ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA HÓA HỌC  +  TRƢƠNG NHƢ Ý NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG CAO CHIẾT CHLOROFORM TỪ LÁ BẰNG LĂNG NƢỚC (LAGERSTROEMIA SPECIOSA (L.)PERS.) Ở KON TUM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Đà Nẵng - 2018 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA HÓA HỌC  +  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG CAO CHIẾT CHLOROFORM TỪ LÁ BẰNG LĂNG NƢỚC (LAGERSTROEMIA SPECIOSA (L.)PERS.) Ở KON TUM SVTH: TRƢƠNG NHƢ Ý LỚP: 14SHH GVHD: GS.TS ĐÀO HÙNG CƢỜNG Đà Nẵng - 2018 Đà Nẵng - 2018 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƢỜNG ĐHSP Độc lập – Tự – Hạnh phúc KHOA HÓA NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Trƣơng Nhƣ Ý Lớp : 14SHH Tên đề tài: “Nghiên cứu chiết tách xác định thành phần hóa học cao chiết Bằng lăng nƣớc (Lagerstroemia speciosa(L.)Pers.) Kon Tum” Nguyên liệu, dụng cụ thiết bị - Nguyên liệu: Quả Bằng lăng nƣớc thu hái tỉnh Kon Tum - Dụng cụ, thiết bị: chiết chƣng ninh, bình tam giác, cột sắc ký, mỏng sắc ký, đèn UV, cân phân tích, bếp cách thủy, tủ sấy, lò nung… Nội dung nghiên cứu - Thu thập, tổng hợp, phân tích tài liệu, tƣ liệu nguồn nguyên liệu, thành phần hóa học, ứng dụng Bằng Lăng nƣớc - Tổng hợp tài liệu phƣơng pháp lấy mẫu, xử lý mẫu; phƣơng pháp chiết tách, định tính phân lập hợp chất từ thực vật - Nghiên cứu phƣơng pháp phổ để xác định thành phần hóa học, định danh xác định cấu trúc Giáo viên hƣớng dẫn: GS.TS Đào Hùng Cƣờng Ngày giao đề tài: 08/12/2017 Ngày hoàn thành: 23/04/2018 Chủ nhiệm khoa Giáo viên hƣớng dẫn PGS.TS Lê Tự Hải GS.TS Đào Hùng Cƣờng Sinh viên hoàn thành nộp báo cáo cho Khoa ngày … tháng 04 năm 2018 Kết điểm đánh giá:…… Đà Nẵng, ngày … tháng … năm 2018 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG LỜI CẢM ƠN Để hồn thành tốt đề tài khóa luận tốt nghiệp này, em xin gửi lời cảm ơn đến Thầy Đào Hùng Cƣờng tận tình hƣớng dẫn, hỗ trợ giúp đỡ suốt trình thực đề tài hoàn thành báo cáo Em xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô giảng dạy công tác phòng thí nghiệm khoa Hóa, đại học Sƣ phạm Đà Nẵng, đặc biệt cô Võ Thị Kiều Oanh thầy Trần Mạnh Lục hỗ trợ kiến thức, sở vật chất, dụng cụ thí nghiệm giúp em hồn thành tốt khóa luận tốt nghiệp Đà Nẵng, ngày tháng năm 2018 Sinh viên thực DANH MỤC CÁC CHỮ CÁI VIẾT TẮT GC : Gas Chromatography MS : Mass Spectrometry STT : Số thứ tự RT: Thời gian lƣu MỤC LỤC MỞ ĐẦU…………………………………………………………………………….1 Tính cấp thiết đề tài Đối tƣợng mục đích nghiên cứu 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 2.2 Mục đích nghiên cứu Nội dung nghiên cứu 3.1 Phƣơng pháp nghiên cứu lý thuyết 3.2 Phƣơng pháp nghiên cứu thực nghiệm Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Bố cục đề tài CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 GIỚI THIỆU VỀ HỌ BẰNG LĂNG VÀ CHI TỬ VI 1.1.1 Họ Bằng Lăng 1.1.2 Thực vật chi Tử vi 1.2 ĐẠI CƢƠNG VỀ CÂY BẰNG LĂNG NƢỚC 1.2.1 Tên gọi 1.2.2 Mô tả thực vật 1.2.3 Phân bố cách trồng 1.3 GIÁ TRỊ SỬ DỤNG CỦA CÂY BĂNG LĂNG NƢỚC 1.3.1 Dùng làm thuốc chữa bệnh 1.3.2 Tác dụng dƣợc lý 1.3.3 Trồng làm cảnh 1.4 NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA HỌ BẰNG LĂNG 1.4.1 Các cơng trình nghiên cứu giới 1.4.2 Các cơng trình nghiên cứu Việt Nam CHƢƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU………………………11 2.1 NGUYÊN LIỆU, DỤNG CỤ, HÓA CHẤT VÀ SƠ ĐỒ NGHIÊN CỨU 11 2.1.1 Thu mẫu xử lý mẫu nguyên liệu 11 2.1.2 Khảo sát khối lƣợng cao chiết cồn loại nguyên liệu 11 2.1.3 Định tính số nhóm chất dịch chiết cồn 12 2.1.4 Dụng cụ, hóa chất thiết bị nghiên cứu 14 2.2 CHIẾT RẮN–LỎNG NGUYÊN LIỆU VÀ CHIẾT LỎNG–LỎNG VỚI DUNG MÔI CHLOROFORM……………………………………………………………16 2.3 PHÂN LẬP PHÂN ĐOẠN CAO TỔNG CHLOROFORM 19 2.3.1 Sắc ký mỏng 19 2.3.2 Sắc ký cột 23 2.3.3 Chạy sắc ký mỏng để lựa chọn dung môi chạy sắc ký cột 26 2.3.4 Tiến hành sắc ký cột cao chloroform 27 2.4 PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ KHÍ KẾT HỢP KHỐI PHỔ (GC-MS) 30 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN………………………………………………….33 3.1 KẾT QUẢ CHIẾT TÁCH CÁC HỢP CHẤT TRONG NGUYÊN LIỆU BẰNG PHƢƠNG PHÁP NGÂM DẦM VÀ CHIẾT PHÂN BỐ LỎNG – LỎNG… ……42 3.1.1 Kết điều chế tổng cao ethanol phƣơng pháp ngâm dầm… …42 3.1.2 Kết chiết phân bố cao ethanol dung môi chloroform……… 34 3.2 KẾT QUẢ ĐỊNH TÍNH THÀNH PHẦN HĨA HỌC TRONG CAO CHIẾT ETHANOL VÀ CAO CHIẾT CHLOROFORM 37 3.3.KẾT QUẢ PHÂN LẬP PHÂN ĐOẠN CAO CHLOROFORM TỪ CAO TỔNG ETHANOL 44 3.4.KẾT QUẢ ĐỊNH DANH THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG CAO CHIẾT CHLOROFORM VÀ PHÂN ĐOẠN … 48 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ……………………………………………… ….68 TÀI LIỆU THAM KHẢO………………………………………………………69 DANH MỤC CÁC BẢNG Số hiệu Tên bảng Trang 1.1 Hàm lƣợng axit có dầu hạt lồi Lagerstroemia thomsonii 1.2 Hàm lƣợng nƣớc số phận Bằng Lăng nƣớc 10 2.1 Thông số nguyên liệu 11 2.2 Các hóa chất sử dụng 15 3.1 Kết chiết ngâm dầm nguyên liệu Ethanol 96% 33 3.2 Kết chiết phân bố cao ethanol dung môi chloroform 35 3.3 Phần trăm khối lƣơng cao 35 3.4 Thành phần nhóm chức cao chiết dung mơi ethanol 96% 36 3.5 Thành phần nhóm chức cao chiết dung môi chloroform 41 3.6 Kết định danh cao chloroform 49 3.7 Thành phần hóa học phân đoạn BL.2 53 * Nhận xét Nhìn vào kết mỏng ta thấy tỷ lệ dung môi khác tách đƣợc cấu tử có chấm sáng, rõ, đậm nhƣng tỷ lệ 2:8 cấu tử tách có khoảng cách lớn nhƣng chậm Kết giải ly hệ dung môi diclometane:chloroform va dung mơi đơn ethyl axetate ta thu đƣợc 149 lọ kí hiệu từ L.1 đến L.149 Hình 3.8 Các bình hứng dung dịch giải ly (17 ml) Tiến hành sắc ký mỏng dựa theo kết thu đƣợc ta gộp lại thành phân đoạn, kí hiệu là: PD.1.L1-31(gộp lọ đến lọ 31), PD.2.L37-105 (gộp lọ 37 đến lọ 105), PD.3.L107-131 (gộp lọ 107 đến lọ 131), PD.4.L133-149(gộp lọ 133 đến lọ 149) đƣợc trình bày hình 3.9 46 Hình 3.9 Kết sắc ký mỏng cao chloroform 47 Khối lƣợng cao thu đƣợc phân đoạn lần lƣợt Phân đoạn PD.1.L1-31: 0.850 g Phân đoạn PD.2.L37-105: 3.242 g Phân đoạn PD.3.L107-131: 2.419 g Phân đoạn PD.4.L133-149: 0.421 g Kết sắc ký mỏng dung dịch giải ly phân đoạn đƣợc thể hình 3.10 Hình 3.10 Vết mỏng phân đoạn * Nhận xét Dựa vào kết mỏng phân đoạn khối lƣợng cao thu đƣợc ta thấy phân ddaonj cho vết khơng có tƣợng kéo vệt dài vệt cách xa Do ta chọn phân đoạn tiến hành đo GC-MS để định danh cấu tử 3.4.KẾT QUẢ ĐỊNH DANH THÀNH PHẦN HĨA HỌC TRONG CAO CHIẾT CHLOROFORM VÀ PHÂN ĐOẠN Sau phân lập cao chloroform thành phân đoạn Phân đoạn thu đƣợc 3,242 g cao tiến hành đo GC-MS để định danh cấu tử 48 Sắc ký đồ GC cao chloroform tách từ tổng cao ethanol đƣợc thể hình 3.11 Hình 3.11 Sắc ký đồ GC cao chloroform Thành phần hóa học phân đoạn cao chloroform đƣợc định danh trình bày bảng 3.6 Bảng 3.6 Kết định danh cao chloroform STT RT %AREA NAME 2(4H)-Benzofuranone, 10.073 8.72 5,6,7,7a-tetrahydro4,4,7a-trimethyl-, (R)- Ppropiolic acid, 3-(12 12.601 17.3 hydroxy-2-isopropyl5-methylcyclohexyl)- 49 FORMULAR Tricyclo[7.2.0.0(2,6)]u 12.727 13.11 ndecan-5-ol, 2,6,10,10-tetramethyl 3,7,11,154 13.163 16.71 Tetramethyl-2hexadecen-1-ol 13.221 8.34 13.415 9.83 14.268 15.03 14.713 4.35 16.186 6.16 2-Pentadecanone, 6,10,14-trimethyl- Ethanol, 2-(9octadecenyloxy)-, (Z)- Isophytol Hexadecanoic acid, ethyl ester 11,13-Dimethyl-12tetradecen-1-ol acetate 50 Butyl 9,12- 10 16.288 22.95 11 15.832 10.02 Phytol 12 16.346 28.83 Ethyl Oleate 13 16.573 24.02 octadecadienoate Octadecanoic acid, ethyl ester Dasycarpidan-114 16.743 7.11 methanol, acetate (ester) 115 17.944 4.39 Monolinoleoylglycerol trimethylsilyl ether 16 18.283 12.28 Methyl 19-methyleicosanoate 51 i-Propyl 11,1217 18.283 12.28 methyleneoctadecanoate 18 21.481 12.23 Squalene Nhận xét Từ kết bảng 3.6 cho thấy phƣơng pháp GC–MS định danh đƣợc 18 cấu tử dịch chiết chloroform từ Lá Bằng Lăng nƣớc Nhìn chung cấu tử có lƣợng cao lớn >5% trừ Hexadecanoic acid, ethyl ester (4.35%), 1- Monolinoleoylglycerol trimethylsilyl ether (4.39%) Từ kết chấm mỏng phân đoạn ta thấy phân đoạn có vệt rõ khối lƣợng cao lớn Do ta chọn phân đoạn tiến hành định danh phƣơng pháp GCMS Sắc kí đồ kết định danh trình bày hình 3.12 52 Hình 3.12 Sắc ký đồ GC phân đoạn BL.2 Thành phần hóa học phân đoạn BL.2 đƣợc định danh trình bày bảng 3.7 Bảng 3.7 Thành phần hóa học phân đoạn BL.2 STT RT %AREA NAME 2(4H)- 10.068 12.12 Benzofuranone, 5,6,7,7a-tetrahydro4,4,7a-trimethyl-, (R)- Ppropiolic acid, 3-(12 12.601 22.11 hydroxy-2-isopropyl5-methylcyclohexyl)- 3,7,11,153 13.163 4.62 Tetramethyl-2hexadecen-1-ol 13.216 18.18 2-Pentadecanone, 6,10,14-trimethyl- Ethanol, 2-(95 13.604 2.15 octadecenyloxy)-, (Z)- 53 FORMULAR 14.268 16.26 14.713 21.96 15.571 8.27 Phytol, acetate Hexadecanoic acid, ethyl ester 2-Hydroxy-1,1,10trimethyl-6,9epidioxydecalin 15.745 10.58 10 16.113 5.82 trans-13Octadecenoic acid cis-Vaccenic acid 11,13-Dimethyl-1211 16.181 5.00 tetradecen-1-ol acetate 12 16.288 5.65 13 16.728 10.9 Butyl 9,12octadecadienoate 4-Heptadecyne, 1chloro- 54 14 16.569 Octadecanoic acid, 5.74 ethyl ester 4,8,12,16- 15 17.944 10.44 Tetramethylheptadeca n-4-olide 1- 16 18.279 2.25 Monolinoleoylglycero l trimethylsilyl ether * Nhận xét Từ bảng 3.8 cho thấy phƣơng pháp GC-MS định danh đƣợc 16 cấu tử phân đoạn BL.2 từ Lá Bằng Lăng nƣớc phân đoạn chƣa tinh khiết Nhìn chung cấu tử có lƣợng cao lớn >5% trừ 3,7,11,15-Tetramethyl-2hexadecen-1-ol (4.62%), 1-Monolinoleoylglycerol trimethylsilyl ether (2.25%) * Đánh giá hoạt tính sinh học: 9,12- Octadecadienoic acid hay gọi linoleic acid (viết tắt CLA) loại acid béo cần thiết cho thể, có liên quan đến acid béo omega–6 (một hai loại acid béo thiết yếu giúp giảm chất béo thể) CLA có tác dụng giảm mỡ thừa cách: - Ngăn chặn không cho tế bào hấp thụ mỡ - Kích thích chức vận chuyển mỡ thừa thể ngồi để đốt khiến mơ mỡ teo nhỏ lại 55 - Tăng tỷ lệ trao đổi chất bản, giúp thể chuyển đổi thức ăn thành lƣợng hiệu - Hạ Cholesterol, hạ huyết áp, giảm nguy sơ cứng động mạch, giảm dị ứng, hen suyễn - Chống oxy hóa, tăng cƣờng hệ thống miễn dịch, ngừa ung thƣ hỗ trợ điều trị ung thƣ 56 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ  Kết luận Qua q trình nghiên cứu thành phần hóa học Bằng Lăng nƣớc Kon Tum, đề tài thu đƣợc kết nhƣ sau: Bằng phƣơmg pháp chiết rắn lỏng 600g nguyên liệu với dung mơi ethanol 96% lần, lần 5.4 lít thu đƣợc tổng khối lƣợng cao 75,42 g Bằng việc sử dụng phƣơng pháp chiết lỏng – lỏng với hệ dung diclomethane: chloroform chiết đƣợc cấu tử có độ phân cực khác vào dung mơi Q trình phân lập cao chloroform sử dụng phƣơng pháp sắc ký mỏng kết hợp khối phổ (GC-MS) định danh đƣợc số cấu tử có hàm lƣợng lớn cao ethanol chứng tỏ trình chiết dung môi chloroform chƣa phải tối ƣu để lấy đƣợc chất mong muốn  Kiến nghị Thông qua đề tài muốn tiếp tục phát triển số vấn đề nhƣ sau: - Tiếp tục nghiên cứu chiết tách xác định thành phần hóa học phận khác Bằng Lăng nhiều điều kiện, dung mơi thổ nhƣỡng khác - Thử hoạt tính sinh học dƣợc lực số phân đoạn có chứa cấu tử có dƣợc tính cao,từ phát triển số chế phẩm phục vụ cho mục đích y học - Các phân đoạn chƣa tinh khiết tiến hành sắc ký cột nhiều lần để thu chất tinh khiết 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] Đoàn Văn Tuấn (2011), Nghiên cứu thành phần hóa học cành, lăng nước (Lagerstroemia speaciosa (L.) Pers), họ Lythraceae Hà Nội, Luận văn thạc sĩ hóa học, trƣờng Đại học Thái Nguyên [2] Phạm Hoàng Hộ (1999), Cây cỏ Việt Nam, 2, tr.23-34 [3] Võ Văn Chi (1971), Cây cỏ thường thấy Việt Nam, tập 2, NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, tr.297-305 [4] Lê Hồng Phúc (1971),“Điểm qua số nghiên cứu chi Lagerstroemia Việt Nam”, NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, tr.297-305 [5] Võ Thị Thanh Tuyền(2001), Bước đầu tịnh tính số nhóm chất có vỏ lăng nước (Lagerstroemia speaciosa (L.) Pers ),Luận văn thạc sĩ hóa học, đại học Sƣ phạm Hà Nội Tiếng Anh [6] Jamaludheen V, Gopikumar K and Sudhakara K (1995), “Variability studies in Lagerstroemia”, Indian forester, 121(2), 137-41 [7] Unno T, Sakane I (1997), “Antioxidative activity of water of Lagerstroemia speciosa (L) Pers leaves”, Bioscience, Biotechnology and Biochemistry, vol 61(10), 1772-4 [8] Xueqing Liu, Jae-kyung Kim, Yunsheng Li, Jing Li, Fang Liu, and Xiaozhuo Chen (2004), “Tannic Acid Stimulates Glucose Transport and Inhibits Adipocyte Differentiation in 3T3-L1 Cells”, The Journal of Nutrition, p.165-171 [9] H.R Ambujakshi, V Surendra, T Haribabu, Divakar Goli (2009), “Antibacterial activity of leaves of Lagerstroemia speciosa (L) Pers.”, Journal of Pharmacy Research, 2(6), 1028 58 [10] Katta Vijaykumar, Papolu B Murthy, Sukala Kannababu1, B Syamasundar and Gottumukkala V Subbaraju (2006) “Quantitative Determination of Corosolic acid in Lagerstroemia Speciosa Leaves, Extracts and Dosage Forms”, International Journal of Applied Science and Engineering, 4(2), p.103-114 [11] Kakuda T, Sakane I, Takihara T, Ozaki Y, Takeuchi H, Kuroyanagi M (1996), “Hypoglycemic effect of extracts from Lagerstroemia speciosa L leaves in genetically diabetic KK-AY mice”, Bioscience, Biotechnology and Biochemistry, vol 60(2), p.204-208 [12] Garcia F (1941), “Distribution and diterioration of insulin-like principle in Lagerstroemia speciosa (banaba)”, Acta Medica Philipina, 3, p.99-104 [13] Carew D.P, Chin T.F (1961) “Constituent of Lagerstroemia speciosa (L) Pers Nature”, US National Library of MedicineNational Institutes of Health, 190, 1108 CA, 1962, 56( 1), 3564c [14] Daulatabad C.D, Mulla G.M, Mirajkar A.M (1991), “Acids from Lagerstroemiathomsoni and Bauhina tomentosa seed oils”, Oil Technologists' Association of India (OTAI), 23(3), 53-4 [15] Jehan C.M (1990), “A keto fatty acid from Lagerstroemia speciosa seed oil”, Phytochemistry, 29, 2323, CA-1990, 113, 148899x [16] Iida H (1984), “Alkaloid from leaves of Lagerstroemia subcostata”, Journal of the American Oil Chemists' Society , 49, 1909 [17] Comins D.L (1992) “Source and sythesis of subcosin I”, Journal of the American Oil Chemists' Society, 57, 5807, CA, 1992, 116, 21289e, 83973g [18] Blomster R.N (1964) “Isoation of lythrin”, Journal of Natural Products, 27,15, CA-1964, 60,85123g [19] Zacharias D.E et al (1965) “Source and structure of lythrin Experientia structure of lythrin”, Experientia, 21, 247, CA-1963, 59, 7062h 59 [20] Wright H et al (1971) “Source and synthesis of decinin”, Journal of the American Chemical Society, 93, 2942 [21] Sarin L.R, Kapoor L.D (1961) “Blood sugar levels during sleep in normal and diabetic subjects”, Bull Reg Research Lab Jammu,1,136 CA- 1961, 55, 16579b [22] Xu Y M (1991) “Isolation of flosin A from leaves of Lagerstroemiaflos reginae” Chemical and Pharmaceutical Bulletin , 39, 639 60 ...ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA HÓA HỌC  +  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG CAO CHIẾT CHLOROFORM TỪ LÁ BẰNG... KHOA HÓA NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Trƣơng Nhƣ Ý Lớp : 14SHH Tên đề tài: Nghiên cứu chiết tách xác định thành phần hóa học cao chiết Bằng lăng nƣớc (Lagerstroemia speciosa( L .)Pers. ). .. học thực tiễn Vì vậy, chọn đề tài Nghiên cứu chiết tách thành phần hóa học Bằng Lăng nƣớc (Lagerstroemia speciosa) Kon Tum , với mục tiêu đóng góp phần tƣ liệu vào hệ thống cơng trình khoa học