TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH - KTNN ====== PHẠM THỊ MONG NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG HẤP THỤ THUỐC BERBERIN CỦA MÀNG CELLULOSE VI KHUẨN LÊN MEN TỪ MƠI TRƯỜNG NƯỚC DỪA GIÀ KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh lý học người động vật Người hướng dẫn khoa học ThS CAO BÁ CƯỜNG HÀ NỘI, 2017 LỜI CẢM ƠN Trong trình thực khóa luận này, tơi nhận hướng dẫn giúp đỡ tận tình mặt từ thầy cô, bạn bè Nhân dịp này, xin bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc tới ThS Cao Bá Cường (Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2) Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc giúp đỡ nhiệt tình thầy Viện NCKH ƯD Trường ĐHSP Hà Nội 2, thầy cô khoa Sinh - KTNN, thầy cô Ban Giám hiệu, Phòng đào tạo tồn thể thầy cơ, cán Trường ĐHSP Hà Nội tạo điều kiện giúp đỡ tơi hồn thành khóa luận Tơi xin cảm ơn gia đình bạn bè động viên, hỗ trợ tơi suốt q trình học tập thực khóa luận Một lần nữa, tơi xin trân trọng cảm ơn! Hà Nội, 20 tháng năm 2017 SINH VIÊN Phạm Thị Mong LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết số liệu khóa luận “Nghiên cứu khả hấp thụ thuốc berberin màng cellulose vi khuẩn lên men từ môi trường nước dừa già” kết qủa nghiên cứu cá nhân suốt thời gian qua hướng dẫn trực tiếp ThS Cao Bá Cường, giảng viên khoa Sinh - KTNN - Trường ĐHSP Hà Nội thực “Viện NCKH ƯD Trường ĐHSP Hà Nội 2” Những số liệu kết khố luận trung thực, khơng có trùng lặp chép tài liệu khác Nếu sai tơi xin chịu hồn tồn trách nhiệm Hà Nội, 20 tháng năm 2017 SINH VIÊN Phạm Thị Mong MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục đích nghiên cứu 3 Đối tượng phạm vi nghiên cứu Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU Cellulose vi khuẩn vi sinh vật tổng hợp cellulose 1.1 Cellulose vi khuẩn tính chất CVK 1.1.1 Cellulose vi khuẩn 1.1.2 Cấu trúc kết tinh cellulose vi khuẩn 1.1.3 Tính chất cellulose vi khuẩn 1.1.4 Ứng dụng CVK 1.2 Vi sinh vật tổng hợp cellulose 1.2.1 Phân loại A xylinum 1.2.2 Đặc điểm hình thái A xylinum 1.2.3 Đặc điểm sinh lý A xylinum 1.2.4 Vai trò CVK A xylinum 1.2.5 Môi trường nuôi cấy A xylinum Giới thiệu thuốc berberin 11 2.1 Công thức 11 2.2 Tính chất 12 2.3 Tác dụng dược lý 12 2.4 Tương tác thuốc 12 2.5 Chỉ định 13 2.6 Chống định 13 Tình hình nghiên cứu nước 13 3.1 Tình hình nghiên cứu thuốc 13 3.1.1 Tình hình nghiên cứu giới 13 3.1.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 13 3.2 Tình hình nghiên cứu màng CVK 14 3.2.1 Tình hình nghiên cứu giới 14 3.2.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 14 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 16 Nội dung nghiên cứu 16 Các thiết bị hóa chất sử dụng nghiên cứu 16 Phương pháp nghiên cứu 16 4.1 Phương pháp tạo màng CVK 16 4.2 Phương pháp xử lý màng CVK trước hấp thụ thuốc berberin 18 4.3 Phương pháp đánh giá độ tinh khiết màng CVK 20 4.4 Phương pháp dựng đường chuẩn 20 4.5 Phương pháp xác định lượng thuốc hấp thụ vào màng CVK 22 4.6 Phương pháp thống kê xử lý kết 23 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 24 Màng CVK thu nuôi cấy môi trường nước dừa già 24 Màng CVK thu sau nuôi cấy 24 Màng CVK tinh chế 25 Kiểm tra độ tinh khiết màng CVK 26 Màng CVK hấp thụ thuốc berberin 27 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 31 Kết luận 31 Kiến nghị 31 TÀI LIỆU THAM KHẢO 32 DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Từ viết tắt A xylinum Từ đầy đủ Acetobacter xylinum CVK Celulose vi khuẩn OD Mật độ quang phổ ĐHSP Đại học Sư phạm NCKH ƯD Nghiên cứu Khoa học Ứng dụng Nxb Nhà xuất DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Ứng dụng CVK Bảng 1.2 Thành phần nước dừa già 10 Bảng 2.1 Môi trường lên men tạo màng CVK 17 Bảng 2.2 Kết đo dường chuẩn thuốc berberin bước sóng 345nm (n = 3) 21 Bảng 3.1 Giá trị OD dung dịch berberin 10% ngâm màng CVK (n= 3) 28 Bảng 3.2 Lượng thuốc berberin hấp thụ vào màng CVK (n = 3) 29 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo berberin 11 Sơ đồ 2.1 Quy trình sản xuất CVK 18 Sơ đồ 2.2 Quy trình xử lý thu CVK tinh khiết 19 Hình 2.1 Đồ thị đường chuẩn berberin bước sóng 345nm 21 Hình 3.1 Màng CVK ni ngày đầu (a) màng CVK nuôi ngày thứ (b) 24 Hình 3.2 Màng CVK thu sau ni cấy 25 Hình 3.3 Các quy trình xử lý màng CVK 25 Hình Kết thử diện đường glucose 26 Hình Màng CVK hấp thụ thuốc berberin 27 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Cellulose hợp chất hóa học thường biết đến với vai trò khung xương quan trọng thể thực vật Không cellulose tổng hợp thực vật, mà cellulose tổng hợp nên vi sinh vật, với tên gọi cellulose vi khuẩn (viết tắt CVK) Một lồi vi sinh vật có khả tổng hợp cellulose tốt Acetobacter xylinum (A xylinum) Cellulose vi khuẩn có cấu trúc đặc tính giống với cellulose thực vật (gồm phân tử glucose liên kết với liên kết β-1,4 glucan), cellulose vi khuẩn khác với cellulose thực vật chỗ: không chứa hợp chất cao phân tử lignin, hemicellulose, pectin sáp nến chúng có đặc tính vượt trội với độ dẻo dai, bền [2], [28] Màng CVK ngày quan tâm nhiều ứng dụng nhiều lĩnh vực công nghệ khác nhau: dùng màng CVK làm mơi trường phân tách cho q trình xử lí nước, dùng làm chất mang đặc biệt cho pin lượng cho tế bào, làm môi trường chất sinh học, thực phẩm hay thay thực phẩm, thiết kế hệ thống hấp thu giải phóng thuốc nhiều ứng dụng khác [28] Gần đây, khả ứng dụng màng CVK không ngừng nghiên cứu, cải tiến nhà khoa học giới (Otomo et al.,2000) Ở Việt Nam, việc nghiên cứu ứng dụng màng CVK mức độ khiêm tốn, nghiên cứu ứng dụng dừng lại bước đầu nghiên cứu Theo kết nghiên cứu cho thấy màng CVK tạo nên từ nguyên liệu rẻ tiền, dễ kiếm, sản xuất quy mô công nghiệp Môi trường nuôi cấy vi khuẩn A xylinum đa dạng nước dừa già, rỉ đường, nước mía,… Trong nước dừa già coi môi trường kinh điển nuôi cấy A xylinum [7] Về mặt tính chất, CVK có độ tinh lớn nhiều so với loại cellulose khác, phân hủy sinh học, tái chế hay phục hồi hồn tồn Ngồi CVK có độ bền tinh thể cao, sức căng lớn, trọng lượng thấp, khả thấm hút lớn, đường kính sợi nhỏ, Đồng thời CVK hàng rào cản oxi sinh vật khác, ngăn cản phân hủy chất tế bào ngăn cản tác động UV, ổn định kích thước hướng, màng CVK có ý nghĩa giữ thuốc giải phóng thuốc kéo dài [27], [20],… Bên cạnh đó, sợi cellulose có cấu trúc mạng hệ thống hấp thu thuốc làm tăng sinh khả dụng thuốc [20] Nước ta thuộc khí hậu nhiệt đới gió mùa: nóng ẩm, mưa nhiều nên vi khuẩn, nấm mốc kí sinh trùng dễ phát triển, với điều kiện vệ sinh an toàn thực phẩm vệ sinh mơi trường nhiều nơi thấp nên dễ tạo thành tạo bệnh rối loạn tiêu hóa, tiêu chảy, đau mắt hột Berberin thuốc thơng thường người hay sử dụng có dấu hiệu tiêu chảy, chí nhiều người ln để sẵn túi xách Berberin alcaloid thực vật thuộc nhóm isoquinolin có nhiều loại thuốc Việt Nam, khoảng 150 loài thuộc nhiều họ thực vật khác Berberin chủ yếu thân rễ vàng đắng với tỷ lệ 1.5-3% Berberin biết đến với tác dụng bật kìm khuẩn tả E coli, điều trị bệnh lỵ Thuốc sử dụng phổ biến giá thành thấp an tồn, khơng ảnh hưởng tới phát triển bình thường vi khuẩn có ích ruột Hiện thị trường có dạng bào chế berberin như: thuốc nhỏ mắt, viên nén, viên bao Vì vấn đề kiểm tra chất lượng nguyên liệu làm thuốc thành phẩm quan trọng Tuy nhiên berberin chủ yếu sử dụng qua đường uống với sinh khả dụng thấp Việc đưa thuốc vào thể mong muốn nhà điều chế thuốc nhiều thập kỷ qua nhằm tăng sinh khả hấp thu thuốc vấn đề không đơn giản Bảng 2.2 Kết đo dường chuẩn thuốc berberin bước sóng 345nm (n = 3) STT Giá trị OD 345nm (n = 3) Nồng độ Giá trị trung (mg/ml) Lần Lần Lần bình 0.353 0.355 0.354 0.354 ± 0.003 10 0.712 0.714 0.710 0.712 ± 0.002 20 1.523 1.522 1.532 1.526 ± 0.006 30 2.031 2.299 2.286 2.205 ± 0.151 40 2.966 3.004 3.046 3.005 ± 0.040 50 3.703 3.641 3.504 3.616 ± 0.102 Dựng đồ thị biểu diễn lập đường chuẩn berberin phần mềm Mật độ quang OD 345nm Excel 2010, kết đồ thị hình 2.2 OD 345nm 3.5 2.5 1.5 0.5 y = 0.0734x + 0.0074 R² = 0.9986 OD 345nm Linear (OD 345nm ) 20 40 60 Nồng độ thuốc berberin (mg/ml) Hình 2.1 Đồ thị đường chuẩn berberin bước sóng 345nm Phương trình đường chuẩn: y = 0.0734x + 0.0074 (R = 0.9986) (1) Trong đó: x nồng độ berberin (mg/ml) y giá trị OD tương ứng R hệ số tương quan 4.5 Phương pháp xác định lượng thuốc hấp thụ vào màng CVK - Cắt màng CVK có đường kính 4cm với độ dày (0.3cm; 0.5cm 0.7cm) tương đối - Cho mẫu màng CVK ép vào bình tam giác có chứa 100ml dung dịch berberin 10% - Sau khoảng thời gian xác định tiến hành rút mẫu đo quang phổ máy UV-2450 để xác định lượng thuốc lại dung dịch thời điểm lấy mẫu, từ xác định lượng thuốc hấp thu vào màng CVK theo công thức: mht = m1-m2 (mg) (2) Trong đó: mht: khối lượng thuốc hấp thu vào màng (mg) m1: khối lượng thuốc ban đầu dung dịch (mg) m2: khối lượng thuốc có dung dịch sau hấp thụ (mg) - Hiệu suất thuốc nạp vào màng CVK tính theo cơng thức [37] (3) Trong đó: EE: phần trăm thuốc nạp vào màng Qt: lượng thuốc lí thuyết Qd: lượng thuốc lại 4.6 Phương pháp thống kê xử lý kết Mỗi thí nghiệm lặp lại lần, lấy kết trung bình để tính tốn, số liệu biểu diễn dạng trung bình ± độ lệch chuẩn dựa vào hàm Excel “Ứng dụng tin học sinh học” [10] “Thống kê ứng dụng” [18] Kiểm định giả thiết giá trị trung bình hai mẫu cách sử dụng hàm: t-Test: Two Sample Assuming Unequal Variences, t-Test: Two Sample Assuming Equal Variences với ý nghĩa α = 0,05, khác biệt coi ý nghĩa thống kê giá trị p < 0,05 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Màng CVK thu nuôi cấy môi trường nước dừa già Vi khuẩn A xylinum cho vào môi trường sử dụng chất dinh dưỡng môi trường để tổng hợp nên cellulose Trong ngày đầu, vi khuẩn làm quen với môi trường, tích lũy chất dinh dưỡng lượng cho giai đoạn sinh trưởng Lượng acid bắt đầu hình thành khơng nhiều làm cho pH mơi trường giảm nhẹ Ngày thứ 2, màng CVK bắt đầu hình thành bề mặt môi trường, dày lên dần ngưng lại thời điểm định, môi trường hết chất dinh dưỡng Độ dày màng tùy thuộc vào thời gian nuôi cấy Sau ngày độ dày màng CVK thể hình 3.1 (a) (b) Hình 3.1 Màng CVK ni ngày đầu (a) màng CVK nuôi ngày thứ (b) Màng CVK thu sau nuôi cấy Các màng CVK nằm bề mặt môi trường, dễ tách khỏi môi trường ni cấy Màng có màu trắng ngà chứa nhiều nước, chất dẻo dai Với thời gian độ dày mơi trường khác thu màng độ dày mỏng khác tuỳ thuộc vào mục đích nghiên cứu, thu màng độ dày sau: - Nuôi cấy thời gian ngày thu màng có độ dày 0.3 cm - Nuôi cấy thời gian ngày thu màng có độ dày 0.5 cm - Nuôi cấy thời gian ngày thu màng có độ dày 0.7cm Hình 3.2 Màng CVK thu sau nuôi cấy Màng CVK tinh chế Để loại bỏ tạp chất môi trường ni cấy, đồng thời phân huỷ trung hồ độc tố vi khuẩn phải tiến hành tinh chế màng CVK Khi tinh chế, ta thu màng CVK có thay đổi màu sắc rõ rệt hình 3.3 Hình 3.3 Các quy trình xử lý màng CVK CVK thô; CVK ngâm NaOH 3% (48h); CVK rửa vòi nước; CVK ngâm HCl 3% (48h); CVK ngâm nước cất hai lần (48h); CVK tinh chế Kiểm tra độ tinh khiết màng CVK  Mục đích: kiểm tra diện đường glucose nồng độ cao môi trường nuôi cấy  Nguyên tắc: dùng thuốc thử Fehling pha để phát diện đường D- glucose, có xuất kết tủa màu nâu đỏ  Tiến hành: - Mẫu thử: dịch thử màng CVK loại sau xử lý hoá học - Mẫu đối chứng: H2O dung dịch D - glucose - Cho vào ống nghiệm chứa mẫu thử ống nghiệm 1ml thuốc thử Fehling Đun cách thuỷ 10 phút - Quan sát kết tủa xuất ống nghiệm - Kết quả: không phát glucose diện màng thể hình 3.4 Mẫu thử 1: màng 0.3cm Mẫu thử 2: màng 0.5cm Mẫu thử 3: màng 0.7cm Hình Kết thử diện đường glucose Màng CVK hấp thụ thuốc berberin Màng tinh khiết sau tinh chế loại bỏ nước 70% sau cho màng vào bình chứa 100ml dung dịch berberin 10% đặt vào máy lắc 180 vòng/phút Và tiến hành lấy mẫu giờ, 1.5 giờ, Màng CVK hấp thụ thể hình 3.5 Hình Màng CVK hấp thụ thuốc berberin Sau ngâm màng CVK dung dịch berberin khoảng thời gian giờ, 1.5 giờ, lấy dung dịch đo quang phổ UV 2450 để xác định lượng thuốc hấp thụ vào màng Kết đo quang phổ CVK trình bày bảng 3.1 Bảng 3.1 Giá trị OD dung dịch berberin 10% ngâm màng CVK (n= 3) Độ dày màng (cm) Thời gian hấp thụ Giá trị OD 345nm (giờ) dung dịch berberin 10% 0.671 ± 0.0032 1.5 0.6561 ± 0.0025 0.656 ± 0.0027 0.678 ± 0.0021 1.5 0.6611 ± 0.0034 0.661 ± 0.0036 0.698 ± 0.002 1.5 0.6881 ± 0.001 0.688 ± 0.0012 0.3 0.5 0.7 Từ kết tính bảng 3.1 ta thấy sau ngâm màng giá trị OD đo gần không giảm chứng tỏ lượng thuốc hấp thụ vào màng đạt cực đại Lấy giá trị OD thu bảng 3.1 thay vào phương trình đường chuẩn berberin ta tìm nồng độ berberin (C%) dung dịch, lấy C% thay vào cơng thức (1) ta khối lượng berberin có dung dịch (m1), lấy khối lượng berberin có dung dịch thay vào công thức (2) ta khối lượng berberin hấp thụ vào màng CVK (mht), tiếp tục lấy khối lượng berberin hấp thụ vào màng CVK thay vào công thức (3) ta thu tỷ lệ thuốc berberin hấp thụ vào màng CVK Khối lượng thuốc hấp thụ vào màng CVK, tỷ lệ hấp thụ cường độ hấp thụ thuốc màng CVK trình bày bảng 3.2 Bảng 3.2 Lượng thuốc berberin hấp thụ vào màng CVK (n = 3) Độ dày Thời gian Khối lượng Thể tích Cường độ màng hấp thụ thuốc hấp thụ màng hấp thụ (cm) cực đại (mg) (cm ) (mg/cm ) 1.163 ± 0.001 3.768 0.309 11.635 ± 0.015 ± 0.123 0.174 10.954 ± 0.002 ± 0.324 0.083 7.275 ± 0.0016 ± 0.367 EE (%) (giờ) 0.3 0.5 0.7 1.095 ± 0.0028 0.728 ± 0.005 6.28 8.792 Nhận xét: Từ bảng 3.2, ta thấy cường độ hấp thụ thuốc berberin qua màng CVK độ dày sau: Màng CVK có độ dày 0.3cm có cường độ hấp thụ thuốc berberin trung bình cao 0.309mg/cm , màng CVK có độ dày 0.5cm có cường độ hấp thụ thuốc berberin trung bình thấp 0.174mg/cm , màng CVK có độ dày 0.7cm có cường độ hấp thụ thuốc berberin trung bình thấp 0.083mg/cm Như vậy, màng CVK mỏng cường độ hấp thụ lớn Xử lý thống kê việc kiểm định giả thuyết t- Test: Two Sample Assuming Unequal Variancess, kết khơng có khác biệt khả hấp thụ khoảng thời gian khác (1.5 giờ) màng CVK có độ dày 0.3cm 0.5cm, P = 0.00416 < 0.05 Nên giá trị cường độ thuốc hấp thụ khoảng thời gian khác có ý nghĩa thống kê Như vậy, màng CVK có độ dày 0.3cm có khả hấp thụ thuốc cao màng CVK có dộ dày 0.5cm Tương tự, màng CVK có độ dày 0.5cm 0.7cm, P = 0.000791 < 0.05 Nên giá trị cường độ thuốc hấp thụ khoảng thời gian khác có ý nghĩa thống kê Như vậy, màng CVK có độ dày 0.5cm có khả hấp thụ thuốc cao màng CVK có dộ dày 0.7cm Tương tự màng CVK có độ dày 0.3cm 0.7cm, tiến hành kiểm định P = 0.00148 < 0.05 Nên giá trị khối lượng thuốc hấp thụ khoảng thời gian khác có ý nghĩa thống kê Như vậy, màng CVK có độ dày 0.3cm có khả hấp thụ thuốc cao màng CVK có dộ dày 0.7cm Kết luận: Như vậy, màng CVK có độ dày 0.3cm có khả hấp thụ thuốc berberin cao màng CVK có độ dày 0.5cm 0.7cm Màng CVK có độ dày 0.3cm có khả hấp thụ thuốc tốt nhất, điều giải thích màng 0.3cm mỏng nhất, sợi cellulose hơn, liên kết lỏng lẻo nên thuốc dễ dàng hấp thụ vào màng CVK KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Nuôi cấy thu màng CVK từ A xylinum môi trường nước dừa già: thu màng CVK có độ dày 0.3cm, 0.5cm 0.7cm để tiến hành hấp thụ thuốc berberin Màng CVK thu tinh khiết, độ thoáng cao, khơng mùi chua, chất lượng phù hợp với nhu cầu làm thí nghiệm Sử dụng màng CVK để hấp thụ thuốc, thấy màng CVK có độ dày 0.3cm có khả hấp thụ thuốc cao nhất, cao màng 0.5cm 0.7cm Kiến nghị Cần tiếp tục khảo sát thêm khả hấp thu thuốc berberin màng CVK tạo chủng A xylinum từ loại môi trường tự nhiên khác như: dịch hoa quả, nước mía, nước dứa,… để mở rộng nguồn nguyên liệu Cần tiếp tục tiến hành khảo sát hấp thụ thuốc berberin qua màng CVK kích thước độ dày khác để tìm trường hợp hấp thụ tốt nhằm ứng dụng vào thực tiễn đời sồng ứng dụng người động vật TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Bộ môn Dược liệu (1998), Bài giảng dược liệu, Trường ĐH Dược Hà Nội, tập 2, tr 89- 91 Bộ Y tế (2002), Dược điển Việt Nam III, Nhà xuất Y học Hà Nội, tr.33- 35, 178- 179 phụ lục (PL- 75, 76) Trịnh Hữu Bằng, Đỗ Công Quỳnh (2001), sinh lý học người động vật, Nxb Khoa học kĩ thuật, Hà Nội Trang 173, 184 - 187 Vũ Bình Dương, Nguyễn Trọng Diệp, Nguyễn Thị Thùy, Hoàng Văn Lương (2010), “Nghiên cứu bào chế viên nén Berberin giải phóng đích đại tràng”, tạp trí y - dược học quân số (8), -12 Hồ Cảnh Hậu, Hoàng Văn Thêm, Nguyễn Thị Lan Hương, Nguyễn Văn Thuận, Nguyễn Cẩm Vân, Nguyến Tuấn Quang (2015), “Nghiên cứu định lượng Berberin chlorid viên nén đại tràng 105 phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao”, tạp trí y - dược học quân số (2) Đặng Thị Hồng (2007), phân lập, tuyển chọn nghiên cứu số đặc tính sinh học vi khuẩn A xylinum chế tạo màng sinh học Luận văn thạc sỹ sinh học, trường Đại học Sư phạm Hà Nội Huỳnh Thị Ngọc Lan, Nguyễn Văn Thanh Nghiên cứu đặc tính màng cellulose vi khuẩn từ Acetobacter xylinum sử dụng làm màng trị bỏng Tạp chí Dược học số 361/2006 trang 18 - 20 Đỗ Tất Lợi ( 1999), thuốc vị thuốc Việt Nam, xuất lần thứ VIII - Nhà xuất Y học, trang 195 Lô Thị Bảo Khánh (2011), nghiên cứu xử lý bảo quản màng bacterial cellulose từ chủng vi khuẩn Acetobacter xylinum BHN2 Luận văn thạc sỹ sinh học, trường Đại học Sư phạm Hà Nội 10 Chu Văn Mẫn Ứng dụng tin học sinh học Nhà xuất Đại học Quốc gia Hà Nội, 2003 11 Nguyễn Thị Nguyệt (2008), nghiên cứu vi khuẩn Acetobacter xylinum cho màng Bacterial Cellulose làm mặt nạ dưỡng da Luận án thạc sỹ sinh học, trường Đại học Sư phạm Hà Nội 12 Đinh Thị Kim Nhung, Trần Như Quỳnh, Nguyễn Thị Thùy Vân (2009), nghiên cứu vi khuẩn Acetobacter xylinum tạo màng bacterial cellulose ứng dụng điều trị bỏng, báo cáo khoa học 13 Đinh Thị Kim Nhung (1998), “Tối ưu hóa thành phần mơi trường dinh dưỡng cho Acetobacter xylinum phương pháp quy hoạch thực nghiệm” Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, 36(1), 10-12 14 Đinh Thị Kim Nhung, Nguyễn Thị Thùy Vân, Trần Như Quỳnh (2012), “Nghiên cứu vi khuẩn Acetobacter xylinum tạo màng bacterial cellulose ứng dụng điều trị bỏng” Tạp trí khoa học cơng nghệ50 (4), 453 - 462 15 Nguyễn Văn Thanh (2006), Nghiên cứu chế tạo màng cellulose trị bỏng từ Acetobacter xylium, đề tài cấp bộ, Bộ Y tế 16 Nguyễn Thị Thùy, Vũ Bình Dương, Nguyễn Trang Điệp, Hoàng Văn Lương (2010), “ Nghiên cứu bào chế viên nén Berberin giải phóng đích đại tràng”, Tạp chí Y- Dược quân số 8-2010 17 Phạm Viết Trang, Nguyễn Liêm, “Góp phần nghiên cứu cải tiến quy trình chiết suất Berberin từ vàng đắng”, Tạp chí dược liệu, tập 5, số 5/2000 18 Hồ Đắc Trinh, Viện dược liệu, chiết Berberin clorid vàng đắng dung dịch acid sulfuric lỗng, Tạp chí Dược học, 1983-Bộ Y tế xuất bản, tr 19 Tài iệu tiếng anh: 19 Almeida I.F et al (2014), “Bacterial cellulose membranes as drug delivery systems: An in vivo skin compatibility study”, European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics, 86(3), pp 332 - 336 20 Amin MCIM, Ahmad N, et al (2012), “Bacterial cellulose film coating as drug delivery system: physicochemical, thermal and drug release properties”, Sain Malaysiana, 41(5), pp 561 - 21 Bielecki, et al (2001), “Bacterial cellulose”, Institute of Technical Biochemistry, Technical Chemistry of Lodz, Stefanowskiego, 37-46 22 Bworm E (2007), Bacterial cellulose Thermoplastic polymer namocomposites, Master of sciencein chaemical engineering, washington state university 23 Brown E Bacterial cellulose/Themoplastic polymer nanocomposites Master of sience in chemical engineering Washington state university, 2007 24 Klemm D et al (2001), “Bacterial synthesized cellulose-artificial blood vessels for microsurgery”, Prog Polym Sci, 26, pp 1561 - 1603 25 Krystynowicz, et al (2002), “Factors affecting the yield and properties of bacterial cellulose”, Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology, 29, 189-195 26 Hai-Peng Cheng, Pei-Ming Wang, Jech-Wei Chen And Wen-Teng Wu Cultivation of Acetobacter xylinum for bacterial cellulose production in a modified airlift reactor Biotechnol Appl Biochem, 35, 125-132 (2002) 27 Lina Fu, Yue Zhang, Chao Li, Zhihong Wu, Qi Zhuo, Xia Huang, Guixing Qiu, Ping Zhou and Guang Yang (2012), skin tissue repair materials from bacterial cellulose by a multilayer fermantation method 28 Lin Huang, Xiuli Chen, Thanh Nguyen Xuan, Huiru Tang, Liming Zhang and Guang Yang (2013), “Nano-cellulose 3D-networks as controlledrelease drug cariers” , Journal of Materials Chemistry B, 2013, 1, 2976 2984 29 Martindal 34 ( 2005 ), volum II, p.1659 th 30 Pharmaceutical Press (1996), Martindale- The extra pharmacopoeia, 31 edition, pp 1678 31 Thanh Xuan Nguyen et al (2014), “Chitosan - coated nano - liposomes for the oral delivery of berberine hydrochloride”, J Mater Chem B, 2, 7149 - 7159 32 Silva NHCS et al (2014), “Bacterial cellulose membranes as transdermal delivery systems for diclofenac: in vitro dissolution and permeation studies”, Carbohydr Polym, pp 106, 264 - 269 33 Watanabe, et al (1998), “Structure features and properties of Bacterial cellulose produced in agitated culture”, Cellulose, 5, 187-200 34 Zhou L, Yang Y, Wang X, et al “ Berberine stimulates glucose transport through a mechanism distinct from insulin” Metabolism 2007;56:405–12 ... thuốc hấp thu vào màng CVK nhiều Đối tượng phạm vi nghiên cứu - Đối tượng nghiên cứu: khả hấp thụ thuốc berberin màng cellulose vi khuẩn lên men từ môi trường nước dừa già - Vật liệu nghiên cứu: ... muốn từ thuốc berberin giảm chi phí cho q trình thí nghiệm sản xuất Đó lí chúng tơi chọn đề tài: "Nghiên cứu khả hấp thụ thuốc berberin màng cellulose vi khuẩn lên men từ môi trường nước dừa già" ... già" Mục đích nghiên cứu - Nghiên cứu, chế tạo màng CVK từ vi khuẩn A xylinum môi trường nước dừa già - Thiết kế khả hấp thụ thuốc berberin dựa màng CVK nhằm tăng lượng thuốc hấp thụ vào thể -