Đang tải... (xem toàn văn)
Đề tài: Khảo sát một số đặc điểm của loài Cordyceps sp. được tìm thấy tại Đà Lạt nhằm mục đích nghiên cứu một số đặc điểm sinh học của loài Cordyceps sp. từ đó tìm hiểu tiềm năng ứng dụng của loài nấm này trong y dược và trong đối kháng sinh học, đồng thời tạo nguồn nguyên liệu ban đầu phục vụ cho các nghiên cứu ứng dụng sau này.
LƠI CAM ̀ ̉ ƠN Đê hoan thanh ̉ ̀ ̀ đề tài: “Khao sat môt sô đăc điêm cua loai ̉ ́ ̣ ́ ̣ ̉ ̉ ̀ Cordyceps sp. được tim thây tai Đa Lat ̀ ́ ̣ ̀ ̣ ” tac gia đa nhân đ ́ ̉ ̃ ̣ ược sự đong gop va giup đ ́ ́ ̀ ́ ỡ nhiêt tinh cua cac ̣ ̀ ̉ ́ thây giao, cô giao, cac anh chi, cac ban trong va ngoai nganh trong nhiêu năm qua. Tac ̀ ́ ́ ́ ̣ ́ ̣ ̀ ̀ ̀ ̀ ́ gia xin chân chân thanh cam ̉ ̀ ̉ ơn: Ts. Trương Binh Nguyên ̀ Viên sinh hoc Tây Nguyên đa tân tinh chi dân va giup ̣ ̣ ̃ ̣ ̀ ̉ ̃ ̀ ́ đỡ tôi trong qua trinh th ́ ̀ ực hiên va hoan thanh khoa luân nay ̣ ̀ ̀ ̀ ́ ̣ ̀ Cô Vu Thi Liêu cung toan thê can bô, anh chi em trong ̃ ̣ ̃ ̀ ̀ ̉ ́ ̣ ̣ Viên sinh hoc Tây ̣ ̣ Nguyên đa nhiêt tinh giup đ ̃ ̣ ̀ ́ ỡ va tao moi điêu kiên cung nh ̀ ̣ ̣ ̀ ̣ ̃ co nh ́ ưng đong gop ̃ ́ ́ kiên th ́ ưc hêt s ́ ́ ức quy bau đê tôi hoan thanh khoa luân nay ́ ́ ̉ ̀ ̀ ́ ̣ ̀ Cac thây cô giao trong khoa sinh hoc đa day dô va truyên đat cho tôi nh ́ ̀ ́ ̣ ̃ ̣ ̃ ̀ ̀ ̣ ững kiên ́ thưc quy bau trong th ́ ́ ́ ơi gian hoc tai tr ̀ ̣ ̣ ương ̀ Cuôi cung tôi xin chân thanh biêt ́ ̀ ̀ ́ ơn bô me va nh ́ ̣ ̀ ững người thân cung ban be khoa ̀ ̣ ̀ ́ 29 khoa sinh hoc tr ̣ ương Đai Hoc Đa Lat đa đông viên, giup đ ̀ ̣ ̣ ̀ ̣ ̃ ̣ ́ ỡ tôi hoan thanh khoa ̀ ̀ ́ luân nay ̣ ̀ PHAN NHA HOA ̃ ̀ LƠI CAM ĐOAN ̀ Tôi cam đoan đây la công trinh nghiên c ̀ ̀ ưu cua tôi. Nh ́ ̉ ưng kêt qua va sô liêu ̃ ́ ̉ ̀ ́ ̣ trong bai khoa luân nay ch ̀ ́ ̣ ̀ ưa được ai công bô d ́ ưới bât c ́ ứ hinh th ̀ ưc nao. Tôi hoan ́ ̀ ̀ toan chiu trach nhiêm tr ̀ ̣ ́ ̣ ước nha tr ̀ ương vê s ̀ ̀ ự cam đoan nay ̀ Đa Lat, ngay 22 thang 5 năm 2009 ̀ ̣ ̀ ́ Tac gia ́ ̉ PHAN NHA HOA ̃ ̀ MUC LUC ̣ ̣ DANH MUC BANG ̣ ̉ Bảng 1. Kết quả so sánh trình tự ITS rDNA của Cordyceps sp.với dữ liệu đã cơng bố trên Genbank………………………………………………………………………….45 Bang 2: Anh h ̉ ̉ ưởng cua cac ngn dinh d ̉ ́ ̀ ương Cacbon khac nhau lên tôc đô sinh ̃ ́ ́ ̣ trưởng cuả loaì Cordyceps sp………………………………………………………… 46 Bang 3 : Anh h ̉ ̉ ưởng cua cac nguôn dinh d ̉ ́ ̀ ương Nit ̃ khac nhau lên tôc đô sinh ́ ́ ̣ trưởng cuả loaì Cordyceps sp ……………………………………………………………… 50 Bang 4: Kha năng sinh bao t ̉ ̉ ̀ ử cua nâm ̉ ́ Cordyceps sp. trên cac nguôn dinh d ́ ̀ ưỡng Nitơ khac nhau…………………………………………………………………………… 54 ́ Bang ̉ 5: Tôć độ sinh trưởng cuả hệ sợi nâm ́ Cordyceps sp cać nông ̀ độ saccharose khać nhau…………………………………………………………………………… 56 Bang 6: Tôc đô sinh tr ̉ ́ ̣ ưởng cua hê s ̉ ̣ ợi nâm ́ Cordyceps sp. trên cac nông đô đam khac ́ ̀ ̣ ̣ ́ nhau………………………………………………………………………………… 58 Bang 7: Sinh khôi cua hê s ̉ ́ ̉ ̣ ợi nâm ́ Cordyceps sp. ở cac trang thai khac nhau cua môi ́ ̣ ́ ́ ̉ trương ̀ dương ̃ ………………………………………………… 60 DANH MUC HINH ̣ ̀ dinh Nấm Hình 1: Cordyceps sp thu thập từ tự nhiên 38 Hình 2: Cấu tạo thể chén bề mặt thể túi 39 Hình 3: Lát cắt ngang thể chén vật kính 10× .39 Hình 4: Các thể chứa túi 40 Hình 5: Các bào tử túi 40× 40 Hinh ̀ Sự naỷ mâm ̀ chụp cuả bào vật baò tử kính tử tui .41 ́ Hình 7: Các bào tử vơ tính 41 Hinh ̀ Sự phat́ triên ̉ cuả hệ sợi theo chu kỳ taọ nên ̃ vong ̀ đông ̀ tâm 42 Hình 9: Các mầm thể nuôi môi trường dinh dưỡng .42 Hình 10 Kết giải trình tự ITS rDNA (mồi xi) 43 Hình 11 Kết giải trình tự ITS rDNA (mồi ngược) .44 Hinh ̀ 12: Sợi nâm ́ Cordyceps sp nuôi môi trương ̀ có chưá arabinose 48 Hinh ̀ 13: Sợi nâm ́ Cordyceps sp nuôi môi trương ̀ có chưá glucose 48 Hinh ̀ 14: Sợi nâm ́ Cordyceps sp nuôi môi trương ̀ có chưá saccharose 49 Hinh ̀ 15: Sợi nâm ́ Cordyceps sp nuôi môi trương ̀ có chưá mantose .49 Hinh ̀ 16: Sợi nâm ́ Cordyceps sp nuôi môi trương ̀ có chưá (NH4)2SO4 52 Hinh ̀ 17: Sợi nâm ́ Cordyceps sp nuôi môi trương ̀ có chưá pepton .52 Hinh ̀ 18: Sợi nâm ́ Cordyceps sp nuôi môi trương ̀ có chưá cao thit 53 ̣ Hinh 19: S ̀ ợi nâm ́ Cordyceps sp. khi nuôi trên môi trương co ch ̀ ́ ưa NH ́ 4NO3 53 Hinh ̀ 20 : Sợi nâm ́ Cordyceps sp nuôi môi trương ̀ long ̉ tinh .61 ̃ Hinh ̀ 21: Sợi nâm ́ sp nuôi môi trương ̀ long ̉ Cordyceps đông 61 ̣ ̣ Hinh 22 : Sinh khôi khô cua hê s ̀ ́ ̉ ̣ ợi nâm ́ Cordyceps sp. sau 10 ngay nuôi cây trong ̀ ́ điêu kiên long tinh .62 ̀ ̣ ̉ ̃ Hinh 23: Sinh khôi khô cua hê s ̀ ́ ̉ ̣ ợi nâm ́ Cordyceps sp. sau 10 ngay nuôi cây trong ̀ ́ điêù kiêṇ đông .62 ̣ long ̉ MỞ ĐẦU Trước đây người ta xem nâm la môt đôi t ́ ̀ ̣ ́ ượng ma co thê xêp no vao nhom vi ̀ ́ ̉ ́ ́ ̀ ́ sinh vât, cung co thê xêp vao gi ̣ ̃ ́ ̉ ́ ̀ ơi th ́ ực vât. Do nh ̣ ưng đăc tinh đôc đao cua chung ma ̃ ̣ ́ ̣ ́ ̉ ́ ̀ theo quan điêm ̉ hiên ̣ đai, ̣ nâm ́ được xêp ́ vaò giơí riêng là giới nâm ́ Regnum Mycetoidem Fries (Syn. Regnum Fungi Conard; Mecetalia Takhtajan). Những phát hiện mới nhất dựa trên các dẫn liệu phân tử lại cho thấy nấm gần với động vật hơn thực vật Nâm la nh ́ ̀ ưng c ̃ ơ thê di d ̉ ̣ ương, không ch ̃ ưa Chlorofin di d ́ ̣ ương băng cach hâp ̃ ̀ ́ ́ thu, no co vai tro quan trong trong t ̣ ́ ́ ̀ ̣ ự nhiên va cuôc sông sinh vât noi chung va con ̀ ̣ ́ ̣ ́ ̀ ngươi noi riêng ̀ ́ [10].Vì thê, ngay nay nâm hoc tr ́ ̀ ́ ̣ ở nên nganh nghiên c ̀ ứu hâp dân v ́ ̃ ới nhiêu nha khoa hoc ̀ ̀ ̣ Nâm la môt trong nh ́ ̀ ̣ ưng sinh vât co nhiêu hinh dang, phong phu vê mau săc, ̃ ̣ ́ ̀ ̀ ̣ ́ ̀ ̀ ́ đông đao vê thanh phân loai va nh ̉ ̀ ̀ ̀ ̀ ̀ ưng đăc tinh sinh hoc đôc đao. Nâm la nguôn th ̃ ̣ ́ ̣ ̣ ́ ́ ̀ ̀ ực phâm, nguôn d ̉ ̀ ược liêu qui gia la chê phâm trong trang tri nôi thât trong công nghiêp ̣ ́ ́ ̀ ́ ̉ ́ ̣ ́ ̣ san xuât dung cu văn phong, trong môi tr ̉ ́ ̣ ̣ ̀ ương sinh thai nâm la sinh vât di d ̀ ́ ́ ̀ ̣ ̣ ưỡng hoaị sinh, no co vai tro rât l ́ ́ ̀ ́ ớn trong viêc thuc đây chu trinh tuân hoan vât chât t ̣ ́ ̉ ̀ ̀ ̀ ̣ ́ ự nhiên, khoang hoa cac chât h ́ ́ ́ ́ ữu cơ lam sach môi tr ̀ ̣ ường sinh thai va tăng đô phi nhiêu cho ́ ̀ ̣ ̀ đât ́ [7] Tuy nhiên, bên canh nh ̣ ưng măt co l ̃ ̣ ́ ợi môt sô loai nâm cung gây không it thiêt ̣ ́ ̀ ́ ̃ ́ ̣ hai cho con ng ̣ ươi. Nâm ki sinh trên th ̀ ́ ́ ực vât gây ra nh ̣ ưng tôn thât đang kê cho năng ̃ ̉ ́ ́ ̉ suât cây trông, nâm con ki sinh gây bênh cho con ng ́ ̀ ́ ̀ ́ ̣ ươi, đông vât. Viêc s ̀ ̣ ̣ ̣ ử dung nâm ̣ ́ hoang dai lam th ̣ ̀ ực phẩm đôi khi cung gây ra nh ̃ ưng hâu qua đang tiêc vi trong thiên ̃ ̣ ̉ ́ ́ ̀ nhiên có ̃ loaị nâm ́ cực đôc̣ như: Amanita phalloides, Amanita muscaria, Boletus santanas co chât đôc gây chêt ng ́ ́ ̣ ́ ười với liêu l ̀ ượng nho.̉ [10] Nhóm nấm Cordyceps và các chi liên quan là một nhóm nấm thuộc lớp nấm túi (Ascomycota) bao gồm hơn 450 lồi thuộc về nhiều chi khác nhau. Bởi kha năng ̉ tiêu diêt cơn trung va trong c ̣ ̀ ̀ thê cua chung con ch ̉ ̉ ́ ̀ ưa nhiêu chât quan trong co y ́ ̀ ́ ̣ ́ ́ nghia rât l ̃ ́ ơn vê măt d ́ ̀ ̣ ược liêu cho nên hiên nay no đang đ ̣ ̣ ́ ược cac nha khoa hoc trên ́ ̀ ̣ thê gi ́ ới quan tâm Nhiều nơi trên thế giới đã dựa vào khả năng ký sinh gây bệnh cho cơn trùng của nhóm nấm này để tạo ra các sản phẩm thuốc trừ sâu sinh học, vừa có khả năng phịng trừ sâu bệnh lại vừa đảm bảo được vấn đề ơ nhiễm mơi trường do dư lượng thuốc bảo vệ thực vật gây nên. Trong những năm gần đây, tại một số vùng của nước ta đã xuất hiện nhiều đợt dịch sâu bệnh mạnh như dịch sâu róm rừng thơng (Quảng Nam, Lâm Đồng), rừng điều (Lâm Đồng), các vườn cà phê (Di Linh Lâm Đồng); ve sầu phá hoại vườn cà phê, rừng cao su (Lâm Đồng, Daklak), dịch châu chấu (Đồng bằng sơng Cửu Long) … gây ra những thiệt hại lớn về kinh tế cho bà con nơng dân cũng như làm ảnh hưởng đến cơng tác bảo vệ cây rừng. Một trong những giải pháp hữu hiệu đồng thời cũng an tồn cho mơi trường, đó là sử dụng đối kháng sinh học. Tuy nhiên việc sử dụng các sản phẩm của nước ngồi có thể chúng ta sẽ lại gặp những rắc rối khác về việc mất cân bằng sinh thái do sự phát triển q mức của các lồi nhập nội như trường hợp ốc bươu vàng, cây Mai Dương… Một ứng dụng vơ cùng quan trọng nữa của nhóm nấm này là khả năng sử dụng chúng như các sản phẩm dược và thực phẩm chức năng. Nhiêu loai nâm ̀ ̀ ́ Cordyceps đa đ ̃ ược sử dung cho muc đich y hoc tai Trung Quôc, Nhât Ban, Thai Lan, ̣ ̣ ́ ̣ ̣ ́ ̣ ̉ ́ Han Quôc ̀ ́ Theo đánh giá của y học cổ truyền Trung Quốc cũng như các nghiên cứu gần đây cho thấy có tới hơn 20 tác dụng hữu ích cua nhom nâm nay đ ̉ ́ ́ ̀ ối với con người. Hiên nay Nhât Ban, Thai Lan, Han Quôc, Trung Quôc la nh ̣ ̣ ̉ ́ ̀ ́ ́ ̀ ưng n ̃ ươc rât quan ́ ́ tâm đên nh ́ ưng loai nâm nay. Tuy nhiên, ̃ ̀ ́ ̀ ở nước ta các nghiên cứu về nhóm nấm này vẫn chưa được tiến hành, chúng ta vẫn chưa có các ghi nhận cụ thể nào về thành phần lồi của nhóm nấm này tại Việt Nam Lâm Đồng là một tỉnh Tây ngun là nơi có hệ thực vật, động vật, cơn trùng vơ cùng đa dạng. Đồng thời cùng với sự phong phú của khu hệ nấm lớn, ở đây hồn tồn là một khu vực lý tưởng để tiến hành các nghiên cứu khảo sát về khu hệ nấm ký sinh cơn trùng và khảo sát các đặc điểm sinh học cũng như đánh gia ti ́ ềm năng ứng dụng của nhóm nấm này Chung tơi tiên hanh đê tai: “ ́ ́ ̀ ̀ ̀ Nghiên cưu ́ môt sô đăc điêm sinh hoc cua loai ̣ ́ ̣ ̉ ̣ ̉ ̀ Cordyceps sp. được tim thây tai Đa Lat” ̀ ́ ̣ ̀ ̣ nhăm muc đich nghiên c ̀ ̣ ́ ưu môt sô đăc ́ ̣ ́ ̣ điêm sinh hoc cua loai ̉ ̣ ̉ ̀ Cordyceps sp. tư đo tìm hi ̀ ́ ểu tiêm năng ̀ ứng dung cua loai n ̣ ̉ ̀ ấm nay trong y d ̀ ược và trong đôi khang sinh hoc, đ ́ ́ ̣ ồng thời tao nguôn nguyên liêu ban ̣ ̀ ̣ đầu phuc vu cho cac nghiên c ̣ ̣ ́ ưu ́ ứng dụng sau này PHÂN I: TƠNG QUAN TAI LIÊU ̀ ̉ ̀ ̣ 1.1. Vi tri hê thơng va đăc điêm sinh hoc cua chi ̣ ́ ̣ ́ ̀ ̣ ̉ ̣ ̉ Cordyceps 1.1.1. Vi tri hê thông cua chi ̣ ́ ̣ ́ ̉ Cordyceps 10 Bang 3 : Anh h ̉ ̉ ưởng cua cac nguôn dinh d ̉ ́ ̀ ưỡng Nitơ khac nhau lên tôc đô sinh ́ ́ ̣ trưởng cua loai ̉ ̀ Cordyceps sp 400 350 300 250 200 150 100 50 Pepton Cao thị t (NH4)2SO4 NH4NO3 Đô thi 2: Tôc đô sinh tr ̀ ̣ ́ ̣ ưởng cua hê s ̉ ̣ ợi nâm ́ Cordyceps sp. trên cac nguôn dinh ́ ̀ dương Nit ̃ ơ khac nhau ́ Từ bang 3 va đô thi 2 ta nhân thây răng trên cac loai đam khac nhau thi tôc đô ̉ ̀ ̀ ̣ ̣ ́ ̀ ́ ̣ ̣ ́ ̀ ́ ̣ sinh trưởng khac nhau ́ Đăc biêt ta thây co s ̣ ̣ ́ ́ ự khac nhau ro rêt gi ́ ̃ ̣ ữa nguôn đam h ̀ ̣ ữu cơ (pepton, cao thit ) va đam vô c ̣ ̀ ̣ ơ (NH4NO3 va (NH ̀ 4)2SO4) Sau 8 ngay nuôi cây s ̀ ́ ợi nâm loai ́ ̀ Cordyceps sp. phat triên tôt nhât trong môi ́ ̉ ́ ́ trương ch ̀ ưa nguôn nit ́ ̀ la pepton, tiêp theo la cao thit. So v ̀ ́ ̀ ̣ ơi môi tr ́ ường chưá nguôn nit ̀ vô cơ thi môi tr ̀ ương ch ̀ ưa nguôn Nit ́ ̀ hữu cơ hê s ̣ ợi phat triên tôt h ́ ̉ ́ ơn, phân nhanh nhiêu h ́ ̀ ơn, đô day colonie day h ̣ ̀ ̀ ơn. Tôc đô sinh tr ́ ̣ ưởng cua hê s ̉ ̣ ợi trên môi trương ch ̀ ưa nguôn ́ ̀ Nitơ la pepton la 343 µm ̀ ̀ /ngày con trên (NH ̀ ̉ 4)2SO4 chi có 257µm/ngày 50 Từ dân liêu va đơ thi co thê thây hê s ̃ ̣ ̀ ̀ ̣ ́ ̉ ́ ̣ ợi loaì Cordyceps sp. moc tôt trên môi ̣ ́ trương ch ̀ ưa nguôn ́ ̀ Nitơ hưu c ̃ ơ. Điêu nay cung dê hiêu vi Nit ̀ ̀ ̃ ̃ ̉ ̀ ơ hưu c ̃ ơ dê phân huy ̃ ̉ hơn so vơi ́ Nitơ vô cơ. Hơn nưa trong ban thân con côn trung giau đam, đây la nguôn ̃ ̉ ̀ ̀ ̣ ̀ ̀ dinh dương chinh ma nâm thuôc chi ̃ ́ ̀ ́ ̣ Cordyceps sử dung. Vi vây, nên s ̣ ̀ ̣ ử dung môi ̣ trương ch ̀ ưa pepton cho qua trinh nghiên c ́ ́ ̀ ứu tiêp theo. Ngoai ra co thê s ́ ̀ ́ ̉ ử dung cao ̣ thit vi trong môi tr ̣ ̀ ương ch ̀ ưa cao thit s ́ ̣ ợi nâm cung phat triên tôt, chi kem môt it so ́ ̃ ́ ̉ ́ ̉ ́ ̣ ́ vơi khi s ́ ử dung pepton ̣ Hinh 16: S ̀ ợi nâm ́ Cordyceps sp. khi nuôi trên môi trương co ch ̀ ́ ưa (NH ́ 4)2SO4 51 Hinh 17: S ̀ ợi nâm ́ Cordyceps sp. khi nuôi trên môi trương co ch ̀ ́ ưa pepton ́ Hinh 18: S ̀ ợi nâm ́ Cordyceps sp. khi nuôi trên môi trương co ch ̀ ́ ưa cao thit ́ ̣ Hinh 19: S ̀ ợi nâm ́ Cordyceps sp. khi nuôi trên môi trương co ch ̀ ́ ưa NH ́ 4NO3 52 3.4 Anh ̉ hưởng cuả nguôn ̀ Nitơ lên khả sinh baò tử cuả nâm ́ Cordyceps sp Đê biêt đ ̉ ́ ược sự anh h ̉ ưởng cua nguôn Nit ̉ ̀ lên kha năng sinh bao t ̉ ̀ ử cua nâm ̉ ́ Cordyceps sp. ta tiên hanh đêm bao t ́ ̀ ́ ̀ ử được kêt qua nh ́ ̉ ư sau: Nguôn ̀ Nitơ sử dung ̣ Sô tê bao trong 5 ô l ́ ́ ̀ ớn Mât đô bao t ̣ ̣ ̀ ử (80 ô nhỏ) (Sô bao t ́ ̀ ử/ ml) Pepton 420 210.105 Cao thiṭ 274 137.105 NH4NO3 99 49.105 (NH4)2SO4 52 26.105 Bang 4 ̉ : Kha năng sinh bao t ̉ ̀ ử cua nâm ̉ ́ Cordyceps sp. trên cac nguôn dinh d ́ ̀ ưỡng Nitơ khac nhau ́ 53 250 200 150 100 50 Pepton Cao thịt NH4NO3 (NH4)2SO4 Đô thi 3: Đô thi biêu diên kha năng sinh bao t ̀ ̣ ̀ ̣ ̉ ̃ ̉ ̀ ử cua nâm ̉ ́ Cordyceps sp. trên cać nguôn dinh d ̀ ương Nit ̃ ơ khac nhau ́ Từ bang 4 va đô thi 3 ta nhân thây răng trên cac loai đam kha năng sinh bao t ̉ ̀ ̀ ̣ ̣ ́ ̀ ́ ̣ ̣ ̉ ̀ ử cua nâm ̉ ́ Cordyceps sp. co s ́ ự khac nhau ro rêt ́ ̃ ̣ Sau 8 ngay nuôi cây kha năng sinh bao t ̀ ́ ̉ ̀ ử cua nâm ̉ ́ Cordyceps sp. trong môi trương ch ̀ ưa nguôn nit ́ ̀ ơ la pepton la cao nhât, tiêp theo la cao thit. So v ̀ ̀ ́ ́ ̀ ̣ ơi môi tr ́ ường chưa nguôn nit ́ ̀ ơ vô cơ thi trong môi tr ̀ ường chưa nguôn nit ́ ̀ ơ hữu cơ nâm ́ Cordyceps sp. co kha năng sinh bao t ́ ̉ ̀ ử manh h ̣ ơn. Sô bao t ́ ̀ ử trên môi trường chưa nguôn ́ ̀ Nitơ là 5/ pepton la 210.10 ̀ /ml con trên (NH ̀ ̉ ́ ml 4)2SO4 chi co 26.10 Vi vây, pepton la nguôn dinh d ̀ ̣ ̀ ̀ ương thich h ̃ ́ ợp cho kha năng sinh bao t ̉ ̀ ử cuả nâm ́ Cordyceps sp 54 3.5. Anh h ̉ ưởng nông đô cua nguôn Cacbon lên tôc đô sinh tr ̀ ̣ ̉ ̀ ́ ̣ ưởng cua hê ̉ ̣ sợi nâm ́ Cordyceps sp Sau khi tim đ ̀ ược nguôn Cacbon thich h ̀ ́ ợp ta tiên hanh khao sat trên cac m ́ ̀ ̉ ́ ́ ưć nông ̀ độ khać để tim ̀ nông ̀ độ thich ́ hợp cho sự phat́ triên ̉ cuả sợi nâm ́ Cordyceps sp Đương kinh colonie ̀ ́ 4 ngay ̀ (mm) 8 ngay ̀ (mm) Nơng ̀ Tơc đơ moc ́ ̣ ̣ (µm/ngaỳ ) đô saccharose ̣ (g/lit) 1,07 ± 0,02 2,03 ± 0,01 240 ± 3,00 10 0,93 ± 0,01 1,93 ± 0,03 250 ± 1,90 20 1,05 ± 0,04 2,1 ± 0,06 262 ± 1,30 30 1,13 ± 0,05 2,2 ± 0,04 267 ± 1,70 40 1,1 ± 0,07 2,1 ± 0,01 250 ± 2,80 50 1,2 ± 0,06 2,17 ± 0,05 242 ± 6,50 Bang 5: Tôc đô sinh tr ̉ ́ ̣ ưởng cua hê s ̉ ̣ ợi nâm ́ Cordyceps sp. trên cac nông đô ́ ̀ ̣ saccharose khac nhau ́ 55 300 250 200 Nồng độ saccharose (g/l) Tốc đ ộ sinh trưởng (µm/ngày) 150 100 50 Nồng độ saccharose (g/l) 10 20 30 40 50 Tốc đ ộ sinh trưởng (µm/ngày) 240 250 262 267 250 242 Đô thi 4: Tôc đô sinh tr ̀ ̣ ́ ̣ ưởng cua hê s ̉ ̣ ợi nâm ́ Cordyceps sp. trên cac nông đô ́ ̀ ̣ saccharose khac nhau ́ Từ bang 5 va đô thi 4 chi ra răng tôc đô sinh tr ̉ ̀ ̀ ̣ ̉ ̀ ́ ̣ ưởng cua hê s ̉ ̣ ợi nâm ́ Cordyceps sp. không nhưng phu thuôc vao nguôn Cacbon ma con phu thuôc vao nông đô cua ̃ ̣ ̣ ̀ ̀ ̀ ̀ ̣ ̣ ̀ ̀ ̣ ̉ chung trong môi tr ́ ương. Khi nông đô saccharose trong môi tr ̀ ̀ ̣ ương dinh d ̀ ương tăng ̃ từ 530g/l thi tôc đô sinh tr ̀ ́ ̣ ưởng hê s ̣ ợi Cordyceps sp. tăng từ 240267 µm/ngay, ̀ nhưng khi nơng đơ cua no tiêp tuc tăng t ̀ ̣ ̉ ́ ́ ̣ ừ 3050g/l thi tôc đô sinh tr ̀ ́ ̣ ưởng lai giam dân ̣ ̉ ̀ từ 267250 µm/ngay. Khi nơng đơ saccharose trong mơi tr ̀ ̀ ̣ ường dinh dương la 30g/l ̃ ̀ thi tôc đô sinh tr ̀ ́ ̣ ưởng cua hê s ̉ ̣ ợi nâm ́ Cordyceps sp. đat c ̣ ực đai la 267 µm/ngay. Vi ̣ ̀ ̀ ̀ vây, khi ta bơ sung saccharose vao mơi tr ̣ ̉ ̀ ương nuôi cây ̀ ́ ở nông đô 30g/l thi hê s ̀ ̣ ̀ ̣ ợi nâm sinh tr ́ ưởng tôt nhât ́ ́ 56 3.6. Anh h ̉ ưởng nông đô cua nguôn Nit ̀ ̣ ̉ ̀ ơ lên tôc đô sinh tr ́ ̣ ưởng cua hê s ̉ ̣ ợi nâm ́ Cordyceps sp Sau khi tim đ ̀ ược nguôn Nit ̀ ơ thich h ́ ợp ta tiên hanh khao sat trên cac m ́ ̀ ̉ ́ ́ ưc nông ́ ̀ đô khac nhau đê tim ra nông đô thich h ̣ ́ ̉ ̀ ̀ ̣ ́ ợp cho sự phat triên cua s ́ ̉ ̉ ợi nâm ́ Cordyceps sp Đương kinh colonie ̀ ́ 4 ngay ̀ (mm) Nông ̀ 8 ngay ̀ (mm) Tôc đô moc ́ ̣ ̣ (µm/ngay) ̀ đơ Pepton ̣ (g/lit) 1 ± 0,020 1.9 ± 0,150 225 ± 0,900 10 0.77 ± 0,001 1.83 ± 0,020 265 ± 2,600 15 0.87 ± 0,030 2 ± 0,011 282 ± 2,200 20 0.43 ± 0,014 1.23 ± 0,030 217 ± 2,800 30 0.2 ± 0,022 0.67 ± 0,004 117 ± 0,090 Bang 6: Tôc đô sinh tr ̉ ́ ̣ ưởng cua hê s ̉ ̣ ợi nâm ́ Cordyceps sp. trên cac nông đô đam ́ ̀ ̣ ̣ khac nhau ́ 57 300 250 Nồng độ pepton (g/l) 200 Tốc đ ộ sinh trưởng (µm/ngày) 150 100 50 Nồng độ pepton (g/l) 10 15 20 30 Tốc đ ộ sinh trưởng (µm/ngày) 225 265 282 217 117 Đô thi 5: Tôc đô sinh tr ̀ ̣ ́ ̣ ưởng cua hê s ̉ ̣ ợi nâm ́ Cordyceps sp. trên cac nông đô ́ ̀ ̣ pepton khac nhau ́ Từ bang ̉ 6 và đồ thi ̣ 5 chi ̉ răng ̀ tôć đô ̣ sinh trưởng cuả hệ sợi nâm ́ Cordyceps sp. không nhưng phu thuôc vao nguôn Nit ̃ ̣ ̣ ̀ ̀ ơ ma con phu thuôc vao nông đô ̀ ̀ ̣ ̣ ̀ ̀ ̣ cua chung trong môi tr ̉ ́ ương. Khi nông đô pepton trong môi tr ̀ ̀ ̣ ương dinh d ̀ ương tăng ̃ từ 515g/l thi tơc đơ sinh tr ̀ ́ ̣ ưởng hê s ̣ ợi tăng từ 225282 µm/ngay, nh ̀ ưng khi nông đô ̀ ̣ cuả no ́ tiêp ́ tuc̣ tăng từ 1530g/l thì tôć độ sinh trưởng lai ̣ giam ̉ dân ̀ từ 282167 µm/ngay. Khi nơng đơ pepton trong mơi tr ̀ ̀ ̣ ương dinh d ̀ ương la 15g/l thi tôc đô sinh ̃ ̀ ̀ ́ ̣ trưởng cua hê s ̉ ̣ ợi nâm ́ Cordyceps sp. đat c ̣ ực đai la 282 µm/ngay. Vi vây, khi ta bơ ̣ ̀ ̀ ̀ ̣ ̉ sung pepton vao môi tr ̀ ương nuôi cây ̀ ́ ở nông đô 15g/l thi hê s ̀ ̣ ̀ ̣ ợi nâm sinh tr ́ ưởng tôt́ nhât, nh ́ ưng khi tiêp tuc tăng nông đô pepton thi luc nay v ́ ̣ ̀ ̣ ̀ ́ ̀ ượt qua ng ́ ương cân thiêt ̃ ̀ ́ cua nâm ̉ ́ Cordyceps sp. no tr ́ ở nên ưc chê. Cu thê la ́ ́ ̣ ̉ ̀ở 20g/l thi sau 4 ngay đâu s ̀ ̀ ̀ ợi nâm chi m ́ ̉ ơi xu ra rât nho, sau 8 ngay chi đat 1,23mm, tơc đơ moc la 217 µm/ngay ́ ̀ ́ ̉ ̀ ̉ ̣ ́ ̣ ̣ ̀ ̀ 58 3.7. Kha năng tich luy sinh khôi cua hê s ̉ ́ ̃ ́ ̉ ̣ ợi nâm ́ Cordyceps sp ở cać trang thai khac nhau cua môi tr ̣ ́ ́ ̉ ường dinh dương ̃ Trang thai môi tr ̣ ́ ương ̀ Sinh khôí (g/l) 12.25 ± 0,17 Longtinh ̉ ̃ 6.20 ± 0,24 Long đông ̉ ̣ Bang 7: Sinh khôi cua hê s ̉ ́ ̉ ̣ ợi nâm ́ Cordyceps sp. ở cac trang thai khac nhau cua ́ ̣ ́ ́ ̉ môi trương dinh d ̀ ương ̃ Từ kêt qua nghiên c ́ ̉ ưu ́ ở bang 7 ta thây kha năng tich luy sinh khôi ̉ ́ ̉ ́ ̃ ́ Cordyceps sp. phu thuôc vao trang thai môi tr ̣ ̣ ̀ ̣ ́ ương dinh d ̀ ương (long tinh, long đông), ma s ̃ ̣ ̉ ̃ ̉ ̣ ̀ ự khac nhau gi ́ ưa cac trang thai môi tr ̃ ́ ̣ ́ ường chu yêu la đô thông thoang. ̉ ́ ̀ ̣ ́ Cordyceps sp. la loai nâm ki sinh trên côn trung năm ̀ ̀ ́ ́ ̀ ̀ ở trên la hoăc trong cac hôc cây, thich môi ́ ̣ ́ ́ ́ trương thiêu không khi ̀ ́ ́ Ở mơi trương long đơng, thì kha năng tich luy sinh khơi th ̀ ̉ ̣ ̉ ́ ̃ ́ ấp hơn so với khi ở trong mơi trường lỏng động, chi băng khoang mơt n ̉ ̀ ̉ ̣ ửa so vơi khi ni trong mơi ́ trương long tĩnh. Vì ̀ ̉ ở môi trương long tinh hê s ̀ ̉ ̃ ̣ ợi phat triên bê măt c ́ ̉ ̀ ̣ ơ chât va chim ́ ̀ ̀ trong dung dich, 75% hê s ̣ ̣ ợi chim trong dung dich trong điêu kiên thiêu không khi, ̀ ̣ ̀ ̣ ́ ́ phu h ̀ ợp vơi đăc điêm sinh ly cua loai nên kha năng tich luy sinh khôi la cao nhât ́ ̣ ̉ ́ ̉ ̀ ̉ ́ ̃ ́ ̀ ́ 59 Hinh 20 : S ̀ ợi nâm ́ Cordyceps sp. nuôi trên môi trương long tinh ̀ ̉ ̃ Hinh 21: S ̀ ợi nâm ́ Cordyceps sp. nuôi trên môi trương long đông ̀ ̉ ̣ ̣ 60 Hinh 22 : Sinh khôi khô cua hê s ̀ ́ ̉ ̣ ợi nâm ́ Cordyceps sp. sau 10 ngay nuôi cây trong ̀ ́ điêu kiên long tinh ̀ ̣ ̉ ̃ Hinh 23: Sinh khôi khô cua hê s ̀ ́ ̉ ̣ ợi nâm ́ Cordyceps sp. sau 10 ngay nuôi cây ̀ ́ trong điêu kiên long đông ̀ ̣ ̉ ̣ 61 KÊT LUÂN VA KIÊN NGHI ́ ̣ ̀ ́ ̣ I. KÊT LUÂN: ́ ̣ Tư kêt qua nghiên c ̀ ́ ̉ ứu trên chung tôi đ ́ ưa ra môt sô kêt luân sau: ̣ ́ ́ ̣ 1. Chưa đủ thơng tin để xác định chính xác tên khoa học của lồi Cordyceps sp. phát hiện tại Langbiang Đà Lạt 2. Ngn ̀ Cacbon thich h ́ ợp cho sự phat triên cua hê s ́ ̉ ̉ ̣ ợi nâm ́ Cordyceps sp. là đường saccharose vơi nông đô tôi ́ ̀ ̣ ́ ưu la 30g/l ̀ 3. Nguôǹ Nitơ thich h ́ ợp cho sự phat triên cua hê s ́ ̉ ̉ ̣ ợi nâm ́ Cordyceps sp. là pepton vơi nông đô tôi ́ ̀ ̣ ́ ưu la 15g/l ̀ 4. Kha năng tich luy sinh khôi hê s ̉ ́ ̃ ́ ̣ ợi nâm trong cung môt lo ́ ̀ ̣ ại môi trường ở cać trang thai nuôi c ̣ ́ ấy khac nhau thi khac nhau. Khi nuôi c ́ ̀ ́ ấy ở trang thai long tinh kha ̣ ́ ̉ ̃ ̉ năng tich luy sinh khôi cao h ́ ̃ ́ ơn so vơi khi nuôi c ́ ấy ở trang thai long đông ̣ ́ ̉ ̣ II. KIÊN NGHI: ́ ̣ Tiếp tục nghiên cứu nhằm xác định xác tên khoa học lồi Cordyceps sp. khăng đ ̉ ịnh đây có phải là một lồi mới hay khơng 2. Tiếp tục khao sat các ngn Cacbon va ngn Nit ̉ ́ ̀ ̀ ̀ khác nhau lên sự sinh trưởng cua hê s ̉ ̣ ợi nâm ́ Cordyceps sp. Khao sat anh h ̉ ́ ̉ ưởng cua vitamin, chât kich tô ̉ ́ ́ ́ sinh hoc, ̣ ảnh hưởng của nhiệt độ, pH… lên q trình phát triển hệ sợi nhằm xác định nguồn cơ chất tối ưu để ni trồng thu sinh khối lồi nấm này 3. Tiến hành nghiên cứu ni trồng thu quả thể, tìm hiểu các điều kiện mơi trường, cơ chất thích hợp cho sự hình thành quả thể 4. Phân tích thành phần của một số hợp chất có hoạt tính sinh học có tiềm năng ứng dụng trong y dược 5. Khảo sát khả năng diệt trừ một số lồi sâu của lồi Cordyceps sp. Đà Lạt 62 TAI LIÊU THAM KHAO ̀ ̣ ̉ Tai liêu tham khao tiêng Viêt Nam ̀ ̣ ̉ ́ ̣ Lê Ba Dung (1991). ́ ̃ Ảnh hưởng của một số nguồn dinh dưỡng (Cacbon, ̣ Nitơ và vitamin) lên sự sinh trưởng của micelium của hai lồi nấm kinh tế: Pleurotus cornucorpae và Pleurotus eryngii. Thơng báo khoa học. Đại học Đà Lạt Ngun Lân Dung (2005). Cơng nghê ni trơng nâm. Nha xt ban nơng ̃ ̃ ̣ ̀ ́ ̀ ́ ̉ nghiêp Ha Nôi ̣ ̀ ̣ Trương Thi Hông (2008). Nghiên c ̣ ̀ ưu s ́ ự phân hoa sinh đia hoc cua nâm ́ ̣ ̣ ̉ ́ hương Shitakee Lentinula spp Luân văn thac si sinh hoc ̣ ̣ ̃ ̣ Trinh Tam Kiêt (1981). Vi tri cua nâm trong sinh gi ̣ ̣ ̣ ́ ̉ ́ ơi. Tap chi sinh hoc sô hai ́ ̣ ́ ̣ ́ Nguyên Văn Lan; Đô Tât L ̃ ̃ ́ ợi; Nguyên Văn Thach (1965). Ki thuât nuôi trông ̃ ̣ ̃ ̣ ̀ va chê biên d ̀ ́ ́ ược liêu. Nha xuât ban y hoc Băc Kinh ̣ ̀ ́ ̉ ̣ ́ Lê Đinh L ̀ ương, Nguyên Lân Dung, Bui Xuân Đông (1982). Vi nâm. Nha ̃ ̃ ̀ ̀ ́ ̀ xuât ban khoa hoc va ky thuât Ha Nôi. ́ ̉ ̣ ̀ ̃ ̣ ̀ ̣ Nguyên Thuc Duy Ph ̃ ́ ượng (1997). Nghiên cứu sự anh h ̉ ưởng của một số nguồn dinh dưỡng va môt vai Phytohormon lên s ̣ ̀ ̣ ̀ ự sinh trưởng của cua hê ̉ ̣ sợi nâm ́ Poria coccus Wolf. Luân an thac si sinh hoc ̣ ́ ̣ ̃ ̣ Hoang Thi San (2007). Phân loai hoc th ̀ ̣ ̉ ̣ ̣ ực vât . Nha xuât ban giao duc ̣ ̀ ́ ̉ ́ ̣ Lê Xuân Tham (2000). Nâm H ́ ́ ương Cao Băng – Taxon đăc biêt trong chi ̀ ̣ ̣ Lentinula Earle. Tap chi d ̣ ́ ược hoc sô 3: 69 ̣ ́ 63 Tai liêu tham khao tiêng n ̀ ̣ ̉ ́ ước ngoaì 10 Chang ShuTing; Jonh A Buswell and SiuWai Chiu (1993) Mushroom Biology and Mushroom Products. The Chinese university Press, Hong Kong 11 Gu YuXiang; Wang ZunSheng; Wang SuXia; Yuan QinSheng (2007). Effect of multiple factors on accumulation of nucleosides and bases in Cordyceps militaris. Food Chemistry 102: 13041309 12 Holliday, John; Cleaver Phillip; LomisPowers Megan; Patel Dinesh (2004). Analysis of Quality and Techniques for Hybridization of Medicinal Fungus Cordyceps sinensis (Berk.) Sacc ( Ascomycetes ) International Journal of Medicinal Mushrooms (New York: Begell House) 6 (2): 152 13 Kobayasi, Y (1982) The genus genera Cordyceps and Torrubiella. Transactions of the Mycological Society Japan 23: 329364 14 Petch, T. (1926). Note on entomogenous fungi. Transactions of the British Mycological Society 15: 209245 15 Sung, GiHo; Nigel L. HywelJones; JaeMo Sung; J. Jennifer Luangsaard; Bhushan Shrestha; Joseph W. Spatafora (2007). Phylogenetic classification of Cordyceps and the clavicipitaceous fungi. Studies in Mycology 57 (1): 5–59. 16 Wang, Z. S.; Gu, Y. X.; Yuan, Q. S. (2006). Effect of nutrition factors on the synthesis of superoxide dismutase, catalase, and membrane lipid peroxide levels in Cordyceps militaris mycelium. Current Microbiology 52: 7479 17 Winkler, D (2008) Yartsa Gunbu (Cordyceps sinensis) and the Fungal Commodification of the Rural Economy in Tibet AR. Economic Botany 63 (2): 291306 64 ... ́ Cordyceps? ?sp.? ?khi nuôi trên môi trương co ch ̀ ́ ưa arabinose ́ 47 Hinh 13: S ̀ ợi nâm ́ Cordyceps? ?sp.? ?khi nuôi trên môi trương co ch ̀ ́ ưa glucose ́ Hinh 14: S ̀ ợi nâm ́ Cordyceps? ?sp.? ?khi nuôi trên môi trương co ch... môt sô đăc điêm sinh hoc cua loai ̣ ́ ̣ ̉ ̣ ̉ ̀ Cordyceps ? ?sp.? ?được? ?tim thây tai Đa Lat” ̀ ́ ̣ ̀ ̣ nhăm muc đich nghiên c ̀ ̣ ́ ưu môt sô đăc ́ ̣ ́ ̣ điêm sinh hoc cua loai ̉ ̣ ̉ ̀ Cordyceps? ?sp.? ?tư đo tìm hi ̀ ́... ưởng cua hê s ̉ ̣ ợi nâm ́ ? ?Cordyceps? ?sp.? ?trên cac nông đô đam khac ́ ̀ ̣ ̣ ́ nhau………………………………………………………………………………… 58 Bang 7: Sinh khôi cua hê s ̉ ́ ̉ ̣ ợi nâm ́ Cordyceps? ?sp.? ?ở cac trang thai khac nhau cua môi