Đang tải... (xem toàn văn)
Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã khảo sát các điều kiện ảnh hưởng đến quá trình tách chiết polyphenol bao gồm: Loại dung môi, nồng độ dung môi, tỷ lệ nguyên liệu: Dung môi, thời gian chiết và nhiệt độ tách chiết để chọn ra điều kiện chiết tối ưu nhất nhằm đánh giá khả năng kháng oxy hóa và kháng khuẩn từ dịch chiết lá cây kim vàng.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học NGHIÊN CỨU TÁCH CHIẾT POLYPHENOL VÀ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHÁNG OXY HÓA, KHÁNG KHUẨN CỦA DỊCH CHIẾT TỪ LÁ CÂY KIM VÀNG (Barleria lupulina L.) Phạm Ngọc Khơi* TĨM TẮT Đặt vấn đề: Cây kim vàng (Barleria lupulina L.) thực vật có hoa thuộc họ Acanthaceae, trồng phổ biến Đông Nam Á Theo dân gian, kim vàng có khả kháng khuẩn kháng viêm, cải thiện biến chứng bệnh tiểu đường, chống thối hóa, kháng khối u bệnh ung thư Tuy nhiên, hoạt tính sinh học đặc biệt khả kháng oxy hóa, kháng khuẩn kim vàng chưa công bố đầy đủ Mục tiêu: Trong nghiên cứu này, khảo sát điều kiện ảnh hưởng đến trình tách chiết polyphenol bao gồm: loại dung môi, nồng độ dung môi, tỷ lệ nguyên liệu:dung môi, thời gian chiết nhiệt độ tách chiết để chọn điều kiện chiết tối ưu nhằm đánh giá khả kháng oxy hóa kháng khuẩn từ dịch chiết kim vàng Phương pháp nghiên cứu: Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến hiệu suất tách chiết polyphenol từ kim vàng Hàm lượng polyphenol xác định phương pháp so màu, hoạt tính kháng oxy hóa xác định dựa vào khả khử gốc tự DPPH Xác định khả kháng khuẩn dịch chiết phương pháp đặt đĩa kháng sinh chủng Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus Kết quả: Dịch chiết từ kim vàng thu có hàm lượng polyphenol cao chiết dung môi ethanol 70%, tỷ lệ nguyên liệu:dung môi 1:10 (g/mL), thời gian tách chiết 60 phút, nhiệt độ tách chiết 60 oC Dịch chiết từ kim vàng có khả kháng oxy hóa cao IC50 = 61,94 μg/mL, thấp vitamin C mẫu đối chứng với IC50 = 28,47 μg/mL Dịch chiết từ kim vàng có khả kháng khuẩn cao chủng Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus nồng độ 40 mg/mL Kết luận: Nghiên cứu khảo sát điều kiện chiết tách polyphenol tốt từ kim vàng qua đánh giá khả kháng oxy hóa kháng khuẩn dịch chiết kim vàng nhiều loại vi khuẩn gây bệnh Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus Từ khóa: Cây kim vàng, polyphenol, kháng oxy hóa, kháng khuẩn ABSTRACT A STUDY ON EXTRACTING POLYPHENOLIC COMPOUNDS INDICATES THAT ANTIOXIDANT AND ANTIBACTERIAL ACTIVITIES OF Barleria lupulina L Pham Ngoc Khoi * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Supplement Vol 22 - No 3- 2018: 35- 43 Background: Barleria lupulina L is a plant of the Acanthaceae family, it occurs in Southeast Asia Traditional medicine studies have demonstrated the possibility of using the biological compounds derived from plants in the prevention and treatment of infectious diseases, inflammation, improve the complications of diabetes, antidegradation, antitumor and anticancer However, the antioxidant and antibacterial activities of Barleria lupulina L are not well studied Aims: The aim of this study is to study the best extraction process to obtain the highest polyphenol content * Bộ môn Mô Phôi - Di truyền Trường Đại học Y khoa Phạm Ngọc Thạch Tác giả liên lạc: TS Phạm Ngọc Khôi ĐT: 0909 097 802 Email: pnkhoi@pnt.edu.vn Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch năm 2018 35 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Barleria lupulina L such as solvent, concentration of solvent, the ratio of material/solvent, time and temperature to use in antioxidant and antibacterial activities Methods: Survey of factors affecting performance polyphenol extracted from Barleria lupulina L leaves Polyphenol content was determined by a colorimetric method, antioxidant activity is based on the ability to eliminate free radicals DPPH Indenting antibacterial extracts of method antibiotic disks set for the strain of Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, and Staphylococcus aureus Results: Ethanol 70%, the ratio of material: solvent (1:10), 60 minutes, 60 oC for polyphenol extraction efficiency is the highest Barleria lupulina L leaves This study evaluated the ability to capture free radicals DPPH IC50 value of the ability to capture free radicals DPPH (61.94 μg/mL), whereas vitamin C (28.47 μg/mL) In this study, polyphenol extracts capable of inhibiting the expression of Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, and Staphylococcus aureus at the concentration in 40 mg/mL Conclusions: In this study, for the first time, we were carried out to optimize extracting conditions of polyphenol from Barleria lupulina L leaves Evaluated the ability of antioxidants of polyphenol extracted though the ability to capture free radicals DPPH Polyphenol extracts are decent variety of bacterial diseases, such as Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, and Staphylococcus aureus Keywords: Barleria lupunia L., polyphenol, antioxidant, antibacterial kim vàng có chứa 12 loại nguyên tố hóa MỞ ĐẦU học khác nhau(4) Ngoài ra, với phản Cây kim vàng (Barleria lupunia L.) hay ứng hóa học đặc trưng xảy tác giả gọi gai kim vàng, gai kim bóng có nguồn định tính diện số hợp chất gốc từ Madagasca Châu Phi, phân bố phổ hữu thiên nhiên có kim vàng biến vùng núi phía Nam Tây Ấn Độ, như: saponin, triterpenoid, flavone, tìm thấy Thái Lan, Indonesia, phytosterol, tannin, caroten, đường khử Trung Quốc, Myanmar, Campuchia Cây kim chất béo(3) vàng thường nhiều nhà trồng làm Mục tiêu nghiên cứu cảnh làm hàng rào có gai nhọn Ở Nghiên cứu nhằm khảo sát điều kiện nước ta, kim vàng mọc hoang trồng ảnh hưởng đến trình tách chiết bao gồm: nhiều nơi, phân bố nhiều tỉnh phía loại dung môi, nồng độ dung môi, tỷ lệ nguyên nam(1,2,4,6) Theo y hoc cổ truyền, kim vàng liệu:dung mơi, thời gian chiết nhiệt độ tách có vị cay, đắng, tính ơn, thơng kinh, giải độc chiết để chọn điều kiện chiết tối ưu có hàm Lá kim vàng dùng để trị đau răng, xuất lượng polyphenol cao nhằm đánh giá khả huyết, ho, cắt suyễn dùng tồn kháng oxy hóa kháng khuẩn từ dịch thân để trị viêm họng, sưng tấy, tê bại, nhức chiết kim vàng mỏi, trật khớp Ngoài lá, thân hoa kim vàng có khả kháng khuẩn kháng viêm, cải thiện biến chứng bệnh tiểu đường, chống thối hóa, chống khối u bệnh ung thư(2,6) Suba cộng công bố kết nghiên cứu hoạt động chống viêm chiết xuất methanol từ kim vàng chuột, kết cho thấy dịch chiết ức chế hoạt động acid acetic giảm đau chuột(9) Ở Việt Nam, theo tác giả Nguyễn Duy Điệt Nguyễn Tư Hiền xác định 36 ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Vật liệu nghiên cứu Lá kim vàng thu hái từ Thành phố Thủ Dầu Một, Tỉnh Bình Dương vào tháng 03 năm 2017 Các chủng vi khuẩn thử nghiệm dùng nghiên cứu Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus Bộ môn Sinh học phân Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch năm 2018 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 tử, Khoa Dược, Trường Đại học Quốc tế Hồng Bàng cung cấp Xử lý mẫu Thu hái kim vàng tươi Lá sau hái đem rửa với nước máy, loại bỏ bụi bẩn hư, vàng, sau phơi héo sấy khơ tủ sấy nhiệt độ 55 oC đến khối lượng không đổi Tiến hành xay sấy khô thành bột mịn Quá trình làm phá vỡ màng tế bào, giúp tăng khuếch tán thẩm thấu chất mẫu vào dung mơi Mẫu đậy kín bảo quản nhiệt độ phòng Định tính sơ thành phần hóa học kim vàng Nguyên tắc nhằm chiết tách hỗn hợp chất có nguyên liệu thực vật thành phân đoạn theo độ phân cực tăng dần: phân cực, phân cực trung bình phân cực mạnh xác định nhóm hợp chất dung dịch chiết phản ứng hóa học đặc trưng Chiết tách nguyên liệu thành phân đoạn theo độ phân cực tăng dần với dung môi ether ethylic, ethanol nước Xác định nhóm hợp chất dịch chiết phản ứng hóa học đặc trưng theo phương pháp Bộ môn Dược liệu Trường Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh(5,7,8) Phương pháp tách chiết Cân xác 10 g mẫu (đã sấy khô nghiền nhỏ) cho vào chai thủy tinh 100 mL, tiến hành khảo sát điều kiện tách chiết thông số khác giữ cố định phương pháp ngấm kiệt Sau tính hiệu q trình trích ly polyphenol thể qua hàm lượng polyphenol tổng số (TPC) tính phương pháp Foline - Ciocalteu Xác định hàm lượng polyphenol tổng số Hàm lượng polyphenol tổng xác định theo phương pháp Singleton cộng (1999) với vài hiệu chỉnh nhỏ, cụ thể sau: dịch chiết hòa lỗng nồng độ thích hợp, sau 0,1 mL dịch chiết pha loãng trộn với 0,9 mL nước cất trước thêm mL thuốc Nghiên cứu Y học thử Foline - Ciocalteu Hỗn hợp trộn trước thêm 2,5 mL Na2CO3 7,5% Sau đó, hỗn hợp phản ứng giữ 30 oC 30 phút trước đo bước sóng 760 nm sử dụng máy quang phổ kế (Carry 50, Varian, Australia) Kết báo cáo miligam acid gallic tương đương (mg GAE)/g chất khơ Cơng thức tính: PP = X * V * k / v * m * (1 – w), PP hàm lượng polyphenol tổng số (mg GAE/g db), X nồng độ acid gallic xác định theo đường chuẩn (mg/mL), V thể tích dịch chiết từ m (g) mẫu kim vàng (mL), k hệ số pha lỗng, v thể tích dịch dược liệu sử dụng (mL), m khối lượng dược liệu thí nghiệm (g), w độ ẩm dược liệu (%)(5,7,8) Khảo sát điều kiện tách chiết Để nghiên cứu ảnh hưởng dung môi chiết, sử dụng ba loại dung mơi có độ phân cực khác nhau, bao gồm: ethanol 99,5%, methanol 99,5% nước cất Các thông số thời gian chiết, nhiệt độ chiết tỷ lệ nguyên liệu:dung môi chiết giữ cố định với giá trị tương ứng là: 60 phút, nhiệt độ phòng 1/10 (g/mL) Loại dung mơi chiết thích hợp chọn dựa vào hàm lượng polyphenol cao Sau sử dụng dung môi để nghiên cứu thông số khác - Ảnh hưởng nồng độ dung môi chiết đến hàm lượng polyphenol thực nồng độ dung môi 30, 50, 70, 90, 99,5% - Ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu:dung môi chiết đến hàm lượng polyphenol thực mức 1:5, 1:10, 1:15, 1:20 (g/mL) - Ảnh hưởng thời gian chiết đến hàm lượng polyphenol thực mốc thời gian 30, 45, 60, 75, 90 phút - Ảnh hưởng nhiệt độ chiết đến hàm lượng polyphenol thực mốc nhiệt độ 30, 40, 50, 60 oC Xác định khả khử gốc tự DPPH (1,1diphenyl-2-picrylhydrazyl) Khả khử gốc tự DPPH xác định theo phương pháp Fu Shieh (2002) Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch năm 2018 37 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 với vài hiệu chỉnh nhỏ Cụ thể sau: khoảng 20 - 140 µL dịch chiết pha lỗng đến nồng độ thích hợp trộn với nước cất để đạt thể tích tổng cộng mL Sau thêm mL dung dịch DPPH 0,2 mM, lắc để yên bóng tối 30 phút Độ hấp thu quang học đo bước sóng 517 nm (Carry 50, Varian, Australia) Khả khử gốc tự DPPH xác định theo cơng thức sau: DPPH (%) = 100 × (ACT-ASP)/ACT (trong đó: ACT độ hấp thu quang học mẫu trắng không chứa dịch chiết, ASP độ hấp thu quang học mẫu có chứa dịch chiết) Kết báo cáo giá trị IC50 nồng độ dịch chiết khử 50% gốc tự DPPH điều kiện xác định Giá trị IC50 thấp hoạt tính khử gốc tự DPPH cao Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm cao chiết Thí nghiệm tiến hành theo phương pháp đặt đĩa giấy để khảo sát khả kháng khuẩn dịch chiết polyphenol từ kim vàng - 1: Mẫu đối chứng (DMSO) - 2: Dịch chiết nồng độ 40 mg/mL - 3: Dịch chiết nồng độ 60 mg/mL - 4: Dịch chiết nồng độ 80 mg/mL - Số nghiệm thức/đĩa petri: nghiệm thức - Tổng số đĩa petri cho loại vi sinh vật: đĩa - Tổng số đĩa petri cho loại khuẩn: 12 đĩa - Thể tích mơi trường/đĩa petri: 20 mL Phương pháp xử lý số liệu Tất thí nghiệm bố trí lặp lại lần để đảm bảo tiến hành phân tích ANOVA Số liệu phân tích ANOVA phần mềm xử lý số liệu thống kê chuyên dụng SAS 8.0 Kiểm định Tukey thực để đánh giá mức độ khác biệt có ý nghĩa giá trị với mức ý nghĩa P < 0,05 KẾT QUẢ Kết định tính số hợp chất tự nhiên Khảo sát định tính sơ hợp chất có 38 kim vàng nhằm chọn hợp chất thích hợp cho thí nghiệm cần nghiên cứu Dịch chiết chiết với dung môi methanol 70%, tỷ lệ nguyên liệu:dung môi 1:10 (g/mL), nhiệt độ phòng chiết 24 Kết khảo sát định tính trình bày bảng Bảng Kết định tính hợp chất tự nhiên có dịch chiết kim vàng Polyphenol Thuốc thử/ phương pháp FeCl3 5% Tannin Chì acetat 10% STT Hợp chất Hiện tượng Xanh đen Tủa màu vàng nhạt Kim loại magie, Màu đỏ tía HCl đậm đặc Chloroform, Terpenoid Màu nâu đỏ Libermann-Burchard Kết tủa màu Alkaloid Bouchardat nâu Saponin Nước cất Khơng có bọt Flavonoid Kết + + + + + - Chú thích: (-): khơng có diện; (+): có diện Theo nghiên cứu sơ hợp chất tự nhiên có kim vàng Sarmad Moin, Sahaya Shibu Babu Arumugam Mahalakshmipriya (2012) cho thấy dịch chiết methanol có diện carbohydrate, flavonoid, phenol, steroid, terpenoid, tannin, khơng có diện alkaloid saponin Tuy nhiên, Sudipa Mandal Subrata Mandal (2014) nghiên cứu lá, thân hoa kim vàng cho thấy chất có diện alkaloid, đường, protein, amino acid Qua q trình thí nghiệm định tính sơ hợp chất hữu tư nhiên, kết đề tài nghiên cứu gần giống với nghiên cứu Sudipa Mandal Subrata Mandal (2014), khác biệt diện alkaloids nguồn gốc thu hái nguyên liệu hai vùng khác nhau, điều kiện khí hậu vùng thổ dưỡng khác nhau, phương pháp chăm sóc phương pháp nghiên cứu khác ảnh hưởng đến hình thành hay thành phần hợp chất kim vàng Từ kết định tính trên, ta thấy kim vàng có chứa hợp chất tự nhiên như: polyphenol, tannin, flavonoid, terpenoid, alkaloid Tuy nhiên lại khơng có saponin Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch năm 2018 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Kết khảo sát ảnh hưởng điều kiện tách chiết đến hàm lượng polyphenol trích ly từ kim vàng Ảnh hưởng loại dung mơi đến hàm lượng polyphenol trích ly từ kim vàng Khảo sát tách chiết kim vàng loại dung môi ethanol, methanol nước cất Với khối lượng mẫu g, chiết với tỷ lệ 1:10 nhiệt độ thường Kết thu thể thông qua đồ thị Nghiên cứu Y học polyphenol thu thấp đạt 127,43 ± 0,86% mgGAE/g db Như ta chọn nồng độ ethanol 70% tối ưu để tiếp tục khảo sát yếu tố khác Đồ thị Ảnh hưởng nồng độ dung mơi đến hàm lượng polyphenol trích từ kim vàng Đồ thị Ảnh hưởng loại dung mơi đến hàm lượng polyphenol trích từ kim vàng Ta thấy hàm lượng polyphenol chiết dung môi ethanol cao đạt 130,20 ± 0,33% mgGAE/g db, hàm lượng polyphenol chiết nước thấp đạt 56,21 ± 0,35% mgGAE/g db Hiệu suất chiết polyphenol với loại dung môi xếp theo thứ tự giảm dần: ethanol > methanol > nước Như ta chọn dung mơi có hiệu suất chiết polyphenol cao ethanol để tiếp tục khảo sát điều kiện ảnh hưởng sau Ảnh hưởng nồng độ dung mơi đến hàm lượng polyphenol trích ly từ kim vàng Sau chọn dung môi tách chiết tốt ethanol Tiến hành khảo sát nồng độ dung môi ethanol khác là: 30, 50, 70, 90, 99,5% Với khối lượng mẫu g, chiết với tỷ lệ 1:10, chiết nhiệt độ thường Kết thu thể thông qua đồ thị Hàm lượng polyphenol tăng dần nồng độ ethanol tăng từ 30 đến 70% bắt đầu giảm xuống tăng nồng độ ethanol từ 70 đến 99,5% Hàm lượng polyphenol thu cao với ethanol 70% đạt 169,32 ± 0,23% mgGAE/g db nồng độ ethanol 30% hàm lượng Ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu:dung môi đến hàm lượng polyphenol trích ly từ kim vàng Sau chọn dung môi tách chiết tốt ethanol 70%, tiến hành khảo sát tiếp trình chiết với tỷ lệ ngun liệu:dung mơi là: 1:5, 1:10, 1:15, 1:20 Với khối lượng mẫu bột g, chiết nhiệt độ thường thời gian Kết thu thể thông qua đồ thị Đồ thị Ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu:dung môi đến hàm lượng polyphenol trích từ kim vàng Ta thấy từ tỷ lệ nguyên liệu:dung môi 1:5 lên tỷ lệ 1:10 hàm lượng polyphenol thu tăng mạnh đạt 60,45 ± 0,39% mgGAE/g db lên 132,04 ± 0,79% mgGAE/g db (tăng 2,2 lần) Và tỷ lệ nguyên liệu:dung môi 1:10 thu hàm lượng polyphenol cao Khi ta tăng tỷ lệ mẫu dung môi lên 1:15 1:20 hàm lượng polypheol lại giảm mạnh xuống (giảm 1,6 lần) đạt 80,05 ± 0,48% mgGAE/g db tỷ lệ 1:15 tiếp tục giảm so với tỷ lệ 1:15 đạt 69,17 ± 0,27% mgGAE/g db tỷ lệ 1:20 (giảm 1,2 lần) Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch năm 2018 39 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Ảnh hưởng thời gian đến hàm lượng polyphenol trích ly từ kim vàng khảo sát với mốc thời gian khác là: 30, 45, Sau chọn tỷ lệ nguyên liệu:dung dung môi ethanol, nhiệt độ thường Kết môi tách chiết tốt 1:10 (g/mL), ta tiếp tục 60, 75, 90 phút Với khối lượng mẫu g, chiết thu thể thông qua đồ thị Đồ thị Ảnh hưởng thời gian đến hàm lượng polyphenol trích từ kim vàng Khi ta tăng thời gian từ 30 lên 45, 60 75 thời gian hiệu suất chiết cao Từ thời phút hàm lượng polyphenol tổng số gian 75 phút ta tăng lên 90 phút hàm lượng tăng dần lên Ở thời gian chiết 30 phút hàm thu lại bắt đầu giảm 109,62 ± 0,35% lượng polyphenol thu 83,94 ± 0,57% mgGAE/g db (giảm 1,2 lần) mgGAE/g db, tiếp tục tăng thời gian lên 75 phút hàm lượng polyphenol thu cao Ảnh hưởng nhiệt độ đến hàm lượng polyphenol trích ly từ kim vàng đạt 133,82 ± 1,57% mgGAE/g db (tăng gấp Tiến hành khảo sát đến nhiệt độ chiết với 1,59 lần) so với 30 phút Tuy nhiên thời gian nhiệt độ khác là: 30, 40, 50, 60 oC Với khối 60 phút hiệu suất thu hàm lượng polyphenol lượng mẫu g, chiết với ethanol 70%, tỷ lệ khơng có khác biệt so với thời gian chiết 75 nguyên liệu:dung môi 1:10, thời gian phút đạt 132,35 ± 0,35% mgGAE/g db, ta với nhiệt độ theo nghiệm thức Kết chọn thời gian chiết 60 phút để tiết kiệm thu thể thông qua đồ thị Đồ thị Ảnh hưởng nhiệt độ đến hàm lượng polyphenol trích từ kim vàng Khi tăng nhiệt độ từ 30 lên 60 oC hàm lượng polyphenol tăng dần lên, nhiệt độ 30 oC hàm lượng polyphenol tổng số thu thấp với giá trị 97,88 ± 0,47% mgGAE/g db nhiệt độ 60 oC hàm lượng polyphenol thu cao đạt 185,98 ± 0,53% mgGAE/g db tăng 1,1 lần so với 30 oC 40 Như vậy, sau khảo sát ảnh hưởng điều kiện tách chiết đến hàm lượng polyphenol trích từ kim vàng, xác định thông số tách chiết tốt sau: dung môi chiết ethanol, nồng độ dung môi ethanol 70%, tỷ lệ nguyên liệu:dung môi 1:10, thời gian chiết 60 phút, nhiệt độ tách chiết 60 oC Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch năm 2018 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Khảo sát khả kháng oxy hóa dịch chiết từ kim vàng Các nồng độ vitamin C biểu thị dạng đường thẳng với phương trình y = 0,602x + 32,86, với hệ số tương quan R = 0,998 thể cho khả ức chế DPPH vitamin C Từ phương trình ta tìm giá trị IC50 vitamin C 28,47 µg/mL Trong khảo sát kháng oxy hóa ta lấy vitamin C làm mẫu đối chứng để so sánh đánh giá khả kháng oxy hóa dịch chiết tồn phần có hàm lượng polyphenol cao chiết từ kim vàng Trong đó, phương trình y = 0,581x + 14,01 hệ số tương quan R = 0,993 thể cho khả ức chế DPPH dịch chiết kim vàng Từ phương trình ta tính giá trị IC50 dịch chiết 61,94 µg/mL Nghiên cứu Y học Khả khử gốc tự phương pháp DPPH phương pháp phân tích đánh giá khả kháng oxy hóa thử nghiệm, tiến hành phương pháp in vitro sử dụng phổ biến nghiên cứu theo Joon Kwan Takaki, năm 2009 90% đề tài nghiên cứu chất kháng oxy hóa sử dụng chất Gía trị IC50 dịch chiết từ kim vàng 61,94 µg/mL vitamin C 28,47 µg/mL, so sánh hai giá trị IC50 ta thấy dịch chiết toàn phần có hàm lượng polyphenol cao có khả kháng oxy hóa cao, nhiên khơng tốt vitamin C, thấp 2,18 lần so với vitamin C Từ kết có ta thấy polyphenol thành phần chất có khả kháng oxy hóa từ dịch chiết kim vàng Khảo sát khả kháng khuẩn dịch chiết từ kim vàng Bảng Kết khảo sát khả kháng khuẩn dịch chiết tồn phần có hàm lượng polyphenol cao từ kim vàng Loại vi khuẩn Nồng độ dịch chiết (mg/mL) DMSO 40 Escherichia coli 60 80 DMSO 40 Klebsiella pneumoniae 60 80 DMSO 40 Pseudomonas aeruginosa 60 80 DMSO 40 Staphylococcus aureus 60 80 Đường kính vòng vơ khuẩn (mm) 0,00 10,50 ± 0,20 14, 43 ± 0,12 19,27 ± 0,25 0,00 9,07 ± 0,12 11,33 ± 0,42 13,37 ± 0,23 0,00 8,10 ± 0,10 12,20 ± 0,17 15,17 ± 0,15 0,00 7,03 ± 0,15 10,37 ± 0,40 11,53 ± 0,35 Khả kháng khuẩn ++ ++ +++ + ++ ++ + ++ +++ + ++ ++ Chú thích: (-): khơng kháng khuẩn, (+): khả kháng khuẩn yếu, (++): khả kháng khuẩn trung bình, (+++): khả kháng khuẩn mạnh Đối với chủng vi khuẩn có DMSO, chứng tỏ dịch chiết tồn phần vòng kháng khuẩn nồng độ, tăng nồng có hàm lượng polyphenol cao từ kim vàng độ từ 40 đến 80 mg/mL, vòng kháng có khả kháng loại vi khuẩn sau tăng lên thường cao nồng độ 80 Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, mg/mL Ta thấy vi khuẩn có đường Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus kính vòng kháng cao so với đối chứng Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch năm 2018 41 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Hình Khả kháng khuẩn dịch chiết tồn phần có hàm lượng polyphenol cao trích từ kim vàng chủng vi khuẩn (A: Escherichia coli, B: Klebsiella pneumoniae, C: Pseudomonas aeruginosa, D: Staphylococcus aureus) Chú thích: (ĐC): đối chứng âm DMSO, (1): dịch chiết từ kim vàng với nồng độ 40 mg/Ml, (2): dịch chiết từ kim vàng với nồng độ 60 mg/mL, (3): dịch chiết từ kim vàng với nồng độ 80 mg/mL KẾT LUẬN Lá kim vàng sau xử lý, sấy xay ta thu nguyên liệu dạng bột Tiến hành tách chiết bột dung môi ethanol, nồng độ ethanol 70%, tỷ lệ nguyên liệu:dung môi 1:10 (g/mL), thời gian chiết 60 phút nhiệt độ 60 oC cho hàm lượng polyphenol cao Khi khảo sát khả kháng oxy hóa dịch chiết tồn phần có hàm lượng polyphenol cao từ kim vàng có giá trị IC50 = 61,94 µg/mL chứng minh dịch chiết có khả kháng oxy hóa cao, thấp với vitamin C có giá trị IC50= 28,47 µg/mL Bên cạnh đó, dịch chiết từ kim vàng cho thấy với nồng độ dịch chiết khác kháng vi khuẩn mức khác Tuy nhiên Escherichia coli có khả kháng khuẩn cao Do điều kiện nghiên cứu giới hạn nên nhiều khía cạnh chưa thể khai thác được, xin đề nghị số vấn đề cần nghiên cứu khảo sát thêm số yếu tố ảnh hưởng đến trình tinh dịch polyphenol từ kim vàng, khảo sát khả 42 kháng số chủng vi khuẩn gây bệnh phổ biến khác để thấy hoạt tính kháng khuẩn mạnh, phổ kháng khuẩn rộng dịch chiết polyphenol từ kim vàng, đồng thời tiến hành thử nghiệm tác dụng kim vàng điều trị số bệnh nhiễm khuẩn, nhiễm trùng động vật thử nghiệm, từ ứng dụng vào việc phòng trị bệnh người TÀI LIỆU THAM KHẢO Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương (2004) Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, tập II, trang 301 - 304, 912 - 915, 1007 - 1010 Đỗ Tất Lợi (2001) Những thuốc vị thuốc Việt Nam Nhà xuất Y học, trang 559 Lại Thị Ngọc Hà, Vũ Thị Thư (2009), “Stress oxy hóa chất chống oxy hóa tự nhiên”, Tạp chí Khoa học Phát triển, tập 7, số 5, trang 667 - 677 Nguyễn Duy Điệt Nguyễn Tư Hiền (1998), “Nghiên cứu thành phần hóa học kim vàng” Tạp chí Dược học, số 4, trang 13 - 14 Nguyễn Minh Cẩm Tiên, Phạm Ngọc Khôi (2016), “Nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm, kháng oxy hóa hợp chất polyphenol chiết xuất từ rễ mướp gai (Lasia spinosa L.)” Tạp chí Y học TP Hồ Chí Minh, Tập 20, Phụ số 20, trang 436 - 446 Phạm Hồng Hộ (2006) Cây có vị thuốc Việt Nam Nhà xuất Trẻ, trang 575 Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch năm 2018 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Phạm Ngọc Khôi, Lê Trọng Nghĩa (2016), “Khảo sát điều kiện thu hồi dịch chiết hoạt tính kháng khuẩn, kháng oxy hóa dịch chiết bắp cải tím (Brassica oleracea)” Tạp chí Khoa học Yersin, Số 01 (11/2016), trang 23 - 29 Phạm Ngọc Khôi, Nguyễn Bùi Minh Tâm (2016), “Khảo sát khả kháng khuẩn dịch chiết bromelain từ Dứa (Ananas comosus) vi khuẩn Shigella Salmonella ứng dụng phòng ngừa điều trị bệnh đường tiêu hóa” Tạp chí Y học TP Hồ Chí Minh, Tập 20, Phụ số 5, trang 21 - 26 Suba V, Murugesan T, Kumaravelrajan R, Mandal C, Saha P (2005), “Antiinflammatory, analgesis and antiperoxidative Nghiên cứu Y học efficacy of Barleria lupulina Lindl”, Extract Phytother Res., 19 (8), trang 695 Ngày nhận báo: 26/12/2017 Ngày phản biện nhận xét báo: 15/01/2018 Ngày báo đăng: 20/04/2018 Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch năm 2018 43 ... hóa từ dịch chiết kim vàng Khảo sát khả kháng khuẩn dịch chiết từ kim vàng Bảng Kết khảo sát khả kháng khuẩn dịch chiết tồn phần có hàm lượng polyphenol cao từ kim vàng Loại vi khuẩn Nồng độ dịch. .. 2018 Kết khảo sát ảnh hưởng điều kiện tách chiết đến hàm lượng polyphenol trích ly từ kim vàng Ảnh hưởng loại dung mơi đến hàm lượng polyphenol trích ly từ kim vàng Khảo sát tách chiết kim vàng loại... chứng âm DMSO, (1): dịch chiết từ kim vàng với nồng độ 40 mg/Ml, (2): dịch chiết từ kim vàng với nồng độ 60 mg/mL, (3): dịch chiết từ kim vàng với nồng độ 80 mg/mL KẾT LUẬN Lá kim vàng sau xử lý,