Đang tải... (xem toàn văn)
Xây dựng quy trình kỹ thuật Real time – PCR định lượng gen WT1 trong bệnh bạch cầu cấp dòng tủy. Áp dụng để đánh giá biểu hiện gen WT1 trên bệnh nhân bạch cầu cấp dòng tủy (BN BCCDT) trước và sau khi điều trị tấn công tại Bệnh viện Truyền máu huyết học thành phố Hồ Chí Minh.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 ĐÁNH GIÁ BIỂU HIỆN GEN WT1 TRÊN BỆNH NHÂN BẠCH CẦU CẤP DÒNG TỦY TRƯỚC VÀ SAU ĐIỀU TRỊ TẤN CÔNG TẠI BỆNH VIỆN TRUYỀN MÁU HUYẾT HỌC TP HỒ CHÍ MINH Phan Thị Thu Lý*, Cao Văn Động**, Nguyễn quốc Dũng**, Phan Cao Thanh Thảo**, Nguyễn Đình Tuyến***, Phan Thị Xinh**,****, Vũ Quang Huy****,*****,****** TÓM TẮT Mục tiêu: Xây dựng quy trình kỹ thuật Real time – PCR định lượng gen WT1 bệnh bạch cầu cấp dòng tủy Áp dụng để đánh giá biểu gen WT1 bệnh nhân bạch cầu cấp dòng tủy (BN BCCDT) trước sau điều trị công Bệnh viện Truyền máu huyết học thành phố Hồ Chí Minh Đối tượng phương pháp: Nghiên cứu thực 20 BN BCCDT Bệnh viện Truyền máu Huyết học thành phố Hồ Chí Minh từ tháng 9/2018 đến tháng 5/2019 Sử dụng phương pháp tạo dòng TVector để xây dựng đường chuẩn gen WT1 ABL Phản ứng Real-time PCR ứng dụng để định lượng số gen WT1 bệnh nhân Kết quả: Xây dựng thành công đường chuẩn gen WT1 gen ABL1, ứng dụng thiết lập điều kiện tối ưu cho phản ứng Real-time PCR định lượng số gen WT1 với cặp mồi đoạn dò đặc hiệu Có 19 số 20 bệnh nhân biểu mức gen WT1 01 bệnh nhân không biểu mức Mười hai số 19 bệnh nhân biểu mức gen WT1 có đáp ứng mức sinh học phân tử sau trình điều trị ứng với giảm ≥2-log tỉ số biểu WT1/ABL1 Kết luận: Phản ứng Real-time quantitative PCR tối ưu hóa sử dụng để đánh giá thay đổi biểu gen WT1 trước sau trình điều trị cơng BN BCCDT Từ khóa: bạch cầu cấp dòng tủy, biểu gen ABSTRACT WILMS TUMOR EXPRESSION EVALUATION IN ACUTE MYELOID LEUKEMIA PATIENT AT PRETREATMENT AND POST-TREATMENT IN BLOOD TRANSFUSION AND HEMATOLOGY HOSPITAL HO CHI MINH CITY Phan Thi Thu Ly, Cao Van Dong, Nguyen Quoc Dung, Phan Cao Thanh Thao, Nguyen Dinh Tuyen, Phan Thi Xinh, Vu Quang Huy * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol 23 - No - 2019: 214 - 219 Objectives: This study is conducted to implementing technical process of WT1 detection and applicating technical process on WT1 expression evaluation in acute myeloid leukemia patients at pre-treatment and posttreatment Methods: Twenty patients in Blood Transfusion and Hematology Hospital Ho Chi Minh city, who had chronic myeloid leukemia, participated in the real-time quantitative PCR to estimating WT1 and ABL1 concentration change by designing primers and probes based on WT1 and ABL1 gene sequences and the calibration curve was established to determine WT1 and ABL1 concentration *Khoa Xét nghiệm - Trường Cao Đẳng Y tế Quảng Nam **Bệnh viện truyền máu Huyết học Thành phố Hồ Chí Minh ***Bệnh viện Sản Nhi tỉnh Quảng Ngãi ****Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh *****Bệnh viện Đại học Y dược TP Hồ Chí Minh ******Trung tâm kiểm chuẩn chất lượng Y học Tác giả liên lạc: CN Phan Thị Thu Lý ĐT: 0908471459 Email: phanlyxn@gmail.com 214 Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật BV Thống Nhất 2019 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học Results: Standard curve for WT1 and ABL realtime quantitative PCR are meeting quality criteriaion and apllicated on optimal conditions for WT1 and ABL realtime quantitative PCR using specific probes and primers Twelve of 19 patients, who have WT1 overexpression, meet the molecular biology responses at post-treatment corresponding to ≥ 2-log reduction In which of 20 patients did not overexpress WT1 Conclussions: The real-time quantitative PCR after optimization can be used to evaluate WT1 expression in acute myeloid leukemia patients at pre-treatment and post-treatment Keywords: acute myeloid leukaemia, gen expression ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh bạch cầu cấp dòng tủy (BCCDT) bệnh ung thư phổ biến giới, đặc trưng tăng sinh tế bào dòng tủy chưa trưởng thành Các bệnh nhân điều trị công sau phát bệnh Tuy nhiên, tỷ lệ tồn lưu tế bào ác tính cao sau điều trị dẫn đến nguy tái phát cao Vì vậy, việc tìm dấu ấn cho phép dự đốn tái phát, đáp ứng điều trị hướng dẫn can thiệp điều trị cần thiết Các dấu ấn sử dụng để theo dõi điều trị (hay theo dõi bệnh tồn lưu tối thiểu _ MRD) BCCDT chủ yếu bất thường di truyền thường gặp PML/RARA, AML1/ETO, CBFB/MYH11 hay MLL/AF9 Song, BN không mang bất thường di truyền thường gặp cần có dấu sinh học khác để theo dõi hiệu điều trị Các nghiên cứu giới mức độ biểu gen WT1 thấp hay cao kèm với mức độ lui bệnh hay tái phát tương ứng(1,17) Do đó, WT1 yếu tố tiên lượng quan trọng mục tiêu theo dõi điều trị bệnh BCCDT Gen WT1 gen ức chế khối u, có biểu mức bệnh BCCDT, với tỷ lệ lên đến 90% bệnh nhân(1) Gen WT1 nằm nhánh ngắn nhiễm sắc thể 11, người bình thường xuất với tỷ lệ thấp tủy xương khơng tìm thấy máu ngoại vi(1,17) Đây gen liên quan đến sinh bệnh học bệnh bạch cầu ngăn chặn phát triển biệt hóa tế bào cách ngăn chặn nhân đôi, nhiều nghiên cứu tiên lượng bệnh nhân ung thư máu liên quan nghịch với biểu WT1(3,11) Do đó, biểu mức WT1 bệnh bạch cầu cấp dòng tủy đại diện cho dấu ấn độc lập theo dõi MRD Với việc định lượng xác số gen, Real-time PCR giải pháp có độ nhạy cao, chuyên biệt đáng tin cậy Do đó, tiến hành xây dựng đường chuẩn, thiết lập quy trình kỹ thuật, thiết kế đoạn mồi dò phù hợp gen WT1 gen ABL để đánh giá biểu gen WT1 bệnh nhân BCCDT trước sau điều trị công bệnh viện Truyền máu Huyết học Thành Phố Hồ Chí Minh ĐỐITƯỢNG- PHƯƠNG PHÁPNGHIÊNCỨU Đối tượng nghiên cứu Bệnh nhân chẩn đốn BCCDT điều trị cơng theo phác đồ ngày Cytarabine ngày Daunorubicin bệnh viện Truyền máu Huyết học thành phố Hồ Chí Minh Phương pháp nghiên cứu Thiết kế nghiên cứu Nghiên cứu mô tả loạt ca Phương pháp tiến hành Ly trích RNA, tổng hợp cDNA Mẫu tủy xương máu ngoại biên 20 BN BCCDT lấy chống đơng EDTA thời điểm bệnh chẩn đốn sau điều trị công Thực tách chiết RNA Invitrap Spin Universal RNA Mini Kit theo hướng dẫn nhà sản xuất cDNA (complement DNA) tổng hợp từ µg RNA với hóa chất PrimeScript RT Master Mix TaKaRa cDNA sau pha loãng nồng độ 50 ng/ L, làm mẫu cho phản ứng Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật BV Thống Nhất 2019 215 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Xây dựng đường chuẩn phương pháp tạo dòng T-vector Từ trình tự chuẩn mang mã số NM_001198551.1 gen WT1 Genbank, thiết kế cặp mồi khuếch đại đoạn gen WT1 từ mẫu cDNA vị trí exon đến exon 10 có kích thước 350 bp làm sản phẩm cho quy trình tạo dòng T-Vectơ Tương tự, chúng tơi thiết kế cặp mồi khuếch đại cho gen ABL mang mã số NM_007313.2 Phản ứng PCR thực với Phusion Hot Start II HighFidelity DNA Polymerase, tiến hành nối vòng sử dụng T-vector từ kit pGEM®-T Vector Systems (Promega – Mỹ) với thể tích phản ứng 10 µL theo hướng dẫn nhà sản xuất Hỗn hợp ủ 16 – 18 4oC trước biến nạp plasmid T-vector vào tế bào vi khuẩn E.coli khả nạp (DH5α) phương pháp sốc nhiệt Vi khuẩn sau biến nạp nuôi môi trường LB với thời gian 90 phút 37oC, lắc nhẹ Cấy dịch nuôi cấy đĩa LB agar có kháng sinh ampicilin chọn lọc khóm trắng/xanh Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG)/X-gal Ủ đĩa cấy 37oC qua đêm, chọn khóm trắng để giải trình tự chuỗi DNA phương pháp Sanger khẳng định kết tạo dòng, đồng thời nhân sinh khối, thu sản phẩm tạo dòng Ly trích DNA plasmid Wizard® Plus SV Minipreps DNA Purification Systems Kit Tiến hành đo mật độ quang để xác định nồng độ độ tinh DNA Số gen WT1 ABL đơn vị thể tích (ký hiệu C0, đơn vị copies/L) tính dựa cơng thức: Trong độ dài mạch tổng độ dài plasmid (3015 bp) đoạn gen WT1 (350 bp) Sau xác định số DNA, dãy nồng độ tuyến tính thiết lập cách pha lỗng để có nồng độ mong muốn C2=102, C3=103, C4=104, C5=105 (copies/L) 216 Thiết lập điều kiện Real-Time PCR Dựa vào trình tự chuỗi gen ABL mang accession number NM_007313.2 gen WT1 mang accession number NM_001198551.1 GenBank, thiết kế đoạn dò chuyên biệt gắn huỳnh quang (Bảng 1) Bảng 1: Các đoạn mồi probe dùng nghiên cứu(1) Tên mồi Trình tự chuỗi (5’-3’) Q.ABL-F GCC TCA GG GTC TGA GTG AAG Q.ABL-R ACA CCA TTC CCC ATT GTG AT Q.ABL-Probe FAM-GCG CTC TCG CTT TGA TTT CGTAMRA Q.WT1-F CAG GCT GCA ATA AGA GAT ATT TTA AGC T Q.WT1-R GAA GTC ACA CTG GTA TGG TTT CTC A Q.WT1-probe FAM-CTT ACA GAT GCA CAG CAG GAA GCA CAC TG-TAMRA Phản ứng Real-Time PCR thiết lập với 2X PrimeTime® Gene Expression Master Mix (Integrated DNA Technologies_Mỹ) theo hướng dẫn nhà sản xuất Nhiệt độ bắt cặp mồi, probe thử nghiệm theo gradient nhiệt độ từ 58oC đến 65oC để tìm điều kiện tối ưu cho phản ứng Chương trình cụ thể: biến tính ban đầu 95oC phút, 50 chu kỳ với bước biến tính 95oC 10 giây, tổng hợp 30 giây nhiệt độ thử nghiệm từ 58oC – 65oC Đánh giá biểu gen WT1 bệnh nhân BCCDT trước sau điều trị Phản ứng Real-time quantitative PCR thực với mẫu cDNA bệnh nhân BCCDT thu thập thời điểm trước sau điều trị công mẫu nồng độ chuẩn Biểu gen WT1 xác định thông qua tỉ số biểu trình bày dạng 100 x WT1/ABL Sự biểu mức WT1 xác định nghiên cứu ≥50 WT1/104ABL mẫu máu ngoại biên ≥250 WT1/10 4ABL mẫu tủy(1) Dữ liệu nhập phân tích phần mềm Excel 2013 Sử dụng trung vị phạm vi từ cực tiểu đến cực mô tả tỉ số biểu Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật BV Thống Nhất 2019 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 gen WT1 Tần số tỉ lệ sử dụng để mô tả trường hợp biểu mức gen WT1 KẾT QUẢ Từ tháng 9/2018 đến tháng 5/2019, chúng tơi ly trích RNA từ 40 mẫu máu tủy bệnh nhân (trước sau điều trị công) tổng hợp cDNA thành công Tất mẫu cho kết định lượng gen ABL 104 copies/L (Bảng 2) Bảng 2: Bảng tổng hợp ABL phản ánh chất lượng mẫu nghiên cứu Thời điểm Trung bình số lấy mẫu ABL (copies/uL) Chẩn đoán 240895 Sau 248185 công Khoảng ABL1 (copies/uL) 16200 - 908000 17600 - 941000 Plasmid mang gen tạo dòng sau ly trích giải trình tự để khẳng định tính xác gen mục tiêu, kiểm tra độ tinh Kết cho thấy sản phẩm đạt độ tinh cao (Bảng 3) Chúng tơi pha lỗng thành cơng nồng độ gen để có nồng độ mong muốn C2=102, C3=103, C4=104, C5=105, C6=106 (copies/L) Nghiên cứu Y học khoảng 97% đến 103% (Bảng 4) Đánh giá biểu gen WT1 bệnh nhân BCCDT trước sau điều trị Mẫu bệnh nhân BCCDT chọn vào nghiên cứu gồm 19 trường hợp lấy mẫu tủy trước sau điều trị; trường hợp lại lấy mẫu máu trước điều trị sau điều trị Trong tổng số 20 bệnh nhân, có 13 nam 07 nữ, số bệnh nhân 15 tuổi 05 Trong độ tuổi trung bình 23,4 khoảng tuổi từ 02 – 45 tuổi Kết phân tích biểu gen WT1 mô tả (Bảng5) Bảng 5: Biểu gen WT1 bệnh nhân BCCDT Biểu gen WT1 Trung bình số WT1/10 ABL (copies/uL) Chẩn đốn Sau cơng 30416,3 2970,3 Biểu Khoảng mức WT1/10 ABL Số ca (tỷ (copies/uL) lệ %) 55,6 - 146055 19 (95%) 1,6 – 52285,7 (%) BÀN LUẬN PCR Khảo Standard Intercept Slope efficiency R nghiệm Deviation (%) WT1 40,682 -2,869 103 0,150 0,9978 ABL 37,997 -3,388 97 0,110 0,9995 Trong nghiên cứu này, sử dụng kỹ thuật RT-PCR khuếch đại đoạn gen WT1 vùng từ exon đến exon 10 với Phusion Hot Start II High-Fidelity DNA Polymerase enzyme xúc tác cho phản ứng Đây polymerase có độ trung thực cao có khả tạo sản phẩm PCR có đầu 3’A overhangs thuận lợi cho ứng dụng tạo dòng T-vector Kết phân tích giải trình tự mẫu khuẩn lạc cho thấy chúng tơi tạo dòng gen WT1 thành cơng, làm tiền đề quan trọng việc xây dựng thiết lập phản ứng Real-time PCR đường chuẩn định lượng gen WT1 Kết thử điều kiện phản ứng Real-time quantitative PCR với đường chuẩn nồng độ tuyến tính pha điều kiện nhiệt độ bắt cặp, tổng hợp chuỗi mồi probe cho thấy nhiệt độ tối ưu cho bắt cặp, tổng hợp chuỗi mồi probe 60oC 30 giây Các đường chuẩn đạt độ tuyến tính cao với R2>0,99 tất khảo nghiệm Khảo nghiệm cho giá trị slope dao động từ -2,896 đến -3,388 Hệ số hiệu PCR xác định nằm Ghi nhận từ thử nghiệm phản ứng Real-time PCR, thông số đường chuẩn thu cho thấy phản ứng có độ nhạy độ tin cậy cao với ngưỡng cut off WT1 40,6 chu kỳ ABL 38 chu kỳ điều kiện nhiệt độ bắt cặp mồi khuếch đại 60oC Do đó, chúng tơi chọn điều kiện tối ưu cho phản ứng Real-time PCR đường chuẩn định lượng gen WT1 sau: biến tính ban đầu 95oC phút, 42 chu kỳ với bước Bảng 3: Kết đo mật độ quang mẫu DNA plasmid Mẫu DNA –WT1 DNA –ABL Abs@260 Abs@280 0,170 0,227 0,091 0,117 Abs ratio 1,868 1,940 Nồng độ (g/ml) 85,00 113,5 Bảng 4: Phương trình đường chuẩn Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật BV Thống Nhất 2019 217 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 biến tính 95oC 10 giây, tổng hợp 30 phút nhiệt độ 60oC Gen WT1 gen ức chế khối u có liên quan đến Wilms Tumor hội chứng liên quan khác WAGR Denys-Drash(2) Trong tủy xương bình thường, tế bào tiền tạo máu biểu gen WT1 thấp giới hạn Tuy nhiên, nhiều nghiên cứu cho thấy thấy tăng biểu WT1 BCCDT, bạch cầu cấp dòng lympho, hội chứng loạn sinh tủy giai đoạn tiến triển bạch cầu mạn dòng tủy(5) Đặc biệt, phần lớn bệnh nhân BCCDT biểu giá trị cao WT1 chẩn đoán, việc đánh giá biểu WT1 phương pháp hữu hiệu để theo dõi MRD sau hóa trị ghép tủy xương trình điều trị(1) dụng dấu ấn định lượng MRD, đặc biệt bệnh nhân không phát bất thường NST phân tử (khoảng 50%)(1,19) Trong nghiên cứu này, kết phân tích cho thấy thời điểm chẩn đốn (Bảng 6), có 19 số 20 bệnh nhân BCCDT biểu mức gen WT1, chiếm 95% Có 01 bệnh nhân có tỉ số biểu thấp, 0,6 xem không biểu mức Kết tương tự nghiên cứu khác Trong nghiên cứu Kwon M cộng năm 2012 cho thấy, 90% bệnh nhân BCCDT có biểu mức gen WT1 Kết định lượng gen WT1 trước sau ghép bệnh nhân với kết chimerism so sánh với kết tế bào dòng chảy nhóm tác giả biểu WT1 bệnh nhân BCCDT có liên quan đến bệnh tồn lưu ác tính(16) Gen WT1 biểu 90% bệnh nhân BCCDT mẫu máu ngoại biên mẫu tủy(1) Sự biểu mức WT1 sử Bảng 6: Biểu gen WT1 theo phân nhóm tổ hợp gen thường gặp Bất thường gen/ tổ hợp gen Số mẫu (n) AML1/ETO CBFB/MYH11 PML/RARA MLL/AF9 FLT3-ITD NPM1 KHÁC Tổng 1 20* 4 Số WT1/10 ABL (copies/uL) Số WT1/10 ABL (copies/uL) Đáp ứng sinh trước điều trị sau điều trị học phân tử (n) Trung bình (khoảng) Trung bình (khoảng) 32463,9 (14731,2 - 53484) 13130,9 (25,9 – 52285,7) 33145,6 (19690,6 - 69396,6) 104,7 (30 – 265,9) 146055 232,4 10070,2 696,4 33452,5 (10926 - 69396,6) 62,6 (1,6 – 99,3) 17956,7 204,2 14849,4 (55,7 - 43956) 1013 (42 – 4154,5) 12* *Trong có 01 BN mang đồng thời đột biến FLT3 tổ hợp gen CBFB-MYH11 Phân nhóm kết định lượng gen WT1 (Bảng 6) cho thấy có 12 tổng số 20 bệnh nhân có đáp ứng mức sinh học phân tử tương đương với giảm 2-log biểu gen WT1(1), chiếm 60% Kết phù hợp với kết theo dõi điều trị dựa bất thường tổ hợp gen bệnh nhân Cụ thể, trường hợp bệnh nhân BCCDT thể tiền tủy bào, mang tổ hợp gen PML/RARA có tiên lượng tốt cho kết MRD tổ hợp gen âm tính thời điểm sau điều trị cơng Trong đó, kết định lượng gen WT1 thời điểm chẩn đoán cho thấy bệnh nhân biểu mức với 146055 218 thời điểm sau công ghi nhận 232 Như vậy, bệnh nhân giảm biểu gen WT1 2-log, xem đạt đáp ứng mức sinh học phân tử Trên 01 bệnh nhân khác mang tổ hợp gen MLL/AF9, kết theo dõi điều trị RT-PCR tổ hợp gen MLL/AF9 cho thấy bệnh nhân không đạt lui bệnh sau giai đoạn điều trị công Định lượng số bênh nhân ghi nhận, thời điểm chẩn đoán bệnh nhân biểu mức WT1 với 10070 sau điều trị công số WT1 696 Bệnh nhân chưa giảm đạt đến mức 2-log số Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật BV Thống Nhất 2019 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 WT1 lúc chẩn đốn (100,7 sao), khơng đạt lui bệnh mức phân tử Điều phù hợp với kết theo dõi MRD tổ hợp gen MLL/AF9 Trong phân nhóm theo bất thường tổ hợp gen, bệnh nhân khác có biểu gen WT1 khác đáp ứng điều trị khác Điều giải thích bệnh nhân khác nhau, giai đoạn mức độ tiến triển bệnh khác mức độ biểu mRNA gen WT1 khác nhau(8) 10 11 12 KẾT LUẬN Nghiên cứu xác định 95% bệnh nhân BCCDT có biểu mức gen WT1 thời điểm chẩn đoán Phản ứng real-time PCR đường chuẩn tối ưu hóa đánh giá thay đổi biểu gen WT1 trước sau trình điều trị giúp theo dõi BTLTT bệnh nhân bạch cầu cấp dòng tủy 13 14 15 TÀI LIỆU THAM KHẢO Ayatollahi H, Sadeghian M H, Naderi M, et al (2017) "Quantitative assessment of Wilms tumor expression by realtime quantitative polymerase chain reaction in patients with acute myeloblastic leukemia" J Res Med Sci, 22:54 Barragán E, Cervera J, Bolufer P, et al (2004) Prognostic implications of Wilms ’ tumor gene (WT1) expression in patients with de novo acute myeloid leukemia Haematologica, 89:926-33 Bergmann L, Miething C, Maurer U, et al (1997) High levels of Wilms’ tumor gene (WT1) mRNA in acute myeloid leukemias are associated with a worse long-term outcome Blood; 90:1217-25 Brieger J, Weidmann E, Maurer U, et al (1995) The Wilms’ tumor gene is frequently expressed in acute myeloblastic leukemias and may provide a marker for residual blast cells detectable by PCR Ann Oncol; 6:811-6 Candoni A, Tiribelli M, Toffoletti E, et al (2009) Quantitative assessment of WT1 gene expression after allogeneic stem cell transplantation is a useful tool for monitoring minimal residual disease in acute myeloid leukemia Eur J Haematol; 82:61-8 Cilloni D, Renneville A, Hermitte F, et al (2009) "Real-time quantitative polymerase chain reaction detection of minimal residual disease by standardized WT1 assay to enhance risk stratification in acute myeloid leukemia: a European LeukemiaNet study" J Clin Oncol, 27(31):5195-5201 Cilloni D, Saglio G (2003) Usefulness of quantitative assessment of Wilms tumor suppressor gene expression in chronic myeloid leukemia patients undergoing imatinib therapy Semin Hematol; 40(2):37-41 Di Stasi A, Jimenez AM, Minagawa K, et al (2015) Review of the results of WT1 peptide vaccination strategies for 16 17 18 19 20 Nghiên cứu Y học myelodysplastic syndromes and acute myeloid leukemia from nine different studies Front Immunol; 6:36 Dohner H, Estey EH, Amadori S, et al (2010) "Diagnosis and management of acute myeloid leukemia in adults: recommendations from an international expert panel, on behalf of the European LeukemiaNet" Blood, 115(3):453-474 Grimwade D, Hills RK, Moorman AV, et al (2010) "Refinement of cytogenetic classification in acute myeloid leukemia: determination of prognostic significance of rare recurring chromosomal abnormalities among 5876 younger adult patients treated in the United Kingdom Medical Research Council trials" Blood, 116 (3):354-365 Hirose M (1999), the role of Wilms’ tumor genes J Med Invest; 46:130-40 Hokland P, Ommen HB, Mule MP, et al (2015) "Advancing the Minimal Residual Disease Concept in Acute Myeloid Leukemia" Semin Hematol, 52 (3):184-192 Jacobsohn DA, Loken MR, Fei M, et al (2018) "Outcomes of MeasurABL1e Residual Disease in Pediatric Acute Myeloid Leukemia before and after Hematopoietic Stem Cell Transplant: Validation of Difference from Normal Flow Cytometry with Chimerism Studies and Wilms Tumor Gene Expression” Blood Marrow Transplantt, 24(10):2040-2046 Jiang Y, Liu L, Wang J, et al (2017) "The Wilms' tumor gene-1 is a prognostic factor in myelodysplastic syndrome: A meta analysis, 9(22):16205-16212 Koizumi Y, Furuya D, Endo T, et al (2018) "Quantification of Wilms' tumor mRNA by digital polymerase chain reaction" Int J Hematol, 107(2):230-234 Kwon M, Martínez-Laperche C, Infante M, et al (2012) Evaluation of minimal residual disease by real-time quantitative PCR of Wilms’ tumor expression in patients with acute myelogenous leukemia after allogeneic stem cell transplantation: Correlation with flow cytometry and chimerism Biol Blood Marrow Transplant; 18:1235-42 Ostergaard M, Olesen LH, Hasle H, et al (2004) "WT1 gene expression: an excellent tool for monitoring minimal residual disease in 70% of acutemyeloid leukaemia patients - results from a single-centre study" British Journal of Haematology, 125(5):590-600 Petiti J, Rosso V, Lo Iacono M, et al (2018) "Prognostic significance of The Wilms' Tumor-1 (WT1) rs16754 polymorphism in acute myeloid leukemia" Leuk Res, 67:6-11 Polák J, Hájková H, Maalaufová-Soukupová J, et al (2012) Estimation of molecular upper remission limit for monitoring minimal residual disease in peripheral blood of acute myeloid leukemia patients by WT1 expression Exp Ther Med; 3:129-33 Rossi G, Minervini MM, Carella AM, et al (2016) Wilms' Tumor Gene (WT1) Expression and Minimal Residual Disease in Acute Myeloid Leukemia In: van den HeuvelEibrink MM (Ed) Wilms Tumor Codon Publications Copyright: The Authors, Brisbane (AU) Ngày nhận báo: 15/05/2019 Ngày phản biện nhận xét báo: 20/05/2019 Ngày báo đăng: 02/07/2019 Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật BV Thống Nhất 2019 219 ... hợp gen WT1 gen ABL để đánh giá biểu gen WT1 bệnh nhân BCCDT trước sau điều trị công bệnh viện Truyền máu Huyết học Thành Phố Hồ Chí Minh ĐỐITƯỢNG- PHƯƠNG PHÁPNGHIÊNCỨU Đối tượng nghiên cứu Bệnh. .. 65oC Đánh giá biểu gen WT1 bệnh nhân BCCDT trước sau điều trị Phản ứng Real-time quantitative PCR thực với mẫu cDNA bệnh nhân BCCDT thu thập thời điểm trước sau điều trị công mẫu nồng độ chuẩn Biểu. .. trước sau điều trị Mẫu bệnh nhân BCCDT chọn vào nghiên cứu gồm 19 trường hợp lấy mẫu tủy trước sau điều trị; trường hợp lại lấy mẫu máu trước điều trị sau điều trị Trong tổng số 20 bệnh nhân, có