Xây dựng quy trình chiết xuất saponin toàn phần từ lá đu đủ rừng bằng phương pháp chiết siêu âm

6 282 2
Xây dựng quy trình chiết xuất saponin toàn phần từ lá đu đủ rừng bằng phương pháp chiết siêu âm

Đang tải... (xem toàn văn)

Thông tin tài liệu

Bài viết trình bày việc xây dựng được quy trình chiết xuất saponin toàn phần từ lá đu đủ rừng bằng phương pháp chiết xuất siêu âm.

tạp chí y - dợc học quân số 9-2019 XÂY DỰNG QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT SAPONIN TỒN PHẦN TỪ LÁ ĐU ĐỦ RỪNG BẰNG PHƯƠNG PHÁP CHIẾT SIÊU ÂM Lê Thị Thanh Thảo1; Nguyễn Trọng Điệp2; Nguyễn Hồng Vân3 Võ Xuân Minh4; Nguyễn Nữ Huyền My2 TÓM TẮT Mục tiêu: xây dựng quy trình chiết xuất saponin tồn phần từ đu đủ rừng phương pháp chiết xuất siêu âm Phương pháp nghiên cứu: chiết xuất theo phương pháp siêu âm; khảo sát thông số quy trình gồm: kích thước tiểu phân dược liệu, loại dung môi, tỷ lệ dung môi/dược liệu, số lần chiết, nhiệt độ chiết thời gian chiết; định lượng saponin phương pháp UV-Vis Kết quả: khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến hàm lượng hiệu suất chiết saponin, từ lựa chọn thơng số chiết xuất thích hợp gồm: chiết siêu âm thiết bị SM30-CEP với dung môi ethanol 50%, nhiệt độ 70 C, chiết lần với tỷ lệ dung môi/dược liệu lần 15/1, thời gian chiết 90 phút/lần, kích thước tiểu phân dược liệu 0,5 - mm Kết luận: xây dựng quy trình chiết xuất saponin tồn phần từ đu đủ rừng phương pháp chiết xuất siêu âm với hiệu suất đạt 95,74% * Từ khóa: Đu đủ rừng; Saponin; Siêu âm; Chiết xuất ĐẶT VẤN ĐỀ Đu đủ rừng (ĐĐR) (Trevesia palmata (Roxb.) Vis.) nhỡ, mọc nhiều dễ mọc bìa rừng hay rừng tái sinh Với nguyên liệu nghiên cứu lá, nguồn nguyên liệu dồi dào, sẵn có khu vực Ba Vì, Cúc Phương, Phú Thọ, Hà Giang…, nên việc thu hái không làm ảnh hưởng đến môi trường sinh thái hay đa dạng sinh học [1] Cho đến nay, ĐĐR Việt Nam sử dụng theo kinh nghiệm dân gian lấy lõi thân thay cho vị thuốc thông thảo [2] Một số nghiên cứu giới cho thấy saponin thành phần hóa học chính, liên quan đến số tác dụng sinh học quan trọng ĐĐR Tuy nhiên, Việt Nam, chưa có cơng trình nghiên cứu chiết xuất saponin từ ĐĐR để ứng dụng vào bào chế thuốc Trong khi, nguồn nguyên liệu tự nhiên, có tiềm khai thác cao Do đó, việc nghiên cứu chiết xuất saponin từ ĐĐR cần thiết Kết nghiên cứu tiền đề quan trọng để bào chế bột cao khơ ĐĐR, góp phần phát triển chế phẩm thuốc từ ĐĐR Trường Cao đẳng Y tế Hà Đông Học viện Quân y Bệnh viện Y học Cổ truyền Hà Đông Đại học Phenikaa Người phản hồi (Corresponding): Lê Thị Thanh Thảo (lethanhthao2604@gmail.com) Ngày nhận bài: 10/10/2019; Ngày phản biện đánh giá báo: 13/11/2019 Ngày báo đăng: 28/11/2019 17 T¹P CHÝ Y - HäC QU¢N Sù Sè 9-2019 NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP lần giờ) để loại chlorophyl Sau NGHIÊN CỨU sấy khơ để đuổi hồn tồn n-hexan chiết Nguyên liệu thiết bị * Nguyên liệu: - Dược liệu: ĐĐR thu hái Hà Giang rửa sạch, sấy khô (40°C), xay nhỏ bảo quản túi nilon kín, để nhiệt độ phòng thí nghiệm - Hóa chất: FeCl3, NaOH, amoniac, lần với methanol siêu âm -50oC (100 ml/lần) Tập trung tồn DC vào bình định mức 200 ml Bổ sung vừa đủ thể tích Lắc để ổn định nhiệt độ phòng 30 phút Hút xác 1,0 ml dịch phía trên, cho vào bình định mức 100 ml, bổ sung vừa đủ đến vạch, thu dung dịch định lượng Dung dịch axít acetic băng, vanillin, HCl, HClO mẫu trắng dùng methanol đạt tiêu chuẩn phân tích; dung môi: ethanol, * Chiết xuất saponin từ ĐĐR: n-hexan, dichloromethan, ethyl acetat, aceton, methanol; chất chuẩn: axít oleanolic (độ tinh khiết 97,0%) * Thiết bị, dụng cụ: - Phương pháp chiết: tiến hành thiết bị chiết siêu âm SM30 Cài đặt thông số: nhiệt độ, thời gian chiết, chế độ làm việc Khi thiết bị đạt thông số Thiết bị chiết xuất siêu âm SONY MEDI nhiệt độ, cho nguyên liệu (khoảng g) vào SM30-CEP (Hàn Quốc); máy quang phổ bình chiết trung gian đặt bể siêu âm, Hitachi U-1900 (Nhật Bản); cân phân tích Mettler Tolendo ML204 (Thụy Sỹ) có độ xác đến 0,1 mg thêm dung mơi chiết xuất theo điều kiện xác định cho thí nghiệm Sau chiết xuất, thu lấy dịch chiết, lọc Phương pháp nghiên cứu qua màng 0,45 µm định lượng saponin * Định lượng saponin toàn phần toàn phần phương pháp UV-Vis ĐĐR: Tiến hành theo phương pháp quang phổ UV-Vis: Trường hợp chiết lần, sau chiết lần 1, thu dịch chiết, ép kiệt bã, thêm dung môi lần vào tiếp tục chiết xuất * Dung dịch chuẩn: dung dịch chuẩn - Các thơng số đầu vào khảo sát: kích gốc axít oleanolic có nồng độ xác thước tiểu phân dược liệu, loại dung mơi, 92,50 µg/ml Từ dung dịch chuẩn gốc, tỷ lệ dung môi/dược liệu (DM/DL), số lần pha dung dịch chuẩn làm việc có chiết, nhiệt độ thời gian chiết; thông số nồng độ thay đổi từ 370 - 11,10 µg/ml đầu hàm lượng saponin tồn phần - Mẫu dược liệu: cân xác 5,0 g bột dược liệu, chiết với n-hexan (2 lần x 125 ml, 18 (mg) chiết g ngun liệu tính theo cơng thức sau: t¹p chÝ y - dợc học quân số 9-2019 Saponin (mg/g) = C × n × V × 100 M × (100-h) C: Nồng độ saponin toàn phần dịch chiết tính theo axít oleanoic (mg/ml); V: Thể tích dịch chiết (ml), M: Khối lượng dược liệu (g); n: Hệ số pha loãng; h: Độ ẩm dược liệu (%) KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN Kết định lượng saponin toàn phần ĐĐR Bảng 1: Hàm lượng saponin toàn phần ĐĐR Lá ĐĐR (g) Hàm ẩm (%) EtOH 50% (ml) 5,0217 5,0704 5,0263 Mật độ quang Hệ số pha loãng 0,606 6,27 500 0,582 0,577 25 C (mcg/ml) Saponin (mg/g) 8,69 23,08 8,38 22,04 8,31 22,06 Trung bình ± SD 22,39 ± 0,60 Như vậy, saponin tồn phần tính theo axít oleanoic 22,39 ± 0,60 mg/g dược liệu khô kiệt Kết khảo sát ảnh hưởng thơng số quy trình chiết xuất * Ảnh hưởng kích thước tiểu phân dược liệu: Tiến hành chiết siêu âm điều kiện: dung môi ethanol 50%, tỷ lệ DM/DL 20/1, nhiệt độ chiết 60ºC 60 phút, với hai loại kích thước tiểu phân (KTTP) khác nhau: 0,5 - mm (mẫu DR1), - mm (mẫu DR2) Hình 1: Ảnh hưởng kích thước tiểu phân dược liệu đến chiết xuất saponin toàn phần từ ĐĐR (n = 3) 19 TạP CHí Y - HọC QUÂN Sự Số 9-2019 Việc giảm KTTP dược liệu làm tăng đáng kể hàm lượng hiệu suất chiết saponin Mặc dù, ĐĐR nguyên liệu tương đối mỏng, mềm, việc giảm KTTP tạo điều kiện thuận lợi để dung mơi thấm vào, hòa tan dược chất khuếch tán nên hiệu suất chiết tăng gần 10% Do vậy, đề tài lựa chọn KTTP nguyên liệu từ 0,5 - mm để khảo sát tiếp * Ảnh hưởng dung môi chiết: Tiến hành chiết xuất siêu âm ĐĐR điều kiện: chiết lần với tỷ lệ DM/DL 10/1, nhiệt độ chiết 60ºC 120 phút, với dung môi chiết nước, ethanol có nồng độ khác (30, 50, 70, 90%) Bảng 2: Ảnh hưởng loại dung môi đến chiết xuất saponin từ ĐĐR (n = 3) Mẫu Dung môi chiết Saponin chiết (mg/g) Hiệu suất chiết (%) DR3 H2O 9,72 ± 0,30 43,4 ± 1,32 DR4 EtOH 30% 11,43 ± 0,46 51,03 ± 2,04 DR5 EtOH 50% 13,89 ± 0,22 62,03 ± 0,98 DR6 EtOH 70% 13,15 ± 0,58 58,75 ± 2,59 DR7 EtOH 90% 12,26 ± 0,44 54,74 ± 1,97 Khi chiết xuất lần điều kiện dung môi ethanol nồng độ khác hàm lượng hiệu suất chiết saponin đạt mức cao dùng ethanol 50% Vì vậy, ethanol 50% lựa chọn để tiếp tục khảo sát * Ảnh hưởng tỷ lệ DM/DL: Tiến hành chiết xuất siêu âm ĐĐR điều kiện: dung môi ethanol 50%, nhiệt độ chiết 60ºC 120 phút, với tỷ lệ DM/DL khác Bảng 3: Ảnh hưởng tỷ lệ DM/DL đến chiết xuất saponin từ ĐĐR (n = 3) Mẫu Tỷ lệ DM/DL x lần chiết DR5 10/1 x lần DR8 20/1 x lần DR9 30/1 x lần DR10 40/1 x lần DR11 10/1 x lần DR12 15/1 x lần Thời gian chiết giờ/lần giờ/lần x lần Hàm lượng hiệu suất chiết saponin Saponin (mg/g) Hiệu suất chiết (%) 13,89 ± 0,22 62,03 ± 0,98 16,53 ± 0,30 73,81 ± 1,34 18,17 ± 0,58 81,15 ± 2,60 20,51 ± 0,85 91,62 ± 3,81 17,46 ± 0,16 77,99 ± 0,71 19,02 ± 0,88 84,95 ± 3,94 Khi chiết lần, hàm lượng hiệu suất chiết saponin tăng lên đáng kể tăng tỷ lệ DM/DL Ở tỷ lệ DM/DL 10/1, cho hiệu suất 62,03 ± 0,98%, tăng lên 73,81 ± 1,34% tỷ lệ DM/DL 20/1 81,15 ± 2,60% tỷ lệ DM/DL 30/1 Đối với chiết xuất 20 tạp chí y - dợc học quân số 9-2019 hai lần (mẫu DR11 DR12), tăng tỷ lệ DM/DL lần chiết làm tăng hàm lượng hiệu suất chiết saponin So sánh chiết xuất lần lần (mẫu DR8 với DR11, mẫu DR9 với DR12), kết cho thấy: với tỷ lệ DM/DL, chia làm lần chiết lần giờ, chiết lần cho hàm lượng hiệu suất cao chiết lần (tăng khoảng 4%) Để tăng hiệu suất chiết saponin từ ĐĐR, cần lượng tương đối dung môi tỷ lệ DM/DL ≥ 30/1 cho hiệu suất chiết > 80% Trong đó, chiết lần cho hiệu suất chiết cao nên điều kiện mẫu DR12 phù hợp hơn, cho hiệu suất cao, tăng tỷ lệ DM/DL số lần chiết tốn dung mơi, thời gian chi phí * Ảnh hưởng nhiệt độ chiết: Tiến hành chiết xuất siêu âm ĐĐR điều kiện: dung môi ethanol 50%, chiết lần, lần với tỷ lệ DM/DL 15/1, thời gian 60 phút/lần x lần Bảng 4: Ảnh hưởng nhiệt độ đến chiết xuất saponin từ ĐĐR (n = 3) Mẫu Nhiệt độ chiết Saponin (mg/g) Hiệu suất chiết (%) DR13 50⁰C 17,70 ± 0,46 79,05 ± 2,07 DR12 60⁰C 19,02 ± 0,88 84,95 ± 3,94 DR14 70⁰C 19,94 ± 0,38 89,06 ± 1,68 DR15 80⁰C 19,66 ± 0,47 87,79 ± 2,10 Khi tăng dần nhiệt độ chiết làm tăng dần hàm lượng hiệu suất chiết saponin đạt mức cao 70°C Khi tiếp tục tăng nhiệt độ chiết lên > 70°C, không làm tăng hiệu suất chiết saponin Như vậy, nhiệt độ thích hợp để chiết saponin từ ĐĐR 70ºC, tăng nhiệt độ khơng làm tăng hiệu suất chiết mà tốn thêm lượng * Ảnh hưởng thời gian chiết: Tiến hành chiết xuất siêu âm ĐĐR điều kiện: dung môi ethanol 50%, chiết lần, lần với tỷ lệ DM/DL 15/1, nhiệt độ chiết 70ºC, thời gian chiết khác Bảng 5: Ảnh hưởng thời gian đến chiết xuất saponin từ ĐĐR (n = 3) Mẫu Thời gian chiết Saponin (mg/g) Hiệu suất chiết (%) DR16 30 phút/lần x lần 12,63 ± 0,58 56,39 ± 2,59 DR17 45 phút/lần x lần 14,37 ± 0,48 64,16 ± 2,13 DR14 60 phút/lần x lần 19,94 ± 0,38 89,06 ± 1,68 DR18 75 phút/lần x lần 20,55 ± 0,55 91,76 ± 2,44 DR19 90 phút/lần x lần 21,44 ± 0,63 95,74 ± 2,81 DR20 120 phút/lần x lần 21,58 ± 0,40 96,38 1,80 21 TạP CHí Y - HọC QUÂN Sù Sè 9-2019 Khi tăng dần thời gian chiết làm tăng dần hàm lượng hiệu suất chiết saponin từ ĐĐR Mức tăng cao thời gian chiết tăng khoảng 60 phút/lần chiết, sau tăng nhẹ Với điều kiện chiết khảo sát, thời gian chiết lần 90 phút/lần cho hàm lượng hiệu suất chiết saponin cao nhất, kéo dài thời gian chiết khơng làm tăng thêm Do đó, lựa chọn thời gian cho lần chiết 90 phút KẾT LUẬN Đã xây dựng quy trình chiết xuất saponin toàn phần từ ĐĐR phương pháp chiết siêu âm với thông 22 số sau: thiết bị SM30-CEP, dung môi ethanol 50%, chiết lần, lần với tỷ lệ DM/DL 15/1, nhiệt độ chiết 700C, thời gian chiết 90 phút/lần, KTTP dược liệu 0,5 - mm; hàm lượng saponin toàn phần chiết 21,44 mg/g, tương ứng với hiệu suất chiết 95,74% TÀI LIỆU THAM KHẢO Đỗ Tất Lợi Những thuốc vị thuốc Việt Nam NXB Y học 2000 De Tommasi N, Pizza C, Bellino A et al Triterpenoid saponins from Trevesia sundaica Journal of Natural Products 1997, 60 (11), pp.1070-1074 ... Sau chiết xuất, thu lấy dịch chiết, lọc Phương pháp nghiên cứu qua màng 0,45 µm định lượng saponin * Định lượng saponin toàn phần toàn phần phương pháp UV-Vis ĐĐR: Tiến hành theo phương pháp. .. suất chiết saponin cao nhất, kéo dài thời gian chiết không làm tăng thêm Do đó, lựa chọn thời gian cho lần chiết 90 phút KẾT LUẬN Đã xây dựng quy trình chiết xuất saponin tồn phần từ ĐĐR phương pháp. .. dụng cụ: - Phương pháp chiết: tiến hành thiết bị chiết siêu âm SM30 Cài đặt thông số: nhiệt độ, thời gian chiết, chế độ làm việc Khi thiết bị đạt thông số Thiết bị chiết xuất siêu âm SONY MEDI

Ngày đăng: 15/01/2020, 17:19

Từ khóa liên quan

Tài liệu cùng người dùng

Tài liệu liên quan