình sản xuất vắcxin cúm đạt từ 200 µg/ml đến 600 µg/ml Bán thành phẩm sau siêu ly tâm tinh sạch hơn nhiều so với trước siêu ly tâm, khơng cịn lẫn các tạp chất, sản phẩm chỉ cịn các băng protein của vi rút cúm Vi rút cúm sau siêu ly tâm cịn ngun vẹn với các kháng ngun bề mặt đặc hiệu của vi rút 83 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Nguyễn Thanh Thủy, Trần Quang Huy (2010). Atlas vi rút gây bệnh cho người, Nhà xuất bản bản Khoa học tự nhiên và công nghệ Nguyễn Văn Ty (2005). Vi rút học, Nhà xuất bản Giáo dục Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương (2014).Báo cáo tổng kết giám sát cúm mùa năm 2014, Location Tiếng Anh Banjac, M., E. Roethl, F. Gelhart, P. Kramberger, B. L. Jarc, M. Jarc, A Strancar, T Muster, M Peterka (2014) "Purification of Vero cell derived live replication deficient influenza A and B virus by ion exchange monolith chromatography", Vaccine, 32(21): pp. 248792 Belshe, R. B., K. M. Edwards, T. Vesikari, S. V. Black, R. E. Walker, M. Hultquist, G Kemble, E. M Connor, Caiv T Comparative Efficacy Study Group (2007). "Live attenuated versus inactivated influenza vaccine in infants and young children", N Engl J Med, 356(7): pp. 68596 Berger, Stephen (2015). GIDEON Guide to Vaccines. 119 Centers for Disease Control and Prevention, CDC (2004) "Cases of influenza A (H5N1)Thailand, 2004. MMWR Morb Mortal Wkly Rep 2004; 53:100." Centers for Disease Control and Prevention, CDC (2012). "Prevention and control of influenza with vaccines: recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP) – United States, 2012–13 influenza season.", MMWR Morb Mortal Wkly Rep, 61(32): pp. 6138 84 Chen, H., H. Yuan, R. Gao, J. Zhang, D. Wang, Y. Xiong, G. Fan, F. Yang, X. Li, J. Zhou, S. Zou, L. Yang, T. Chen, L. Dong, H. Bo, X. Zhao, Y. Zhang, Y. Lan, T. Bai, J. Dong, Q. Li, S. Wang, Y. Zhang, H. Li, T. Gong, Y. Shi, X. Ni, J. Li, J. Zhou, J. Fan, J. Wu, X. Zhou, M. Hu, J. Wan, W. Yang, D. Li, G. Wu, Z. Feng, G. F. Gao, Y. Wang, Q. Jin, M. Liu, Y. Shu (2014). "Clinical and epidemiological characteristics of a fatal case of avian influenza A H10N8 virus infection: a descriptive study", Lancet, 383(9918): pp. 71421 10 Clancy, S. (2008). "Genetics of the influenza virus", Nature Education, 1(1): pp. 83 11 Collin, N., X de Radigues, H N Vaccine Task Force World Health Organization (2009) "Vaccine production capacity for seasonal and pandemic (H1N1) 2009 influenza", Vaccine, 27(38): pp. 51846 12 Cowling, B. J., L. Jin, E. H. Lau, Q. Liao, P. Wu, H. Jiang, T. K. Tsang, J. Zheng, V. J. Fang, Z. Chang, M. Y. Ni, Q. Zhang, D. K. Ip, J. Yu, Y. Li, L. Wang, W. Tu, L. Meng, J. T. Wu, H. Luo, Q. Li, Y. Shu, Z. Li, Z. Feng, W Yang, Y Wang, G M Leung, H Yu (2013) "Comparative epidemiology of human infections with avian influenza A H7N9 and H5N1 viruses in China: a populationbased study of laboratoryconfirmed cases", Lancet, 382(9887): pp. 12937 13 Eisfeld, A. J., G. Neumann, Y. Kawaoka (2015). "At the centre: influenza A virus ribonucleoproteins", Nat Rev Microbiol, 13(1): pp. 2841 14 Gilleland, H. E., Jr., L. B. Gilleland, J. Staczek, R. N. Harty, A. Garcia Sastre, O. G. Engelhardt, P. Palese (1997). "Chimeric influenza viruses incorporating epitopes of outer membrane protein F as a vaccine against pulmonary infection with Pseudomonas aeruginosa", Behring Inst Mitt(98): pp. 291301 85 15 Hamilton, S. B., D. E. Wyatt, B. T. Wahlgren, M. K. O'Dowd, J. M. Morrissey, D. E. Daniels, J. A. Lednicky (2011). "Higher titers of some H5N1 and recent human H1N1 and H3N2 influenza viruses in Mv1 Lu vs. MDCK cells", Virol J, 8: pp. 66 16 Hay, A. J., A. J. Wolstenholme, J. J. Skehel, M. H. Smith (1985). "The molecular basis of the specific antiinfluenza action of amantadine", EMBO J, 4(11): pp. 30214 17 He, C., Z. Yang, K. Tong (2011). "Downstream processing of Vero cell derived human influenza A virus (H1N1) grown in serumfree medium", J Chromatogr A, 1218(31): pp. 527985 18 Ito, T., J. N. Couceiro, S. Kelm, L. G. Baum, S. Krauss, M. R. Castrucci, I. Donatelli, H. Kida, J. C. Paulson, R. G. Webster, Y. Kawaoka (1998). "Molecular basis for the generation in pigs of influenza A viruses with pandemic potential", J Virol, 72(9): pp. 736773 19 J., Hickling, E’Hondt E. (2006). "A review of production technologies for influenza virus vaccines, and their suitability for deployment in developing countries for influenza pandemic preparedness. Geneva, Switzerland: World Health Organization; 2006. " 20 Kandun, I N., H Wibisono, E R Sedyaningsih, Yusharmen, W. Hadisoedarsuno, W. Purba, H. Santoso, C. Septiawati, E. Tresnaningsih, B. Heriyanto, D. Yuwono, S. Harun, S. Soeroso, S. Giriputra, P. J. Blair, A. Jeremijenko, H. Kosasih, S. D. Putnam, G. Samaan, M. Silitonga, K. H. Chan, L. L. Poon, W. Lim, A. Klimov, S. Lindstrom, Y. Guan, R. Donis, J. Katz, N. Cox, M. Peiris, T. M. Uyeki (2006). "Three Indonesian clusters of H5N1 virus infection in 2005", N Engl J Med, 355(21): pp. 2186 94 86 21 Kawaoka, Y., C. W. Naeve, R. G. Webster (1984). "Is virulence of H5N2 influenza viruses in chickens associated with loss of carbohydrate from the hemagglutinin?", Virology, 139(2): pp. 30316 22 Kawaoka, Y., R. G. Webster (1988). "Sequence requirements for cleavage activation of influenza virus hemagglutinin expressed in mammalian cells", Proc Natl Acad Sci U S A, 85(2): pp. 3248 23 Kistner, O., P. N. Barrett, W. Mundt, M. Reiter, S. SchoberBendixen, F Dorner (1998) "Development of a mammalian cell (Vero) derived candidate influenza virus vaccine", Vaccine, 16(910): pp. 9608 24 Kistner, O., M K Howard, M Spruth, W Wodal, P Bruhl, M. Gerencer, B A Crowe, H SavidisDacho, I Livey, M Reiter, I. Mayerhofer, C. Tauer, L. Grillberger, W. Mundt, F. G. Falkner, P. N. Barrett (2007). "Cell culture (Vero) derived whole virus (H5N1) vaccine based on wildtype virus strain induces crossprotective immune responses", Vaccine, 25(32): pp. 602836 25 Klenk, H D., W Garten (1994) "Host cell proteases controlling virus pathogenicity", Trends Microbiol, 2(2): pp. 3943 26 Knipe D.M., et al, Fields Virology, Volume 1, Lippincott William & Wilkins, London. 2001 27 L., Rudenko (2013). " Live Attenuated Influenza Vaccine in Russia. 2nd WHO meeting on influenza vaccines that induce broad spectrum and long lasting immune responses 6–7 December 2005 Geneva Available from: http://www.who.int/vaccine_research/diseases/influenza/Roudenko.pdf (accessed 12 February 2013)." 28 Lamb, R. A. (1989) "Genes and Proteins of the Influenza Viruses," The Influenza Viruses, Springer US. p. 187 87 29 Lamb, R A., C J Lai (1981) "Conservation of the influenza virus membrane protein (M1) amino acid sequence and an open reading frame of RNA segment encoding a second protein (M2) in H1N1 and H3N2 strains", Virology, 112(2): pp. 74651 30 Lancet (2013). "From SARS to H7N9: will history repeat itself?", Lancet, 381(9875): pp. 1333 31 Le J., Manojkumar R., Pokorny B.A., Silverman J. (2012) Preparation of high growth reassortants by “classical” reassortment method. , Humana Press 32 Liu, M., J M Wood, T Ellis, S Krauss, P Seiler, C Johnson, E. Hoffmann, J. Humberd, D. Hulse, Y. Zhang, R. G. Webster, D. R. Perez (2003). "Preparation of a standardized, efficacious agricultural H5N3 vaccine by reverse genetics", Virology, 314(2): pp. 58090 33 Luytjes, W., M Krystal, M Enami, J D Parvin, P Palese (1989). "Amplification, expression, and packaging of foreign gene by influenza virus", Cell, 59(6): pp. 110713 34 McKinsey, & Company (2013) "Preliminary findings for the technical studies under resolution WHA63.1, 10 December 2010 Available from: http://apps.who.int/gb/pip/pdf_files/OEWG2/PIP_OEWG_Preliminary findingsen.pdf (accessed 12 February 2013)." 35 Neumann, G., T. Watanabe, H. Ito, S. Watanabe, H. Goto, P. Gao, M. Hughes, D. R. Perez, R. Donis, E. Hoffmann, G. Hobom, Y. Kawaoka (1999). "Generation of influenza A viruses entirely from cloned cDNAs", Proc Natl Acad Sci U S A, 96(16): pp. 934550 36 Neumann, G., A. Zobel, G. Hobom (1994). "RNA polymerase Imediated expression of influenza viral RNA molecules", Virology, 202(1): pp. 4779 88 37 Nicolson, C., D. Major, J. M. Wood, J. S. Robertson (2005). "Generation of influenza vaccine viruses on Vero cells by reverse genetics: an H5N1 candidate vaccine strain produced under a quality system", Vaccine, 23(22): pp. 294352 38 Oner, A. F., A. Bay, S. Arslan, H. Akdeniz, H. A. Sahin, Y. Cesur, S. Epcacan, N Yilmaz, I Deger, B Kizilyildiz, H Karsen, M Ceyhan (2006). "Avian influenza A (H5N1) infection in eastern Turkey in 2006", N Engl J Med, 355(21): pp. 217985 39 Palache, A. (2011). "Seasonal influenza vaccine provision in 157 countries (20042009) and the potential influence of national public health policies", Vaccine, 29(51): pp. 945966 40 Rodrigues, M., S Li, K Murata, D Rodriguez, J R Rodriguez, I. Bacik, J R Bennink, J W Yewdell, A GarciaSastre, R S. Nussenzweig, et al (1994) "Influenza and vaccinia viruses expressing malaria CD8+ T and B cell epitopes. Comparison of their immunogenicity and capacity to induce protective immunity", J Immunol, 153(10): pp. 4636 48 41 Skehel, J. J., D. C. Wiley (2000). "Receptor binding and membrane fusion in virus entry: the influenza hemagglutinin", Annu Rev Biochem, 69: pp. 531 69 42 Steinhauer, D A (1999) "Role of hemagglutinin cleavage for the pathogenicity of influenza virus", Virology, 258(1): pp. 120 43 StienekeGrober, A., M Vey, H Angliker, E Shaw, G Thomas, C. Roberts, H. D. Klenk, W. Garten (1992). "Influenza virus hemagglutinin with multibasic cleavage site is activated by furin, a subtilisinlike endoprotease", EMBO J, 11(7): pp. 240714 89 44 Stoeckle, M. Y., M. W. Shaw, P. W. Choppin (1987). "Segmentspecific and common nucleotide sequences in the noncoding regions of influenza B virus genome RNAs", Proc Natl Acad Sci U S A, 84(9): pp. 27037 45 Stöhr, Klaus (2013). Influenza vaccine production. 520 46 Tian, G., S. Zhang, Y. Li, Z. Bu, P. Liu, J. Zhou, C. Li, J. Shi, K. Yu, H. Chen (2005). "Protective efficacy in chickens, geese and ducks of an H5N1 inactivated vaccine developed by reverse genetics", Virology, 341(1): pp. 15362 47 WHO, Requirements for influenza vaccine (live). 1998 48 WHO (2005) WHO guidance on development of influenza vaccine reference viruses by reverse genetics. WHO/CDS/CSR/GIP/2005.6 49 WHO (2006) "WHO Collaborating Centres and Essential Laboratories. 2006 Available from: http://www.who.int/influenza/gisrs_laboratory/collaborating_centres/en/ (accessed 12 February 2013)." 50 WHO (2013) "Influenza (Seasonal) Fact sheet 211 Available from http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs211/en/ (accessed February 2013)." 51 WHO (2014) "Human infection with avian influenza A(H5N1) virus update http://www.who.int/csr/don/2014_01_09_h5n1/en/index.html (Accessed on January 13, 2014)." 52 WHO (2014) "WHO Risk Assessment Human infections with avian influenza A(H7N9) virus. http://www.who.int/influenza/human_animal_interface/RiskAssessment_H7 N9_21Jan14.pdf (Accessed on January 23, 2014)." 53 WHO (2015). "Avian influenza A (H5N1) in Egypt update, 21 March 2015. http://www.emro.who.int/surveillanceforecastingresponse/surveillance 90 news/avianinfluenzaah5n1inegyptupdate21march2015.html (Accessed on March 27, 2015)." 54 WHO (2015) "Cumulative number of confirmed human cases for avian influenza A(H5N1) reported to WHO, 20032015 Available at: http://www.who.int/influenza/human_animal_interface/EN_GIP_20150126C umulativeNumberH5N1cases.pdf?ua=1" 55 WHO (2015) "Influenza at the humananimal interface Summary and assessment as of March 2015. http://www.who.int/influenza/human_animal_interface/Influenza_Summary_ IRA_HA_interface_3_March_2015.pdf?ua=1 (Accessed on March 27, 2015)." 56 WHO (2015) " Influenza at the humananimal interface. http://www.who.int.sci hub.org/influenza/human_animal_interface/HAI_Risk_Assessment/en/ (Accessed on March 27, 2015)." 57 WHO (2015) "Influenza Update N° 245 Available at: http://www.who.int/influenza/surveillance_monitoring/updates/2015_09_07_ surveillance_update_245.pdf" 58 WHO (2015).Influenza Update N° 246, Location, 59 WHO (2015) "WHO risk assessment of human infections with avian influenza A(H7N9) virus 23 February 2015. http://www.who.int/influenza/human_animal_interface/influenza_h7n9/Risk Assessment_H7N9_23Feb20115.pdf?ua=1 (Accessed on March 31, 2015)." 60 WHO (20013) "Avian influenza A (H10N8). http://www.wpro.who.int/china/mediacentre/factsheets/h10n8/en/index.html (Accessed on December 20, 2013)." 91 61 Wiley, D. C., I. A. Wilson, J. J. Skehel (1981). "Structural identification of the antibodybinding sites of Hong Kong influenza haemagglutinin and their involvement in antigenic variation", Nature, 289(5796): pp. 3738 62 Williams, M.S., J.M. Wood (1993). A brief history of inactivated influenza virus vaccine, Elsevier, Amsterdam 63 Wilson, I A., J J Skehel, D C Wiley (1981) "Structure of the haemagglutinin membrane glycoprotein of influenza virus at 3 A resolution", Nature, 289(5796): pp. 36673 64 Winter, G., S Fields (1981) "The structure of the gene encoding the nucleoprotein of human influenza virus A/PR/8/34", Virology, 114(2): pp. 4238 65 Wood, J. M., D. Major, R. W. Newman, U. Dunleavy, C. Nicolson, J. S. Robertson, G C Schild (2002) "Preparation of vaccines against H5N1 influenza", Vaccine, 20 Suppl 2: pp. S847 66 Yamashita, M., M. Krystal, P. Palese (1988). "Evidence that the matrix protein of influenza C virus is coded for by a spliced mRNA", J Virol, 62(9): pp. 334855 92 ... Nghiên? ?cứu? ?xây? ?dựng? ?và áp dụng các? ?phương? ?pháp? ?đánh? ?giá? ?chất lượng? ?kháng? ?ngun? ?trong? ?quy? ?trình? ?sản? ?xuất? ?vắcxin? ?cúm Xây? ?dựng? ?tiêu chuẩn? ?đánh? ?giá? ?chất? ?lượng? ?kháng? ?ngun? ?trong? ?quy? ? trình? ?sản? ?xuất? ?vắcxin? ?cúm 10 Chương 1 TỔNG QUAN... chúng tơi đã tiến hành thực hiện đề tài : ? ?Nghiên? ?cứu? ?? ?xây? ?dựng? ?phương? ? pháp? ?đánh? ?giá? ?chất? ? ? ?lượng? ?kháng? ?ngun? ?trong? ?quy? ?trình? ?sản? ?xuất? ? vắcxin? ?cúm? ?? trên? ?sản? ?xuất? ?vắc xin? ?cúm? ?A/H5N1 và? ?cúm? ?A/H1N1, với 2 mục tiêu : Nghiên? ?cứu? ?xây? ?dựng? ?và áp dụng các? ?phương? ?pháp? ?đánh? ?giá? ?chất. .. TRƯỜNG ĐẠI HỌC? ?KHOA? ?HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN THỊ KIM DUNG NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG KHÁNG NGUYÊN TRONG? ?QUY? ?TRÌNH SẢN XUẤT VẮCXIN CÚM Chuyên ngành: Vi sinh vật học Mã số: 60420107 LUẬN VĂN THẠC SỸ? ?KHOA? ?HỌC