Đang tải... (xem toàn văn)
Hiện nay hàng loạt các công nghệ nuôi trồng, thu hoạch, chế biến sinh khối vi tảo, các loại công nghệ này đang không ngừng được hoàn thiện, hạ giá thành và nâng cao chất lượng sinh khối, mặt khác sử dụng vi tảo đang được mở rộng trong các lĩnh vực như dùng làm thức ăn bổ dưỡng cho người và thức ăn cho động vật, đặc biệt là các ngành nuôi trồng thủy sản, nguồn phân bón sinh học, năng lượng sạch, các hóa chất trong công nghiệp và dược phẩm, xử lý môi trường.
Đồ án tốt nghiệp 1 MỞ ĐẦU Trong những năm cuối cùng của thế kỉ 20, các nhà sinh học đã phát hiện ra các nhóm sinh vật có tốc độ sinh trưởng nhanh. Vi tảo ( Microalgae) là những sinh vật bậc thấp có trong sự chú ý đó vì chúng khơng chỉ có những cơ chế đặc thù mà còn sinh trưởng và phát triển cực kì nhanh. Hàng năm có 200 tỉ tấn chất hữu cơ được tạo thành trên tồn thế giới, trong số đó 170 180 tỉ tấn là do tảo tạo thành. Vi tảo chiếm 1/3 sinh khối của thực vật trên trái đất Cho đến nay hàng loạt các cơng nghệ ni trồng, thu hoạch, chế biến sinh khối vi tảo, các loại cơng nghệ này đang khơng ngừng được hồn thiện, hạ giá thành và nâng cao chất lượng sinh khối, mặt khác sử dụng vi tảo đang được mở rộng trong các lĩnh vực như dùng làm thức ăn bổ dưỡng cho người và thức ăn cho động vật, đặc biệt là các ngành ni trồng thủy sản, nguồn phân bón sinh học, năng lượng sạch, các hóa chất trong cơng nghiệp và dược phẩm, xử lý mơi trường Tuy nước ta đã có nhiều nghiên cứu về loại tảo này nhưng quy mơ ứng dụng còn chưa rộng. Hiện tại ở Đà Nẵng vẫn chưa có cơ sở nào sản xuất sinh khối để phục vụ cho các ngành thực phẩm và y học, sở dĩ như thế là do thành phần mơi trường ni cấy còn sử dụng q nhiều hóa chất nên mơi trường ni cấy đắt, do đó kém kinh tế dẫn đến chi phí đầu tư cao, các điều kiện để ni cấy cũng chưa tốt nhất và phương pháp thu nhận sinh khối tảo chưa được triệt để, hiệu quả chưa cao. Ngồi ra, cũng chưa có phương pháp bảo quản giống tốt trong một thời gian dài để chủ động được nguồn giống để giảm chi phí sản xuất cho những đợt sau. Trước những lý do như thế chúng tơi chọn đề tài: “Nghiên cứu các điều kiện nuôi cấy thu sinh khối và các phương pháp thu hoạch, bảo quản tảo Spirulina platensis”. Nhằm mục đích tìm ra mơi trường ít thành phần hóa chất, rẻ tiền, phương pháp thu hoạch SVTH: Nguyễn Thị Thu Thảo GVHD: TS. Đặng Đức Long Đồ án tốt nghiệp 2 tốt và các phương pháp bảo quản giống trong một thòi gian dài để chủ động trong q trình ni cấy và mang lại tính kinh tế PHẦN I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1. Giới thiệu chung về đối tượng thí nghiệm 1.1.1. Vai trò, vị trí của tảo Spirulina trong cơng nghệ sinh học (CNSH) Cơng nghệ sinh học là một lĩnh vực cơng nghệ cao dựa trên nền tảng khoa học về sự sống, kết hợp với quy trình và thiết bị kỹ thuật nhằm tạo ra các cơng nghệ khai thác các hoạt động sống của vi sinh vật, tế bào thực vật và động vật để sản xuất quy mơ cơng nghiệp các sản phẩm sinh học có chất lượng cao phục vụ cho lợi ích, nhu cầu của con người đồng thời phát triển kinh tế xã hội và bảo vệ mơi trường [30] Trong tự nhiên vai trò của giới tảo (Algae) nói chung, nhất là tảo biển với vai trò quang hợp gắn giữ cacbonic đã tạo ra khoảng 500 tỷ tấn chất hữu cơ có thể sử dụng được (trong đó có nhiều hoạt chất sinh học q) và thải ra 90% lượng oxy trong bầu khí quyển cần cho sự hơ hấp của người và động vật Chính điều này đã kích thích nghề ni tảo biển ra đời và đặc biệt xuất hiện Cơng nghệ sinh học vi tảo với bộ 3 nổi tiếng là Chlorella, Scenedesmus và Spirulina, chúng có nhiều giá trị trong cơng nghiệp thực phẩm, mỹ phẩm và dược phẩm Trong 3 nhóm tảo trên thì Spirulina hiện được chọn để phát triển sản xuất hơn 2 loại kia do 5 ưu thế sau: Hiệu quả kinh tế cao và góp phần bảo vệ, cải thiện mơi trường: Spirulina khơng những đơn giản trong nhu cầu dưỡng chất mà còn rất hiệu quả trong sử dụng năng lượng ánh sáng mặt trời, nước (có thể dùng nước biển, nước lợ, SVTH: Nguyễn Thị Thu Thảo GVHD: TS. Đặng Đức Long Đồ án tốt nghiệp 3 nước mặn, )…, tạo ra 16,8 tấn oxy/năm Điều này giúp bảo vệ mơi trường khí quyển, giảm hiệu ứng nhà kính (green house). Giá trị sử dụng đã vượt ra khỏi ranh giới truyền thống là dùng làm thực phẩm. Theo Thạc sĩ Dược sĩ Lê Văn Lăng, giảng viên Trường Đại học Y Dược TpHCM, Spirulina là nguồn dinh dưỡng q của tự nhiên. Nó có đủ các thành phần thiết yếu: protein lipid glucid cùng khoảng 30 vi lượng và hầu hết các vitamin cần thiết cho cơ thể, đáp ứng hồn hảo cơng thức chuẩn về chế phẩm dinh dưỡng vi lượng khống vitamin do FAO/WHO cơng bố và là sản phẩm cải thiện suy dinh dưỡng rất tốt cho trẻ em, người già, người bệnh sau phẫu thuật Mặt khác, với hoạt chất: Phycocyanin, Sulfolipid, Spirulan, Betacaroten, các khống vi lượng (coban, kẽm, sắt…) và các vitamin cần thiết, tảo Spirulina còn có giá trị dược liệu, giúp cơ thể tăng cường miễn dịch, chống lại bệnh tật. Có thể dùng tảo Spirulina hỗ trợ trong điều trị các bệnh: viêm gan, suy gan, đục thủy tinh thể, suy giảm thị lực, rụng tóc… Song song đó, tảo Spirulina cũng có tác dụng trong phòng chống một số bệnh ung thư do các hoạt chất tăng cường miễn dịch, chống oxy hóa, bảo vệ tế bào, chống đột biến gen. Năm 1996 1997, một nhóm nhà khoa học người Nhật đã phân lập và xác định cấu trúc một hoạt chất mới trong Spirulina và đặt tên là Spirulan (CaSp). Các thử nghiệm đã chứng tỏ Ca Sp có tác dụng kháng virus HIV type 1 và virus Herpes simplex type 1 [31] Tham gia vào việc xử lý mơi trường: ngồi việc cung cấp dưỡng khí oxy, Spirulina còn có khả năng gắn giữ mạnh các cation độc như chì, thuỷ ngân, cadimi, nên chúng có thể dùng để xử lý chất thải lỏng, xử lý nước thải [29]. Spirulina có thể là đối tượng chuyển tải các tiến bộ khoa học kỹ thuật rất hiện đại trong cơng nghệ sinh học: + Ni định hướng thu các chất có lợi cho dinh dưỡng và trị bệnh cho người và động vật. Đã có các tiến bộ về ni cấy Spirulina gắn Iod (phòng trị bệnh thiếu vi chất iod), gắn Selen, gắn Germani (chất chống oxy hố, chống lão hố, phòng chống ung thư )v.v Hoặc ni với những tiền chất định hướng SVTH: Nguyễn Thị Thu Thảo GVHD: TS. Đặng Đức Long Đồ án tốt nghiệp 4 cho sinh khối Spirulina giàu acid béo cần thiết, giàu betacaroten. Sự thành cơng trong tương lai phụ thuộc vào việc chọn giống Spirulina và tìm tòi cơng nghệ phù hợp, sẽ cho những lơ/mẻ sinh khối Spirulina rất có giá trị trong y dược. + Spirulina với cơng nghệ chuyển nạp gen: Chuyển nạp gen là kỹ thuật phân lập gen từ cơ thể cho (donor) cấy ghép vào bộ máy di truyền của cơ thể nhận (receiver) nhằm tạo ra tính trạng mới cần thiết từ cơ thể đó. Kỹ thuật tân tiến này đang được nghiên cứu với Spirulina ở 2 hướng sau: Chuyển gen chịu trách nhiệm di truyền tạo phao khí của Spirulina giúp vi sinh vật nổi trên mặt nước dễ dàng. Ta biết muốn phòng trừ bệnh sốt rét phải diệt muỗi Anopheles stopenis, bệnh sốt xuất huyết phải diệt muỗi Aedes aegypti, bệnh giun chỉ phải diệt muỗi Culex quinquefasciatus. Một cách hiệu quả cắt đứt vector truyền bệnh này là diệt ấu trùng (bọ gậy, lăng quăng ) của chúng. Hiện một số nghiên cứu cho thấy có những vi sinh vật, hoặc vi nấm có thể thực hiện được điều này. Tuy vậy, việc phải sống trơi nổi trên mặt nước (mơi trường ấu trùng các loại muỗi gây bệnh sinh sống) để diệt ấu trùng muỗi lại là điểm khơng có hoặc yếu kém của các vi sinh vật này. Do vậy có thể tách gen di truyền tạo phao khí nổi trên mặt nước của Spirulina ghép vào vi sinh vật có ích trên, tạo ra những đặc điểm mong muốn diệt ấu trùng muỗi gây bệnh [1] Chuyển nạp gen tạo chất dẻo sinh học cho Spirulina: có thể ghép vào Spirulina gen tạo chất polyhydroxyl butylat (P.H.B), gen này có vi khuẩn Aleutroplus, để tạo ra giống Spirulina mới có đặc tính phát triển sinh khối nhanh, đồng thời chứa P.H.B với hàm lượng thích hợp. Trích ly chất P.H.B để sản xuất nhựa thay thế nhựa dẻo (như polystyrene) và chất dẻo mới này dễ bị phân huỷ khơng làm ơ nhiễm mơi trường v.v [22]. Spirulina tương đối thích nghi với mọi quy mơ sản xuất: có thể thu hoạch từ tự nhiên hoặc ni ở quy mơ nhỏ (hộ gia đình, làng xã), trong điều kiện bán SVTH: Nguyễn Thị Thu Thảo GVHD: TS. Đặng Đức Long Đồ án tốt nghiệp 5 tự nhiên với kỹ thuật đơn giản như ni trồng thuỷ sản, và ni quy mô công nghiệp [11] 1.1.2. Phân loại học Mang nhiều tên gọi khác nhau như Spirulina, Arthrospira và là một chủ đề được thảo luận nhiều từ trước đến nay, nhất là khi cái tên “tảo” được nhắc đến lần đầu tiên Năm 1852, việc phân loại học đầu tiên viết Stizenberger. Ơng đưa ra tên lồi mới là Arthrospira dựa vào cấu trúc chứa vách ngăn, đa bào, dạng xoắn. Gomont đã khẳng định những nghiên cứu của Stizenberger vào năm 1892, đồng thời Gomont bổ sung thêm lồi khơng có vách ngăn là Spirulina và lồi có vách ngăn là Arthrospira. Như vậy, tên được cơng nhận là Arthrospira, nhưng trong những hoạt động khảo sát và nghiên cứu Arthrospira được gọi là Spirulina, do đó tên Spirulina được sử dụng phổ biến cho đến nay thay cho tên Arthrospira. 1.1.3. Đặc điểm sinh học của Spirulina Lồi Spirulina (Arthrospira) platensis thuộc[2]: Chi : Spirulina (Arthrospira) Họ : Oscillatoriceae Bộ : Oscillatoriales Lớp : Cyanophyceae Ngành : Cyanophyta Hình 1.1: Tảo Spirullina platensis 1.1.3.1. Đặc điểm hình thái Tên “Spirulina” xuất phát từ tiếng Latinh “helix” hoặc “spiral” biểu hiện hình dạng xoắn của nó. Spirulina là tảo đa bào, dạng sợi, sống cộng sinh, các tế bào được phân biệt bởi vách ngăn, dạng sợi xoắn hình lò xo khơng phân nhánh, số vòng xoắn lớn nhất là 6 8 vòng đều nhau. Đường kính xoắn khoảng 35 50 m, bước xoắn là 60 m, chiều dài sợi tảo có thể đạt 250 m. Nhiều trường hợp Spirulina có kích thước lớn hơn. Các vách ngang chia sợi Spirulina thành nhiều tế bào riêng rẽ liên kết với nhau bằng cầu liên bào Sợi tảo SVTH: Nguyễn Thị Thu Thảo GVHD: TS. Đặng Đức Long Đồ án tốt nghiệp 6 Spirulina có khả năng chuyển động và tự vận động theo kiểu trượt quanh trục của sợi [13] 1.1.3.2. Đặc điểm cấu tạo Tế bào Spirulina có cấu trúc giống với sinh vật Prokaryote thiếu các hạt liên kết với màng. Thuộc gram âm, thành tế bào nhiều lớp và được bao bọc bởi màng polysaccharide nhầy. Thành tế bào Spirulina khơng chứa celulose mà hệ tiêu hóa con người khơng phân cắt được. Spirulina có tỷ lệ chuyển hóa quang hợp khoảng 10% so với chỉ 3% của các thực vật sống trên cạn như đậu nành. Tế bào tảo Spirulina chưa có nhân điển hình, vùng nhân chỉ là vùng giàu axit nucleic chưa có màng nhân bao bọc, phân bố trong ngun sinh chất. Thành tế bào Spirulina có cấu trúc nhiều lớp, không chứa celulose mà chứa mucopolyme, pectin và các loại polysacharid khác. Màng tế bào nằm sát ngay dưới thành tế bào và nối với màng quang hợp thylakoid tại một vài điểm Spirulina khơng có lục lạp mà chỉ chứa thylakoid quang hợp nằm rải rác trong ngun sinh chất. Màng thylakoid bao quanh các hạt polyphosphat có đường kính 0,5 1μ thường nằm trung tâm tế bào Sắc tố quang hợp là phycocyanin, bên cạnh có chlorophyll a Ngoài ra, tế bào Spirulina khơng có khơng bào thực, chỉ có khơng bào chứa khí làm chức năng điều chỉnh tỉ trọng tế bào. Khơng bào khí có vai trò rất quan trọng trong việc làm cho Spirulina nổi lên mặt nước [10] Spirullina là một chi tảo thuộc ngành tảo lam, tế bào Spirulina khơng có ty thể và mạng lưới nội chất, tuy nhiên tế bào vẫn có ribosome với hệ số lắng 70S số thể vùi hạt polyphotphat, glycogen, phycocyanin, cacboxysome và hạt mesosome [10]. Thành tế bào dưới kính hiển vi điện tử hiện lên gồm 4 lớp: từ lớp L 1 đến L1 L2 L3 L4 lớp L4 (L1, L2, L3, L4). L1 và L3 chứa vật liệu dạng sợi. L2 là một peptidoglycan giống như ở tế bào vi khuẩn. L4 được sắp xếp chạy theo chiều dọc của trục sợi Spirulina [4] SVTH: Nguyễn Thị Thu Thảo GVHD: TS. Đặng Đức Long Hình 1.2. Lát cắt tế bào Spirulina Đồ án tốt nghiệp 7 Hình 1.2. cũng cho thấy một vách ngăn đang hình thành, vách ngăn này gồm ba lớp: L2 kẹp giữa hai L1, có thể hình dung như hình 1.3 L4 L3 L2 L1 Màng sinh chất L1 L2 L1 Hình 1.3. Mơ hình sắp xếp vách tế bào Spirulina Lớp L1 và L3 có chức năng vận chuyển điện tử, do đó hai lớp L2 và L4 tập platensis trung các điện tử đó. Độ dày của mỗi lớp từ 1015nm, nên độ dày của tồn bộ thành tế bào là khoảng 40 60nm. Các lớp L1, L3, L4 có độ dày bằng nhau, lớp L1 lớn hơn [2]. 1.1.3.3. Đặc điểm sinh thái Spirulina là chi tảo lam phân bố rộng trong đất, nước ngọt, nước lợ, nước mặn và suối nước nóng. Đây là một trong khoảng 2500 lồi cyanophyta cổ nhất, tự dưỡng đơn giản, có khả năng tổng hợp các chất cần thiết cho cơ thể, kể cả các đại phân tử phức tạp để xây dựng tế bào và có khả năng cố định đạm rất cao, chúng khơng thể sống hồn tồn trong tối… SVTH: Nguyễn Thị Thu Thảo GVHD: TS. Đặng Đức Long Đồ án tốt nghiệp 8 Trong q trình sinh trưởng và phát triển tảo Spirulina chịu ảnh hưởng của các yếu tố mơi trường. Những yếu tố như ánh sáng, nhiệt độ, pH và thành phần dinh dưỡng khơng chỉ ảnh hưởng đến quang hợp và sản xuất sinh khối tế bào mà còn ảnh hưởng tới các hoạt động chuyển hóa của tế bào a) Ảnh hưởng của ánh sáng Ánh sáng là nhân tố quan trọng nhất ảnh hưởng đến quang hợp của các sinh vật. Do bản chất tiền nhân của Spirulina nên ánh sáng khơng ảnh hưởng nhiều tới q trình phát triển. Tuy nhiên, Spirulina cũng giống như nhiều lồi tảo khác có khả năng quang tự dưỡng và phụ thuộc vào ánh sáng vì đây là nguồn năng lượng chính [28] Hầu hết, các nghiên cứu trong phòng thí nghiệm về đáp ứng của Spirulina đối với ánh sáng là được thực hiện dưới điều kiện phát triển quang tự dưỡng bằng việc sử dụng mơi trường khống và bicarbonate như một nguồn carbon. Từ các nghiên cứu đó cho thấy sự phát triển của Spirulina trở nên bão hòa ở cường độ ánh sáng 1µmol m2 s1 khoảng bằng 10 15% lượng ánh sáng mặt trời ở bước sóng 400 700nm, giá trị này tùy thuộc vào điều kiện phát triển và mối tương quang giữa chlorophyll và sinh khối [28]. Ngồi ra, cường độ chiếu sáng còn ảnh hưởng đến các hàm lượng các chất bên trong tế bào tảo. Một số nghiên cứu đã nhận định rằng khi cường độ chiếu sáng tăng thì hàm lượng của acid béo (PUFA) giảm [26]. Theo Seshadri & Thomas (1979), sự tác động của ánh sáng tới Spirulina là bởi hai yếu tố chính đó là thời gian và cường độ chiếu sáng. Q trình ni cấy ngồi trời thì cường độ ánh sáng tối hảo cho Spirulina trong khoảng 20 30klux. Về thực hành ni cấy Spirulina thì cường độ ánh sáng tối ưu là 25 30klux, ở khoảng này hoạt tính quang hợp cao nhất, cần điều chỉnh đạt được khoảng cường độ chiếu sáng này trong ni cấy [11]. Ngồi ra, cường độ ánh sáng còn phụ thuộc vào mật độ ni cấy của tảo, vì khi cường độ ánh sáng cao mà mật độ tảo lớn thì mỗi sợi tảo vẫn nhận được cường độ ánh sáng nhỏ. Nhiều loại vi tảo có cường độ quang hợp bão hồ ở khoảng 33% tổng lượng SVTH: Nguyễn Thị Thu Thảo GVHD: TS. Đặng Đức Long Đồ án tốt nghiệp 9 cường độ ánh sáng. Vì vậy trong điều kiện ánh sáng có cường độ cao và thời gian chiếu sáng dài, người ta thấy xuất hiện hiện tượng quang ức chế có thể làm tảo chết hoặc làm giảm đáng kể năng suất ni trồng [1] Theo Charenkova C.A (1977) thì thời gian chiếu sáng càng dài thì năng suất tảo Spirulina càng cao. Năng suất tảo đạt cao nhất khi chiếu sáng liên tục. Như vậy tảo Spirulina khơng có chu kỳ quang [1]. b) Ảnh hưởng của nhiệt độ Trong khi ánh sáng được xem là nhân tố mơi trường quan trọng nhất cho quang hợp của vi sinh vật thì nhiệt độ là nhân tố cơ bản nhất cho sự sống của sinh vật. Nhiệt độ ảnh hưởng đến tất cả hoạt động sống của vi sinh vật như q trình trao đổi chất, thành phần dinh dưỡng cũng như các đặc tính sinh lý khác. Nhiệt độ mơi trường ln là một trong những yếu tố nhạy cảm ảnh hưởng đến bất kỳ sinh vật nào. Nhiệt độ mơi trường ni là yếu tố cần đáp ứng liên tục, vì rất dễ bị chi phối và tác động bởi điều kiện xung quanh, mức độ và thời gian chiếu sáng. Do vậy nhiệt độ là một trong những yếu tố thường xun được theo dõi trong cơng nghệ ni trồng vi tảo [28]. Spirulina phát triển ở nhiệt độ khá cao, chúng có khả năng phát triển mạnh ở khoảng nhiệt độ 32 400C. Nhiệt độ cực thuận cho ni cấy Spirulina là 35 380C. Ở nhiệt độ dưới 250C Spirulina phát triển rất chậm, nhiệt độ trên 380C tảo này sẽ chết rất nhanh [21]. Tuy vậy, trong tự nhiên người ta phát hiện Spirulina ở những suối nước nóng đến 690C Ngồi ra, nhiệt độ còn ảnh hưởng đến thành phần sinh hóa của tảo. Theo một nghiên cứu đã cho thấy rằng: ở nhiệt độ 350C khơng ảnh hưởng xấu lên sản xuất sinh khối nhưng lại ảnh hưởng tích cực lên sản xuất protein, lipid và phenolic. Nhiều chủng khác nhau sẽ phát triển các khoảng nhiệt độ khác nhau [28] Có một mối liên hệ giữa nhiệt độ và ánh sáng trong q trình ni cấy tảo Giống như hai mặt đối lập của một q trình thống nhất, chúng đều đóng vai trò quan trọng định đến suất sinh khối Spirulina Sinh SVTH: Nguyễn Thị Thu Thảo GVHD: TS. Đặng Đức Long Đồ án tốt nghiệp 10 trưởng của tảo đạt cao nhất với một cường độ và thời gian chiếu sáng thích hợp, kèm theo nó là một chế độ nhiệt tương đối ổn định. c) Ảnh hưởng của pH pH mơi trường là một trong các nhân tố quan trọng trong ni cấy Spirulina. pH tối ưu cho sự phát triển của chi này là kiềm và kiềm cao. Đây là ưu thế lớn giúp Spirulina ít bị lây nhiễm bởi các tảo khác [14]. Tuy nhiên, pH là yếu tố nội tại ln ln thay đổi, khơng những do chế độ chiếu sáng, nhiệt độ hàm lượng các chất dinh dưỡng tạo nên mà còn do tác động ngược lại của chính trạng thái sinh trưởng của quần thể tảo. Khi tảo phát triển càng mạnh, pH mơi trường bị thay đổi và trở thành yếu tố kìm hãm cho sự sinh trưởng và phát triển. Do đó, pH mơi trường q cao hay q thấp đều làm chậm q trình sinh trưởng của tảo [20]. Theo Trần Văn Tựa và Nguyễn Hữu Thước (1993) thì pH mơi trường từ 8,5 9 là pH tối ưu cho tảo Spirulina sinh trưởng và phát triển. Ở pH này, nguồn cacbon vơ cơ được tảo đồng hóa nhiều nhất. Tuy nhiên pH= 10 11 Spirulina vẫn có khả năng phát triển nhưng rất chậm. Một nghiên cứu đã chỉ ra rằng mặc dù Spirulina là lồi tảo sống trong mơi trường kiềm nhưng giá trị pH > 10,3 là có hại cho mơi trường ni cấy [6] Vì vậy pH được coi là yếu tố chỉ thị, phản ánh các thành phần ni dưỡng cung cấp cho mơi trường ni dưỡng tảo, chủ yếu là nguồn bicarbonat và khí CO2 hồ tan [11] d) Ảnh hưởng của thành phần dinh dưỡng Spirulina có thể sống trong mơi trường tự nhiên đến các mơi trường nhân tạo hoặc nửa nhân tạo bằng bổ sung các chất khoáng cần thiết vào nguồn nước tự nhiên: nước biển, nước suối khoáng, nước khoáng ngầm, giếng khoan Thành phần dinh dưỡng bao gồm cả nguyên tố đa lượng (C, N, P, K, S, Mg, Na, Cl, Ca và Fe) và nguyên tố vi lượng (Zn, Cu, Ni, Co,W). Tất cả điều ảnh hưởng đến sự sinh trưởng của tảo. Trong đó, các ngun tố vi lượng là thành SVTH: Nguyễn Thị Thu Thảo GVHD: TS. Đặng Đức Long Đồ án tốt nghiệp 58 Dựa vào đồ thị đường chuẩn ở hình 3.18 ta có phương trình đường chuẩn y = 0.0053x có hệ số tương đối R2 = 0.9965, với giá trị này R2 có thể chấp nhận để tính tốn kết quả của hàm lượng protein tạo thành Từ đường chuẩn dựng được chúng tơi tiến hành đo mẫu tảo OD595nm xác định hàm lượng protein của các chủng tảo ni cấy. Thay giá trị ∆OD 595nm của các chủng tảo (bảng 8.1 trong phụ lục 8) vào đồ thị đường chuẩn ta có bảng 3.10 Bảng 3.10. Hàm lượng protein của các chủng tảo ni cấy Mẫu ni cấ y Nồng độ protein( mg/ml) Hàm lượng protein (% trọng lượng tươi) AZ 0,609 60,9 AR 0,593 59,3 AS3 0,537 53,7 Với số liệu như bảng 3.10 ở trên ta thấy rằng: Hàm lượng protein của các chủng Spirulina platensis ni cấy được dao động khoảng 53,7 – 60,9%. Trong đó, chủng AZ có hàm lượng protein cao nhất đạt 60,9% và chủng AR đạt 59,3% và chủng AS3 đạt 53,7%. Nhìn chung có sự chênh lệch về hàm lượng protein có trong các mẫu khác nhau. Qua đó ta thấy chất lượng tảo ni trong mơi trường Zarrouk cho lượng protein cao hơn khi ni trong mơi trường rỉ đường và hàm lượng protein có trong mẫu sau khi phục hồi sau 3 ngày (sau khi tiến hành siêu âm) cũng đạt khá cao. Theo PGSTS Đặng Đình Kim nghiên cứu cho thấy hàm lượng protein của chủng tảo Spirulina platensis là rất cao từ 66– 67 % [10]. Ở thí nghiệm của Goksan nghiên cứu về sự phát triển của Spirulina platensis trong những hệ thống ni cấy khác nhau dưới điều kiện nhà kính, hàm lượng protein trong hệ thống các bình trong suốt (transparent jars) là 33% (so với trọng lượng khơ), túi polyethylene (54,5%), hệ thống ao hồ tạo dòng chảy (raceway ponds) (58,3%) SVTH: Nguyễn Thị Thu Thảo GVHD: TS. Đặng Đức Long Đồ án tốt nghiệp 59 [13]. Theo Harriet, khi nghiên cứu ảnh hưởng của mơi trường ni cấy lên hàm lượng protein trong mơi trường nước được mặn hóa (salinated water) thì hàm lượng protein đạt 48,59% (so với trọng lượng khơ) và hàm lượng protein ở mơi trường nước thải loại muối (desalonator wastewater) đạt 56,17% [11] Như vậy tóm lại, các mẫu khác nhau có hàm lượng protein khác nhau có thể là do những ngun nhân sau: Các giống tảo khác nhau cũng cho hàm lượng protein khác nhau, các mẫu ni ở điều kiện mơi trường khác nhau sẽ có hàm lượng protein khác nhau. Ngồi ra hàm lượng protein còn phụ thuộc vào thời gian thu hoạch, có thể ở mẫu này đến thời gian thu hoạch nhưng mẫu khác thì chưa tới giai đoạn thu hoạch 3.8. Kết quả thuần chủng giống tảo 3.8.1. Phương pháp chiếu tia UV Tia cực tím có khả diệt khuẩn, điều có nghĩa Spirulina platensis cũng là đối tượng chịu ảnh hưởng, khả năng này càng dễ xảy ra khi Spirulina platensis được phơi trực tiếp dưới tia cực tím Thực nghiệm cho thấy rằng nếu chiếu tia UV trong 30 phút thì Spirulina platensis bị phá hủy thành các đoạn ngắn, còn nếu chiếu trong 60 phút thì các tế bào bị phả hủy và các chất trong tế bào được giải phóng ra mơi trường. Hiệu quả thuần chủng mẫu bằng cách chiếu trực tiếp tia UV vào dịch nuôi cấy không khả thi mà bên cạnh còn có tác động xấu đến Spirulina platensis SVTH: Nguyễn Thị Thu Thảo GVHD: TS. Đặng Đức Long Hình 3.19. Mẫu tảo bị nhiễm sau khi được cấy lên mơi trường thạch từ dịch được chiếu tia UV Đồ án tốt nghiệp 60 Ở hình 3.19 ta thấy mẫu tảo sau khi chiếu tia UV được cấy trên mơi trường thạch thì bị nhiễm. Các ngun nhân có thể là do độ vơ trùng của tủ cấy khơng đảm bảo, khoảng cách giữa đèn UV và mẫu cần thuần chủng xa nhau nên cường độ khơng đủ để tiêu diệt vi sinh vật. Do Spirulina platensis có kích thước lớn hơn nhiều lần vi khuẩn thì lượng tia UV mà chúng nhận được cũng nhiều hơn. Ngồi ra, cũng có thể do mật độ tế bào trong mẫu cao q nên tế bào nhận tia UV nên khơng có khả diệt khuẩn Spirulina platensis có cấu trúc xoắn lò xo nên ln tồn tại những vị trí bị che khuất theo chiều dài sợi đây chính là chỗ mà UV hầu như khơng thể tiếp cận để phát huy tính sát khuẩn do đó đây cũng là nơi mà vi khuẩn có thể ẩn nấp để tránh tác động của tia UV 3.8.2 Phương pháp cấy chuyền môi trường thạch Zarrouk vô trùng. Trên môi trường thạch Zarrouk, Spirulina platensis với khả năng phát triển nhanh hơn vi khuẩn tạp nhiễm trong những giờ đầu tiên nuôi cấy nhờ đó nên ta có thể tận dụng đặc điểm này để làm thuần chủng giống. Khi các sợi tảo đầu tiên được mọc ra thì tiến hành rửa 5 7 lần và cấy chuyền lên mơi trường Zarrouk vơ trùng khác ngay Như thế, vi khuẩn nhiễm chưa kịp phát triển nhiều thì bị rửa trơi phần lớn các lần rửa, khi chưa kịp tăng số lượng trở lại thì thao tác cấy lên mơi trường thạch Zarrouk vơ trùng với thành phần hồn tồn là khống, hạn chế sự phát triển của vi sinh vật dị dưỡng. Khuẩn nhiễm là vi sinh vật dị dưỡng, do đó cần nguồn carbon hữu cơ để phát triển, chúng sống trong mơi trường ni Spirulina platensis là do các chất dinh dưỡng của tế bào khuẩn lam bị phân hủy. Mơi trường Zarrouk vơ trùng SVTH: Nguyễn Thị Thu Thảo GVHD: TS. Đặng Đức Long Đồ án tốt nghiệp 61 khơng chứa bất kỳ nguồn carbon hữu cơ nào. Trong khi đó, Spirulina platensis với khả năng tự dưỡng vẫn phát triển sinh khối tạo ra những sợi mới trong thời gian ngắn từ 6 8 giờ đồng hồ, những sợi mới này lại được chuyển sang môi trường Zarrouk mới, vơ trùng Những sợi Spirulina platensis phát triển là những sợi còn khỏe mạnh, do đó sẽ tiếp tục tăng sinh khối trong khoảng thời gian 12 14 giờ đồng hồ sau khi cấy trên mơi trường Zarrouk mới. Do nguồn dinh dưỡng bị hạn chế tới mức cạn kiệt nên vi khuẩn nhiễm tạp cũng bị hạn chế tới mức tối thiểu trong thời gian đó. Tế bào khuẩn nhiễm còn lại sẽ bị loại bỏ dần qua các bước rửa và cấy lên mơi trường Zarrouk thạch vơ trùng tiếp theo. Như vậy, bằng một phương pháp khá đơn giản bao gồm các bước “Mơi trường thạch Mơi trường dịch thể, rửa Mơi trường thạch” thì thu được giống Spirulina platensis thuần sau 4 lần lặp lại tương tự như trên. a c b d SVTH: Nguyễn Thị Thu Thảo GVHD: TS. Đặng Đức Long Hình 3.20. Mẫu tảo phát triển sau 4 lần cấy chuyền a. Lần 1 b. Lần 2 c. Lần 3 d. Lần 4 Đồ án tốt nghiệp 62 3.9. Khảo sát các phương pháp bảo quản giống 3.9.1 Bảo quản giống môi trường lỏng điều kiện bình thường của phòng thí nghiệm Giống được phân bố trong các chai nhựa và giữ điều kiện phòng thí nghiệm. Sau một thời gian bảo quản tiến hành hoạt hóa để theo dõi khả năng sống sót tảo sau bảo quản Sau bảo quản gần tháng (từ 18/03/2012 10/06/2012) ở điều kiện phòng thí nghiệm ta tiến hành đem giống này nhân trong các mơi trường vơ trùng mới và kết quả thì tảo vẫn phát triển rất tốt. Do thời gian tiến hành đề tài chỉ có 3 tháng nên chỉ kiểm chứng được kết quả bảo quản sau tháng. Nhưng sau 3 tháng ta vẫn thấy tảo rất xanh, nên ở điều kiện bình thường có thể giữ giống ở thời gian lâu hơn nữa Hình 3.21. Mẫu tảo sau 3 tháng bảo quản ở điều kiện bình thường của phòng thí nghiệm SVTH: Nguyễn Thị Thu Thảo GVHD: TS. Đặng Đức Long Đồ án tốt nghiệp 63 2.3.9.2. Bảo quản giống trong mơi trường lỏng và ở tủ lạnh 40C Giống được phân bố trong các bình serum loại 500ml, bình tam giác loại 250ml và giữ ở tủ lạnh 40C. Sau một thời gian bảo quản tiến hành hoạt hóa để theo dõi khả năng sống sót của tảo sau bảo quản Hình 3.22. Mẫu tảo sau khi bảo quản được hai tháng ở 40C. (Từ 10/04/2012 – 09/06/2012) Sau bảo quản được hai tháng 40C ta thấy mẫu tảo vẫn rất xanh và khi tiến hành nhân giống thì giống vẫn phát triển rất tốt. Với điều kiện như thế thì có thể giữ được giống tảo ở thời gian lâu hơn 2.3.9.3. Bảo quản giống bằng cấy chuyền trên mơi trường thạch Chuẩn bị mơi trường thạch Zarrouk đổ đĩa petri. Mẫu tảo sau thời gian ni cấy thu sinh khối ở pha log bằng ly tâm hoặc lọc thu sinh khối. Cấy sinh khối tảo vào đĩa petri (cấy trải). Các thao tác đều được tiến hành trong tủ cấy vơ trùng. Sau khi cấy xong đem đi ni ở điều kiện bình thường SVTH: Nguyễn Thị Thu Thảo GVHD: TS. Đặng Đức Long Hình 3.23. Mẫu tảo cấy chuyền trên mơi trường thạch sau thời gian bảo quản 2 tháng ( 11/04/2012 11/06/2012) Đồ án tốt nghiệp 64 Sau hai tháng cấy chuyền trên mơi trường thạch (hình 3.23) ta thấy tảo vẫn phát triển rất tốt nhưng mơi trường thạch thì khi quan sát ta thấy mơi trường bị khơ nên khi dùng phương pháp bảo quản này thì chỉ có thể duy trì trong hai tháng và sau đó phải cấy chuyền 2.3.9.4. Bảo quản giống bằng glycerol và ở điều kiện lạnh sâu Giống tảo Spirulina platensis sau khi được thu hoạch, tiến hành phân bố vào các ống eppendoff đã vơ trùng. Tiến hành bổ sung Glycerol đã được vơ trùng vào ở nồng độ 10%, 20%, 30% vào các ống eppendoff ở trên. Đem bảo quản ở nhiệt độ 210C trong tủ lạnh sâu. Sau một thời gian bảo quản hơn 1 tháng (từ 28/04/2012 đến 10/06/2012) ta tiến hành hoạt hóa để theo dõi khả năng sống sót của mẫu tảo sau bảo quản Sau một tháng bảo quản, đánh giá cảm quan thì ta thấy mẫu tảo khi bổ sung glycerol và bảo quản trong tủ lạnh sâu 210C vẫn rất xanh. Hình 3.24. Mẫu tảo được bổ sung Glycerol vơ trùng ở nồng độ 10 30% sau hơn 1 tháng bảo quản ở tủ đơng sâu 210C SVTH: Nguyễn Thị Thu Thảo GVHD: TS. Đặng Đức Long Đồ án tốt nghiệp 65 2.3.9.5. Bảo quản giống bằng phương pháp sấy đơng khơ Cho giống sau khi thu hoạch vào các bình penicillin, bổ sung Glycerol đã thanh trùng theo tỉ lệ 10%, 20%, 30% vào các bình penicillin, sau đó tiến hành sấy đơng khơ từ từ ở nhiệt độ 400C trong 6 12 giờ. Sau khi mẫu đã khơ hồn tồn tiến hành bảo quản trong tủ lạnh đơng 210C. Sau một thời gian bảo quản tiến hành hoạt hóa giống để theo dõi sức sống của chủng tảo được bảo quản Hình 3.25. Mẫu tảo sấy đơng khơ sau 2 tháng bảo quản ở 210C Sau hai tháng bảo quản, theo đánh giá cảm quan thì tảo vẫn giữ được màu xanh nhưng khi hoạt hóa thì mẫu tảo bị chết, khơng thấy có sự phát triển như giống được bảo quản bằng các phương pháp khác A B C D E Hình 3.26. Mẫu tảo được hoạt hóa để kiểm tra tỉ lệ, sức sống sau khi bảo quản một thời gian (tỉ lệ giống 30%) A. Giống bảo quản trong mơi trường lỏng và ở điều kiện bình thường của phòng thí nghiệm sau gần 3 tháng B. Giống bảo quản trong mơi trường lỏng và ở tủ lạnh 40C sau 2 tháng C. Giống b o quị Thu Th ản bằng c ấy chuyền trên mơi trườ ng thạch sau 2 tháng SVTH: Nguy ễả n Th ảo GVHD: TS. Đ ặng Đức D. Gi ố ng b ả o qu ả n b ằ ng glycerol và đi ề u ki ệ n l nh sâu sau h ơn 1 tháng Long E. Giống bảo quản bằng phương pháp sấy đông khô (bổ sung 20% glycerol) sau 2 tháng Đồ án tốt nghiệp 66 A Từ hình 3.26 theo đánh giá cảm quan ta thấy các mẫu được bảo quản theo các cách khác nhau sau các khoảng thời gian bảo quản khác nhau khi đem nhân giống lại thì cho kết quả khá tốt. Các mẫu tảo đều xanh, phát triển tương đối tốt. Từ đó cho thấy kết quả bảo quản trên mơi trường lỏng cho hiệu quả cao nhất, mơi trường thạch cũng tốt nhưng sẽ dễ nhiễm và thời gian bảo quản ngắn hơn, phương pháp sấy đơng khơ có vẻ khơng khả thi lắm SVTH: Nguyễn Thị Thu Thảo GVHD: TS. Đặng Đức Long Đồ án tốt nghiệp 67 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Sau thời gian tiến hành các thí nghiệm chúng tơi rút ra một số kết luận sau: 1. Để giảm lượng hóa chất, đặc biệt là giảm chi phí đầu tư để ni tảo thì mơi trường rỉ đường + NaHCO3 đáp ứng được u cầu đó. Mơi trường ni cấy tốt nhất qua tiến hành thực nghiệm là 0,75ml rỉ đường+ 16,8g NaHCO3 2. Nhân tố ánh sáng cũng ảnh hưởng nhiều đến khả năng quang hợp, sinh trưởng, phát triển của tảo và ánh sáng đèn huỳnh quang đã đáp ứng được u cầu này. Thử nghiệm với ánh sáng đèn Led nhưng hiệu quả khơng khả thi: Cùng mơi trường rỉ đường nhưng khi ni dưới ánh sáng huỳnh quang OD đạt 0,291 trong khi đó ni dưới đèn Led xanh chỉ đạt 0,156 Cùng mơi trường Zarrouk nhưng khi ni dưới ánh sáng huỳnh quang OD đạt 0,524 trong khi đó ni dưới đèn Led xanh chỉ đạt 0,191 3. Các phương pháp thu hoạch Lọc thủ cơng: hiệu quả thấp, tốn thời gian Lọc có bơm chân khơng: nhanh dễ thực hiện hiệu quả cao Phương pháp siêu âm: hiệu quả cao, tỉ lệ tế bào lắng 100% ở thời gian 900 giây 4. Các phương pháp bảo quản Qua tiến hành thực nghiệm ta thấy giống bảo quản trên mơi trường lỏng cho hiệu quả cao nhất, có thể kéo dài hơn 3 tháng mà chất lượng tảo cũng khơng thay đổi đáng kể. Bảo quản bằng cách bổ sung Glycerol và bảo quản trong tủ lạnh đơng sâu 210C cũng cho hiệu quả tương đối tốt, còn mẫu tảo khi bổ sung glycerol các nồng độ khác nhau và đem sấy đơng khơ thì hiệu quả bảo quản khơng khả thi, có thể trong q trình sấy tế bào tảo bị phá hủy dưới điều kiện sấy nên kết quả sau bảo quản khơng tốt Kiến nghị SVTH: Nguyễn Thị Thu Thảo GVHD: TS. Đặng Đức Long Đồ án tốt nghiệp 68 Do thời gian thực hiện đề tài q ngắn nên còn một số vấn đề chưa thể tiến hành được nên chúng tơi có một số kiến nghị: Sau khi thu hoạch sinh khối thì mẫu nước còn lại có mùi hơi tanh nên cần tìm ra phương pháp xử lý mùi tanh Tìm ra phương pháp giữ giống lâu nhất mà chất lượng tảo sau bảo quản cũng sinh trưởng, phát triển tốt Tảo Spirulina platensis có khả năng xử lý nước thải, hấp thụ kim loại nặng vì vậy nên tạo ra các chủng tảo đột biến có khả năng xử lý nước thải tốt Ni thu nhiều sinh khối và chiết thu các hợp chất có giá trị y dược để điều trị một số bệnh nguy hiểm như ung thư, HIV… SVTH: Nguyễn Thị Thu Thảo GVHD: TS. Đặng Đức Long Đồ án tốt nghiệp 69 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt [1]. Bùi Thị Ngọc Bích (2006), Khảo nghiệm một số phương pháp tăng sinh khối giống tảo Spirulina platensis, Luận văn kỹ sư Đại Học Nơng Lâm tp HCM [2]. Phan Văn Dân (2009), Nghiên cứu thu sinh khối Spirulina platensis sạch bằng quy trình ni trong hệ kín, Luận văn thạc sĩ sinh học Đại học Khoa Học Tự Nhiên tp HCM [3] Nguyễn Thị Đệ (1994), Một số tính chất của các phycobiliprotein chính ở tảo lam Việt Nam, Tạp chí sinh học 3: 7779 [4]. Nguyễn Thị Hoa (2009), Nghiên cứu chế biến bánh mì ngọt có bổ sung tảo lam Spirulina, Luận văn tốt nghiệp Đại học Bình Dương [5]. Thân Trọng Huy (2006), Ngun lý máy rửa siêu âm, Luận văn thạc sĩ, khoa vật lý, trường đại học Khoa học Đại học Huế [6] Đặng Đình Kim (1993), Một số chất có hoạt tính sinh học tảo Spirulina và ứng dụng của chúng, Tạp chí sinh học 15 (4): 2021 [7]. Đặng Đình Kim, Đặng Hồng Phước Hiền, Nguyễn Tiến Cư (1994), “Một số vấn đề về cơng nghệ sản xuất tảo Spirulina ở Việt Nam”, Tạp chí sinh học 16 (3), tr 7 11. [8] Đặng Đình Kim, Nguyễn Tiến Cư, Nguyễn Thị Ninh, Đặng Diễm Hồng, Trần Văn Tựa, Phan Phương Lan, Nguyễn Văn Hòa (1994), “Thực nghiệm ni trồng Spirulina trong nước khống Đắc Min”, Tạp chí sinh học 16 (3), trang 95 98 [9]. Đặng Đình Kim, Đặng Hồng Phước Hiền, Dương Trọng Hiền (1994), Tách chiết Phycobiliprotein từ tảo lam Spirulina platensis và bước đầu tìm hiểu khả năng ứng dụng chế phẩm trong y học, Tạp chí sinh học 16 (3), tr 93 – 94. SVTH: Nguyễn Thị Thu Thảo GVHD: TS. Đặng Đức Long Đồ án tốt nghiệp 70 [10]. Đặng Đình Kim (1999), Cơng nghệ sinh học vi tảo, NXB Nơng nghiệp Hà Nội. [11]. Lê Văn Lăng (1999), Spirulina Ni trồng sử dụng trong y dược và dinh dưỡng, NXB Y học [12]. Vũ Thành Lâm (2006), Ni trồng Tảo Spirulina, Trung tâm Cơng nghệ Sinh học Đại học Quốc gia Hà Nội [13]. Hồng Thị Thanh Loan (2010), Nghiên cứu phân lập, bảo quản và nhân giống tảo Spirulina platensis, Đồ án tốt nghiệp, Đại học Bách Khoa Đà Nẵng [14]. Nguyễn Bá Lộc (1997), Quang hợp, NXB Giáo dục Hà Nội [15]. Nguyễn Đức Lượng (2002), Công nghệ vi sinh, Vi sinh vật học công nghiệp, Tập 2, NXB ĐHQGTPHCM, tr 119 133. [16]. TS. Dương Tấn Nhựt (2007), Cơng nghệ sinh học thực vật tập 1, Nhà xuất bản nơng nghiệp [17]. Ngơ Kế Sương, Nguyễn Thị Q, Nguyễn Văn Hòa (1994), “ Kết quả bước đầu nghiên cứu tảo lam cố định nitơ”, Tạp chí sinh học 16 (3), tr 50 – 54 [18]. GS Nguyễn Hữu Thước (1988), Tảo Spirulina nguồn dinh dưỡng và dược liệu q, NXB Khoa học và Kỹ thuật Hà Nội Tài liệu Tiếng Anh [19]. AOAC official method (1998), 942.04 [20] Grobbellar J.U (2004), Algal Nutrion In: Handbook of Microalgal culture (Richmon A.): 97115] [21]. Jean Paul Jourdan (2001), Grow your own Spirulina, page: 3 [22] Kawata, Y (2006), Studies on recombinant DNA techniques for cyanobacterium Spirulina platensis, Doctoral Thesis, Kyoto University, 46 pages (short contents in English [23]. Ma B, Chen Y, Hao H, Zang G (2005), Influence of ultrasonic field on Microcystins produced by bloom forming algae, Department of Mechanical Engineering, Tsinghua University, Beijing 100084, PR China] SVTH: Nguyễn Thị Thu Thảo GVHD: TS. Đặng Đức Long Đồ án tốt nghiệp 71 [24] Morist, A., Montesinos, J., L., Cusido, J., Godia, A., F (2001), “Recovery and treatment of Spirulina platensis cells cultured in a continuous photobioreactor to be used as food”, Journal of Process Biochemistry, 37, p 535 547 [25] Niramol Catawatcharakul B.Sc.(1994), Development of a Tubular Photobioreactor for Mass Cultivation of Spirulina platensis, Biotechnology Program, Thailand [26] Qiang Hu (2004), Environmetal effects on cell composition In: Handbook of Microalgal culture (Richmon A.): 8395] [27]. Venkataraman, L., V. (1998), Spirulina: Global Reach of a Health Care Product , 4th International Food Conference [28]. Vonshak A. (1997), Spirulina: growth physiology and biochemistry in: Spirulina plantesis: Physiology, cellbiology and bioteachnology (Vonshak A.): 4367 [29]. Rangsayatorn, N., Upatham, S., E., Kruatrachue, M., Pokethitiyook, P., Lanza, G., P (2002), “Phytoremediation potential of Spirulina (Arthrospira) platenssis: biosorption and toxicity studies of cadmium”, Journal of Environmental Pollution, 119, p 45 – 53. Tài liệu Internet [30].http://vi.wikipedia.org/wiki/C%C3%B4ng_ngh%E1%BB%87_sinh_h %E1%BB%8Dc [31]. http://muare.vn/anuong/4205937 [32]. http://Spirulinaprogram. org [33]. http://vietsciences.org/timhieu/khoahoc/biologie/spirulina.htm [34]. http://vi.wikipedia.org/wiki/T%E1%BA%A3o_xo%E1%BA%AFn [35].http://www.ntu.edu.vn/canbo/longdb/default.aspx? file=privateres/canbo/longdb/file/thuy%20thien%20truc/tao%20spirulina%20va%20van %20de%20phong%20benh.htm.aspx SVTH: Nguyễn Thị Thu Thảo GVHD: TS. Đặng Đức Long Đồ án tốt nghiệp 72 [36]. http://tietkiemnangluong.com.vn/home/tuvan/taisaodenledduocxem laloaidentietkiemnangluong2912197.html [37]. http://www.webluanvan.com/f31/thanhphanhoahoctrongriduong34235/ [38]. http://svdanang.com/@pbkok/showthread.php?t=17285 SVTH: Nguyễn Thị Thu Thảo GVHD: TS. Đặng Đức Long ... Ultrospec 2000 để xác định tốc độ sinh trưởng của tảo trong các môi trường và trong điều kiện ánh sáng khác nhau 2.3.5. Khảo sát các phương pháp thu hoạch tảo Spirulina platensis 2.3.5.1. Thu hoạch bằng phương pháp lọc thủ công... những tác dụng đã và đang được các nhà khoa học nghiên cứu [32, 33, 34] 1.2. Tình hình nghiên cứu và ni trồng tảo Spirulina 1.2.1. Tình hình nghiên cứu và ni trồng tảo Spirulina trên thế giới Người ta bắt đầu biết đến tảo. .. nghiệm thức, mỗi nghiệm thức được tiến hành ni trong 3 bình serum và tiến hành lặp lại 3 lần. Khảo sát ảnh hưởng của các loại ánh sáng ni cấy khác nhau lên sự sinh trưởng và phát triển của tảo Spirulina platensis. Cấy 30% tảo giống vào 300 ml mơi trường trong bình serum loại 500ml ni trong các điều kiện khác nhau