16.2 CHỈ THỊ SINH HỌC DÙNG CHO TIỆT KHUẨN Chỉ thị sinh học dùng cho tiệt khuẩn chế phẩm sinh học tiêu chuẩn hóa, sản xuất từ vi sinh vật chọn lọc, dùng để đánh giá hiệu qui trình tiệt trùng Chỉ thị sinh học thường sản xuất cách cấy lượng bào tử vi sinh vật thị lên vật mang trơ, ví dụ băng giấy lọc, mỏng thủy tinh hay ống plastic, sau đóng gói vật mang cấy khuẩn vào bao bì thích hợp nhằm bảo vệ sản phẩm tránh bị biến chất tạp nhiễm Vật liệu dùng làm bao gói phải bền, khơng bị phân hủy trình tiệt trùng, phải cho tác nhân tiệt trùng thấm vào bên để tiếp xúc với vi khuẩn Hỗn dịch bào tử vi khuẩn đóng ống thuỷ tinh kín dùng làm thị sinh học Đối với chế phẩm lỏng, cấy trực tiếp bào tử vi khuẩn thị vào số đơn vị đóng gói đại diện sản phẩm cần tiệt trùng hay vào chất lỏng có thành phần gần giống sản phẩm, cấy trực tiếp vào sản phẩm thật Trong trường hợp này, phải có biện pháp kiểm tra thích hợp để đảm bảo thân chế phẩm hay sản phẩm giả khơng có khả ức chế vi khuẩn thị Các thông tin bắt buộc phải cung cấp kèm theo thị sinh học bao gồm: tên loài vi khuẩn dùng làm vi sinh vật đối chiếu, số định danh nòi bảo tàng giống gốc, số lượng bào tử sống vật mang, hạn dùng trị số D Trị số D tham số tiệt trùng (khoảng thời gian liều hấp thụ) cần để làm giảm lượng bào tử sống xuống 10% so với lượng ban đầu Chỉ thị sinh học gồm hai hay nhiều lồi vi khuẩn vật mang, không lẫn tạp khuẩn Ngoài ra, nhãn thị sinh học phải cung cấp thông tin môi trường nuôi cấy điều kiện ủ Để kiểm tra qui trình tiệt trùng, đặt thị sinh học vị trí giả định, xác định trước phương pháp vật lý thích hợp có thể, nơi mà tác nhân tiệt trùng khó luân chuyển đến buồng tiệt trùng Sau cho tiếp xúc với tác nhân tiệt trùng, chuyển vật mang vào môi trường dinh dưỡng thích hợp điều kiện vơ trùng đem ủ Đối với thị sinh học đóng ống thuỷ tinh kín có chứa sẵn mơi trường dinh dưỡng đem ủ Các vi khuẩn thị chọn lựa theo nguyên tắc: a) sức đề kháng vi khuẩn thị phương pháp tiệt trùng cho phải lớn sức đề kháng tất vi khuẩn gây bệnh vi khuẩn có khả nhiễm vào sản phẩm cần tiệt trùng, b) không gây bệnh, c) dễ nuôi cấy Sau ủ, quan sát thấy vi khuẩn thị phát triển, chứng tỏ qui trình tiệt trùng sử dụng không đạt yêu cầu Tiệt trùng nhiệt ẩm: Qui trình tiệt trùng nhiệt ẩm thường dùng thị sinh học để thẩm định bào tử vi khuẩn Bacillus stearothermophilus (ví dụ: ATCC 7953, NCTC 10007, NCIMB 8157, hay CIP 52.81) Số lượng bào tử sống vật mang phải từ x 10 trở lên Trị số D 121 ± oC (ký hiệu D121) phải lớn 1,5 phút Phải kiểm tra để bảo đảm chế độ tiệt trùng 121 ± oC phút thị sinh học vi khuẩn sống, bị diệt hồn tồn chế độ tiệt trùng 121 ± o C 15 phút Tiệt trùng nhiệt khô: Qui trình tiệt trùng nhiệt khơ thường dùng thị sinh học để thẩm định bào tử vi khuẩn Bacillus subtilis (ví dụ: var niger ATCC 9372, NCIMB 8058, CIP 77.18) Số lượng bào tử sống vật mang khơng x 10 trị số D 160 oC phải từ – 10 phút Trong trường hợp tiệt trùng nhiệt độ cao 220 oC, ví dụ tiệt trùng khử chất gây sốt dụng cụ thủy tinh, dùng nội độc tố vi khuẩn bền nhiệt thay cho bào tử vi khuẩn (xem phụ lục Các phương pháp tiệt trùng để biết thêm chi tiết) Tiệt trùng xạ ion hóa: Chỉ thị sinh học sử dụng để kiểm tra lơ tiệt trùng điều kiện sản xuất bình thường hay biện pháp bổ sung để thẩm định phương pháp tiệt trùng xạ ion hóa Thường dùng bào tử vi khuẩn Bacillus pumilus (ví dụ: ATCC 27.142, NCTC 10327, NCIMB 10692, CIP 77.25) Số lượng bào tử sống vật mang khơng x 10 Trị số D không nhỏ 1,9 kGy Phải kiểm tra để bảo đảm không vi khuẩn sống sau cho thị sinh học tiếp xúc với xạ ion hóa liều hấp thu 25 kGy (liều hấp thu tối thiểu) Tiệt trùng chất khí: Chỉ thị sinh học sử dụng tất qui trình tiệt trùng chất khí, thẩm định hiệu triệt trùng qui trình lẫn điều kiện vận hành bình thường Với tác nhân tiệt trùng ethylen oxyd, thường dùng bào tử vi khuẩn Bacillus subtilis (ví dụ: var niger ATCC 9372, NCIMB 8058, CIP 77.18) Số lượng bào tử sống vật mang không x 105 Trị số D phải lớn 2,5 phút tiến hành tiệt trùng 54 oC, độ ẩm tương đối RH = 60% nồng độ ethylen oxyd khí mang 600 mg/l Phải kiểm tra để bảo đảm khơng vi khuẩn sống sau xử lý thị sinh học 60 phút điều kiện nêu trên, phải vi khuẩn sống xử lý 15 phút 30 oC (30 oC, RH = 60%, 600 mg/l) Để kiểm tra khả sức đề kháng bào tử với tác nhân tiệt khuẩn thiếu độ ẩm, cho thị sinh học tiếp xúc với ethylen oxyd nồng độ 600 mg/l nhiệt độ 54 oC 60 phút khơng có độ ẩm, phải vi khuẩn sống  ... dụng cụ thủy tinh, dùng nội độc tố vi khuẩn bền nhiệt thay cho bào tử vi khuẩn (xem phụ lục Các phương pháp tiệt trùng để biết thêm chi tiết) Tiệt trùng xạ ion hóa: Chỉ thị sinh học sử dụng để... 1,9 kGy Phải kiểm tra để bảo đảm khơng vi khuẩn sống sau cho thị sinh học tiếp xúc với xạ ion hóa liều hấp thu 25 kGy (liều hấp thu tối thi u) Tiệt trùng chất khí: Chỉ thị sinh học sử dụng tất... oC (30 oC, RH = 60%, 600 mg/l) Để kiểm tra khả sức đề kháng bào tử với tác nhân tiệt khuẩn thi u độ ẩm, cho thị sinh học tiếp xúc với ethylen oxyd nồng độ 600 mg/l nhiệt độ 54 oC 60 phút khơng