Đang tải... (xem toàn văn)
Hiện nay với sự phát triển của kỹ thuật phân tích, phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao là phương pháp phân tích đơn giản, nhanh, có độ tin cậy cao. Trong những năm gần đây, HPLC được ứng dụng rộng rãi trong phân tích, đánh giá chất lượng thực phẩm như axit amin, vitamin, kháng sinh, phụ gia thực phẩm. Tham khảo đồ án tốt nghiệp Nghiên cứu xác định hàm lượng các axit amin thủy phân trong một số loài nấm lớn ở vùng Bắc Trung Bộ bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC để hiểu hơn về vấn đề này.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH Độc lập Tự do Hạnh phúc NHIỆM VỤ ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ và tên sinh viên : Nguyễn Duy Trong ̣ Hoang Thi Nga ̀ ̣ Khóa : 51 Ngành : Cơng nghệ thực phẩm Mssv: 1052043902 Mssv: 1052040676 Tên đề tài: Xác định hàm lượng axit amin thuy phân ̉ trong một số lồi nấm bằng phương pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao Nội dung nghiên cứu, thiết kế tốt nghiệp: ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… Cán bộ hướng dẫn : ThS. Hoàng Văn Trung Ngày giao nhiệm vụ đồ án : Ngày tháng năm 2014 Ngày hồn thành đồ án : Ngày tháng năm 2014 Ngày tháng năm 2014 Chủ nhiệm bộ mơn (Ký ghi rõ họ tên) Cán bộ hướng dẫn (Ký, ghi rõ họ tên) Sinh viên đã hồn thành và nộp đồ án vào ngày tháng năm 2014 Người duyệt (Ký, ghi rõ họ tên) BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO CỘNG HỊA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH Độc lập –Tự do –Hạnh phúc BẢN NHẬN XÉT ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ và tên sinh viên: Nguyên Duy Trong ̃ ̣ Hoang Thi Nga ̀ ̣ Khóa: 51 Msv: 105204 Msv: 1052040676 Ngành: Cơng nghệ thực phẩm Cán bộ hướng dẫn: ThS. Hồng Văn Trung Cán bộ duyệt: Nội dung nghiên cứu, thiết kế: ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… Nhận xét của cán bộ hướng dẫn: ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………… … Ngày tháng năm 2014 Cán bộ hướng dẫn (Ký, ghi rõ họ, tên) BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH Độc lập –Tự do –Hạnh phúc BẢN NHẬN XÉT ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ và tên sinh viên: Nguyễn Duy Trong ̣ Hoang Thi nga ̀ ̣ Khóa: 51 Msv: 105204 Msv: 1052040676 Ngành: Cơng nghệ thực phẩm Cán bộ hướng dẫn: ThS. Hồng Văn Trung Cán bộ duyệt: Nội dung nghiên cứu, thiết kế: ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………… Nhận xét của cán bộ duyệt: ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… …………………………………… ………………………………………… … Ngày tháng năm 2014 Cán bộ duyệt (Ký, ghi rõ họ, tên) LỜI CẢM ƠN Khóa luận được thực hiện tại phòng thí nghiệm Trung tâm Kiểm định An tồn Thực phẩm và Mơi trường Trường Đại học Vinh Chung tôi xin chân thanh cam ́ ̀ ̉ ơn Ban giam hiêu Tr ́ ̣ ương Đai hoc Vinh, ̀ ̣ ̣ bô môn Công Nghê Th ̣ ̣ ực Phâm, quy thây cô đa truyên đat kiên th ̉ ́ ̀ ̃ ̀ ̣ ́ ưc cho chung ́ ́ tôi trong thơi gian hoc tâp tai tr ̀ ̣ ̣ ̣ ương ̀ Với lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, chúng tơi xin chân thành gửi lời cảm ơn đến thầy giáo Th.S Hồng Văn Trung Khoa Hóa học Trường Đại học Vinh đã giao đề tài, tận tình hướng dẫn, tạo mọi điều kiện thuận lợi trong suốt q trình nghiên cứu và hồn thành đề tài Chúng tơi xin chân thành cảm ơn ThS. Chu Thị Thanh Lâm – Trung tâm kiểm định An tồn thực phẩm và Mơi trường – T.T Thực hành thí nghiệm Trường Đại học Vinh đã tạo điều kiện thuận lợi và giúp đỡ chúng tơi trong q trình làm thí nghiệm Đề tài được hồn thành nhờ sự hỗ trợ kinh phí từ đề tài Nghị định thư hợp tác Việt Nam – Đài Loan của PGS.TS Trần Đình Thắng – Khoa Hóa học, trường Đại Học Vinh Chúng tơi cũng xin gửi lời cảm ơn đến các thầy cơ, các cán bộ trong Trung tâm Thi nghiêm đã giúp đ ́ ̣ ỡ chúng tơi trong q trình thực hiện đề tài Và lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè đã động viên, giúp đỡ chúng tơi hồn thành đề tài Vinh, ngày tháng năm 2015 Sinh viên thực Nguyễn Duy Trong ̣ Hoang Thi Nga ̀ ̣ Tom Tăt ́ ́ Nguyên Duy Trong, Hoang Thi Nga l ̃ ̣ ̀ ̣ ơp 51K Công Nghê Th ́ ̣ ực Phâm, ̉ Khoa Hoa Hoc, Tr ́ ̣ ương Đai hoc Vinh. Phân tich axit amin thuy phân trên ̀ ̣ ̣ ́ ̉ môt sô loai nâm t ̣ ́ ̀ ́ ự nhiên băng săc ky long cao ap (HPLC) ̀ ́ ́ ̉ ́ Giang viên h ̉ ương dân: ́ ̃ Th.s Hoang Văn Trung ̀ Khoa luân đ ́ ̣ ược thực hiên trên 7 đôi t ̣ ́ ượng la nâm t ̀ ́ ự nhiên, đây la cac loai ̀ ́ ̀ nâm l ́ ớn, co tac dung to l ́ ́ ̣ ơn đôi v ́ ́ ới con người. Vi vây, thanh phân dinh ̀ ̣ ̀ ̀ dương, đăc biêt la thanh phân amino axit rât đ ̃ ̣ ̣ ̀ ̀ ̀ ́ ược quan tâm Đê th ̉ ực hiên phân tich chung tôi tiên hanh x ̣ ́ ́ ́ ̀ ử li mâu va s ́ ̃ ̀ ử dung may ̣ ́ săc ki long cao ap (HPLC) cua ́ ́ ̉ ́ ̉ Trung tâm Kiểm định An tồn Thực phẩm và Mơi trường Trường Đại học Vinh Nhưng kêt qua đat đ ̃ ́ ̉ ̣ ược: Chung tôi xác đ ́ ịnh được các điều kiện tách và định lượng axit amin bằng HPLC. Xây dựng được đường chuẩn của các axit amin. Khảo sát được giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) của phương pháp Từ đo phân tich va đinh l ́ ́ ̀ ̣ ượng được cac loai axit amin trong 7 mâu ́ ̣ ̃ nâm t ́ ự nhiên BẢNG KÍ HIỆU CÁC TỪ VIẾT TẮT Viết tắt AOAC Tên đầy đủ Hiệp hội các nhà hố học phân tích chính thống AQC Aminoquinolil N hydroxysuccinimidyl cacbamat Dm Chất khơ EAA Axit amin thiết yếu FMOC 9florenylmetyl cloroformat GC Sắc ký khí Sắc ký khí detector ion hóa ngọn lửa GC/FID GC/MS Sắc ký khí khối phổ HPLC Sắc ký lỏng hiệu năng cao KPH Khơng phát hiện MeOH Metanol NEAA Axit amin không thiết yếu orthophthalaldehyd/ ortho phthaldialdehyd Phenylisothioxyanat OPA PITC RPHPLC Tên tiếng anh Association of Official Analytical Chemists Aminoquinolil N hydroxysuccinimidyl carbamate dry matter Essential amino acid 9florenylmethyl cloroformate Gas chromatography Gas chromatography/ flame ionization detector Gas chromatography/ mass spectrometry High performance liquid chromatography Methanol Nonessential amino acid orthophthalaldehyd/ ortho phthaldialdehyd Phenylisothiocyanate Reverse phase High Sắc ký lỏng hiệu năng cao pha performance liquid ngược chromatography TAA Tổng axit amin Total amino acid TEA Trietylamin Triethylamine THF Tetrahydrofuran Tetrahydrofuran MỞ ĐẦU 1. Lí do chọn đề tài Việt Nam là một trong những quốc gia có đa dạng sinh học cao trên giới với khoảng 12000 lồi thực vật bậc cao và 3000 lồi động vật có xương sống đã được mơ tả, trong đó có những lồi đặc hữu. Cấu trúc địa chất độc đáo, địa lý thủy văn đa dạng, khí hậu nhiệt đới gió mùa đã góp phần tạo nên sự đa dạng của hệ nấm Việt Nam, đây là nguồn có giá trị tài ngun rất to lớn Nấm có ý nghĩa rất quan trọng trong đời sống con người, chúng là nguồn thực phẩm giàu chất dinh dưỡng (Termitomyces albuminosus, Macrocybe gegantea), là nguồn thức ăn quý được nhân dân ưa chuộng, chứa nhiều protein, các chất khống và vitamin (A, B, C, D, E ). Nhiều lồi nấm được ứng dụng trong cơng nghiệp dược phẩm, là nguồn ngun liệu để điều chế các hoạt chất điều trị bệnh như: Laricifomes officinalis là ngun liệu để chiết aragicin dùng trong chữa bệnh lao hoặc dùng làm thuốc nhuận tràng hay chất thay cho quinine Các chế phẩm từ nấm linh chi (Ganoderma) được dùng để hỗ trợ điều trị nhiều bệnh như bệnh gan, tiết niệu, tim mạch, ung thư, AIDS. Trong quả thể của Ganoderma lucidum có 10 Hình 3.38: Sắc đồ tách axit amin trong dịch thủy phân nấm Linh Chi Đen Bảng 3.9: Hàm lượng axit amin trong các mẫu nấm Axit Nấm Nấm Nấm Nấm amin PL1 PL2 PL4 PL3 Thr KPH 7.32 7.62 KPH 27,96 69.56 Val 2039.50 KPH 1195.31 1197.4 1498,76 2717.84 Met 149.43 51.90 15.11 9.36 321,18 148.73 Ile 729.08 108.66 219.41 251.45 396,45 1294.49 Leu 1785.60 537.61 1052.79 1062.11 952,02 2271.51 Phe 3175.21 747.98 1624.62 1737.25 2258.77 888.37 Lys 493.46 207.77 690.36 483.99 672.97 453.82 His 4348.93 1037.40 2488.49 2510,92 2421.66 4863.67 12721.1 2698,64 7365.71 7252.48 8549.77 12707.9 TT Tổng axit Nấm Linh Linh Chi Chi Đen amin thiết 86 yếu Asp 3876.80 882.97 1812.52 1797.90 1558.60 4190.67 10 Glu KPH KPH KPH KPH KPH KPH 11 Ser 1286.11 771.86 762.50 277.79 1008.87 12 Gly 1052.69 KPH 560.67 609.05 313.02 1033.28 3082.47 1980.87 1410.38 1955.63 1018.8 3804.60 Cys – 13 ss – Cys 14 Ala 1192.51 270.37 723.62 685.38 935.96 491.86 15 Arg _ _ _ _ _ _ 16 Tyr 266.17 83.64 102.65 108.27 130.41 459.84 17 Pro 1511.82 556.47 825.85 973.07 1251.27 2638.57 12268.7 3774.32 6207.55 6891.8 5485.85 13627.9 Tổng 24989.8 6472.96 13573.26 14144.8 14035.62 26335.8 EAA/TAA 50.91% 41.69% 54.27 % 51.28% 60.91% 48.25% Tổng axit amin không thiết yếu Bảng 3.8 va bang 3.9 ̀ ̉ cho thấy trong 7 loại nấm thì nấm Linh Chi Đen có tổng hàm lượng các axit amin cao nhất (26335.8 μg/g), nấm PL2 thấp nhất (6472.96 μg/g). Nếu so sánh với một số lồi nấm trên thế giới đã được nghiên cứu về hàm lượng như nấm sò tím 6,86 g/100g = 68600 μg/g và nấm kim châm Hàn 87 Quốc 5,62 g/100g = 56200 μg/g (Lee, K, J et at., 2011), hay lồi Dictyophora indusiata (nấm lưới trắng) là lồi có hàm lượng axit amin (8000mgkg1) thấp nhất trong 41 lồi nấm Vân Nam (mục 1.2.5) thì có thể nhận xét cać mâu ̃ nấm hàm lượng trung bình còn thấp. Như vậy, tùy thuộc từng lồi nấm, mơi trường sống…mà nấm có hàm lượng protein khác nhau Trong thành phần của cả 7 loại nấm này đều chứa đầy đủ các axit amin thiết yếu cho thể Tỉ lệ EAA/TAA từ 41.69% (nấm Pl2) đến 60,91% (nấm Thượng Hoang) suy ra t ̀ ỉ lệ EAA/NEAA từ 0,78 – 1.56. Như vậy tỉ lệ EAA/NEAA của 7 loaị đáp ứng tốt với giá trị tham khảo là 0,6 đề nghị bởi PAO/WHO (1973), tuy nhiên axit amin Arg không được đinh l ̣ ượng trong cac mâu do đo anh h ́ ̃ ́ ̉ ưởng khach quan đên kêt qua. ́ ́ ́ ̉ Cả 7 loại nấm này là nguồn thực phẩm giàu dinh dưỡng có chứa đầy đủ các axit amin thiết yếu Hàm lượng Glu va môt sô acid amin khac ̀ ̣ ́ ́ quá nhỏ trong môt vai ̣ ̀ loại nấm nên không thể định lượng được Chung tôi cung tiên hanh xac đinh axit amin thuy phân ́ ̃ ́ ̀ ́ ̣ ̉ ở cac loai nâm ́ ̣ ́ PL1, Pl2, Pl3, Pl4, Thượng Hoang đ ̀ ược xử li mâu nguyên liêu theo cac ́ ̃ ̣ ́ phương phap khac nhau. Kêt qua ́ ́ ́ ̉ ở bang 3.10. ̉ Bảng 3.10.Ham l ̀ ượng cac axit amin trong mâu nâm theo cac ph ́ ̃ ́ ́ ương phap ́ xử li mâu khac nhau ́ ̃ ́ TT Axit Nấm Nấm Nấm Nấm Nâm ́ Thượn Nâm ́ Nâm ́ 88 amin PL1 PL1 PL1 HL ĐK HL CK HL T g PL2 HL T PL2 Hoang ̀ HLCK HL T PL3 HL T PL4 HLCK Thr 114,34 KPH 24,04 KPH 0 0 Val 1647,34 2019,58 2582,3 1997,9 2401,8 Met 300,80 217,27 107,05 369,65 418,02 128,03 106,10 234,19 Ile 160,42 198,67 232,34 286,23 KPH Leu 1219,18 1433,88 464,26 2318,08 3120,5 462,75 2544,2 1251,18 Phe 135,11 1555,73 481,56 2389,19 2987,1 498,79 2543,5 1233,3 Lys 667,68 627,64 201,09 861,04 1091,0 319,69 751,48 1011,4 His 1817,90 1688,69 783,28 2587,22 3407,9 1246,9 2770,8 2055,3 4415,43 7369,22 2061,28 10777,1 13893,1 2656,16 10713,9 8187,2 Tổng axit amin thiết yếu Asp 1386,88 1203,08 296,17 2285,56 2818,5 749,18 2860,2 1202,9 10 Glu KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH 11 Ser KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH 12 Gly KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH 4951,88 3601,55 2701,1 4531,36 5943,4 3059,7 1439,6 5905,8 Cys 13 – ss – Cys 14 Ala KPH KPH 0 0 15 Arg _ _ _ _ _ _ _ _ 89 16 Tyr 614,84 608,27 294,29 364,36 921,29 279,65 272,96 1033,8 17 Pro 4988,89 3460,9 1536,1 5020,9 4633,5 3519,9 3852,8 5634,6 11942,49 8873,8 4827,66 12202,18 14316,7 7608,43 8425,56 13777,1 Tổng 16357,92 8947,50 6888,94 22979,28 28209,8 10264,6 19139,5 21964,3 EAA/TAA 27,00% 82,36% 29,92% 46,90% 49,25% 25,88% 55,98% 37,28% Tổng axit amin không thiết yếu Tư bang 3.10 ta thây ̀ ̉ ́ ở cac điêu kiên x ́ ̀ ̣ ử li mâu khac nhau lam anh ́ ̃ ́ ̀ ̉ hưởng đên ham l ́ ̀ ượng cac acid amin ́ ở cac m ́ ưc đô khac nhau. Thr bi mât đi ́ ̣ ́ ̣ ́ khi sử dung ph ̣ ương phap chiêt hôi l ́ ́ ̀ ưu, sây đông khô đê x ́ ̉ ử li mâu. ́ ̃ 90 KẾT LUẬN Trên cơ sở các nhiệm vụ được đặt ra và các kết quả đã đạt được chúng tơi rút ra một số kết luận sau: 1. Khảo sát tối ưu hóa một số điều kiện trong quy trình thủy phân xử lý mẫu xác định hàm lượng axit amin trong nấm : + Thời gian thủy phân mẫu tối ưu là 24h + Nồng độ HCl thủy phân tối ưu là 6M 2. Đã xây dựng được các phương trình đường chuẩn của cać axit amin và xác định khoảng nồng độ nghiên cứu nằm trong khoảng tuyến tính 3. Xác định được giới hạn phát hiện LOD và giới hạn định lượng LOQ của phương pháp là rất nhỏ: LOD từ 0,0 006 – 0,0060 pmol, LOQ từ 0,0020 – 0,0153 pmol 4. Quy trình phân tích đưa ra đã được đánh giá bằng đường chuẩn, độ 91 thu hồi. Độ thu hồi với các loại axit amin nằm trong khoảng 85,6 – 133,8% trong vùng đường chuẩn tuyến tính 5. Xác định được hàm lượng axit amin thủy phân trong 7 mẫu nấm tự nhiên, cụ thể: Mẫu nấm TT Hàm lượng axit amin thủy Nấm PL1 phân(μg/g) 24989.8 Nấm PL2 6472.96 Nấm PL3 13573.26 Nấm PL4 14144.8 Nấm Thượng 6522.06 hồng Nấm Linh chi 14035.62 Nấm Linh chi đen 26335.8 Từ các kết quả thu được chúng tơi thấy phương pháp phân tích hàm lượng axit amin trong các mẫu nấm với độ tin cậy cao và đề nghị được áp dụng phương pháp phân tích axit amin này cho nhiều đối tượng thực phẩm khác nhau 92 Chúng tơi mong muốn được tiếp tục nghiên cứu để hồn chỉnh và mở rộng trong những đề tài khác, tiếp tục đánh giá các kết quả để có thể so sánh được hàm lượng axit amin trong những lồi nấm khác nhau từ đó đánh giá được giá trị của các lồi nấm và bổ sung số liệu vào bảng thành phần thực phẩm Việt Nam TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt 1. Nguyễn Trung thuần, Phạm Thị Thu, (2002), Bách khoa dinh dưỡng, Nhà xuất bản Phụ Nữ Hà Nội, trang 2852 2. Phạm Luận (1987), Cơ sở lý thuyết sắc ký lỏng hiệu năng cao, Khoa Hóa học Trường Đại học Tổng Hợp Hà Nội 3. Phạm Luận (1999), Cơ sở lý thuyết sắc ký điện di mao quản hiệu suất cao, Khoa Hóa học Trường ĐHKHTN Hà Nội 4. Phạm Văn Sổ, Bùi Thị Như Thuận (1978), Kiểm nghiệm lương thực thực phẩm, Nhà xuất bản Khoa học và Kĩ thuật – Hà Nội, trang 128 183 93 5. Trịnh Tam Kiệt (2011), Nấm lớn Việt Nam tập I, Nhà xuất bản khoa học tự nhiên và cơng nghệ 6. Trịnh Tam Kiệt, Trịnh Tam Bảo (2008), Thành phần lồi nấm dược liệu của Việt Nam, Tạp chí di truyền học và ứng dụng – chun san cơng nghệ sinh học, 4, 3942 Tiếng Anh AOAC Official Method (2000), Monosodium Glutamate in food, Potentiometric Titration Method, C. 970.37 8. Bailey, J.L. (1962), Estimation of amino acids by ninhydrin, Techniques in Protein Chemistry, Elsevier, Amsterdam, pp 7381 Bano Z., Rajarathnam, S (1988), Pleurotus mushroom, CRC Crit Rev Food Sci Nutr, 27, 87–158 10. Bano, Z., Rajathnam, S. (1982), Tropical Mushroom Biological Nature and Cultivation Methods, Chinese University Press, Hong Kong, 363 380, 1982 11. Barros L, Cruz T, Baptista P, Estevinho LM, Ferreira ICFR. (2008), Food Chem Toxicol, 46:2742–7 12 Barros, L., Baptista, P., Correira, D M., Casa, S., Oliveira, B., & Ferreira, I C F R (2007a), Fatty acid and sugar compositions, and nutritional value of five wild edible mushrooms from Northeast Portugal, Food Chemistry, 105, 140–145 13. Barros, L., Venturini, B. A., Baptista, P., Estevinho, L. M., & Ferreira, I. C F R (2008), Chemical composition and biological properties of Portuguese wild mushrooms: A comprehensive study, Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi:10.1021/jf8003114 14 BauerPetrovska, B (2001) Protein fractions in edible Macedonian mushrooms. European Food Research and Technology, 212, 469–472 15. Belitz, H.D., & Grosch, W. (1999), Food chemistry, Berlin: Springer 94 16. Cavalieri, C., Bolzoni, L., & Bandini,M. (2010), Nicotine determination in mushrooms by LCMS/MS with preliminary studies on the impact of drying on nicotine formation. Learning, Media and Technology, 27, 473 17. Chang, S, T. (1980), Mushroom as human food, Bioscience, 30, 399401 18. Chen, S.Y., Ho, K.J., Hsieh, Y.J., Wang, L.T., & Mau, J.L. (2012), Contents of lovastatin, caminobutyric acid and ergothioneine in mushroom fruiting bodies and mycelia, LWTFood Science and Technology, 47, 274–278 19. Colak, A., Faiz, Z., & Sesli, E. (2009), Nutritional composition of some wild edible mushrooms, Turkish Journal of Biochemistry, 34, 25–31 20. Colak, A., Kolcuoglu, Y., Sesli, E., & Dalman, O. (2007), Biochemical composition of some Turkish fungi, Asian Journal of Chemistry, 19, 2193–2199 21 Constantinos K Zacharis, Georgios A Theodoridis, Anastasios N. Voulgaropoulos (2005), Coupling of sequential injection with liquid chromatography for the automated derivatization and online determination of amino acids, Talanta, 68, p.448458 22 Dany Heems, Genevieve Luck, Christophe Fraudeau, Eric Verette (1988), Full automated precolumn derivatization, online dialysis and highperformance liquid chromatographic analysis of amino acids in food, beverages and feedstuff, Journal of chromatography A, 798, p.917 23. Díez, A. A., & Alvarez, A. (2001), Compositional and nutritional studies on two wild edible mushrooms from northwest Spain, Food Chemistry, 75, 417–422 24. Diplock AT, Aggett PJ, AshwellM, Bornet F, Fern EB, RoberfroidMB (1999), Br J Nutr, 81:S1–S27 25. Eva Guillamón, Ana GarcíaLafuente, Miguel Lozano, Matilde D´Arrigo, Mauricio A Rostagno, Ana Villares, José Alfredo Martínez (2010), Edible mushrooms: Role in the prevention of cardiovascular diseases , Fitoterapia, Volume 81 , Pages 715723 95 26. Falandysz J. (2008). J Environ Sci Health C Environ Carcinog Ecotoxicol Rev; 26:256–99 27 FAO (Food and Agriculture Organization) (1991), Protein Quality Evaluation, Rome:Food and Agricultural Organization of the United Nations 28 Gross, B., & Asther, M (1989) Flavour of Basidiomycetes: Characteristics, analysis and production, Sciences des Aliments, 9, 427– 454 29. Guo, Y. J., Deng, G. F., Xu, X. R., Wu, S., Li, S., Xia, E. Q., et al. (2012), Antioxidant capacities, phenolic compounds and polysaccharide contents of 49 edible macrofungi, Food & Function, 3, 1195–1205 30. Hawksworth, D.L., (1991), The fungal dimension of biodiversity. Magnitude, significance and conservasion, Mycol, Res. 95, 640655 31. Hawksworth, D.L., (2001), The magnitude of fungal diversity: the 1.5 million species estimate revisited, Mycol, Res. 105, 14221432 32 Hayes, W, A., Haddad, N (1976) The foof value of the cultivated mushroom and its importance to the mushroom industry, Mushroom J., 40, 104110 33. Ibrahim Kıvrak, Seyda Kıvrak, Mansur Harmandar (2014), Free amino acid profiling in the giant puffball mushroom (Calvatia gigantea) using UPLC–MS/MS, Food Chemistry, 158, 88–92 34. Kim, M. Y., Chung, L. M., Lee, S. J., Ahn, J. K., Kim, E. H., Kim, M. J., et al. (2009), Comparison of free amino acid, carbohydrates concentrations in Korean edible and medicinal mushrooms, Food Chemistry, 113, 386– 393 35 Kwang Jae Lee, In Jue Yun, Kyung Hee Kim, Sang Hyun Lim, Hun Ju Ham, Won Sik Eum, Jin Ho Joo (2011), Amino acid and fatty acid compositions of Agrocybe chaxingu, an edible mushroom, Journal of Food Composition and Analysis, 24, 175–178 96 36. Li, G. S. F., Chang, S.T. (1982), Tropical Mushroom Biological Nature and Cultivation Methods, Chinese University Press, Hong Kong, 199 219 37. Liu, P., Li, H. M., & Tang, Y. J. (2012), Comparison of free amino acids and 5’ nucleotides between Tuber fermentation mycelia and natural fruiting bodies, Food Chemistry, 132, 1413–1419 38. Liu, Y. T., Sun, J., Luo, Z. Y., Rao, S. Q., Su, Y. J., Xu, R., et al. (2012), Chemical composition of five wild edible mushrooms collected fromsouthwest China and their antihyperglycemic and antioxidant activity, Food and Chemical Toxicology, 50, 1238–1244 39. Lourdes Bosch, Amparo Alegria, Rosaura Farre (2006), Application of the 6aminoquinolylNhydroxysuccinimidyl carbamate (AQC) reagent to the RPHPLC determination of amino acids in infant foods, Journal of chromatography B, 831, P. 176183 40. M. Ummadi, B. C.Weiner (2002), Use of capillary electrophoresis and laserinduced fluorescence for attomole detection of amino acids, Journal of chromatography A, 964, p.243253 41. Mantovani MS, Bellini MF, Angeli JPF, Oliveira RJ, Silva AF, Ribeiro LR.(2008), Mutat Res;658:154–61 42. Manzi P, Grambelli L, Marconi S, Vivanti V, Pizzoferrato L. (1999), Food Chem, 65, 477–82 43 Manzi, P., Marconi, P., Aguzzi, A., & Pizzoferrato, L (2004), Commercial mushrooms: Nutritional quality and effect of cooking, Food Chemistry, 84, 201–206 44 Marekov, L., Momchilova, S., Grung, B., NikolovaDamyanova, B. (2012), Fatty acid composition of wild mushroom species of order Agaricales—Examination by gas chromatography–mass, Journal of Chromatography B, Volume 910, 5460 45. Mattilda P, Könkö K, Eurola M, Pihlava JM, Astola J, Vahteristo L, et al ( 2001), J Agric Food Chem , 49, 2343–8 97 46. Moore, S., Stein, W.H., (1948), Photometric ninhydrin method for use in the chromatography of amino acids, Journal of Biological Chemistry, 176, p.367388 47. Moore, S., Stein, W.H., (1951), Determination amino acid by post columm derivatization, J.Biol. Chem. 192,663 48. Moore, S., Stein, W.H., (1954), A modified ninhydrin reagent for the photometric determination of amino acids and related compounds, Journal of Biological Chemistry, 211, p.907913 49. Nathalie Le Floc'h, Bernard Seve (2007), Biological roles of tryptophan and its metabolism: Potential implications for pig feeding, Livestock Science, Volume 112, Issues 12 23–32 50. Nedelcheva, D., Antonova, D., Tsvetkova, S., Marekov, I., Momchilova, S., NikolovaDamyanova, B., et al. (2007). TLC and GC–MS probes into the fatty acid composition of some Lycoperdaceae mushrooms. Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies, 30, 2717–2727 51 Pavel Kalač (2009), Chemical composition and nutritional value of European species of wild growing mushrooms, Food Chemistry, Volume 113, Pages 916 52. Rai, M., Tidke, G., & Wasser, S. P. (2005), Therapeutic potential of mushrooms, Natural Products Radiance, 246–257 53. Satoshi Mitsuhashi (2014), Current topics in the biotechnological production of essential amino acids, functional amino acids, and dipeptides, Current Opinion in Biotechnology, 26:38–44 54. ShihWen Sun, YiCheng Lin, YihMing Weng, MinJane Chen (2006), Effciency improvement on ninhydrin method for amino acids quantification, Journal of food and analysis, 19, p.112117 55 Shuting Chang and Philip G.Miles, (1930), Mushroom culvation, nutritional value, medicinal effect, and environmental impact, 2nd ed 56. Sun, C., Lin, J.,Wan, Y. P., Liu, Y., & Xu, H. K. (2012), Amino acids contents of common wild edible mushrooms in Yunnan province, Plant Diversity and Resources, 34,89–92 98 57. U.S. Department of Agriculture, Agricultural Research Service, USDA Nutrient Data Laboratory (2009), USDA National Nutrient Database for Standard Reference, Release 22. www.ars.usda.gov/nutrientdata. 58. University of Maryland Medical Center (2009). "Lysine", Retrieved 59. Vaz, J. A., Barros, L., Martins, A., SantosBuelga, C., Vasconcelos, M. H., & Vasconcelos I. C. F. R. (2011), Chemical composition of wild edible mushrooms and antioxidant properties of their water soluble polysaccharidic and ethanolic fractions, Food Chemistry, 126, 610–616 60 Vetter, J (2000), Trypsin inhibitor activity of basidiomycetous mushrooms, European Food Research and Technology, 211, 346–348 61. Wang, X, M., Zhang, Z., Wu, L, H., Zhao, Y, L., Li, T., Li, Z, Q., Wang, Y, Z., Liu, H, G. (2014), A minireview of chemical composition and nutritional value of edible wildgrown mushroom from China, Food Chemistry, 151, 279–285 62. Whittaker, R. H. (1969), “New concepts of kingdoms of organisms”, Science, 163, 150–160 63. Wu G. (2009), Amino acids: metabolism, functions, and nutrition, Amino Acids, 37, 117 64. Yaru Song, Ming Shenwu, Shulin Zhao, Dongyan Hou, YiMing Liu (2005), Enantiomeric separation of amino acids derivatized with 7fluoro 4nitrobenzoxadiazole by capillary liquid chromatographyltandem mass spectrometry, Journal of chromatography A, 1091, 102109. 65 Yiannis C Fiamegos, Constantine D Stalikas (2006), Gas chromatographic determination of amino acids via onestep phasetransfer catalytic pentafluorobenzylationpreconcentration, Journal of chromatography A 66. Yin, J. Z., & Zhou, L. X. (2008). Analysis of nutritional components of 4 kinds of wild edible fungi in Yunnan Food Research and Development, 29, 133–136 99 100 ... tài : Nghiên cứu xác định hàm lượng các axit amin thuy phân ̉ 11 trong một số lồi nấm lớn vùng Bắc Trung Bộ bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC 2. Mục đích nghiên cứu Xây dựng phương pháp tách và định lượng đồng thời cac axit amin. .. Tổng quan về nấm, các axit amin và phương pháp định lượng axit amin Xác định các điều kiện tách và định lượng axit amin bằng HPLC Xây dựng đường chuẩn của các axit amin Khảo sát giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) của... Xây dựng phương pháp tách và định lượng đồng thời cac axit amin ́ trong các loại nấm khác nhau, cung cấp số liệu về thành phần dinh dưỡng (axit amin) trong một số loại nấm được nghiên cứu 3. Đối tượng nghiên cứu