ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TRỌNG ĐIỂM CẤP NHÀ NƯỚC GIAI ĐOẠN 2013-2018 "KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ PHỤC VỤ PHÁT TRIỂN BỀN VỮNG VÙNG TÂY BẮC" Mã số: KHCN-TB/13-18 BÁO CÁO TỔNG HỢP ĐỀ TÀI: “Nghiên cứu phát triển (theo hướng GACP) bào chế số chế phẩm từ dược liệu Ô đầu, Ý dĩ, Tam thất, Đan sâm vùng Tây Bắc” Mã số: KHCN-TB.05C/13-18 Cơ quan chủ trì đề tài: Khoa Y Dược, ĐHQGHN Chủ trì đề tài: PGS.TS.Nguyễn Thanh Hải Hà Nội - 2017 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ TRỌNG ĐIỂM CẤP NHÀ NƯỚC GIAI ĐOẠN 2013-2018 "KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ PHỤC VỤ PHÁT TRIỂN BỀN VỮNG VÙNG TÂY BẮC" Mã số: KHCN-TB/13-18 BÁO CÁO TỔNG HỢP ĐỀ TÀI “Nghiên cứu phát triển (theo hướng GACP) bào chế số chế phẩm từ dược liệu Ô đầu, Ý dĩ, Tam thất, Đan sâm vùng Tây Bắc” Mã số: KHCN-TB.05C/13-18 Chủ nhiệm đề tài: Cơ quan chủ trì đề tài: PGS.TS Nguyễn Thanh Hải PGS.TS Đinh Đồn Long Hà Nội - 2017 THÔNG TIN CHUNG Tên đề tài: “Nghiên cứu phát triển (theo hướng GACP) bào chế số chế phẩm từ dược liệu Ô đầu, Ý dĩ, Tam thất, Đan sâm vùng Tây Bắc” Mã số đề tài: KHCN-TB.05C/13-18 Thuộc: Chương trình (tên, mã số chương trình): Khoa học Cơng nghệ trọng điểm cấp Nhà nước, giai đoạn 2013-2018: “ Khoa Công nghệ phục vụ phát triển bền vững vùng Tây Bắc” Mã số chương trình: KHCN-TB/13-18 Chủ nhiệm đề tài: Họ tên: Nguyễn Thanh Hải Ngày, tháng, năm sinh: 11/08/1965 Giới tính: Nam  Học hàm, học vị/ Trình độ chun mơn: Phó giáo sư, tiến sĩ Dược học Chức danh khoa học: Tiến sĩ Chức vụ: Phó Chủ nhiệm Khoa Y Dược, Chủ nhiệm Bộ mơn Bào chế Công nghệ Dược phẩm, Khoa Y Dược Điện thoại: Tổ chức : (04)37450166 Nhà riêng: (04)39710634 Mobile: 0913512599 Fax: 0437450188 E-mail: haipharm@yahoo.com Tên tổ chức công tác: Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội Địa tổ chức: 144 Xuân Thủy - Cầu Giấy - Hà Nội Địa nhà riêng: Số 26/666, Đường Bạch Đằng, quận Hai Bà Trưng, tp.Hà Nội Tổ chức chủ trì đề tài: Tên tổ chức chủ trì đề tài: Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội Điện thoại: 0485876452 E-mail: smp@vnu.edu.vn Fax: 0437450188 Website: smp.vnu.edu.vn Địa chỉ: 144 Xuân Thủy- Cầu Giấy - Hà Nội Tên tổ chức chủ quản đề tài: Đại học Quốc gia Hà Nội Tên tổ chức chủ trì đề tài: Khoa Y Dược, ĐHQGHN Họ tên thủ trưởng tổ chức: PGS.TS Nguyễn Thanh Hải Số tài khoản: 3713 MSNS 1109888 Kho bạc Nhà nước Cầu Giấy-Hà Nội Cơ quan chủ quản đề tài: Đại học Quốc gia Hà Nội DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT AC : Aconitin ACN : Acetonitril AUC : Diện tích đường cong nồng độ-thời gian (Area Under the Curve) DLTW : Dược liệu trung ương FDA : Cơ quan quản lý dược phẩm thực phẩm Hoa Kì (Food and Drug Administration) HPLC : Sắc ký lỏng hiệu cao (High Performance Liquid Chromatography) LC/MS GC/MS : Sắc ký lỏng – Khối phổ (Liquid Chromatography – Mass spectrometry) : Sắc ký khí/ detector khối phổ (Gas Chromatography/Mass Spectrometry) LD50 : Lượng chất cần thiết để giết nửa số lượng động vật thí nghiệm sau quãng thời gian định sẵn (Lethal dose) MeOH : Methanol RSD : Độ lệch chuẩn tương đối ( Relative Standard Deviation) UV- Vis : Tử ngoại – khả kiến (Ultra Violet-Visible) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Tên Bảng Trang Một số alcaloid thuộc nhóm khác phân lập từ chi Aconitum 11 Bảng 1.2 Các hợp chất flavonoid phân lập từ ý dĩ 24 Bảng 1.3 Các hợp chất lignan phân lập từ ý dĩ 26 Bảng 1.4 Các hợp chất phenolic phân lập từ ý dĩ 26 Bảng 1.5 Nhóm hoạt chất phenol acid phenolicphân lập từ rễ chi 35 Salvia L Bảng 1.6 Nhóm hoạt chất diterpen chi Salvia L 36 Bảng 1.7 Các thành phần hoạt chất khác có chi Salvia L 37 Bảng 1.8 Một số Saponin thuộc nhóm PPD phân lập từ chi Panax 48 Bảng 1.9 Một số Saponin thuộc nhóm PPT phân lập từ chi Panax 49 Bảng 1.10 Một số Saponin thuộc nhóm Octillol phân lập từ chi Panax 50 Bảng 1.11 Một số Saponin thuộc nhóm OA phân lập từ chi Panax 51 Bảng 1.12 Sơ đồ chiết xuất phân lập saponin từ rễ tam thất 52 Bảng 2.1 Phân loại thành phần cấp hạt 62 Bảng 2.2 Các tiêu tiêu chuẩn sản phẩm theo DĐVN4 79 Bảng 3.1 Kết phân tích mẫu đất huyện Quản Bạ 83 Bảng 3.2 Kết phân tích mẫu đất huyện Đồng Văn 85 Bảng 3.3 Kết phân tích mẫu đất huyện Mù Cang Chải 89 Bảng 3.4 Kết phân tích mẫu đất huyện Bắc Hà 94 Bảng 3.5 Kết phân tích mẫu đất huyện Si Ma Cai 97 Bảng 3.6 Kết phân tích mẫu đất huyện Sa Pa 101 Bảng 3.7 Sự phát triển, suất chất lượng Ô đầu vùng 102 trồng huyện Đồng Văn tỉnh Hà Giang Bảng 3.8 Sự phát triển, suất chất lượng Ô đầu vùng 102 trồng huyện Quản Bạ tỉnh Hà Giang Bảng 3.9 Giống gieo trồng ảnh hưởng đến phát triển, suất chất lượng Ý dĩ vùng trồng huyện Bắc Hà, Lào Cai 103 Bảng 3.10 Giống gieo trồng ảnh hưởng đến phát triển, suất 103 chất lượng Ý dĩ huyện Mù Cang Chải, tỉnh Yên Bái Bảng 3.11 Khả sinh trưởng đan sâm 104 Bảng 3.12 Khả phát triển Đan sâm 104 Bảng 3.13 Sự phát triển, suất chất lượng Tam thất vùng 105 trồng huyện Si Ma Cai, tỉnh Lào Cai Bảng 3.14 Sự phát triển, suất chất lượng Tam thất vùng 105 trồng huyện Đồng Văn tỉnh Hà Giang Bảng 3.15 Số liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR phổ DEPT chất OD7 125 Bảng 3.16 Số liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR chất OD5 128 Bảng 3.17 Số liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR chất OD8 130 Bảng 3.18 Số liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR chất OD9 132 Bảng 3.19 Số liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR chất OD10 134 Bảng 3.20 Số liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR chất OD6 139 Bảng 3.21 Tỷ lệ chuột chết lô chuột uống phân đoạn D 142 Bảng 3.22 Tỷ lệ chuột chết lô chuột uống phân đoạn E 143 Bảng 3.23 Tỷ lệ chuột chết lô chuột uống PĐ I 144 Bảng 3.24 Ảnh hưởng PĐ E lên thời gian phản ứng với nhiệt độ 146 chuột nhắt trắng Bảng 3.25 Tác dụng giảm đau PĐ E chuột nhắt trắng 147 phương pháp gây đau máy tail-flick Bảng 3.26 Ảnh hưởng PĐ E lên số quặn đau chuột nhắt 148 trắng Bảng 3.27 Ảnh hưởng thuốc thử lên trọng lượng tuyến ức tương đối 150 Bảng 3.28 Ảnh hưởng thuốc thử lên số lượng bạch cầu 150 Bảng 3.29 Ảnh hưởng thuốc thử lên nồng độ IgG máu ngoại vi 151 Bảng 3.30 Ảnh hưởng thuốc thử đến phản ứng bì với kháng nguyên 151 OA Bảng 3.31 Ảnh hưởng thuốc thử đến nồng độ IL-2 152 Bảng 3.32 Ảnh hưởng thuốc thử đến nồng độ TNF-α 153 Bảng 3.33 Kết giải phẫu vi thể tuyến ức 153 Bảng 3.34 Số liệu phổ NMR chất PG1 158 Bảng 3.35 Số liệu phổ NMR hợp chất PG2 159 Bảng 3.36 Số liệu thử độc tính cấp phân đoạn n-Hexane chiết từ Ý 167 dĩ Bảng 3.37 Số liệu thử độc tính cấp phân đoạn etyl acetate chiết từ Ý dĩ 167 Bảng 3.38 Số liệu thử độc tính cấp phân đoạn butanol chiết từ Ý dĩ 168 Bảng 3.39 Số liệu thử độc tính cấp phân đoạn H2O chiết từ Ý dĩ 168 Bảng 3.40 Số liệu thử độc tính cấp phân đoạn Etanol chiết từ Ý dĩ 168 Bảng 3.41 Phần trăm ức chế enzyme tyrosinase phân đoạn dịch chiết ý dĩ 172 Bảng 3.42 Số liệu thử độc tính cấp phân đoạn n-Hexane chiết từ 185 Đan sâm Bảng 3.43 Số liệu thử độc tính cấp phân đoạn etyl acetate chiết từ 185 Đan sâm Bảng 3.44 Số liệu thử độc tính cấp phân đoạn butanol chiết từ Đan sâm 185 Bảng 3.45 Số liệu thử độc tính cấp phân đoạn H2O chiết từ Đan sâm 186 Bảng 3.46 Số liệu thử độc tính cấp phân đoạn Etanol chiết từ Đan sâm 186 Bảng 3.47 Kết ly giải huyết khối in vitro 187 Bảng 3.48 Kết thời gian APPT, PT TT phân đoạn chiết từ 188 Đan sâm in vivo Bảng 3.49 Hoạt tính gây độc tế bào phân đoạn dịch chiết 189 Đan sâm Bảng 3.50 IC50 phân đoạn dịch chiết từ rễ Đan sâm 190 Bảng 3.51 Kích thước khối u nhóm chuột theo thời gian 190 Bảng 3.52 Trọng lượng thể nhóm chuột 192 Bảng 3.53 Trọng lượng khối u kết thúc thí nghiệm 192 Bảng 3.54 Số liệu phổ 1H 13C-NMR phần aglycon hợp chất GC-1 197 Bảng 3.55 Số liệu phổ 1H 13C-NMR phần đường hợp chất GC-1 198 Bảng 3.56 Số liệu phổ 1H 13C-NMR phần aglycon hợp chất GC-2 200 Bảng 3.57 Số liệu phổ 1H 13C-NMR phần đường hợp chất GC-2 201 Bảng 3.58 Số liệu phổ 1H 13C-NMR phần aglycon hợp chất GC-3 203 Bảng 3.59 Số liệu phổ 1H 13C-NMR phần đường hợp chấtGC-3 204 Bảng 3.60 Số liệu phổ 1H 13C-NMR phần aglycon hợp chất GC-4 206 Bảng 3.61 Số liệu phổ 1H 13C-NMR phần đường hợp chất GC-4 206 Bảng 3.62 Số liệu phổ 1H 13C-NMR phần aglycon hợp chất GC-5 208 Bảng 3.63 Số liệu phổ 1H 13C-NMR phần đường hợp chất GC-5 209 Bảng 3.64 Số liệu thử độc tính cấp phân đoạn n-Hexane chiết từ 210 Tam thất Bảng 3.65 Số liệu thử độc tính cấp phân đoạn etyl acetate chiết từ Tam thất 210 Bảng 3.66 Số liệu thử độc tính cấp phân đoạn butanol chiết từ Tam thất 210 Bảng 3.67 Số liệu thử độc tính cấp phân đoạn H2O chiết từ Tam thất 211 Bảng 3.68 Số liệu thử độc tính cấp phân đoạn Etanol chiết từ Tam thất 211 Bảng 3.69 Giá trị mật độ quang học (OD), tỷ số tăng sinh (A%) giá trị IC50 216 Bảng 3.70 Giá trị mật độ quang học (OD), tỷ số tăng sinh (A%) giá 216 trị IC50 Saponin Paclitaxel dòng TB ung thư HCT116 Bảng 3.71 Giá trị mật độ quang học (OD), tỷ số tăng sinh (A%) giá 217 trị IC50 phân đoạn saponin Paclitaxel dòng TB ung thư H460 Bảng 3.72 Giá trị mật độ quang học (OD), tỷ số tăng sinh (A%) giá 218 trị IC50 phân đoạn saponin Paclitaxel dòng TB ung thư BT474 Bảng 3.73 Kích thước khối u nhóm chuột theo thời gian 219 Bảng 3.74 Trọng lượng thể nhóm chuột (g) 220 Bảng 3.75 Trọng lượng khối u 221 Bảng 3.76 Tác dụng Saponin lên số công thức máu (n=5) 227 Bảng 3.77 Đánh giá tiêu chuẩn cồn thuốc chứa Ô đầu bảo quản 235 điều kiện thường Bảng 3.78 Đánh giá tiêu chuẩn cồn thuốc chứa Ô đầu bảo quản điều kiện lão hóa cấp tốc 236 Bảng 3.79 Đánh giá tiêu chuẩn cao ý dĩ Ý bảo quản điều kiện thường 239 Bảng 3.80 Đánh giá tiêu chuẩn cao ý dĩ bảo quản điều kiện lão hóa cấp tốc 240 Bảng 3.81 Ảnh hưởng yếu tố số lần chiết đến trình chiết 257 Bảng 3.82 Ảnh hưởng yếu tố thời gian chiết đến trình chiết 257 DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 1.1 Cấu trúc alcaloid C18-diterpenoid Hình 1.2 Cấu trúc khung C19-diterpenoid alcaloid Hình 1.3 Hình 1.3 Một số alcaloid thuộc nhóm C19-diterpenoid alcaloid Hình 1.4 Khung C20-diterpenoid alcaloid Hình 1.5 Cấu trúc số alcaloid thuộc nhóm C20-diterpen alcaloid 10 Hình 1.6 Khung cấu trúc nhóm Alcaloid bisditerpenoid 11 Hình 1.7 Khung cấu trúc chung nhóm dẫn chất quercetin kaempferol 12 Hình 1.8 Một số hình ảnh thuốc sản xuất từ số loài thuộc chi 19 Aconitum Hình 1.9 Hình ảnh lồi Coix lacryma-jobi L var lacryma-jobi 20 Hình 1.10 Hình ảnh lồi Coix lacryma-jobi L var stenocarpa Stapf 21 Hình 1.11 Hình ảnh lồi Coix lacryma-jobi L var ma-yuen Stapf 21 Hình 1.12 Cấu tạo vỏ hạt ý dĩ 22 Hình 1.13 Một số hình ảnh sản phẩm chứa ý dĩ 32 Hình 1.14 Một số hình ảnh sản phẩm chứa đan sâm 43 Hình 1.15 Cấu trúc nhóm PPD 48 Hình 1.16 Cấu trúc nhóm PPT 49 Hình 1.17 Sơ đồ chiết xuất phân lập saponin từ rễ tam thất 53 Hình 1.18 Một số hình ảnh sản phẩm chứa tam thất 58 Hình 2.1 Sơ đồ nghiên cứu tác dụng tăng cường miễn dịch 68 Hình 3.1 Bản đồ huyện Quản Bạ - tỉnh Hà Giang 81 Hình 3.2 Bản đồ Huyện Đồng Văn – Tỉnh Hà Giang 84 Hình 3.3 Bản đồ Huyện Mù Cang Chải – Tỉnh Yên Bái 87 Hình 3.4 Bản đồ Huyện Bắc Hà – Tỉnh Lào Cai 91 Hình 3.5 Bản đồ Huyện Si Ma Cai – Tỉnh Lào Cai 95 Hình 3.6 Bản đồ Huyện Sa Pa – Tỉnh Lào Cai 99 Hình 3.7 Một số hình ảnh đầu 108 Hình 3.8 Một số hình ảnh ý dĩ 110 ... Nghiên cứu phát triển (theo hướng GACP) bào chế số chế phẩm từ dược liệu Ô đầu, Ý dĩ, Tam thất, Đan sâm vùng Tây Bắc thực nhằm mục tiêu sau: Nghiên cứu phát triển nguồn cung cấp dược liệu chuẩn (theo. .. thất, Đan sâm Nghiên cứu phát triển phương thức sử dụng dược liệu Ô đầu, Ý dĩ, Tam thất, Đan sâm làm thuốc Nghiên cứu đề xuất mô hình phát triển bền vững dược liệu Ơ đầu, Ý dĩ, Tam thất, Đan sâm. .. tài: Nghiên cứu phát triển (theo hướng GACP) bào chế số chế phẩm từ dược liệu Ô đầu, Ý dĩ, Tam thất, Đan sâm vùng Tây Bắc Mã số đề tài: KHCN-TB.05C/13-18 Thuộc: Chương trình (tên, mã số chương