BƯỚC đấu NGHIÊN cứu GIÁ TRỊ của kỹ THUẬT SÀNG lọc KHỒNG xâm lấn TRONG CHẨN đoán TRƯỚC SINH một số bất THƯỜNG NHIỄM sắc THỂ TẠIBỆNH VIỆN PHỤ sản hà nội năm 2016

91 112 0
BƯỚC đấu NGHIÊN cứu GIÁ TRỊ của kỹ THUẬT SÀNG lọc KHỒNG xâm lấn TRONG CHẨN đoán TRƯỚC SINH một số bất THƯỜNG NHIỄM sắc THỂ TẠIBỆNH VIỆN PHỤ sản hà nội năm 2016

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

1 SỞ Y TẾ HÀ NỘI BỆNH VIỆN PHỤ SẢN HÀ NỘI ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP CƠ SỞ TÊN ĐỀ TÀI: BƯỚC ĐẤU NGHIÊN CỨU GIÁ TRỊ CỦA KỸ THUẬT SÀNG LỌC KHỒNG XÂM LẤN TRONG CHẨN ĐOÁN TRƯỚC SINH MỘT SỐ BẤT THƯỜNG NHIỄM SẮC THỂ TẠI BỆNH VIỆN PHỤ SẢN HÀ NỘI NĂM 2016 - 2017 Chủ nhiệm đề tài: PGS.TS Nguyễn Duy Ánh Nhóm nghiên cứu: Ths.Bs Hoàng Hải Yến Bs Đinh Thúy Linh Ths.Bs Nguyễn Hồng Phượng Ths.CNSH Nguyễn Thị Vân Anh NĂM 2018 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT AF Amniotic fluid AFP Alfa feto-protein BoBs BACs-on-Beads BP Base pair cffDNA Cell free fetal DNA CMA Chromosomal microarray-based analysis CV Chrionic villus DNA Deoxyribonucleic acid DTBS Dị tật bẩm sinh FISH Fluorescent in situ hybridization NGS Next generation sequencing NIPS Noninvasive prenatal testing SNPs Single nucleotide polymorphisms NST Nhiễm sắc thể PAPP-A Pregnancy – associated plasma protein A PGD Preimplantation Genetic Diagnosis PN BoBs Prenatal-BoBs uE3 Unconjugated Estriol - Estriol không liên hợp βhCG Beta human chronic gonadotropin MPS Massively parallel sequencing MPSS Massively parallel shotgun sequencing NCVs Normalized chromosome values MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG DANH MỤC BIỂU ĐỒ DANH MỤC SƠ ĐỒ DANH MỤC HÌNH MỞ ĐẦU Bất thường nhiễm sắc thể (NST) nguyên nhân 50% trường hợp sảy thai, số nguyên nhân hàng đầu gây nên tử vong tàn tật cho trẻ sơ sinh toàn giới [1] Chiếm khoảng 83% bất thường lệch bội NST 21, 18, 13 NST giới tính gây hội chứng Down, Edwards, Patau, Turner , [2] Cho đến nay, giới chưa có biện pháp phòng ngừa tình trạng thai mắc hội chứng bất thường NST Chính vậy, việc phát sớm bất thường NST sàng lọc, chẩn đoán trước sinh tư vấn di truyền việc làm cần thiết nhằm giảm tỷ lệ sinh bất thường NST Các phương pháp sàng lọc trước sinh truyền thống cho bất thường lệch bội NST bao gồm siêu âm hình thái phân tích huyết từ máu mẹ thai kỳ thai kỳ Tuy nhiên, tỷ lệ phát lệch bội dao động từ 30-94% với tỷ lệ dương tính giả 5% tùy thuộc vào phương pháp sàng lọc sử dụng [3] Để chẩn đoán xác định, thai phụ có nguy cao thực thủ thuật xâm lấn sinh thiết gai rau chọc hút dịch ối để phân tích NST thai nhi, điều mang lại nguy thai với tỷ lệ 0.11% - 0.22% [4] Do đó, cần có phương pháp sàng lọc với tỷ lệ dương tính giả thấp đồng thời tỷ lệ phát cao hơn, thai phụ không cần chịu thủ thuật xâm lấn, tránh nguy ảnh hưởng đến mẹ thai [5] Việc phát DNA thai tự (cell-free fetal DNA - cffDNA) có nguồn gốc từ rau thai lưu hành máu mẹ Denis Lo cộng năm 1997 [6] mở khả thực xét nghiệm sàng lọc trước sinh không xâm lấn (NIPS) phát sớm thai lệch bội NST phương pháp giải trình tự hệ [7], [8], [9] Hơn nữa, NIPS có tỷ lệ phát trisomy 21 99% với tỷ lệ dương tính giả thấp 0.1% [11] Do cffDNA coi nguồn mẫu lý tưởng cho xét nghiệm sàng lọc trước sinh phát lệch bội nhiễm sắc thể thai Tại Việt Nam, lĩnh vực sàng lọc chẩn đoán trước sinh ngày phát triển với việc triển khai nhiều kỹ thuật Bệnh viện Phụ sản Hà Nội bệnh viện chuyên khoa hàng đầu Thủ đô, với việc thành lập phát triển Trung tâm sàng lọc, chẩn đoán trước sinh sơ sinh, việc ứng dụng kỹ thuật nhằm nâng cao chất lượng sàng lọc vấn đề cấp thiết Vì chúng tơi tiến hành đề tài “Bước đầu nghiên cứu giá trị kỹ thuật sàng lọc không xâm lấn chẩn đoán trước sinh số bất thường nhiễm sắc thể Bệnh viện Phụ sản Hà Nội năm 2016 – 2017” với mục tiêu: Xác định tỉ lệ thai có nguy bất thường nhiễm sắc thể kỹ thuật sàng lọc không xâm lấn NIPS Xác định tỉ lệ bất thường nhiễm sắc thể 13, 18, 21và nhiễm sắc thể giới tính nhóm thai phụ kết NIPS có nguy Đánh giá giá trị kỹ thuật sàng lọc không xâm lấn NIPS sàng lọc bất thường nhiễm sắc thể 13, 18, 21, nhiễm sắc thể giới tính Chương TỔNG QUAN 1.1 Bất thường nhiễm sắc thể thai thường gặp sàng lọc, chẩn đoán trước sinh 1.1.1 Tần suất, dạng bất thường nhiễm sắc thể thai 1.1.1.1 Tần suất Bất thường nhiễm sắc thể (NST) nguyên nhân 50% trường hợp sảy thai, số nguyên nhân hàng đầu gây nên tử vong tàn tật cho trẻ sơ sinh toàn giới [1] Chiếm khoảng 83% bất thường lệch bội NST 21, 18, 13 NST giới tính gây hội chứng Down, Edwards, Patau, Turner , [2] Tại Trung Quốc, năm có khoảng 16 triệu trẻ sinh, dị tật bẩm sinh chiếm khoảng 4-6% Bất thường nhiễm sắc thể chiếm tỷ lệ 1:160 trẻ sinh sống [12],[13] Thống kê ngành y tế cho thấy, năm Việt Nam có khoảng gần 1.5 triệu trẻ em sinh ra, tỷ lệ dị tật bẩm sinh chiếm khoảng 1.5-2% trẻ sinh sống Đáng lưu ý, năm có khoảng 1.4001.800 trẻ bị mắc bệnh Down, khoảng 250-250 trẻ mắc hội chứng Edwards Theo nghiên cứu tác giả Phùng Như Toàn năm 2003 Bệnh viện Từ Dũ, tỷ lệ bất thường NST 11.2% Năm 2004, tỷ lệ bất thường NST Bệnh viện Phụ sản Trung Ương 17.5% theo nghiên cứu tác giả Hoàng Thị Ngọc Lan cộng sự, nghiên cứu tác giả Trần Danh Cường năm 2005 11.6% thai phụ có nguy cao (tuổi thai phụ >35 tuổi, có tiền sử mang thai hay sinh bị bất thường số lượng nhiễm sắc thể), lệch bội NST 21 chiếm 50,79% [14] 1.1.1.2 Các dạng bất thường NST thai thường gặp Các bất thường NST nguyên nhân 50% trường hợp sảy thai tự nhiên tháng đầu thai kỳ nguyên nhân 7% tử vong sơ sinh khoảng 0,6% trẻ lúc sinh phát có bất thường NST Tuy nhiên, chiếm đến 83% trường hợp bất thường NST lệch bội NST 21, 18, 13, X Y sống sót đến sinh Hội chứng Down chiếm tỷ lệ cao 53%, tiếp đến hội chứng Edwards 13%, hội chứng Patau chiếm 5%, hội chứng Turner 8%, bất thường NST giới tính XXX, XXY, XYY chiếm 4%, lại bất thường gặp khác (Hình 1) [2] Hình 1.1: Tỉ lệ bất thường NST chẩn đoán trẻ

Ngày đăng: 05/01/2020, 15:18

Từ khóa liên quan

Mục lục

  • Hình 1.1: Tỉ lệ bất thường các NST được chẩn đoán khi trẻ <1 tuổi

  • Hình 1.2: Trẻ mắc hội chứng Down (Trisomy 21)

    • Hội chứng Klinefelter (47,XXY) [22],[23]

    • Hội chứng XYY (47, XYY) [24]

    • Hội chứng trisomy X (47,XXX)[25],[26]

    • Hội chứng Monosomy X (Hội chứng Turner)[27]

    • Muốn chẩn đoán xác định thai bất thường số lượng NST phải dựa vào các xét nghiệm di truyền. Các xét nghiệm này có thể phân tích ở mức độ tế bào (phân tích NST), ở mức độ phân tử (phân tích DNA, RNA) hoặc cả ở mức độ tế bào và phân tử (kỹ thuật FISH). Tất cả xét nghiệm này cần phải lấy được tế bào hoặc DNA có nguồn gốc từ thai NST sử dụng thủ thuật xâm lấn như sinh thiết gai rau trong 3 tháng đầu và chọc hút dịch ối trong 3 tháng giữa thai kỳ.

    • Việc chẩn đoán trước sinh các bất thường NST bằng kỹ thuật nuôi cấy tế bào ối và sau đó là tế bào gai rau với mục đích xác lập bộ nhiễm sắc thể đồ (karyotype) của thai đã được thực hiện trên toàn thế giới vào cuối những năm thập niên 60 và đầu thập niên 70, kỹ thuật này thực hiện mất rất nhiều công sức và thời gian [28]. Sau đó khoảng những năm giữa của thập niên 90 thế kỷ 20, kỹ thuật FISH lai huỳnh quang tại chỗ ra đời, giúp khảo sát nhanh NST 13, 18, 21, X, Y từ mẫu máu, gai rau hoặc dịch ối, thường cho kết quả từ 48-72 giờ nhưng độ nhạy tương đối thấp, chi phí tốn kém và mất nhiều công sức [29],[30]. Đến khoảng 2001, kỹ thuật di truyền phân tử QF-PCR (quantitative fluorescent polymerase chain reaction) đã được chấp nhận giúp chẩn đoán nhanh các bất thường NST bằng cách khảo sát và định lượng các trình tự STR (short tandem repeat) đặc trưng của NST bằng các cặp mồi gắn huỳnh quang [31]. Phương pháp này cho kết quả nhanh trong vòng 48 giờ, có độ nhạy và độ đặc hiệu cao, với ưu điểm nổi bật là năng suất cao và giá thành thấp.

    • Để có mẫu nghiệm phẩm phục vụ chẩn đoán xác định cho các trường hợp thai có nguy cơ cao phát hiện qua sàng lọc, các thai phụ sẽ được thực hiện các thủ thuật xâm lấn như sinh thiết gai nhau, chọc hút dịch ối, hay lấy máu cuống rốn. Các thủ thuật này có thể ảnh hưởng đến sự phát triển thai hoặc gây sẩy thai từ 0,5% đến 1 hay 2% tùy phương pháp. Tỉ lệ dương tính giả 5 - 7% của xét nghiệm sàng lọc có nghĩa là sẽ có 5 đến 7% thai phụ phải làm xét nghiệm chẩn đoán xâm lấn không cần thiết, dẫn đến tăng số thai phụ bị sẩy thai do thủ thuật ngoài ý muốn. Ngoài ra các hạn chế về tỉ lệ dương tính giả cao và tỉ lệ phát hiện thấp gây khó khăn cho bác sĩ khi tư vấn và làm cho thai phụ và gia đình lo lắng, hoang mang không cần thiết. Do đó, phát triển các phương pháp sàng lọc không xâm lấn có tỉ lệ phát hiện cao hơn với tỉ lệ dương tính giả thấp hơn là hết sức cần thiết và là ưu tiên của lĩnh vực sản khoa [5].

    • Ở thập niên 80, sàng lọc trước sinh chủ yếu dựa vào tuổi mẹ nhưng chỉ phát hiện được khoảng 30% các trường hợp lệch bội NST (trisomy). Năm 1987, thử nghiệm triple test là phương pháp phối hợp tuổi mẹ với ba xét nghiệm hoá sinh trong máu mẹ gồm AFP (alpha fetoprotein), βhCG (beta human chorionic gonadotropin) và uE3 (unconjugated estriol) khi thai từ 15 đến 20 tuần 6 ngày tuổi, đã được nghiên cứu và ứng dụng ở nhiều nước trên thế giới đặc biệt là Hoa Kỳ, Canada [32],[33]. Sau đó, các phương pháp sàng lọc tiến thêm một bước quan trọng khi kết hợp siêu âm đo độ mờ da gáy (Nuchal translucency – NT) của thai khi thai từ 11 tuần đến 13 tuần 6 ngày cùng với xét nghiệm double test là PAPP-A (pregnancy-associated plasma protein A) và fb-hCG trong máu mẹ, gọi là xét nghiệm kết hợp hay combined test [32]. Các xét nghiệm này được đưa vào chương trình chăm sóc trước sinh nhằm sàng lọc, phát hiện sớm các thai phụ có nguy cơ cao bị bất thường NST 21, 18, 13, và đặc biệt là NST 21 ngay trong ba tháng đầu thai kỳ. Tuy nhiên các xét nghiệm này chỉ có tỉ lệ phát hiện khoảng 65% (triple test) đến 85% (combined test) với tỉ lệ dương tính giả từ 5 - 7% [3]. Trong khi còn có nhiều tranh luận về thời điểm nên sàng lọc ở ba tháng giữa hay ba tháng đầu của thai kỳ, thì năm 1999, chiến lược sàng lọc trước sinh phối hợp các XN cả ba tháng đầu và ba tháng giữa thai kỳ thành một bộ XN tích hợp (integrated test) để sàng lọc các tật dị bẩm sinh gồm T21, T18 và khuyết tật ống thần kinh [33]. Đây được coi là một giải pháp tối ưu, nâng tỉ lệ phát hiện lên tới 94% với tỉ lệ dương tính giả 5%. Nếu giảm tỉ lệ dương tính giả xuống từ 0,8% đến 1,5% thì tỉ lệ phát hiện tương ứng sẽ là từ 85% đến 87%. Số chênh mang thai có HC Down ở thai phụ có sàng lọc nguy cơ cao (Odds of being Affected Positive Result - OAPR) là 1:7, vượt trội so với XN bộ ba sàng lọc triple test OAPR 1:77 và combined test 1:35 [33]. Như vậy các XN sàng lọc trước sinh trên vẫn bị giới hạn bởi độ nhạy và độ đặc hiệu chưa tối ưu, xét nghiệm phải thực hiện nhiều bước kể cả phải siêu âm đo NT mà chỉ được thực hiện bởi các bác sĩ có chứng nhận đo NT của Hiệp hội Y khoa thai nhi Fetal Medicine Foundation – FMF). Tuy nhiên trong thực tế hiện nay, xét nghiệm sàng lọc và chẩn đoán trước sinh tập trung chủ yếu ở ba tháng đầu thai kỳ, với hy vọng phát hiện sớm các trường hợp nguy cơ cao để có thể đình chỉ thai nghén các trường hợp thai bị khuyết tật nặng nề một cách an toàn.

      • Bảng 1.1 là phân tích tổng hợp tỷ lệ phát hiện và tỷ lệ dương tính giả trisomy 21 của các xét nghiệm sàng lọc bất thường NST 21 của Nicolaides năm 2003 [3].

      • DR: Tỷ lệ phát hiện; FPR: tỷ lệ dương tính giả

      • Sự ra đời của các hệ thống giải trình tự gen thế hệ mới (Next Generation Sequencing – NGS) đã giúp việc nghiên cứu các trường hợp bệnh lý đa gen như ung thư (gan, vú, phổi…) hay các bệnh di truyền ngày càng đơn giản hoá với chi phí tối ưu. Nổi bật trong đó phải kể đến là ứng dụng của NGS trong các xét nghiệm sàng lọc trước sinh, dựa trên các nghiên cứu của Dennis Lo và cộng sự phát hiện được DNA thai tự do (cell free fetal DNA - cffDNA) lưu hành trong máu người mẹ được phát hiện lần đầu vào năm 1997 để từ đó có thể phát hiện các trường hợp thai phụ mang thai lệch bội NST 21, 18 và 13 với chỉ 10 ml máu mẹ.

      • Hình 1.3: DNA tự do lưu hành trong máu mẹ

      • Hình 1.4: Lưu đồ thực hiện giải trình tự gen thế hệ mới phát hiện T21.

      • Hình 1.5: Giải trình tự trên hệ thống giải trình tự Ion Torrent

      • - Đối tượng nghiên cứu là những thai phụ mang thai đơn từ 10 tuần thai đến khám tại Bệnh viện Phụ sản Hà Nội, thời gian từ tháng 5 năm 2016 đến tháng 08 năm 2017

      • - Chất liệu nghiên cứu: 10ml máu tĩnh mạch được lấy vào ống chuyên dụng streck.

      • Những thai phụ mang thai đơn từ 10 tuần thai được sàng lọc bằng các xét nghiệm truyền thống có nguy cơ cao mang thai bị lệch bội NST có ít nhất một trong những tiêu chuẩn sau được chọn làm đối tượng nghiên cứu:

      • Những thai phụ có tình trạng bệnh lý sau không được chọn làm đối tượng nghiên cứu:

      • Thai < 10 tuần

      • Đa thai hoặc song thai thai tiêu biến (Vanishing twins).

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan