ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC PHẠM KIM THOA NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA LÁ CÂY LÁ DIỄN (Dicliptera chinensis (L.) Nees) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC HÀ NỘI – 2017 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC Người thực hiện: PHẠM KIM THOA NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA LÁ CÂY LÁ DIỄN (Dicliptera chinensis (L.) Nees) KHỐ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC KHĨA: QH.2012.Y Người hướng dẫn: TS VŨ ĐỨC LỢI Hà Nội – 2017 LỜI CẢM ƠN Trong thời gian thực khóa luận tốt nghiệp, bên cạnh nỗ lực cố gắng thân, nhận quan tâm ân cần, nhiệt tình giúp đỡ người Thời điểm hồn thành khóa luận lúc tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành với người dạy dỗ, hướng dẫn, động viên giúp đỡ suốt thời gian qua Lời tơi xin chân thành bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS Vũ Đức Lợi - Chủ nhiệm Bộ môn Dược liệu - Dược học cổ truyền, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội trực tiếp hướng dẫn, tận tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi để tơi nghiên cứu hồn thành khóa luận Tơi xin chân thành cảm ơn giảng viên, anh chị kỹ thuật viên Bộ môn Dược liệu - Dược học cổ truyền, Bộ môn Bào chế Công nghệ dược phẩm, Bộ mơn hóa dược Kiểm nghiệm thuốc Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội giúp đỡ tơi nhiều q trình thực khóa luận, xin gửi lời cảm ơn đến tất quý thầy cô trường dạy dỗ, trang bị kiến thức cho suốt năm theo học trường Cuối tơi xin cảm ơn gia đình, bạn bè theo sát động viên, quan tâm tạo điều kiện giúp tơi hồn thành khóa luận Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 10 tháng năm 2017 Sinh viên Phạm Kim Thoa DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, VIẾT TẮT STT 10 11 12 13 14 15 16 DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Hình Hình 2.1 Hình 2.2 Hình 3.1 Hình 3.2 Hình 3.3 Hình 3.4 Hình 3.5 Hình 3.6 Hình 3.7 Hình 3.8 Hình 3.9 Hình 3.10 Hình 3.11 DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Bảng ̉̉ Bang 1.1 Bảng 1.2 Bảng 3.1 Bảng 3.2 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU MỞ ĐẦU ̉̉ CHƯƠNG 1: TÔNG QUAN 1.1 Vị trí phân loại, đặc điểm thực vật, phân bố .3 1.1.1 Vi trịṕ hân loaịchi Dicliptera .3 1.1.2 Đăcc̣ điểm thưcc̣ vâṭcủa ho c̣Acanthaceae 1.1.3 Đặc điểm lồi thcc̣ chi Dicliptera .3 1.1.4 Đăcc̣ điểm thưcc̣ vâṭcủa Ládiên 1.2 Thành phần hóa hocc̣ của Ládiên 1.3 Tác dụng dược lý của Lá diễn .8 1.3.1 Tác dụng chứng minh khoa học 1.3.2 Tác dụng cổ truyền 10 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀPHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.1 Đối tượng nghiên cứu .12 2.1.1 Nguyên vật liệu 12 2.1.2 Hóa chất sử dungc̣ .12 2.1.3 Trang thiết bị, dụng cụ 12 2.2 Phương pháp nghiên cứu 13 2.2.1 Phương pháp nghiên cứu đặc điểm thực vật 13 2.2.2 Nghiên cứu vềhóa hocc̣ .14 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 19 3.1 Kết nghiên cứu thực vật .21 3.2 Kết định tính hóa học từ Lá diễn .26 3.3 Kết phân lập hợp chất 26 3.3.1 Hợp chất HD1-CDCl3-1H 26 3.3.2 Hợp chất HDl-CDCl3-Cl3CPD 30 3.4 Bàn luận 31 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Tài liệu Tiếng Anh PHỤ LỤC MỞ ĐẦU Sự phát triển của ngành Dược có ảnh hưởng rất lớn tới sức khỏe của người Đời sống của người nâng cao nhu cầu sử dụng dược phẩm ngày lớn, đó phải kể đến nhu cầu sử dụng dược phẩm có nguồn gốc thực vật Việt Nam nước có khí hậu nhiệt đới gió mùa, nhiều loại địa hình nên có nguồn động thực vật đa dạng Vậy nên nguồn thực vật có hoạt tính sinh học rất dồi phong phú Ngay từ xa xưa, ông cha ta sử dụng nguồn tài nguyên thực vật làm thuốc chữa bệnh bơi ngồi da, sử dụng trực tiếp hay sắc uống… Ngày nay, nhà khoa học dựa vào khoa học kĩ thuật để tìm hiểu phân tích hoạt chất có tác dụng sinh học thực vật, dược liệu tìm câu trả lời thành phần hoạt chất chế tác dụng của chúng Cây Lá Diễn có tên khoa học Dicliptera chinensis (L.) Nees thuộc chi Dicliptera họ Acanthaceae thuốc quý, sử dụng từ lâu đời Trong đời sống, việc sử dụng Lá diễn để nhuộm thực phẩm Y học Việt Nam Trung Quốc, toàn diễn dùng để chữa cảm mao,c̣ số t cao, lênsởi, giảm niêu;c̣ dùng ngồi tri lợ̉, sưng, rơm sẩy, mun nhoṭ…[1,2,4-6,11] Ngày nay, nhà khoa học phát thấy tác dụng hiệu điều trị gan bị tổn thương viêm, xơ gan,… [17,19,22,26] Hiện nhà khoa học tiếp tục nghiên cứu loài thuộc chi Dicliptera để tìm tác dụng ứng dụng điều trị bệnh Việc nghiên cứu xác định thành phần hóa học tác dụng sinh học của loài thuốc sở khoa học cho việc sử dụng chúng hợp lý, an toàn hiệu Sử dụng phương pháp chiết xuất, phân lập để xác định thành phần hóa học của thuốc Tuy nhiên, Việt Nam thời điểm chưa có nhiều nghiên cứu thành phần hóa học của Lá diễn Nhằm mục đích góp phần vào việc tìm hiểu Lá diễn thu hái Trực Ninh, Nam Định, luận văn với đề tài “Nghiên cứu đặc điểm thực vật thành phần hóa học Lá diễn (Dicliptera chinensis (L.) Nees)” có mục tiêu: 1 Xác định đặc điểm thực vật xác định tên khoa học Lá diễn trồng huyện Trực Ninh, tỉnh Nam Định Chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc số hoạt chất phân lập từ Lá diễn 3.3.2 Hợp chất HDl-CDCl3-13CCPD Hợp chất HDl-CDCl3-13CCPD thu dạng tinh thể hình kim, khơng màu, khơng mùi, nhiệt độ nóng chảy: 155-157 oC, [α]D25 = - 45o (c = 0,05 CHCl3) H-NMR (400 MHz, CDCl3), δ (ppm): 5,35 (1H, d, J = Hz, H-6), 5,11 (1H, dd), 5,03 (1H, dd), 3,52 (1H, m, H-3), 1,01(3H, s, H-19) 13 C-NMR (100 MHz, CDCl3), δ (ppm): 140,6 (C-5), 138,5 (C-22), 129,2 (C- 23), 121,8 (C-6), 71,9 (C-3), 56,8 (C-14), 55,9 (C-17), 51,3 (C-9), 50,2 (C24), 42,3 (C-4), 42,2 (C-12), 40,4 (C-20), 37,2 (C-7), 36,3 (C-1), 36,1 (C-13), 33,9 (C-25), 31,8 (C-8), 31,8 (C-13), 31,6 (C-16), 29,1 (C-2), 28,2 (C-28), 26,0 (C-15), 24,2 (C-11), 21,3 (C-26), 21,0 (C-21), 19,4 (C-27), 18,7 (C-19), 12,2 (C-29), 12,0 (C-18) Hình 3.9 Phổ 1H-NMR của hợp chất HDl-CDCl3-13CCPD 30 Hình 3.10 Phổ 13C-NMR của hợp chất HDl-CDCl3-13CCPD Trên phổ 1H-NMR 13C-NMR cho thấy có ba proton olefinic δ 5,35 (1H, d, J = 5,0 Hz, H-6), 5,11 (1H, dd, H-22), 5,03 (1H, dd, H-23) ứng với ba cacbon δ 121,8 (C-6), 138,5 (C-22), 129,2 (C-23) Dựa vào kiện lý hóa so sánh phổ của stigmast-5,22-dien-3-β-ol cơng bố [16,18] thấy có trùng khớp hợp chất HDl-CDCl3-Cl3CPD xác định stigmast5,22-dien-3-β-ol Hình 3.11 Cấu trúc hóa học của hợp chất HD1-CDCl3-13CCPD 3.4 Bàn luận So với nghiên cứu trước chi Dicliptera, khóa luận mô tả chi tiết đặc điểm hình thái thực vật, đặc biệt thân, lá, đặc điểm vi 31 phẫu, soi bột của loài Dicliptera chinensis (L.) Nees Đồng thời khóa luận tiến hành chiết xuất, phân lập xác định thành phần hóa học Lá diễn Các nghiên cứu cấu tạo vi học của thân Lá diễn có thể sử dụng để làm tư liệu cho việc tiêu chuẩn hóa kiểm nghiệm dược học, đồng thời kết góp phần phân biệt loài Dicliptera chinensis (L.) Nees với loài khác thuộc chi Dicliptera So với loài khác chi Dicliptera, loài Dicliptera chinensis (L.) Nees có đặc điểm thực vật khác biệt: bắc của D Chinensis hình trứng thn, khơng bắc của D Clinopodia hình chữ nhật, D resupinata hình trứng mỏng; hoa của D Chinensis mọc thành cụm màu trắng hồng hoa của D Suberecta mà đỏ, hoa của D.foetida mọc đơn độc màu tím nhạt, D.squarrosa màu vàng cam [2,4] Về định tính, sử dụng phương pháp hóa học sắc ký lớp mỏng, phương pháp sử dụng chủ yếu Việt nam để định tính nhóm chất hóa học dược liệu Kết định tính cho thấy Lá diễn có chứa thành phần: acid amin, caroten, chất béo, saponin, tannin, acid hữu cơ, đường khử, flavonoid Qua trình khảo sát hệ dung môi chạy sắc ký lớp mỏng, xác định điều kiện sắc ký phù hợp để định tính, đồng thời bước làm sở cho trình phân lập tiến tới xây dựng tiêu chuẩn của vị thuốc Lá diễn trồng Việt Nam Tuy nhiên, khóa luận tiến hành chấm sắc ký dịch chiết n-hexan, ethylacetat để có thể cung cấp thông tin đầy đủ điều kiện sắc ký phục vụ trình phân lập tiêu chuẩn hóa vị thuốc cần tiến hành dịch chiết khác MeOH, EtOH hay dịch chiết phân đoạn dung môi hữu cụ thể khác Về chiết xuất phân lập: phương pháp chiết xuất n-hexan, ethylacetat phân lập chất sắc ký cột tham khảo nghiên cứu trước đó Sau phân lập hợp chất so sánh với chất biết, kết xác định hợp chất Lá diễn Hai hợp chất đó 3β-hydroxylup-20 (29)-en Stigmast-5,22-dien-3-β-ol 32 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận - Đã mô tả đặc điểm thực vật, đặc điểm vi phẫu xác định tên khoa học của mẫu Lá Diễn thu hái huyện Trực Ninh, tỉnh Nam Định Dicliptera chinensis (Linnaeus) Nees, họ Acanthaceae (họ Ơ rơ) - Xác định cấu trúc số thành phần phân lập từ của loài Dicliptera chinensis (Linnaeus) Nees: Thông qua kết đo nhiệt độ nóng chảy, góc quay cực riêng, phổ tử ngoại - khả kiến, phổ khối, phổ cộng hưởng hạt nhân, xác định cấu trúc hợp chất vừa phân lập được, đó là: 3β-hydroxylup-20 (29)-en Stigmast-5,22-dien-3-β-ol Kiến nghị - Triển khai phân lập hợp chất khác từ loài Dicliptera chinensis (Linnaeus) Nees - Dựa kết nghiên cứu thành phần hóa học, cần nghiên cứu tác dụng sinh học của loài tác dụng bảo vệ gan tác dụng sinh học khác 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Nguyên Bá(2014), Từ điển bách khoa thưcc̣ vâṭ hocc̣ Viêṭ Nam, NXB Giáo ducc̣ ViêṭNam, tr 393 Đỡ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xn Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Thu, Nguyễn Tập, Trần Toàn (2011), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, tập III, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, tr 479-480 Nguyên Văn Chi, Trần Hơpc̣ (1999), Cây cỏcóić h ởViêṭ Nam, tâpc̣ I, NXB Giáo duc,c̣ tr 214-215 VõVăn Chi (2003), Từđiển thưcc̣ vâṭ thông dungc̣, tâpc̣ I, NXB Khoa hocc̣ vàky ,̃thuât,c̣ tr 957 PGS.TS Lưu Đàm Cư, Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật,Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam, (2005), “Nghiên cứu chiết tách nhuộm màu thực phẩm từ kinh nghiệm sử dụng thực vật của đồng bào dân tộc thiểu số”, Trung tâm hỗ trợ nghiên cứu Châu Á, Đại học Quốc gia Hà Nội Nguyễn Thượng Dong (2006), Nghiên cứu thuốc từ thảo dược, NXB Khoa học Kỹ thuật Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu (1990), Phương pháp nghiên cứu hóa học thuốc, NXB y học chi nhánh thành phố Hồ Chí Minh, Khoa Dược Phạm Hoàng Hộ (1999), Cây cỏ Việt Nam, tâpc̣ III, Nhà xuất trẻ, tr.73-74 Đỗ Tất Lợi (2001), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, tr.518-520 10 Nguyên ChiT ́ ôn (2015), Đông Nam Dươcc̣-2000 vi c̣thuốc chữa bênh, tâpc̣ I, NXB Y hoc,c̣ tr 542 11 Viện Dược Liệu (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, NXB Khoa học Kỹ thuật, tr.432-438 12 Viện Dược liệu (2006), Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý thuốc từ thảo dược, NXB Khoa học kỹ thuật, tr 139141 Tài liệu Tiếng Anh 13 Abdullahi, S.M, Musa, A.M, Abdullahi, M.I, Sule M.Iand Sani, Y.M.(2013), “Isolation of Lupeol from the Stem-bark of Lonchocarpus sericeus (Papilionaceae)”, Scholars Academic Journal of Biosciences (SAJB), 1(1):18-19 14 Ahmad B1, Khan MR, Shah NA, Khan RA (2013) “In vitro antioxidant potential of Dicliptera roxburghiana.” BMC Complement Altern Med, 13:140 15 Ankita Wal, Pranary Wal, A.K Rai, Kanwal raj (2010), “Isolation and modification of pseudohybrid plant (Lupeol)”, J.Pharm Sci & Res Vol.2(1),13-25 16 Bibhu Prasad Sahu, Panchanan Gouda and Chakrapani Patnaik (2016), Pandanus Odaritissimus Linn Prasad Sahu, Panchanan Gouda and Chakrapani Patnaik (2016), Pandanus Odaritissimus Linn: Isolation of Stigmast-5, 22-dien-3-β-ol from ethanolic extra of stem bark and study of antimicrobial activity, Journal of Chemistry and chemical Sciences, Vol.6(6), 574-585 17 Charoenchai P1, Vajrodaya S, Somprasong W, Mahidol C, Ruchirawat S, Kittakoop P (2010), Antiplasmodial, cytotoxic, radical scavenging and antioxidant activities of Thai plants in the family Acanthaceae,Chulabhorn Research Institute, Bangkok, Thailand, 76(16), 1940-1943 18 Farina Mujeeb, Preeti Bajpai, and Neelam Pathak (2014), “Phytochemical Evaluation, Antimicrobial Activity, and Determinnation of Bioactive Components from Leaves of Aegle marmelos”, BioMed Research International Vol 2,pp.1-11 19 Gao Ya, Zhong Mingli, Zhong Jialiang, Zhang Kefeng (2014) “Oestrogenicity and effect on hepatic metabolism of the aqueous extract of the leaf mixture of Aloe buettneri, Dicliptera verticillata, Hibiscus macranthus and Justicia insularis”, Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine, 6, 953-956 20 Gao YT, Yang XW, Ai TM (2006), “Studies on the chemical constituents in herbs of ethanolic extract from herbs of Dicliptera chinensis”, Zhongguo Zhong Yao Za Zhi, 31(12), 985-987 21 P.S Jain, S.B Bari (2010), “Isolation of Lupeol, Stigmatsterol and campesteron from petrolium ether extract of woody stem of Wrightia tinctoria tinctoria”, Asian Journal of plant Sciences, 9(3): 1-5 22 Takhtajan A.L (1997), Diversity and Classification of Flowering Plants, Columbia University Press, New York, USA 23 Telefo PB1, Moundipa PF, Tchana AN, Tchouanguep Dzickotze C, Mbiapo FT (1998),”Effects of an aqueous extract of Aloe buettneri, Justicia insularis, Hibiscus macranthus, Dicliptera verticillata on some physiological and biochemical parameters of reproduction in immature female rats”, J Ethnopharmacol, 63(3):193200 24 Telefo PB1, Moundipa PF, Tchouanguep FM (2002),“Oestrogenicity and effect on hepatic metabolism of the aqueous extract of the leaf mixture of Aloe buettneri, Dicliptera verticillata, Hibiscus macranthus and Justicia insularis”, Fitoterapia, 73(6):472-8 25 Yinggang Luo, Chun Feng, Yajuan Tian, Guolin Zhang (2002), “Glycosides from Dicliptera riparia Phytochemistry”, 6(4), 449-454 26 Zhang K, Gao Y, Zhong M, Xu Y, Li J, Chen Y, Duan X, Zhu H(2016), “Hepatoprotective effects of Dicliptera chinensis polysaccharides on dimethylnitrosamine-induced hepatic fibrosis rats and its underlying mechanism”, J Ethnopharmacol, 179, 38-44 27 ZhangK, ZhuH, GaoY(2010), “Research on active extracts of Diclipterachinensis on liver protection”, ZhongguoZhong Yao ZaZhi, 35(4): 497-498 28 Zhang X1, Zhang J2, Jia L3, Xiao S4 (2016), “Dicliptera Chinensis polysaccharides target TGF-β/Smad pathway and inhibit stellate cells activation in rats with dimethylnitrosamine-induced hepatic fibrosis” Cell Mol Biol (Noisy-le-grand, 62(1): 99-103 PHỤ LỤC Phụ lục 1: phiếu giám định tên khoa học của loài thực vật VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập -Tự do-Hạnh phúc PHÒNG THỰC VẬT KẾT QUẢ GIÁM ĐỊNH TÊN KHOA HỌC MẪU THỰC VẬT Kính gửi: TS.Vũ Đức Lợi, Khoa Y Dược, ĐHQGHN Chúng gồm: ThS.Bùi Hồng Quang ThS Đỗ Văn Hải Nhận đề nghị giám định tên khoa học mẫu tiêu thực vật thu hái TT.Cổ Lễ, huyện Trực Ninh, tỉnh Nam Định mang số hiệu (Vũ Đức Lợi 09) Mẫu tiêu gửi đến mẫu tiêu dạng tươi (có ảnh chụp chi tiết dạng sống, hoa, ) Mẫu tiêu có đủ tiêu chuẩn để giám định tên khoa học bao gồm quan sinh dưỡng quan sinh sản Kết giám định mẫu tiêu mang số hiệu: Vũ Đức Lợi 09 Tên khoa học: Dicliptera chinensis (Linnaeus) Nees - Cây diễn; gan heo Thuộc họ: Ơ Rơ: Acanthaceae Hà Nội, ngày 22 tháng 12 năm 2016 Phụ lục 2: Phổ hợp chất HDl-CDCl3- H 13 Phụ lục 3: Phổ hợp chất HDl-CDCl3- CCPD ... văn với đề tài Nghiên cứu đặc điểm thực vật thành phần hóa học Lá diễn (Dicliptera chinensis (L. ) Nees) có mục tiêu: 1 Xác định đặc điểm thực vật xác định tên khoa học Lá diễn trồng huyện...ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC Người thực hiện: PHẠM KIM THOA NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA LÁ CÂY LÁ DIỄN (Dicliptera chinensis (L. ) Nees) KHOÁ LUẬN TỐT... 18 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Kết nghiên cứu thực vật Đặc điểm thực vật: Cây Lá diễn hay địa phương còn gọi gan heo có đặc điểm thực vật: thân thảo nửa bụi ( 1), cao 30-80 cm Thân