BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Nguyễn Thị Thu Thủy NGHIÊN CỨU SỬ DỤNG CHỈ THỊ ITS ĐỂ ĐÁNH GIÁ QUAN HỆ DI TRUYỀN VÀ NHẬN DẠNG MỘT SỐ MẪU GIỐNG CÂY ÓC CHÓ THU THẬP TẠI CÁC TỈNH MIỀN NÚI PHÍA BẮC LUẬ N VĂ N THẠ C SĨ SINH HỌC THỰC NGHIỆM Hà Nội – 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Nguyễn Thị Thu Thủy NGHIÊN CỨU SỬ DỤNG CHỈ THỊ ITS ĐỂ ĐÁNH GIÁ QUAN HỆ DI TRUYỀN VÀ NHẬN DẠNG MỘT SỐ MẪU GIỐNG CÂY ÓC CHÓ THU THẬP TẠI CÁC TỈNH MIỀN NÚI PHÍA BẮC Chuyên ngành : Sinh học thự c nghiệm Mã số : 8420114 LUẬ N VĂ N THẠ C SĨ SINH HỌC THỰC NGHIỆM NGƯỜI HƯỚNG DẪ N KHOA HỌC Hướng dẫn 1: PGS.TS Khuất Hữu Trung Hướng dẫn 2: PGS.TS Đồng Văn Quyền Hà Nội - 2019 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận văn kết nghiên cứu cá nhân hướng dẫn PGS.TS Khuất Hữu Trung PGS.TS Đồng Văn Quyền Các số liệu tài liệu trích dẫn luận văn trung thực Kết nghiên cứu không trùng với cơng trình cơng bố trước Tôi xin chịu trách nhiệm với lời cam đoan Hà Nội, tháng năm 2019 Tác giả Nguyễn Thị Thu Thủy LỜI CẢM ƠN Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Học viện Khoa học Công nghệ, Viện Di truyền Nông nghiêp, thầy giáo, cô giáo tạo điều kiện thuận lợi cho học tập hồn thành khóa học Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Khuất Hữu Trung – Phó viện trưởng – Viện Di truyền Nơng nghiệp PGS.TS Đồng Văn Quyền – Phó viện trưởng – Viện Công nghệ Sinh học, người tận tình giúp đỡ, hướng dẫn tơi hồn thành luận văn Tôi xin cảm ơn tập thể cán Bộ môn Kĩ thuật Di truyền - Viện Di truyền Nông nghiệp động viên, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi sở vật chất - trang thiết bị để tơi hồn thành luận văn Luận văn sử dụng phần số liệu kết thuộc đề tài: “Khai thác Phát triển nguồn gen Ĩc chó (Juglans regia Linn) Lai Châu số tỉnh miền núi phía Bắc”, mã số NVQG-2016/15 TS Nguyễn Toàn Thắng làm chủ nhiệm Tôi xin chân thành cám ơn Cuối cùng, xin bày tỏ lòng biết ơn vơ sâu sắc tới gia đình, bạn bè, đồng nghiệp người ln bên cạnh, động viên, góp ý cho tơi suốt trình học tập Hà Nội, tháng năm 2019 Tác giả Nguyễn Thị Thu Thủy DA AFLP Amp cDNA Com CTAB Cety DNA Deo dNTPs Deo DMSO Dim EDTA Ethy EtBr Ethi ISSR Inter ITS Inter PCR Phản RAPD Rand rDNA Ribo RFLP Rest RNA Ribo SSR Simp SCAR Sequ DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1: Sơ đồ vùng ITS gen rDNA vùng nhân vị trí mồi ITS 20 Hình 3.1:DNA tổng số 26 mẫu Ĩc chó 29 Hình 3.2: Phổ điện di sản phẩm PCR với cặp mồi ITS1/ITS8 26 mẫu Óc chó (M1KB: Marker ladder 1Kb; H2O: Đ/c âm) 30 Hình 3.3: Một đoạn giản đồ có đỉnh với màu sắc khác tương ứng với loại nucleotid mẫu Ĩc chó HG02, HG05 HG18 .32 Hình 3.4: Kết gióng hàng, gióng cột 26 trình tự ITS1-5,8SrRNA-ITS2 26 mẫu Ĩc chó mẫu tham chiếu AF399876.1 42 Hình 3.5: Sơ đồ hình mối quan hệ di truyền 26 mẫu nghiên cứu mẫu tham chiếu AF399876.1 .46 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Các hợp chất Ĩc chó Anh (Juglans regia) .9 Bảng 1: Danh sách 26 mẫu Óc chó 23 Bảng 2: Danh sách mồi ITS (White cộng sự, 1990) .25 Bảng 3: Thành phần phản ứng PCR 26 Bảng 4: Chu trình phản ứng PCR 27 Bảng 1: Độ dài trình tự thuộc 26 mẫu Ĩc chó nghiên cứu mẫu tham chiếu AF399876.1 33 Bảng 2: Thành phần bốn loại nucleotide 26 mẫu nghiên cứu mẫu tham chiếu AF399876.1 .34 Bảng 3: Hệ số tương đồng di truyền 26 mẫu nghiên cứu mẫu tham chiếu AF399876.1 vào trình tự vùng ITS1-5,8SrRNA-ITS2 .44 MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT DANH MỤC HÌNH ẢNH DANH MỤC BẢNG MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 GIỚI THIỆU VỀ CÂY ÓC CHÓ 1.1.1 Nguồn gốc phạm vi phân bố Ĩc chó 1.1.2 Đặc điểm thực vật học thành phần hóa học hạt óc chó 1.1.3 Đặc điểm sinh thái phạm vi phân bố 1.1.4 Giá trị sử dụng giá trị kinh tế 1.2 TỔNG QUAN PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VỀ PHÂN LOẠI THỰC VẬT 1.2.1 Các phương pháp phân loại dựa đặc điểm hình thái 1.2.2 Các phương pháp dựa thị phân tử 1.2.2.1 Các Marker phân tử dựa DNA 1.2.2.2 Sử dụng trình tự DNA bảo tồn cao phân tích quan hệ phát sinh thực vật 1.3 CÁC NGHIÊN CỨU VỀ ĐA DẠNG DI TRUYỀN ÓC CHÓ CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 VẬT LIỆU 2.2 HÓA CHẤT 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.3.1 Tách chiết DNA tổng số 2.3.2 Thành phần phản ứng PCR 2.3.3 Chương trình chạy PCR 2.3.4 Phương pháp điện di agarose 2.3.5 Phương pháp gel theo kit Qiagen 2.3.6 Giải trình tự CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 KẾT QUẢ TÁCH CHIẾT DNA 3.2 KẾT QỦA PCR VÀ TINH SẠCH CÁC SẢN PHẨM KHUẾCH ĐẠI 3.3 KẾT QUẢ KHẢO SÁT VÙNG TRÌNH TỰ ITS1-5,8SrRNA-ITS2 Ở CÁC MẪU NGHIÊN CỨU 3.4 KẾT QỦA SO SÁNH TRÌNH TỰ NUCLEOTIDE VÙNG ITS1 5,8SrRNA - ITS2 CỦA CÁC MẪU NGHIÊN CỨU 3.5 KẾT QUẢ XÂYDỰNG CÂY QUAN HỆ PHÁT SINH GIỮA 26 MẪU NGHIÊN CỨU 3.6 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH MARKER PHÂN TỬ PHÂN BIỆT 26 MẪU ÓC CHÓ NGHIÊN CỨU CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 KẾT LUẬN 4.2 KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC: TRÌNH TỰ 26 MẪU ĨC CHĨ NGHIÊN CỨU MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Cây Ĩc chó có tên khoa học Juglans regia Linn, phân bố rộng rãi khắp giới, trồng thương mại khắp miền Nam châu Âu, Bắc Phi, Mỹ, Tây Nam Mỹ Đông Á cho nhiên liệu điezen sinh học Trên giới, ngành sản xuất hạt Ĩc chó có doanh thu ước tính gần 10 tỷ USD năm 2011 (tính theo số lượng FAO với giá USD/kg) Hoa Kỳ nước xuất lớn giới Trung Quốc lên nước quan trọng sản xuất tiêu dùng Tính từ năm 2000, tổng sản lượng hạt óc chó tồn cầu tăng đặn khối lượng Tới năm 2010, sản lượng đạt 2,55 (triệu tấn), gần gấp đôi 1,29 (triệu tấn) sản lượng năm 2000 Tại Việt Nam, năm 2011 có 22.000 hạt óc chó tiêu thụ chủ yếu từ nhập khẩu.[1] Cây Ĩc chó ưa chuộng đem giá trị thương mại, thẩm mỹ quan trọng hết đem lại giá trị dinh dưỡng cho người Quả óc chó sản phẩm từ óc chó có tính phổ biến cao siêu thực phẩm có lợi cho sức khỏe chúng chứa chất chống oxy hóa, hàm lượng chất béo, protein, vitamin khoáng chất cao Quả óc chó có tác dụng giảm nguy tim mạch, bệnh tim mạch vành, điều trị đái tháo đường tuýp II, phòng ngừa điều trị số bệnh ung thư, giảm triệu chứng rối loạn thần kinh tuổi tác Ngồi ra, Ĩc cho tăng cường phát triển trí thơng minh não bộ, phòng hỗ trợ bệnh ung thư, phòng chống loãng xương, giảm stress, giảm ngủ, tăng cường chất lượng tinh trùng, ổn định đường huyết, giảm cholesterol máu Các phận sử dụng vị thuốc y học cổ truyền, điển sử dụng để điều trị đau thấp khớp, sốt, tiểu đường, bệnh da hoa sử dụng để điều trị đau thấp khớp sốt rét Gỗ số lồi óc chó đánh giá cao màu sắc, độ cứng độ bền cao nên sử dụng làm đồ nội thất, sàn nhà nhiều vật dụng đặc biệt khác súng săn Việc nghiên cứu, phát triển trồng Ĩc chó khơng cải tạo mơi 61 genus Juglansbased on isozymic zymograms, Acta Hort Sinica 14(2), pp.90-96 61 Woeste K., Burns R., Rhodes O., Michler C., 2002, Thirty polymorphic nuclear microsatellite loci from black walnut, J Hered, 93, pp.58–60 62 Wolfe KH., L.W.H., Sharp P., 1987, Rates of nucleotide substitutionvary greatly among plant mitochondria, chloroplast, nuclearDNAs, Proc Natl Acad Sci USA, 84, pp 9054–9058 63 Yan-Min W., Ying L., Feng-Xiang D., Sheng-Ke X., 2000, Study on different ecological types of Chinese walnut (Juglans regia) using RAPD markers, J Beij For Univ, 22, pp.23–27 62 PHỤ LỤC: TRÌNH TỰ 26 MẪU ÓC CHÓ NGHIÊN CỨU >A F399876.1 Juglans regia (mẫu tham chiếu) CCCGCTTA TTGA TA TGCTTA A A TTCA GCGGGTA A TCCCGCCTGA CCTGGG GTCGCGA TGGTA GA GTCGCA GGA A CGA CGCA A TA GGGTCGA GGA GCA C CTTCA CA GCGA CGGGCA A CA CA CGA CGGGTCA CGA GGGTTTCTCA A CCA CCGA TTGTCGTGGCGCTCGTCGCCTA GGA CTCA CTTTTA GGCTA A CCGCG A GCA GA A GCA CA CGGGA GGCCA A TGTCTTCCCCGCA CCCCA CA CA TCA T A A GA A GTGTTTGGGGTTGGGGCA A CGA TGCGTGA CA CCCA GGCA GA CG TGCCCTCGGCCGA A TGGCTTCGGGCGCA A CTTGCGTTCA A A GA CTCGA T GA TTCGCGGGA TTCTGCA A TTCA CA CCA A GTA TCGCA TTTCGCTA CGTTC TTCA TCGA TGCGA GA GCCGA GA TA TCCGTTGCCGA GA GTCGTTA TGTA T CA TGGTA A A GA TGTCA CCA A CA A CGCGCA CA CCGTTTCCGGGGCGCCCG TGGTTA CTCCTTGTTTA A GTTCCTTGGCGCA GA CCGCGCCGGGGTTCA TT GTTCGA TCGGGA A GGGA A CGA GA A GA TTGA CCA A CCA CA CA CGA GGA G CGGTGGGCA TA TCTCA A CGTGCCCTCCCA A CCGTTTTTTGGGA GGGGGC A TTA CA CCCCCA CCCA GA A GGTTA TTA CA TGTTCA CA GGTCGTTCTGCTG GGCA GGTA TCGA CA A TGA TCCTTCCGCA GGTTCA CCTA CGG >HG1 TCCGCTTA TTGA TA TGCTTA A A TTCA GCGGGTA A TCCCGCTTGA CCTGGG GTCGCGA TGGTA GA GTCGCA GGA A CGA CGCA A TA GGGTCGA GGA GCA C CTTCA CA GCGA CGGGCA A CA CA CGA CGGGTCA CGA GGGTTTCTCA A CCA CCGA TTGTCGTGGCGCTCGTCGCCTA GGA CTCA CTTTTA GGCTA A CCGCG A GCA GA A GCA CA CGGGA GGCCA A TGTCTTCCCCGCA CCCCA CA CA TCA T A A GA A GTGTTTGGGGTTGGGGCA A CGA TGCGTGA CA CCCA GGCA GA CG TGCCCTCGGCCGA A TGGCTTCGGGCGCA A CTTGCGTTCA A A GA CTCGA T GA TTCGCGGGA TTCTGCA A TTCA CA CCA A GTA TCGCA TTTCGCTA CGTTC TTCA TCGA TGCGA GA GCCGA GA TA TCCGTTGCCGA GA GTCGTTA TGTA T CA TGGTA A A GA TGTCA CCA A CA A CGCGCA CA CCGTTTCCGGGGCGCCCG TGGTTA CTCCTTGTTTA A GTTCCTTGGCGCA GA CCGCGCCGGGGTTCA TT GTTCGA TCGGGA A GGGA A CGA GA A GA TTGA CCA A CCA CA CA CA A GGA G CGA TCGGCGTA TCTCA A CGTGCGCTCCCTA CCGA TTTTTGGGA GGGGGC A TTA CA CCCCCA CCCA CA A GGA TA GTA CA TGTTCGCA GGTCGGTCTGCT GGGCA GGTA TCGA CA A TGA TCCTTCCGTA CGTTCGCCTA CGG 63 >HG02 TCCGCTTA TTGA TA TGCTTA A A TTCA GCGGGTA A TCCCGCCTGA CCTGGG GTCGCGA TGGTA GA GTCGCA GGA A CGA CGCA A TA GGGTCGA GGA GCA C CTTCA CA GCGA CGGGCA A CA CA CGA CGGGTCA CGA GGGTTTCTCA A CCA CCGA TTGTCGTGGCGCTCGTCGCCTA GGA CTCA CTTTTA GGCTA A CCGCG A GCA GA A GCA CA CGGGA GGCCA A TGTCTTCCCCGCA CCCCA CA CA TCA T A A GA A GTGTTTGGGGTTGGGGCA A CGA TGCGTGA CA CCCA GGCA GA CG TGCCCTCGGCCGA A TGGCTTCGGGCGCA A CTTGCGTTCA A A GA CTCGA T GA TTCGCGGGA TTCTGCA A TTCA CA CCA A GTA TCGCA TTTCGCTA CGTTC TTCA TCGA TGCGA GA GCCGA GA TA TCCGTTGCCGA GA GTCGTTA TGTA T CA TGGTA A A GA TGTCA CCA A CA A CGCGCA CA CCGTTTCCGGGGCGCCCG TGGTTA CTCCTTGTTTA A GTTCCTTGGCGCA GA CCGCGCCGGGGTTCA TT GTTCGA TCGGGA A GGGA A CGA GA A GA TTGA CCA A CCA CA CA CA A GGA A CGA TGGGCGTGTCTCA CTGTGCCCTCCCTA CCGA TCGTTGGGA GGGA GG A TTA A TTA CCCA CCCA CA A GGA TA GTA CTTGTA TGTTCGTCGGTCTGCTG GCTA GGTA TGGA CCA TGA TCGA TCCTTCGGTTCGCCTA CCG >HG05 TCCGCTTA TTGA TA TGCTTA A A TTCA GCGGGTA A TCCCGCCTGA CCTGGG GTCGCGA TGGTA GA GTCGCA GGA A CGA CGCA A TA GGGTCGA GGA GCA C CTTCA CA GCGA CGGGCA A CA CA CGA CGGGTCA CGA GGGTTTCTCA A CCA CCGA TTGTCGTGGCGCTCGTCGCCTA GGA CTCA CTTTTA GGCTA A CCGCG A GCA GA A GCA CA CGGGA GGCCA A TGTCTTCCCCGCA CCCCA CA CA TCA T A A GA A GTGTTTGGGGTTGGGGCA A CGA TGCGTGA CA CCCA GGCA GA CG TGCCCTCGGCCGA A TGGCTTCGGGCGCA A CTTGCGTTCA A A GA CTCGA T GA TTCGCGGGA TTCTGCA A TTCA CA CCA A GTA TCGCA TTTCGCTA CGTTC TTCA TCGA TGCGA GA GCCGA GA TA TCCGTTGCCGA GA GTCGTTA TGTA T CA TGGTA A A GA TGTCA CCA A CA A CGCGCA CA CCGTTTCCGGGGCGCCCG TGGTTA CTCCTTGTTTA A GTTCCTTGGCGCA GA CCGCGCCGGGGTTCA TT GTTCGA TCGGGA A GGGA A CGA GA A GA TTGA CCA A CCA CA CA CGA GGA G CGGTGGGCA TA TCTCA A CGTGCCCTCCCGA CCGTTTTTTGGGA GGGGGC A TTA CA CCCCCA CCCA GA A GGTTA TTA CA TGTTCA CA GGTCGTTCTGCTG GGCA GGTA TCGA CA A TGA TCGA TCCTTCGGTTCGCCTA CCG 64 >HG7 TCCGCTTA TTGA TA TGCTTA A A TTCA GCGGGTA A TCCCGCCTGA CCTGGG GTCGCGA TGGTA GA GTCGCA GGA A CGA CGCA A TA GGGTCGA GGA GCA C CTTCA CA GCGA CGGGCA A CA CA CGA CGGGTCA CGA GGGTTTCTCA A CCA CCGA TTGTCGTGGCGCTCGTCGCCTA GGA CTCA CTTTTA GGCTA A CCGCG A GCA GA A GCA CA CGGGA GGCCA A TGTCTTCCCCGCA CCCCA CA CA TCA T A A GA A GTGTTTGGGGTTGGGGCA A CGA TGCGTGA CA CCCA GGCA GA CG TGCCCTCGGCCGA A TGGCTTCGGGCGCA A CTTGCGTTCA A A GA CTCGA T GA TTCGCGGGA TTCTGCA A TTCA CA CCA A GTA TCGCA TTTCGCTA CGTTC TTCA TCGA TGCGA GA GCCGA GA TA TCCGTTGCCGA GA GTCGTTA TGTA T CA TGGTA A A GA TGTCA CCA A CA A CGCGCA CA CCGTTTCCGGGGCGCCCG TGGTTA CTCCTTGTTTA A GTTCCTTGGCGCA GA CCGCGCCGGGGTTCA TT GTTCGA TCGGGA A GGGA A CGA GA A GA TTGA CCA A CCA CA CA CGA GGA G CGGTGGGCA TA TCTCA A CGTGCCCTCCCA A CCGTTTTTTGGGA GGGGGC A TTA CA CCCCCA CCCA GA A GGTTA TTA CA TGTTCA CA GGTCGTTCTGCTG GGCA GGTA TCGA CA A TGA TCCTTCCGCA GGTTCA CCTA CGG >HG9 TCCGCTTA TTGA TA TGCTTA A A TTCA GCGGA GA A TCCCGCCTGA CCTGG GGTCGCGA TGGTA GA GTCGCA GGA A CGA CGCA A TA GGGTCGA GGA GCA CCTTCA CA GCGA CGGGCA A CA CA CGA CGGGTCA CGA GGGTTTCTCA A CC A CCGA TTGTCGTGGCGCTCGTCGCCTA GGA CTCA CTTTTA GGCTA A CCGC GA GCA GA A GCA CA CGGGA GGCCA A TGTCTTCCCCGCA CCCCA CA CA TCA TA A GA A GTGTTTGGGGTTGGGGCA A CGA TGCGTGA CA CCCA GGCA GA C GTGCCCTCGGCCGA A TGGCTTCGGGCGCA A CTTGCGTTCA A A GA CTCGA TGA TTCGCGGGA TTCTGCA A TTCA CA CCA A GTA TCGCA TTTCGCTA CGTT CTTCA TCGA TGCGA GA GCCGA GA TA TCCGTTGCCGA GA GTCGTTA TGTA TCA TGGTA A A GA TGTCA CCA A CA A CGCGCA CA CCGTTTCCGGGGCGCCC GTGGTTA CTCCTTGTTTA A GTTCCTTGGCGCA GA CCGCGCCGGGGTTCA T TGTTCGA TCGGGA A GGGA A CGA GA A GA TTGA CCA A CCA CA CA CGA GGA GCGGTGGGCA TA TCTCA A CGTGCCCTCCCA A CCGTTTTTTGGGA GGGGG CA TTA CA CCCCCA CCCA GA A GGTTA TTA CA TGTTCA CA GGTCGTTCTGCT GGGCA GGTA TCGA CA A TGA TCCTTCCGCA GGTTCA CCTA CGG 65 >HG11 TCCGCTTA TTGA TA TGCTTA A A TTCA GCGGGTA A TCCCGCCTGA CCTGGG GTCGCGA TGGTA GA GTCGCA GGA A CGA CGCA A TA GGGTCGA GGA GCA C CTTCA CA GCGA CGGGCA A CA CA CGA CGGGTCA CGA GGGTTTCTCA A CCA CCGA TTGTCGTGGCGCTCGTCGCCTA GGA CTCA CTTTTA GGCTA A CCGCG A GCA GA A GCA CA CGGGA GGCCA A TGTCTTCCCCGCA CCCCA CA CA TCA T A A GA A GTGTTTGGGGTTGGGGCA A CGA TGCGTGA CA CCCA GGCA GA CG TGCCCTCGGCCGA A TGGCTTCGGGCGCA A CTTGCGTTCA A A GA CTCGA T GA TTCGCGGGA TTCTGCA A TTCA CA CCA A GTA TCGCA TTTCGCTA CGTTC TTCA TCGA TGCGA GA GCCGA GA TA TCCGTTGCCGA GA GTCGTTA TGTA T CA TGGTA A A GA TGTCA CCA A CA A CGCGCA CA CCGTTTCCGGGGCGCCCG TGGTTA CTCCTTGTTTA A GTTCCTTGGCGCA GA CCGCGCCGGGGTTCA TT GTTCGA TCGGGA A GGGA A CGA GA A GA TTGA CCA A CCA CA CA CA A GGA A CGA GGGGCGTGTCTCTCCGTGCCCTCCCTA CCGA TTGTTGGGA GGGA GG A TTA CTTA CCCCCCCA CA A A GA TA GTA CTTGTTTGCTCGTCGGTCTGCCG GCTGGGTA TCGA TCA TGA TCGA CCTTCCGGTA CGCCTA CGG >HG16 TCCGCTTA TTGA TA TGCTTA A A TTCA GCGGGTA A TCCCGCCTGA CCTGGG GTCGCGA TGGTA GA GTCGCA GGA A CGA CGCA A TA GGGTCGA GGA GCA C CTTCA CA GCGA CGGGCA A CA CA CGA CGGGTCA CGA GGGTTTCTCA A CCA CCGA TTGTCGTGGCGCTCGTCGCCTA GGA CTCA CTTTTA GGCTA A CCGCG A GCA GA A GCA CA CGGGA GGCCA A TGTCTTCCCCGCA CCCCA CA CA TCA T A A GA A GTGTTTGGGGTTGGGGCA A CGA TGCGTGA CA CCCA GGCA GA CG TGCCCTCGGCCGA A TGGCTTCGGGCGCA A CTTGCGTTCA A A GA CTCGA T GA TTCGCGGGA TTCTGCA A TTCA CA CCA A GTA TCGCA TTTCGCTA CGTTC TTCA TCGA TGCGA GA GCCGA GA TA TCCGTTGCCGA GA GTCGTTA TGTA T CA TGGTA A A GA TGTCA CCA A CA A CGCGCA CA CCGTTTCCGGGGCGCCCG TGGTTA CTCCTTGTTTA A GTTCCTTGGCGCA GA CCGCGCCGGGGTTCA TT GTTCGA TCGGGA A GGGA A CGA GA A GA TTGA CCA A CCA CA CA CGA GGA G CGGTGGGCA TA TCTCA A CGTGCCCTCCCA A CCGTTTTTTGGGA GGGGGC A TTA CA CCCCCA CCCA GA A GGTTA TTA CA TGTTCA CA GGTCGTTCTGCTG GGCA GGTA TCGA CA A TGA TCCTTCCGCA GGTTCA CCTA CGG 66 >HG18 TCCGCTTA TTGA TA TGCTTA A A TTCA GCGGGTA A TCCCGCCTGA CCTGGG GTCGCGA TGGTA GA GTCGCA GGA A CGA CGCA A TA GGGTCGA GGA GCA C CTTCA CA GCGA CGGGCA A CA CA CGA CGGGTCA CGA GGGTTTCTCA A CCA CCGA TTGTCGTGGCGCTCGTCGCCTA GGA CTCA CTTTTA GGCTA A CCGCG A GCA GA A GCA CA CGGGA GGCCA A TGTCTTCCCCGCA CCCCA CA CA TCA T A A GA A GTGTTTGGGGTTGGGGCA A CGA TGCGTGA CA CCCA GGCA GA CG TGCCCTCGGCCGA A TGGCTTCGGGCGCA A CTTGCGTTCA A A GA CTCGA T GA TTCGCGGGA TTCTGCA A TTCA CA CCA A GTA TCGCA TTTCGCTA CGTTC TTCA TCGA TGCGA GA GCCGA GA TA TCCGTTGCCGA GA GTCGTTA TGTA T CA TGGTA A A GA TGTCA CCA A CA A CGCGCA CA CCGTTTCCGGGGCGCCCG TGGTTA CTCCTTGTTTA A GTTCCTTGGCGCA GA CCGCGCCGGGGTTCA TT GTTCGA TCGGGA A GGGA A CGA GA A GA TTGA CCA A CCA CA CA CGA GGA G CGGTGGGCA TA TCTCA A CGTGCCCTCCCA A CCGTTTTTTGGGA GGGGGC A TTA CA CCCCCA CCCA GA A GGTTA TTA CA TGTTCA CA GGTCGTTCTGCTG GGCA GGTA TCGA CA A TGA TCCTTCCGCA CGTTCA CCTA CGG >HG22 TGGCGTTA TTGA TA TGCTTA A A TTCA GCGGGTA A TCCCGCCTGA CCTGG GGTCGCGA TGGTA GA GTTGCA GGA A CGA CGCA A TA GGGTCGA GGA GCA CCTTCA CA GCGA CGGGCA A CA CA CGA CGGGTCA CGA GGGTTTCTCA A CC A CCGA TTGTCGTGGCGCTCGTCGCCTA GGA CTCA CTTTTA GGCTA A CCGC GA GCA GA A GCA CA CGGGA GGCCA A TGTCTTCCCCGCA CCCCA CA CA TCA TA A GA A GTGTTTGGGGTTGGGGCA A CGA TGCGTGA CA CCCA GGCA GA C GTGCCCTCGGCCGA A TGGCTTCGGGCGCA A CTTGCGTTCA A A GA CTCGA TGA TTCGCGGGA TTCTGCA A TTCA CA CCA A GTA TCGCA TTTCGCTA CGTT CTTCA TCGA TGCGA GA GCCGA GA TA TCCGTTGCCGA GA GTCGTTA TGTA TCA TGGTA A A GA TGTCA CCA A CA A CGCGCA CA CCGTTTCCGGGGCGCCC GTGGTTA CTCCTTGTTTA A GTTCCTTGGCGCA GA CCGCGCCGGGGTTCA T TGTTCGA TCGGGA A GGGA A CGA GA A GA TTGA CCA A CCA CA CA CGA GGA GCGGTGGGCA TA TCTCA A CGTGCCCTCCCA A CCGTTTTTTGGGA GGGGG CA TTA CA CCCCCA CCCA GA A GGTTA TTA CA TGTTCA CA GGTCGTTCTGCT GGGCA GGTA TCGA CA A TGA TCCTTCCGCA GGTCA CCCTA CGG 67 >LCa01 TCCGCTTA TTGA TA TGCTTA A A TTCA GCGGGTA A TCCCGCCTGA CCTGGG GTCGCGA TGGTA GA GTCGCA GGA A CGA CGCA A TA GGGTCGA GGA GCA C CTTCA CA GCGA CGGGCA A CA CA CGA CGGGTCA CGA GGGTTTCTCA A CCA CCGA TTGTCGTGGCGCTCGTCGCCTA GGA CTCA CTTTTA GGCTA A CCGCG A GCA GA A GCA CA CGGGA GGCCA A TGTCTTCCCCGCA CCCCA CA CA TCA T A A GA A GTGTTTGGGGTTGGGGCA A CGA TGCGTGA CA CCCA GGCA GA CG TGCCCTCGGCCGA A TGGCTTCGGGCGCA A CTTGCGTTCA A A GA CTCGA T GA TTCGCGGGA TTCTGCA A TTCA CA CCA A GTA TCGCA TTTCGCTA CGTTC TTCA TCGA TGCGA GA GCCGA GA TA TCCGTTGCCGA GA GTCGTTA TGTA T CA TGGTA A A GA TGTCA CCA A CA A CGCGCA CA CCGTTTCCGGGGCGCCCG TGGTTA CTCCTTGTTTA A GTTCCTTGGCGCA GA CCGCGCCGGGGTTCA TT GTTCGA TCGGGA A GGGA A CGA GA A GA TTGA CCA A CCA CA CA CGA GGA G CGGTGGGCA TA TCTCA A CGTGCCCTCCCA A CCGTTTTTTGGGA GGGGGC A TTA CA CCCCCA CCCA GA A GGTTA TTA CA TGTTCA CA GGTCGTTCTGCTG GGCA GGTA TCGA CA A TGA TCCTTCCGCA GGTTCA CCTA CGG >LCa03 TCCGCTTA TTGA TA TGCTTA A A TTCA GCGGGTA A TCCCGCCTGA CCTGGG GTCGCGA TGGTA GA GTCGCA GGA A CGA CGCA A TA GGGTCGA GGA GCA C CTTCA CA GCGA CGGGCA A CA CA CGA CGGGTCA CGA GGGTTTCTCA A CCA CCGA TTGTCGTGGCGCTCGTCGCCTA GGA CTCA CTTTTA GGCTA A CCGCG A GCA GA A GCA CA CGGGA GGCCA A TGTCTTCCCCGCA CCCCA CA CA TCA T A A GA A GTGTTTGGGGTTGGGGCA A CGA TGCGTGA CA CCCA GGCA GA CG TGCCCTCGGCCGA A TGGCTTCGGGCGCA A CTTGCGTTCA A A GA CTCGA T GA TTCGCGGGA TTCTGCA A TTCA CA CCA A GTA TCGCA TTTCGCTA CGTTC TTCA TCGA TGCGA GA GCCGA GA TA TCCGTTGCCGA GA GTCGTTA TGTA T CA TGGTA A A GA TGTCA CCA A CA A CGCGCA CA CCGTTTCCGGGGCGCCCG TGGTTA CTCCTTGTTTA A GTTCCTTGGCGCA GA CCGCGCCGGGGTTCA TT GTTCGA TCGGGA A GGGA A CGA GA A GA TTGA CCA A CCA CA CA CGA GGA G CGGTGGGCA TA TCTCA A CGTGCCCTCCCA A CCGTTTTTTGGGA GGGGGC A TTA CA CCCCCA CCCA GA A GGTTA TTA CA TGTTCA CA GGTCGTTCTGCTG GGCA GGTA TCGA CA A TGA TCCTTCCGCA GGTTCA CCTA CGG 68 >LCa04 TCCGCTTA TTGA TA TGCTTA A A TTCA GCGGGTA A TCCCGCCTGA CCTGGG GTCGCGA TGGTA GA GTCGCA GGA A CGA CGCA A TA GGGTCGA GGA GCA C CTTCA CA GCGA CGGGCA A CA CA CGA CGGGTCA CGA GGGTTTCTCA A CCA CCGA TTGTCGTGGCGCTCGTCGCCTA GGA CTCA CTTTTA GGCTA A CCGCG A GCA GA A GCA CA CGGGA GGCCA A TGTCTTCCCCGCA CCCCA CA CA TCA T A A GA A GTGTTTGGGGTTGGGGCA A CGA TGCGTGA CA CCCA GGCA GA CG TGCCCTCGGCCGA A TGGCTTCGGGCGCA A CTTGCGTTCA A A GA CTCGA T GA TTCGCGGGA TTCTGCA A TTCA CA CCA A GTA TCGCA TTTCGCTA CGTTC TTCA TCGA TGCGA GA GCCGA GA TA TCCGTTGCCGA GA GTCGTTA TGTA T CA TGGTA A A GA TGTCA CCA A CA A CGCGCA CA CCGTTTCCGGGGCGCCCG TGGTTA CTCCTTGTTTA A GTTCCTTGGCGCA GA CCGCGCCGGGGTTCA TT GTTCGA TCGGGA A GGGA A CGA GA A GA TTGA CCA A CCA CA CA CGA GGA G CGGTGGGCA TA TCTCA A CGTGCCCTCCCA A CCGTTTTTTGGGA GGGGGC A TTA CA CCCCCA CCCA GA A GGTTA TTA CA TGTTCA CA GGTCGTTCTGCTG GGCA GGTA TCGA CA A TGA TCCTTCCGCA GGTTCA CCTA CGG >LCa10 TCCGCTTA TTGA TA TGCTTA A A TTCA GCGGGTA A TCCCGCCTGA CCTGGG GTCGCGA TGGTA GA GTCGCA GGA A CGA CGCA A TA GGGTCGA GGA GCA C CTTCA CA GCGA CGGGCA A CA CA CGA CGGGTCA CGA GGGTTTCTCA A CCA CCGA TTGTCGTGGCGCTCGTCGCCTA GGA CTCA CTTTTA GGCTA A CCGCG A GCA GA A GCA CA CGGGA GGCCA A TGTCTTCCCCGCA CCCCA CA CA TCA T A A GA A GTGTTTGGGGTTGGGGCA A CGA TGCGTGA CA CCCA GGCA GA CG TGCCCTCGGCCGA A TGGCTTCGGGCGCA A CTTGCGTTCA A A GA CTCGA T GA TTCGCGGGA TTCTGCA A TTCA CA CCA A GTA TCGCA TTTCGCTA CGTTC TTCA TCGA TGCGA GA GCCGA GA TA TCCGTTGCCGA GA GTCGTTA TGTA T CA TGGTA A A GA TGTCA CCA A CA A CGCGCA CA CCGTTTCCGGGGCGCCCG TGGTTA CTCCTTGTTTA A GTTCCTTGGCGCA GA CCGCGCCGGGGT TCA TT GTTCGA TCGGGA A GGGA A CGA GA A GA TTGA CCA A CCA CCCA CA CA CA A CGA GCGGTGTGTA TA TCTCA GCGTGCCCTCCCGA CCGTTTTTTGGGA GG GGGCA TTA CCCCCCCA CA CA GA A A GTTA TTA CA TGTTCA CA GGTCGTTC TGCTGGGCA GGTA TCGA CA A TGA TCCTTCCGCA GGTTCA CCTA CGG 69 >LCa12 TCCGCTTA TTGA TA TGCTTA A A TTCA GCGGGTA A TCCCGCCTGA CCTGGG GTCGCGA TGGTA GA GTCGCA GGA A CGA CGCA A TA GGGTCGA GGA GCA C CTTCA CA GCGA CGGGCA A CA CA CGA CGGGTCA CGA GGGTTTCTCA A CCA CCGA TTGTCGTGGCGCTCGTCGCCTA GGA CTCA CTTTTA GGCTA A CCGCG A GCA GA A GCA CA CGGGA GGCCA A TGTCTTCCCCGCA CCCCA CA CA TCA T A A GA A GTGTTTGGGGTTGGGGCA A CGA TGCGTGA CA CCCA GGCA GA CG TGCCCTCGGCCGA A TGGCTTCGGGCGCA A CTTGCGTTCA A A GA CTCGA T GA TTCGCGGGA TTCTGCA A TTCA CA CCA A GTA TCGCA TTTCGCTA CGTTC TTCA TCGA TGCGA GA GCCGA GA TA TCCGTTGCCGA GA GTCGTTA TGTA T CA TGGTA A A GA TGTCA CCA A CA A CGCGCA CA CCGTTTCCGGGGCGCCCG TGGTTA CTCCTTGTTTA A GTTCCTTGGCGCA GA CCGCGCCGGGGTTCA TT GTTCGA TCGGGA A GGGA A CGA GA A GA TTGA CCA A CCA CA CA CGA GGA G CGGTGGGCA TA TCTCA A CGTGCCCTCCCA A CCGTTTTTTGGGA GGGGGC A TTA CA CCCCCA CCCA GA A GGTTA TTA CA TGTTCA CA GGTCGTTCTGCTG GGCA GGTA TCGA CA A TGA TCCTTCCGCA GGTTCA CCTA CGG >LC3 TCCGCTTA TTGA TA TGCTTA A A TTCA GA GTGA A TTCCCGCCTGA CCTGGG GTCGCGA TGGTA GA GTCGCA GGA A CGA CGCA A TA GGGTCGA GGA GCA C CTTCA CA GCGA CGGGCA A CA CA CGA CGGGTCA CGA GGGTTTCTCA A CCA CCGA TTGTCGTGGCGCTCGTCGCCTA GGA CTCA CTTTTA GGCTA A CCGCG A GCA GA A GCA CA CGGGA GGCCA A TGTCTTCCCCGCA CCCCA CA CA TCA T A A GA A GTGTTTGGGGTTGGGGCA A CGA TGCGTGA CA CCCA GGCA GA CG TGCCCTCGGCCGA A TGGCTTCGGGCGCA A CTTGCGTTCA A A GA CTCGA T GA TTCGCGGGA TTCTGCA A TTCA CA CCA A GTA TCGCA TTTCGCTA CGTTC TTCA TCGA TGCGA GA GCCGA GA TA TCCGTTGCCGA GA GTCGTTA TGTA T CA TGGTA A A GA TGTCA CCA A CA A CGCGCA CA CCGTTTCCGGGGCGCCCG TGGTTA CTCCTTGTTTA A GTTCCTTGGCGCA GA CCGCGCCGGGGTTCA TT GTTCGA TCGGGA A GGGA A CGA GA A GA TTGA CCA A CCA CA CA CGA GGA G CGGTGGGCA TA TCTCA A CGTGCCCTCCCA A CCGTTTTTTGGGA GGGGGC A TTA CA CCCCCA CCCA GA A GGTTA TTA CA TGTTCA CA GGTCGTTCTGCTG GGCA GGTA TCGA CA A TGA TCCTTCCGCA GGCA CCCTA A CGG 70 >LC14 TCCGCTTA TTGA TA TGCTTA A A TTCA GCGGGTA A TCCCGCCTGA CCTGGG GTCGCGA TGGTA GA GTCGCA GGA A CGA CGCA A TA GGGTCGA GGA GCA C CTTCA CA GCGA CGGGCA A CA CA CGA CGGGTCA CGA GGGTTTCTCA A CCA CCGA TTGTCGTGGCGCTCGTCGCCTA GGA CTCA CTTTTA GGCTA A CCGCG A GCA GA A GCA CA CGGGA GGCCA A TGTCTTCCCCGCA CCCCA CA CA TCA T A A GA A GTGTTTGGGGTTGGGGCA A CGA TGCGTGA CA CCCA GGCA GA CG TGCCCTCGGCCGA A TGGCTTCGGGCGCA A CTTGCGTTCA A A GA CTCGA T GA TTCGCGGGA TTCTGCA A TTCA CA CCA A GTA TCGCA TTTCGCTA CGTTC TTCA TCGA TGCGA GA GCCGA GA TA TCCGTTGCCGA GA GTCGTTA TGTA T CA TGGTA A A GA TGTCA CCA A CA A CGCGCA CA CCGTTTCCGGGGCGCCCG TGGTTA CTCCTTGTTTA A GTTCCTTGGCGCA GA CCGCGCCGGGGTTCA TT GTTCGA TCGGGA A GGGA A CGA GA A GA TTGA CCA A CCA CA CA CGA GGA G CGGTGGGCA TA TCTCA A CGTGCCCTCCCA A CCGTTTTTTGGGA GGGGGC A TTA CA CCCCCCA CCCCA GA A GGTTA TTA CA TGTTCA CA GGTCGTTCTGC TGGGCA GGTA TCGA CA A TGA TCCTTCCGCA GGTTCA CCTA CGG >LC18 TCCGCTTA TTGA TA TGCTTA A A TTCA GCGTGA A A TCCCGCCTGA CTGA GG GTCGCGA TGGTA GA GTCGCA GGA A CGA CGCA A TA GGGTCGA GGA GCA C CTTCA CA GCGA CGGGCA A CA CA CGA CGGGTCA CGA GGGTTTCTCA A CCA CCGA TTGTCGTGGCGCTCGTCGCCTA GGA CTCA CTTTTA GGCTA A CCGCG A GCA GA A GCA CA CGGGA GGCCA A TGTCTTCCCCGCA CCCCA CA CA TCA T A A GA A GTGTTTGGGGTTGGGGCA A CGA TGCGTGA CA CCCA GGCA GA CG TGCCCTCGGCCGA A TGGCTTCGGGCGCA A CTTGCGTTCA A A GA CTCGA T GA TTCGCGGGA TTCTGCA A TTCA CA CCA A GTA TCGCA TTTCGCTA CGTTC TTCA TCGA TGCGA GA GCCGA GA TA TCCGTTGCCGA GA GTCGTTA TGTA T CA TGGTA A A GA TGTCA CCA A CA A CGCGCA CA CCGTTTCCGGGGCGCCCG TGGTTA CTCCTTGTTTA A GTTCCTTGGCGCA GA CCGCGCCGGGGTTCA TT GTTCGA TCGGGA A GGGA A CGA GA A GA TTGA CCA A CCA CA CA CGA GGA G CGGTGGGCA TA TCTCA A CGTGCCCTCCCA A CCGTTTTTTGGGA GGGGGC A TTA CA CCCCCA CCCA GA A GGTTA TTA CA TGTTCA CA GGTCGTTCTGCTG GGCA GGTA TCGA CA A TGA TCCTTCCGCA GGTTCA CCTA CGG 71 >LC23 TCCGCTTA TTGA TA TGCTTA A A TTCA GCGGGTA A TCCCGCCTGA TCTGGG GTCGCGA TGGTA GA GTCGCA GGA A CGA CGCA A TA GGGTCGA GGA GCA C CTTCA CA GCGA CGGGCA A CA CA CGA CGGGTCA CGA GGGTTTCTCA A CCA CCGA TTGTCGTGGCGCTCGTCGCCTA GGA CTCA CTTTTA GGCTA A CCGCG A GCA GA A GCA CA CGGGA GGCCA A TGTCTTCCCCGCA CCCCA CA CA TCA T A A GA A GTGTTTGGGGTTGGGGCA A CGA TGCGTGA CA CCCA GGCA GA CG TGCCCTCGGCCGA A TGGCTTCGGGCGCA A CTTGCGTTCA A A GA CTCGA T GA TTCGCGGGA TTCTGCA A TTCA CA CCA A GTA TCGCA TTTCGCTA CGTTC TTCA TCGA TGCGA GA GCCGA GA TA TCCGTTGCCGA GA GTCGTTA TGTA T CA TGGTA A A GA TGTCA CCA A CA A CGCGCA CA CCGTTTCCGGGGCGCCCG TGGTTA CTCCTTGTTTA A GTTCCTTGGCGCA GA CCGCGCCGGGGTTCA TT GTTCGA TCGGGA A GGGA A CGA GA A GA TTGA CCA A CCA CA CA CGA GGA G CGGTGGGCA TA TCTCA A CGTGCCCTCCCA A CCGTTTTTTGGGA GGGGGC A TTA CA CCCCCA CCCA GA A GGTTA TTA CA TGTTCA CA GGTCGTTCTGCTG GGCA GGTA TCGA CA A TGA TCCTTCCGCA GGTTCA CCTA CGG >LC25 TCCGCTTA TTGA TA TGCTTA A A TTCA GCGGGTA A TCCCGCCTGA CCTGGG GTCGCGA TGGTA GA GTCGCA GGA A CGA CGCA A TA GGGTCGA GGA GCA C CTTCA CA GCGA CGGGCA A CA CA CGA CGGGTCA CGA GGGTTTCTCA A CCA CCGA TTGTCGTGGCGCTCGTCGCCTA GGA CTCA CTTTTA GGCTA A CCGCG A GCA GA A GCA CA CGGGA GGCCA A TGTCTTCCCCGCA CCCCA CA CA TCA T A A GA A GTGTTTGGGGTTGGGGCA A CGA TGCGTGA CA CCCA GGCA GA CG TGCCCTCGGCCGA A TGGCTTCGGGCGCA A CTTGCGTTCA A A GA CTCGA T GA TTCGCGGGA TTCTGCA A TTCA CA CCA A GTA TCGCA TTTCGCTA CGTTC TTCA TCGA TGCGA GA GCCGA GA TA TCCGTTGCCGA GA GTCGTTA TGTA T CA TGGTA A A GA TGTCA CCA A CA A CGCGCA CA CCGTTTCCGGGGCGCCCG TGGTTA CTCCTTGTTTA A GTTCCTTGGCGCA GA CCGCGCCGGGGTTCA TT GTTCGA TCGGGA A GGGA A CGA GA A GA TTGA CCA A CCA CA CA CGA GGA G CGGTGGGCA TA TCTCA A CGTGCCCTCCCA A CCGTTTTTTGGGA GGGGGC A TTA CA CCCCCA CCCA GA A GGTTA TTA CA TGTTCA CA GGTCGTTCTGCTG GGCA GGTA TCGA CA A TGA TCCTTCCGCA GGTTCA CCTA CGG 72 >LC37 TCCGCTTA TTGA TA TGCTTA A A TTCA GCGGGTA A TCCCGCCTGA CCTGGG GTCGCGA TGGTA GA GTCGCA GGA A CGA CGCA A TA GGGTCGA GGA GCA C CTTCA CA GCGA CGGGCA A CA CA CGA CGGGTCA CGA GGGTTTCTCA A CCA CCGA TTGTCGTGGCGCTCGTCGCCTA GGA CTCA CTTTTA GGCTA A CCGCG A GCA GA A GCA CA CGGGA GGCCA A TGTCTTCCCCGCA CCCCA CA CA TCA T A A GA A GTGTTTGGGGTTGGGGCA A CGA TGCGTGA CA CCCA GGCA GA CG TGCCCTCGGCCGA A TGGCTTCGGGCGCA A CTTGCGTTCA A A GA CTCGA T GA TTCGCGGGA TTCTGCA A TTCA CA CCA A GTA TCGCA TTTCGCTA CGTTC TTCA TCGA TGCGA GA GCCGA GA TA TCCGTTGCCGA GA GTCGTTA TGTA T CA TGGTA A A GA TGTCA CCA A CA A CGCGCA CA CCGTTTCCGGGGCGCCCG TGGTTA CTCCTTGTTTA A GTTCCTTGGCGCA GA CCGCGCCGGGGTTCA TT GTTCGA TCGGGA A GGGA A CGA GA A GA TTGA CCA A CCA CA CA CGA GGA G CGGTGGGCA TA TCTCA A CGTGCCCTCCCA A CCGTTTTTTGGGA GGGGGC A TTA CA CCCCCA CCCA GA A GGTTA TTA CA TGTTCA CA GGTCGTTCTGCTG GGCA GGTA TCGA CA A TGA TCCTTCCGCA GGTTCA CCTA CGG >LC42 TCCGCTTA TTGA TA TGCTTA A A TTCA GCGA GTA A TCCCGCCTGA CCTGGG GTCGCGA TGGTA GA GTCGCA GGA A CGA CGCA A TA GGGTCGA GGA GCA C CTTCA CA GCGA CGGGCA A CA CA CGA CGGGTCA CGA GGGTTTCTCA A CCA CCGA TTGTCGTGGCGCTCGTCGCCTA GGA CTCA CTTTTA GGCTA A CCGCG A GCA GA A GCA CA CGGGA GGCCA A TGTCTTCCCCGCA CCCCA CA CA TCA T A A GA A GTGTTTGGGGTTGGGGCA A CGA TGCGTGA CA CCCA GGCA GA CG TGCCCTCGGCCGA A TGGCTTCGGGCGCA A CTTGCGTTCA A A GA CTCGA T GA TTCGCGGGA TTCTGCA A TTCA CA CCA A GTA TCGCA TTTCGCTA CGTTC TTCA TCGA TGCGA GA GCCGA GA TA TCCGTTGCCGA GA GTCGTTA TGTA T CA TGGTA A A GA TGTCA CCA A CA A CGCGCA CA CCGTTTCCGGGGCGCCCG TGGTTA CTCCTTGTTTA A GTTCCTTGGCGCA GA CCGCGCCGGGGTTCA TT GTTCGA TCGGGA A GGGA A CGA GA A GA TTGA CCA A CCA CA CA CGA GGA G CGGTGGGCA TA TCTCA A CGTGCCCTCCCA A CCGTTTTTTGGGA GGGGGC A TTA CA CCCCCA CCCA GA A GGTTA TTA CA TGTTCA CA GGTCGTTCTGCTG GGCA GGTA TCGA CA A TGA TCCTTCCGCA GGTTCA CCTA CGG 73 >LC48 TCCGCTTA TTGA TA TGCTTA A A TTCA GCGGGTA A TCCCGCCTGA CCTGGG GTCGCGA TGGTA GA GTCGCA GGA A CGA CGCA A TA GGGTCGA GGA GCA C CTTCA CA GCGA CGGGCA A CA CA CGA CGGGTCA CGA GGGTTTCTCA A CCA CCGA TTGTCGTGGCGCTCGTCGCCTA GGA CTCA CTTTTA GGCTA A CCGCG A GCA GA A GCA CA CGGGA GGCCA A TGTCTTCCCCGCA CCCCA CA CA TCA T A A GA A GTGTTTGGGGTTGGGGCA A CGA TGCGTGA CA CCCA GGCA GA CG TGCCCTCGGCCGA A TGGCTTCGGGCGCA A CTTGCGTTCA A A GA CTCGA T GA TTCGCGGGA TTTTGCA A TTCA CA CCA A GTA TCGCA TTTCGCTA CGTTC TTCA TCGA TGCGA GA GCCGA GA TA TCCGTTGCCGA GA GTCGTTA TGTA T CA TGGTA A A GA TGTCA CCA A CA A CGCGCA CA CCGTTTCCGGGGCGCCCG TGGTTA CTCCTTGTTTA A GTTCCTTGGCGCA GA CCGCGCCGGGGTTCA TT GTTCGA TCGGGA A GGGA A CGA GA A GA TTGA CCA A CCA CA CA CGA GGA G CGGTGGGCA TA TCTCA A CGTGCCCTCCCA A CCGTTTTTTGGGA GGGGGC A TTA CA CCCCCA CCCA GA A GGTTA TTA CA TGTTCA CA GGTCGTTCTGCTG GGCA GGTA TCGA CA A TGA TCCTTCCA CCGGCCCA CTTTCGG >LC52 TCCGCTTA TTGA TA TGCTTA A A TTCGGCGGGTA A TCCCGCCTGA CCTGGG GTCGCGA TGGTA GA GTCGCA GGA A CGA CGCA A TA GGGTCGA GGA GCA C CTTCCCA GCGA CGGGCA A CA CA CGA CGGGTCA CGA GGGTTTCTCA A CCA CCGA TTGTCGTGGCGCTCGTCGCCTA GGA CTCA CTTTTA GGCTA A CCGCG A GCA GA A GCA CA CGGGA GGCCA A TGTCTTCCCCGCA CCCCA CA CA TCA T A A GA A GTGTTTGGGGTTGGGGCA A CGA TGCGTGA CA CCCA GGCA GA CG TGCCCTCGGCCGA A TGGCTTCGGGCGCA A CTTGCGTTCA A A GA CTCGA T GA TTCGCGGGA TTCTGCA A TA GA CA CCA A GTA TCGCA TTTCGCTA CGTT CTTCA TCA A TGCGA GA GCCA A TA TCCGTTGCCA A GA GTCGTTA TGTA TC A TGGTA A A GA TGTCA CCA A CA A CGCGCA CA CCGTTTCCGGGGCGCCCGT GGTTA CTCCTTGTTTA A GTTCCTTGGCGCA GA CCGCGCCGGGGTTCA TTG TTCGA TCGGGA A GGGA A CGA GA A GA TTGA CCA A CCA CA CA CGA GGA GC GGTGGGCA TA TCTCA A CGTGCCCTCCCA A CCGTTTTTTGGGA GGGGGCA TTA CA CCCCCA CCCA GA A GGTTA TTA CA TGTTCA CA GGTCGTTCTGCTGG GCA GGTA TCGA CA A TGA TCCTTCCGCA GGTTCA CCTA CGG 74 >LC55 TCCGCTTA TTGA TA TGCTTA A A TTCA GCGGGTA A TCCCGCCTGA CCTGGG GTCGCGA TGGTA GA GTCGCA GGA A CGA CGCA A TA GGGTCGA GGA GCA C CTTCA CA GCGA CGGGCA A CA CA CGA CGGGTCA CGA GGGTTTCTCA A CCA CCGA TTGTCGTGGCGCTCGTCGCCTA GGA TTCA CTTTTA GGCTA A CCGCG A GCA GA A GCA CA CGGGA GGCCA A TGTA TTCCCCGCA CCCCA CA CA TCA T A A GA A GTGTTTGGGGTTGGGGCA A CGA TGCGTGA CA CCCA GGCA GA CG TGCCCTCGGCCGA A TGGCTTCGGGCGCA A CTTGCGTTCA A A GA CTCGA T GA TTCGCGGGA TTCTGCA A TTCA CA CCA A GTA TCGCA TTTCGCTA CGTTC TTCA TCGA TGCGA GA GCCGA GA TA TCCGTTGCCGA GA GTCGTTA TGTA T CA TGGTA A A GA TGTCA CCA A CA A CGCGCA CA CCGTTTCCGGGGCGCCCG TGGTTA CTCCTTGTTTA A GTTCCTTGGCGCA GA CCGCGCCGGGGTTCA T T GTTCGA TCGGGA A GGGA A CGA GA A GA TTGA CCA A CCA CA CA CGA GGA G CGGTGGGCA TA TCTCA A CGTGCCCTCCCA A CCGTTTTTTGGGA GGGGGC A TTA CCCCCCCCCCA A GGTTA TTA CA TGTTTCCA GGTCTTTCTGCTGGGC A GGTA TCCA CCA TGA TCCTTCCGCA GGTCCCCGTA CGG >LC65 TCCGCTTTTTGA TCCGCTTA A TTCA GCGGGA A A TCCCGCCTGA CCTGGGG TCGCGA TGGTA GA GTCGCA A GA A CGA CGCA A TA GGGTCA A GGA GCA CC TTCA CA GCGA CGGGCA A CA CA CGA CGGGTCA CGA GGGTTTCTCA A CCA C CGA TTGTCGTGGCGCTCGTCGCCTA GGA CTCA CTTTTA GGCTA A CCGCG A GGA GA A GCA CA CGGGA A GCCA A TGTCTTCCCCGCA CCCCA CA CA TCA T A A GA A GTGTTTGGGGTTGGGGCA A CGA TGCGTGA CA CCCA GGCA GA CG TGCCCTCCGA A TGGCTTCGGGCGCA A CTTGCGTTCA A A GA CTCGA TGA T TCGCGGGA TTCTGCA A TTCA CA CCA A GTA TCGCA TTTCGCTA CGTTCTTC A TCGA TGCGA GA GCCGA GA TA TCCGTTGCCGA GA GTCGTTA TGTA TCA T GGTA A A GA TGTCA CCA A CA A CGCGCA CA CCGTTTCCGGGGCGCCCGTGG TTA CTCCTTGTTTA A GTTCCTTGGCGCA GA CCGCGCCGGGGTTCA TTGTT CGA TCGGGA A GGGA A CGA GA A GA TTGA CCA A CCA CA CA CGA GGA GCGG TGGGCA TA TCTCA A CGTGCCCTCCCA A CCGTTTTTTGGGA GGGGGCA TT A CCCCCCCA CCCA GA A GGTTA TTA CA TGTTCA CA GGTCGTTCTGCTGGG CA GGTA TCGA CA A TGA TCCTTCCGCA GGTTCA CCTA CGG 75 >LC68 TCCGCTTA TTGA TA TGCTTA A A TTCA GCGGGTA A TCCCGCCTGA A CTGGG GTCGCGA TGGTA GA GTCGCA GGA A CGA CGCA A TA GGGTCGA GGA GCA C CTTCA CA GCGA CGGGCA A CA CA CGA CGGGTCA CGA GGGTTTCTCA A CCA CCGA TTGTCGTGGCGCTCGTCGCCTA GGA CTCA CTTTTA GGCTA A CCGCG A GCA GA A GCA CA CGGGA GGCCA A TGTCTTCCCCGCA CCCCA CA CA TCA T A A GA A GTGTTTGGGGTTGGGGCA A CGA TGCGTGA CA CCCA GGCA GA CG TGCCCTCGGCCGA A TGGCTTCGGGCGCA A CTTGCGTTCA A A GA CTCGA T GA TTCGCGGGA TTCTGCA A TTCA CA CCA A GTA TCGCA TTTCGCTA CGTTC TTCA TCGA TGCGA GA GCCGA GA TA TCCGTTGCCGA GA GTCGTTA TGTA T CA TGGTA A A GA TGTCA CCA A CA A CGCGCA CA CCGTTTCCGGGGCGCCCG TGGTTA CTCCTTGTTTA A GTTCCTTGGCGCA GA CCGCGCCGGGGTTCA TT GTTCGA TCGGGA A GGGA A CGA GA A GA TTGA CCA A CCA CA CA CGA GGA G CGGTGGGCA TA TCTCA A CGTGCCCTCCCA A CCGTTTTTTGGGA GGGGGC A TTA CA CCCCCA CCCA GA A GGTTA TTA CA TGTTCA CA GGTCGTTCTGCTG GGCA GGTA TCGA CA A TGA TCCTTCCGCA GGTTCA CCTA CGG ...BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Nguyễn Thị Thu Thủy NGHIÊN CỨU SỬ DỤNG CHỈ THỊ ITS ĐỂ ĐÁNH GIÁ QUAN HỆ DI TRUYỀN VÀ NHẬN DẠNG MỘT SỐ MẪU GIỐNG CÂY ÓC CHÓ THU. .. ích phục vụ cho nghiên cứu giảng dạy Mục đích nghiên cứu Xác định quan hệ di truyền, mức độ đa dạng Óc chó thu thập tỉnh miền núi phía Bắc Xác định đặc trưng trình tự ITS số mẫu Ĩc chó phục vụ cơng... Ĩc chó 23 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 VẬT LIỆU Vật liệu sử dụng nghiên cứu 26 mẫu non Óc chó thu thập tỉnh miền núi phía Bắc gồm mẫu thu c huyện Đồng Văn, tỉnh Hà Giang; mẫu