Đang tải... (xem toàn văn)
Mục tiêu Báo cáo khóa luận tốt nghiệp: Bước đầu nghiên cứu nuôi cấy chủng Lactobacillus acidophilus trên môi trường bán rắn xác định hàm lượng sinh khối L. acidophilus thu được khi lên men trên môi trường MRS bán rắn, so sánh với lên men trên môi trường MRS rắn thông thường. Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết tài liệu.
TRƯỜNG ĐẠI HỌC ĐÀ LẠT KHOA SINH HỌC BÁO CÁO KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP KHĨA 32 ĐỀ TÀI: BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU NI CẤY CHỦNG LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS TRÊN MƠI TRƯỜNG BÁN RẮN GVHD: Ths. Hồng Việt Hậu SVTH: Nguyễn Thị Phương Thủy Mục tiêu đề tài Xác định hàm lượng sinh khối L. acidophilus thu được khi lên men trên mơi trường MRS bán rắn, so sánh với lên men trên mơi trường MRS rắn thơng thường ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU Chủng Lactobacillus acidophilus • Nguồn: viện Human Hungary • Được cung cấp từ phịng cơng nghệ vi sinh trường Đại học Đà Lạt BỐ TRÍ THÍ NGHIỆM NGHIỆM THỨC 1: Khảo sát hàm lượng sinh khối của L. acidophilus khi ni cấy ở mơi trường bán rắn với hàm lượng agar 5 (g/l) NGHIỆM THỨC 2: Khảo sát hàm lượng sinh khối của L. acidophilus khi ni cấy ở môi trường bán rắn với hàm lượng agar 6 (g/l) NGHIỆM THỨC 3: Khảo sát hàm lượng sinh khối của L. acidophilus khi nuôi cấy ở môi trường bán rắn với hàm lượng agar 7 (g/l) NGHIỆM THỨC 4: Khảo sát hàm lượng sinh khối của L. acidophilus khi nuôi cấy ở môi trường bán rắn với hàm lượng agar 8 (g/l) NGHIỆM THỨC 5: Khảo sát hàm lượng sinh khối của L. acidophilus khi nuôi cấy trên môi trường rắn với hàm lượng agar 16 (g/l) CHỦNG GIỐNG PHỤC HỒI GIỐNG CẤY PHÂN VÙNG NHÂN GIỐNG CẤP 1 QUY TRÌNH THỰC HIỆN KIỂM TRA GIỐNG LÊN MEN BỀỀ M MẶ ẶTT LÊN MEN B THU SINH KHỐI TẾ BÀO CỐ ĐỊNH SINH KHỐI TẾ BÀO SẤY VÀ XAY SINH KHỐI SAU CỐ ĐỊNH KIỂM TRA MẬT ĐỘ VÀ HÌNH THÁI TẾ BÀO L. ACIDOPHILUS CỦA SẢN PHẨM VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP VẬT LIỆU • Mơi trường MRS ở các nghiệm thức agar khác nhau PHƯƠNG PHÁP • • • • • • • Phục hồi giống Cấy phân vùng Nhân giống cấp 1 Lên men bề mặt Thu và cố định sinh khối tế bào Sấy và xay sau cố định Kiểm tra mật độ và hình thái tế bào Hình 3.1. Kết quả phục hồi L. acidophilus Hình 3.2. Kết quả cấy phân vùng L. acidophilus Hình 3.3. MRS lỏng trước nhân giống Hình 3.4. Kết quả nhân giống cấp L. acidophilus Kết quả kiểm tra mật độ tế bào L. acidophilus trước lên men 4.65*109 CFU/ml 107CFU/ml Hình 3.6. Hình thái tế bào L. acidophilus Hình 3.7. Kết quả lên men L. acidophilus trên mơi trường bán rắn Hình 3.7. Kết quả lên men L. acidophilus trên mơi trường bán rắn Hình 3.8. Kết quả lên men L. acidophilus trên mơi trường rắn Hình 3.9. Sinh khối L. acidophilus được cố định trên bột mì Hình 3.10. Sinh khối L. acidophilus đã được cố định và sấy Hình 3.11. Chế phẩm L. acidophilus sau khi xay Bảng 3.1. Khối lượng sản phẩm đạt được ở các nghiệm thức NGHIỆM THỨC LẦN 1 (g) LẦN 2 (g) LẦN 3 (g) TRUNG BÌNH (g) Nghiệm thức 1 ( agar: 5 g/l ) 750 768 762 760 Nghiệm thức 2 ( agar: 6 g/l ) 755 764 766 761.7 Nghiệm thức 3 ( agar: 7 g/l ) 760 765 765 763.3 Nghiệm thức 4 ( agar: 8 g/l ) 765 763 767 765 Nghiệm thức 5 ( agar: 16 g/l) 750 752 758 753.3 Bảng 3.2. Mật độ tế bào L. acidophilus ni cấy ở các nồng độ agar: 5, 6, 7, 8, 16 (g/l) Định lượng mật độ tế bào sau khi cố định Hàm lượng agar(g/l) BÁN RẮN RẮN Kết quả trung bình (CFU/g) Lần 1 (CFU/g) Lần 2 (CFU/g) Lần 3 (CFU/g) 3.36*1010 3.89*1010 4.31*1010 3.79*1010 5.77*1010 5.84*1010 5.26*1010 5.62*1010 2.23*1011 3.27*1011 4.18*1011 3.23*1011 3.25*1011 3.71*1011 3.52*1011 3.49*1011 16 3.42*1011 3.28*1011 4.45*1011 3.72*1011 Bảng 3.3. Kết quả mật độ tế bào L. acidophilus trên một ml mơi trường ni cấy. Khối lượng Nghiệm thức sản phẩm(g) CFU/g sản Tổng thể tích mơi CFU/ml môi trường phẩm trường nuôi cấy (ml) nuôi cấy Nghiệm thức 1 760 3.79*1010 1050 2.74*1010 Nghiệm thức 2 761.7 5.62*1010 1050 4.08*1010 Nghiệm thức 3 763.3 3.23*1011 1050 2.35*1011 Nghiêm thức 4 765 3.49*1011 1050 2.54*1011 Nghiệm thức 5 753.3 3.72*1011 1050 2.67*1011 Biểu đồ 3.1. Biểu đồ thể hiện sự chênh lệch mật độ L. acidophilus khi lên men trên các mơi trường có hàm lượng agar 5, 6, 7, 8, 16 (g/l) CFU/ml 12 10 Hàm lượng agar (g/lít) KẾT LUẬN Qua nghiên cứu ni cấy vi khuẩn L. acidophilus trên mơi trường bán rắn, rút ra một số kết luận sau: Trong các nồng độ agar bán rắn khảo sát, nồng độ agar cho sinh khối tế bào cao nhất là 8 g/l Hiệu suất ni cấy trên mơi trường rắn và bán rắn tương đương nhau: mơi trường rắn đạt 2.67*1011 CFU/ml mơi trường ni cấy, bán rắn đạt 2.54*1011 CFU/ml mơi trường ni cấy Có thể sử dụng phương pháp ni cấy trên mơi trường bán rắn (agar: 8 g/l) để ni cấy L. acidophilus thay thế cho phương pháp ni cấy trên mơi trường rắn KIẾN NGHỊ Khảo sát theo thời gian khả năng giảm sút về mật độ tế bào của L. acidophilus ni cấy trên mơi trường MRS bán rắn (sau khi cố định trên chất mang) CÁM ƠN Q THẦY CƠ VÀ CÁC BẠN ĐÃ QUAN TÂM THEO DÕI ... Hiệu suất ni? ?cấy? ?? ?trên? ?mơi? ?trường? ?rắn? ?và? ?bán? ?rắn? ?tương đương nhau: mơi? ?trường? ? rắn? ?đạt 2.67*1011 CFU/ml mơi? ?trường? ?ni? ?cấy, ? ?bán? ?rắn? ?đạt 2.54*1011 CFU/ml mơi trường? ?ni? ?cấy Có thể sử dụng phương pháp ni? ?cấy? ?? ?trên? ?mơi? ?trường? ?bán? ?rắn? ?(agar: 8 g/l) để ni cấy? ? L.? ?acidophilus? ?thay thế cho phương pháp ni? ?cấy? ?trên? ?mơi? ?trường? ?rắn. .. NGHIỆM THỨC 4: Khảo sát hàm lượng sinh khối của L.? ?acidophilus? ?khi ? ?nuôi? ? cấy? ?ở? ?môi? ?trường? ?bán? ?rắn? ?với hàm lượng agar 8 (g/l) NGHIỆM THỨC 5: Khảo sát hàm lượng sinh khối của L.? ?acidophilus? ?khi? ?nuôi? ? cấy? ?trên? ?môi? ?trường? ?rắn? ?với hàm lượng agar 16 (g/l)... Xác định hàm lượng sinh khối L.? ?acidophilus? ?thu được khi lên men? ?trên? ?mơi? ?trường? ?MRS? ?bán? ?rắn, so sánh với lên men? ?trên? ?mơi? ?trường? ?MRS? ?rắn? ?thơng thường ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU Chủng? ?Lactobacillus? ?acidophilus •