BÁO CÁO THỰC TẬP CƠNG NGHỆ SINH HỌC Nhóm 3- tổ – M3- K66 Ngày thực tập: chiều ngày 14 – 18 /11/ 2015 • Phan Thị Thu Thảo 1101473 • Mai Huy Thơng • Nguyễn Thị Bích Thủy I 1101507 Sinh tổng hợp canci lactat Số ml Trắng 26,1 Khởi điểm Kết thúc 26,5 Kết thúc 26,2 Kết thúc 26,45 - 0.4 0 - 0.1 0 - 0.35 0 Na2S203 ΔV Tra bảng C% 7% Kết quả: (Mai Huy Thông) - Nhận xét bảng:Nồng độ đường giảm từ 7%( 10.5g glucose/150ml) xuống 0%=> phần lớn đường bị chuyển hóa hết để cung cấp lượng cho vsv tạo sản phẩm - Khối lượng calci lactate ( nhóm ) mtt = 10,22 g C6H12O6 => CH3-CHOH- COOH => (CH3-CHOH-COO)2 Ca nđường= mđường: Mđường= 10.5: 180= 0.0583(mol)  NCalactat lt= 0.0583( mol)  mlt= n.M = 0.0583x 218= 12.72(g)  H= mtt: mlt= 80.37% Bàn luận (Phan Thị Thu Thảo) Yếu tố ảnh hưởng đến hiệu suất: • thành phần mơi thêm xác theo tỷ lệ, nhiệu độ phải phân bố mơi trường • việc cung cấp đầy đủ thành phần cung cấp cho vsv phát triển sinh sản phẩm=> tăng hiệu suất • Độ vơ trùng: để tránh nhiễm vsv lạ vào dịch gây cạnh tranh chất với L.acidophilus a) Giai đoạn trước lên men: - Giống: • phải chủng, không nhiễm vsv khác, nguồn gốc rõ ràng => tạo sản phẩm với hiệu suất độ tinh khiết cao • giống chọn lại liên tục, không nên dùng dịch nồi lên men xong để làm giống cho nồi khác giống bị nhiễm vsv khác, khả phát triển giảm giúp loại bỏ tính hồi biến tính hoang dại, thối hóa … => tăng hiệu suất • Giống sử dụng phải sinh sản nhanh, phát triển mạnh, có khả đồng hóa cao, thích ứng với mơi trường => tăng hiệu suất, sản phẩm chất lượng tốt - Khi nhân giống tủ vô trùng phải đảm bảo điều kiện vô trùng, tiệt trùng tủ, đưa tay sâu vào tủ làm để tránh nhiễm vsv lạ nhiễm vào => tăng hiệu suất - glucose sữa pha riêng để tránh việc pha lại toàn mơi trường sau tiệt trùng glucose nhiệt độ cao dễ bị caramen hóa sữa dễ bị đơng vón b) Giai đoạn lên men: - Các thiết vị phải vô trùng=> tránh nhiễm vsv lạ - PH: năm khoảng 6.3-6.5 => PH tối ưu giúp L acidophilus phát triển - Nhiệt độ: 36-40oC - Thời gian nuôi cấy, canxi lactat sản phẩm bậc nên lấy sản phẩm cuối pha log => qua thực nghiệm sau 96h( tỷ lệ giống cấy 5-10%)=> thu sản phẩm nhiều tinh khiết - Lượng CaCO3 thêm vào: trình sinh trưởng L acidophilus tạo acid lactic làm giảm PH môi trường, PH thấp ức chế vsv phát triển => giảm hiệu suất Như phải cho CaCO3 vừa đủ để cân băng PH, tạo muối Ca lactat => giảm nồng độ a.lactic=> vsv tăng tạo a.lactic để cân phản ứng => tăng hiệu suất c) Kết tinh sản phẩm - Các thao tác lọc, đun điểu chỉnh PH phải cẩn thận, tỷ mỉ để kết tinh sản phẩm nhiều - Dịch lên men phải nóng q trình làm để tăng độ tan Ca lactat => kết tinh nhiều - Khi lọc than hoạt dịch phải nóng để hạn chết Ca lactat kết tinh lên bề mặt than hoạt gây thất hoạt chất - Khi lọc hút chân khơng sản phẩm khô không để rách giấy lọc gây hoạt chất, sau phải rửa nước lạnh với lượng vừa đủ để tránh hòa tan Ca lactat => giảm hiệu suất d) Kiểm nghiệm thành phẩm - Các thuốc thử, hoạt chất phải cho xác, định lượng dịch có lẫn nhiều sản phẩm màu nên khó xác định điểm kết thúc => dễ sai lệch kết - Lúc định lượng I2 thao tác nhanh I2 dễ bị oxi hóa cho hồ tinh bột( HTB) lúc gần cuối điểm kết thúc để tránh HTB hấp phụ I2=> tránh ảnh hưởng đến kết Sinh tông hợp EtOH phương pháp bất động tế bào Kết ( Nguyễn Thị Bích Thủy) a Sinh khối tế bào - Điều kiện hiếu khí: 1.57 g - Điều kiện kỵ khí: 0.4g b Kết định lượng đường Số ml Na2S203 Δ=trắng-thử Tra bảng C% Trắng 26,1 Khởi điểm 23,5 2,6 8,16 1,6 Kết thúc Kết thúc 24,2 27,5 1,9 0,7 5,99 1,2 Kết thúc 25,6 0.5 0 - Nhận xét bảng: • Nồng độ đường lúc pha 8%, sau để qua đêm ngày định lượng nồng độ đường 1.6% => bảo quản đường không tốt, dịch đường chứa vsv lạ đường bị chuyển hóa gần hết => giảm hiệu suất tạo EtOH • Nồng độ đường giảm dần trình lên men => glucose sử dụng hết để cung cấp lượng tạo sản phẩm Bàn luận So sánh bình hiếu khí kỵ khí Bình hiếu khí Độ đục Lượng EtOH Bọt khí Bình kỵ khí > > > Các yếu tố ảnh hưởng đến hiệu suất chất lượng sản phẩm - Độ vô trùng: để tránh nhiễm vsv lạ vào dịch gây cạnh tranh chất với S.cerevisiae a Giai đoạn trước lên men - Giống: tương tự canxi lactat - Khi nhân giống tủ vô trùng, cấy giống vào ống nghiệm đưa tay vào sâu tủ để tránh nhiễm vsv từ vào Khi tiệt trùng que cấy xong để nguội lấy giống, khơng bị chét giống, giảm hiệu suất ống không lên b Giai đoạn lên men - PH, nhiệt độ, thời gian nuôi cấy phải tối ưu để tạo điện kiện tốt cho vsv phát triển tạo nhiều sản phẩm - Phương pháp: lên men liên tục Ưu điểm • Kéo dài pha cân bằng, tế bào lâu già hóa => tạo sản phẩm nhiều • Tính đồng sản phẩm cao hươn lên men nhiều lô mẻ khác => chất lượng tốt • Sản phẩm lấy liên tục => tránh bão hòa hoạt chất => tránh ức chế tế bào sinh sản phẩm => tăng hiệu suất Tuy nhiên, phương pháp có số nhược điểm dễ làm giảm hiệu suất chất lượng khơng có biện pháp khắc phục • Dễ thất giống- sinh khối thu sản phẩm • Sản phẩm khơng đạt nồng độ tối đa bị pha lỗng • Khó giữ vơ trùng đặc biệt lên men kéo dài • Làm thay đổi sinh lý tế bào => cần tính tốn lại nhiều thơng số, chất lượng đợt lên men khác khó đồng => ảnh hưởng đến chất lượng - Phương pháp: bất động tế bào cách bẫy tế bào gel canxi alginat Ưu điểm ảnh hưởng đến H chất lượng • Dễ tách khỏi sản phẩm • Có thể ngừng phản ứng cần • Tế bào ổn định Nhược điểm : tế bào phân bố không bị lưu giữ khn gel, tế bào khó tiếp cận với mơi trường, phản ứng khó thực trì sống tế bào cố định khó tế bào tự => giảm hiệu suất chất lượng sản phẩm - Khi tạo hạt, nhỏ dịch Na alginat chứa sinh khối vào dd CaCl hạt dễ kết tụ vào tạo thành khối gel lớn => khó đưa vào cột, tế bào bị nhiều lớp gel bao bọ khó tiếp cân mơi trường => giảm hiệu suất - Tạo hạt ngồi khơng khí => dễ nhiễm vsv lạ => giảm hiệu suất chất lượng - Các hạt gel to nhỏ không đều, hút dịch không khuấy => tế bào bị lắng xuống đáy => tế bào phân bố không gel nhỏ giọt - Lượng glucose sử dụng tốc độ dòng • Tốc độ cao q: dịch không ngấm vào hạt, tế bào không tiếp cận với đường • Chậm quá: thời gian, dễ nhiễm vsv lạ • Lượng glucose q: tạo sản phẩm => giảm H c Định lượng đường: tương tự canxi lactat d Ưu điểm canxi alginat làm chất mang - Bền với to, pH, vsv, tác nhân hóa học - Phương pháp cố định đơn giản - Dồ bền phù hợp - Không độc với tế bào, thể sống - Giá thành rẻ - Khơng có cạnh tranh glucose tế bào chất mang ... biến tính hoang dại, thối hóa … => tăng hiệu suất • Giống sử dụng phải sinh sản nhanh, phát triển mạnh, có khả đồng hóa cao, thích ứng với mơi trường => tăng hiệu suất, sản phẩm chất lượng tốt... bậc nên lấy sản phẩm cuối pha log => qua thực nghiệm sau 96h( tỷ lệ giống cấy 5-10%)=> thu sản phẩm nhiều tinh khiết - Lượng CaCO3 thêm vào: trình sinh trưởng L acidophilus tạo acid lactic làm... kết thúc để tránh HTB hấp phụ I2=> tránh ảnh hưởng đến kết Sinh tông hợp EtOH phương pháp bất động tế bào Kết ( Nguyễn Thị Bích Thủy) a Sinh khối tế bào - Điều kiện hiếu khí: 1.57 g - Điều kiện