BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BÙI THỊ MINH PHƢỢNG PHÁT HIỆN NGƢỜI LÀNH MANG GEN BỆNH VÀ CHẨN ĐOÁN TRƢỚC LÀM TỔ BỆNH HEMOPHILIA A BẰNG KỸ THUẬT MICROSATELLITE DNA LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI - 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BÙI THỊ MINH PHƢỢNG PHÁT HIỆN NGƢỜI LÀNH MANG GEN BỆNH VÀ CHẨN ĐOÁN TRƢỚC LÀM TỔ BỆNH HEMOPHILIA A BẰNG KỸ THUẬT MICROSATELLITE DNA Chuyên ngành: Hóa sinh M số: 62720112 LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: GS.TS Tạ Thành Văn PGS.TS Trần Vân Khánh HÀ NỘI - 2019 LỜI CAM ĐOAN Tôi Bùi Thị Minh Phƣợng, nghiên cứu sinh khóa 34, Trƣờng Đại học Y Hà Nội, chuyên ngành Hóa sinh, xin cam đoan: Đây luận án thân trực tiếp thực dƣới hƣớng dẫn Thầy GS.TS Tạ Thành Văn Cô PGS.TS Trần Vân Khánh Công trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác đ đƣợc công bố Việt Nam Các số liệu thông tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, đ đƣợc xác nhận chấp thuận sở nơi nghiên cứu Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trƣớc pháp luật cam kết này./ Hà Nội, ngày tháng năm 2018 NGƢỜI VIẾT CAM ĐOAN Bùi Thị Minh Phƣợng DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT BMD Becker Muscular Dystrophy BVSKTE Bảo vệ sức khoẻ trẻ em CK Creatine Kinase DMD Duchenne Muscular Dystrophy DNA Deoxyribo Nucleic Acid FISH Fluorescent In Situ Hybridization ICSI Intracytoplasmic Sperm Injection IVF In Vitro Fertilization KB Kilo Base MLPA Multiplex Ligation Probe Amplification NST X Nhiễm sắc thể X NST Y Nhiễm sắc thể Y PCR Polymerase Chain Reaction PGD Preimplantation Genetic Diagnosis RNA Ribo Nucleic Acid RT – RCR Reverse Transcription PCR STR Short Tandem Repeat MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 ĐẶC ĐIỂM CHUNG BỆNH HEMOPHILIA A 1.1.1 Định nghĩa 1.1.2 Lịch sử nghiên cứu 1.1.3 Dịch tễ bệnh học 1.1.4 Đặc điểm lâm sàng chẩn đoán bệnh hemophilia A 1.2 ĐẶC ĐIỂM DI TRUYỀN VÀ CƠ SỞ PHÂN TỬ HEMOPHILIA A 1.2.1 Cơ chế di truyền bệnh hemophilia A 1.2.2 Cơ sở phân tử học bệnh hemophilia A 1.3 NGƢỜI LÀNH MANG GEN BỆNH HEMOPHILIA A 14 1.3.1 Đặc điểm chung ngƣời mang gen bệnh 14 1.3.2 Cơ chế di truyền ngƣời mang gen bệnh hemophilia A 14 1.3.3 Triệu chứng ngƣời mang gen 16 1.3.4 Các phƣơng pháp phát ngƣời lành mang gen bệnh 17 1.4 PHƢƠNG PHÁP THỤ TINH TRONG ỐNG NGHIỆM VÀ QUY TRÌNH CHẨN ĐỐN TRƢỚC LÀM TỔ 23 1.4.1 Phƣơng pháp thụ tinh ống nghiệm 23 1.4.2 Quy trình chẩn đốn gen trƣớc làm tổ 25 1.4.3 Các phƣơng pháp kỹ thuật sinh học phân tử áp dụng việc chẩn đoán trƣớc làm tổ 30 1.5 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG NƢỚC VÀ TRÊN THẾ GIỚI VỀ CHẨN ĐOÁN TRƢỚC LÀM TỔ 38 1.5.1 Tình hình nghiên cứu giới Việt Nam 38 1.5.2 Tình hình nghiên cứu chẩn đốn trƣớc làm tổ bệnh hemophilia A 42 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 46 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 46 2.2 DỤNG CỤ, TRANG THIẾT BỊ VÀ HÓA CHẤT NGHIÊN CỨU 47 2.2.1 Dụng cụ trang thiết bị 47 2.2.2 Hoá chất 48 2.2.3 Trình tự mồi cho phản ứng 51 2.3 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 52 2.3.1 Thiết kế nghiên cứu 52 2.3.2 Địa điểm nghiên cứu 54 2.3.3 Quy trình kỹ thuật sử dụng nghiên cứu 54 2.3.4 Quy trình xác định ngƣời lành mang gen bệnh hemophilia A kỹ thuật microsatellite DNA 57 2.3.5 Quy trình chẩn đoán trƣớc làm tổ 60 2.4 ĐẠO ĐỨC NGHIÊN CỨU TRONG Y HỌC 63 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 64 3.1 KẾT QUẢ PHÁT HIỆN NGƢỜI LÀNH MANG GEN F8 BỊ ĐỘT BIẾN BẰNG KỸ THUẬT MICROSATELLITE DNA 64 3.1.1 Kết xác định marker dị hợp tử gen F8 bệnh nhân ngƣời lành mang gen bệnh kỹ thuật microsatellite DNA 64 3.1.2 Kết phát ngƣời lành mang gen bệnh hemophilia A kỹ thuật microsatellite DNA 68 3.2 KẾT QUẢ CHẨN ĐOÁN TRƢỚC LÀM TỔ BỆNH HEMOPHILIA BẰNG KỸ THUẬT MICROSATTELITE DNA 90 3.2.1 Kết kích thích buồng trứng thực ICSI 90 3.2.2 Kết chẩn đoán tiền làm tổ gia đình hemophilia A 92 CHƢƠNG 4: BÀN LUẬN 108 KẾT LUẬN 138 KHUYẾN NGHỊ 139 CÁC DANH MỤC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU CÓ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Thành phần hóa chất sử dụng cho điện di mao quản 63 Bảng 3.1 So sánh kết phát ngƣời lành mang gen bệnh phƣơng pháp 87 Bảng 3.2 Tỷ lệ phát ngƣời lành mang gen bệnh kỹ thuật microsatellite-DNA 88 Bảng 3.3 Kết đánh giá tỷ lệ phôi phát triển sau thụ tinh 90 Bảng 3.4 Kết đánh giá phát triển phôi thu đƣợc ngày 91 Bảng 3.5 Kết sinh thiết phơi chẩn đốn gen đánh giá phát triển phôi sau sinh thiết ngày 92 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hình ảnh chảy máu khớp gối bệnh nhân hemophilia A Hình 1.2 Hình ảnh chảy máu bệnh nhân hemophilia A Hình 1.3 Kiểu gen kiểu hình bố mẹ hệ sau Hình 1.4 Vai trò yếu tố VIII q trình đơng máu huyết tƣơng 10 Hình 1.5 Vị trí gen mã hóa yếu tố VIII NST X 10 Hình 1.6 Cấu trúc gen protein FVIII 11 Hình 1.7 Protein yếu tố VIII với vùng chức 12 Hình 1.8 Sơ đồ di truyền ngƣời mẹ mang gen kết với bố bình thƣờng 15 Hình 1.9 Sơ đồ di truyền ngƣời mẹ bình thƣờng kết với bố bị bệnh 15 Hình 1.10 Sơ đồ phả hệ ngƣời mẹ mang gen kết với bố bình thƣờng 18 Hình 1.11 Sơ đồ di truyền ngƣời mẹ mang gen kết hôn với bố bị bệnh 19 Hình 1.12 Quy trình thực thụ tinh ống nghiệm 25 Hình 1.13 Sinh thiết phôi bào giai đoạn blastomere cho chẩn đốn PGD 28 Hình 1.14 Ứng dụng kỹ thuật FISH chẩn đốn xác định giới tính số lƣợng nhiễm sắc thể 32 Hình 1.15 Kết multiplex PCR sử dụng cặp mồi amel, SYR, FXS1108, DXS 9798, phôi bào sinh thiết chẩn đoán bệnh hemophilia A 37 Hình 1.16 Sơ đồ phả hệ gia đình mang gen đột biến đảo đoạn intron 22 gây bệnh hemophilia A 43 Hình 1.17 Hình ảnh marker dị hợp tử xác định đột biến gen F8 gây bệnh hemophilia A 44 Hình 1.18 Kết multiplex PCR sử dụng cặp mồi amel, SYR, FXS1108, DXS 9798, phôi bào sinh thiết 45 Hình 2.1 Kết STR lựa chọn marker dị hợp tử 59 Hình 2.2 Kỹ thuật Microsatellite DNA chẩn đốn đột biến gen gây bệnh di truyền lặn liên kết nhiễm sắc thể giới tính X 59 Hình 2.3 Kết STR xác định giới tính 62 Hình 3.1 Kết đồng hợp tử đồng hợp tử STR 64 Hình 3.2 Kết khuếch đại marker DXS9901, FXS1108, F8int22 DXS9897 65 Hình 3.3 Tần suất alen marker FXS 1108 66 Hình 3.4 Tần suất alen marker DXS9897 66 Hình 3.5 Tần suất alen marker F8int22 67 Hình 3.6 Tần suất alen marker DXS9901 67 Hình 3.7 Sơ đồ phả hệ gia đình HA 61 68 Hình 3.8 Hình ảnh giải trình tự gen gia đình m số HA61 69 Hình 3.9 Hình ảnh điện di vùng trình tự lặp lại sử dụng cặp mồi FXS1108, DXS9897 F8int22 gia đình HA61 70 Hình 3.10 Sơ đồ phả hệ gia đình HA37 sau phân tích hai phƣơng pháp 72 Hình 3.11 Ảnh giải trình tự gen gia đình m số HA37 73 Hình 3.12 Ảnh điện di vùng trình tự lặp lại sử dụng cặp mồi DXS9901 DXS9897 gia đình m số HA37 74 Hình 3.13 Sơ đồ phả hệ gia đình HA50 sau phân tích hai phƣơng pháp 75 Hình 3.14 Hình ảnh giải trình tự gen gia đình HA50 76 Hình 3.15 Ảnh điện di vùng trình tự lặp lại sử dụng cặp mồi DXS9901, DXS9897 FXS1108, gia đình bệnh nhân hemophilia A mã số HA50 77 Hình 3.16 Sơ đồ phả hệ gia đình HA16 79 Hình 3.17 Hình ảnh giải trình tự gen gia đình m số HA16 80 Hình 3.18 Ảnh điện di vùng trình tự lặp lại sử dụng cặp mồi DXS9901 DXS9897 gia đình HA16 81 Hình 3.19 Sơ đồ phả hệ gia đình HA30 sau phân tích 83 Hình 3.20 Hình ảnh giải trình tự gen gia đình bệnh nhân mã số HA3084 Hình 3.21 Ảnh điện di vùng trình tự lặp lại sử dụng cặp mồi DXS9901 FXS1108, gia đình bệnh nhân hemophilia A mã số HA30 85 Hình 3.22 Ảnh điện di vùng trình tự lặp lại sử dụng cặp mồi, F8in22, DXS9897 DXS9901 gia đình m số HA09 89 Hình 3.23 Kết khuếch đại marker FXS1108, F8int22, DXS9897 94 Hình 3.24 Kết multiplex PCR khuếch đại marker dị hợp tử FXS1108, DXS9897 F8int22 marker giới tính Amel SRY mẫu bệnh nhân HA61 95 Hình 3.25 Ảnh điện di vùng trình tự lặp lại sử dụng cặp mồi FXS 1108, F8int22, DXS 9897 xác định phơi nam bình thƣờng gia đình HA61 96 Hình 3.26 Ảnh điện di vùng trình tự lặp lại sử dụng cặp mồi FXS 1108, F8int22, DXS 9897 xác định phôi nam bệnh lý gia đình HA61 97 Hình 3.27 Sơ đồ phả hệ phơi gia đình HA61 98 Hình 3.28 Kết khuếch đại marker FXS1108 DXS9897 99 Hình 3.29 Ảnh điện di vùng trình tự lặp lại sử dụng cặp mồi FXS1108 DXS9897 ngƣời mẹ so sánh với bệnh nhân HA28 100 Hình 3.30 Ảnh điện di vùng trình tự lặp lại sử dụng cặp mồi FXS 1108, DXS 9897 xác định phơi nam bình thƣờng gia đình HA28 102 Hình 3.31 Ảnh điện di vùng trình tự lặp lại sử dụng cặp mồi FXS 1108, DXS 9897 xác định phơi nam bệnh lý gia đình HA28 103 Hình 3.32 Ảnh điện di vùng trình tự lặp lại sử dụng cặp mồi FXS 1108, DXS 9897 xác định phơi nữ mang gen gia đình HA28 104 Hình 3.33 Ảnh điện di vùng trình tự lặp lại sử dụng cặp mồi FXS 1108, DXS 9897 xác định phơi nữ khơng mang gen gia đình HA28 105 Hình 3.34 Sơ đồ phả hệ gia đình HA28 106 Hình 3.35 Tỷ lệ phôi bất thƣờng không bất thƣờng gen 107 24 H S Chen YC, Cheng SN,et.al (2010) Genetic analysis of haemophilia A in Taiwan Haemophilia, 16, 538–544 25 N h l m h a 60-benh-nhan-mau-kho-dong-chua-duoc-dieu-trị., 26 T A Franchini.M, Mannucci.P (2007) The management of hemophilia in elderly patients Clinical Interventions in Aging, (3), 361-368 27 F N Gigarel N, Burlet P,et.al (2004) Single cell co amplification of polymorphic markers for the indirect preimplantation genetic diagnosis of hemophilia A, X-linked adrenoleukodystrophy, X-linked hydrocephalus and incontinentia pigmenti loci on Xq28 Hum Genet., 114, 298–305 28 B R H Hoffman E.P., Kunkel LM (1987) Dystrophin: The protein product of the Duchenne muscular dystrophy locus Cell, 51, 914-928 29 H.-H B Jochen Graw, Johannes Oldenburg,et al (2005) Heamophilia A: from mutation analysis to new therapies Nature reviews Genetics, , 488501 30 W J Shima M, Yoshioka A,et.al (1989) An arginine to cysteine amino acid substitution at a critical thrombin cleavage site in a dysfunctional factor VIII molecule Blood, 74, 1612-1617 31 L h R Jaquemin M, Benhida A, et al (2000) A novel cause of mild/moderate hemophilia A:mutation scattered in the factor VIII C1 domain reduce factor VIII binding to von Willebrand factor Blood, 96, 958-965 32 G F Bagnall RD, Green PM (2006) Int22h-related inversions causing hemophilia A: a novel insight into their origin and a new more discriminant PCR test for their detection J Thromb Haemost, 4, 591–598 33 M P Franchini M (2009) Multiple gene interaction and modulation of hemostatic balance Clin Chem Lab Med, 47 (2), 1455–1460 34 D S Shrestha S, Zuhua L,et.al (2016) Evaluation of factor VIII polymorphic short tandem repeat markers in linkage analysis for carrier diagnosis of hemophilia A BIOMEDICAL REPORTS, 5, 228 -232 35 W F o Hemophilia (2012) Carriers and women with hemophilia.Carriers and women with hemophilia WFH 50 years of advancing treatment for all, 36 N T M Nguyễn Anh Trí (2015) Ngƣời mang gen Hemophillia Hội r i lo n đ ng máu iệt nam, 1-9 37 S J L e al (2005) Carriers of Hemophilia What you need to know J Natl Cancer Inst Monogr, 87-90 38 S R Oldenburg.J , Grimm.T,et.al (1993) Direct and Indirect Estimation of the Sex Ratio of Mutation Frequencies in Hemophilia A Am J Hum Genet, 53, 1229-1238 39 T H T Lƣu Vũ Dũng, Tạ Thành Văn, Trần Vân Khánh CS (2015) Phát đột biến gen F8 gây bệnh hemophilia A T p chí nghiên cứu y học, 91 (5), 13-18 40 C P R Liliana Carmen Rossetti, Irene Beatriz Larripa, et al (2005) Genotyping the Hemophilia Inversion Hotspot by Use of Inverse PCR Clinical Chemistry, 51, 1154–1158 41 N W Richard D Bagnall, et al (2019) Recurrent inversion breaking intron of the factorVIII gene is a frequent cause of severe hemophilia A Blood, 99 (1), 168 - 174 42 C J M E Jan P Schouten, Raymon Waaijer, et al (2002) Relative quantification of 40 nucleic acid sequences by multiplex ligation-dependent probe amplification Nucleic Acids Res, 30 (12), e57 43 E R Steptoe PC (1978) Birth after the reimplantation of a human embryo Lancet, (8085), 366 44 V S Hamilton BE (2006) Fertility and abortion rates in the United States, 1960-2002 Int J Androl, 29, 34-45, 29, 34-45 45 R S a R V.C (2005) Timing effects on first marriage: twentieth-century experience in England and Wales and the USA Popul Stud (Camb),, 59, 135146 46 N ZP (2000) Sperm centriole disfunction and sperm immotility Mol Cell Endocrinol,, 166, 59-62 47 P K Ziebe S, Lindenberg S (1997) Embryo morphology or cleavage stage: how to select the best embryos for transfer after in-vitro fertilization Hum Reprod, 12 (7), 1545–1549 48 C D S Jones G.M, Song B,et.al (2008) Novel strategy with potential to identify developmentally competent IVF blastocysts Human Reproduction, 23, 1748–1759 49 H J Callahan TL, Ettner SL,et.al (1994) The economic impact of multiple-gestation pregnancies and the contribution of assisted-reproduction techniques to their incidence N Engl J Med, 331, 244-249 50 S C Wenstrom KD, Hammitt DG, Van Voorhis BJ (1993) Increased risk of monozygotic twinning associated with assisted reproduction Fertil Steril, 60, 51 W D V van der Schoot, J.C.F.M Dreesen, et al (2019) Preimplantation genetic testing for more than one genetic condition: clinical and ethical considerations and dilemmas Human Reproduction,, 34 (6), 1146-1154 52 P S Braude P, Flinte F, Ogilvie CM (2002) Preimplantation genetic diagnosis NATURE REVIEWS, 3, 941-955 53 J Baruch S, Kaufman DJ,et.al (2008) Preimplantation genetic screening: a survey of in vitro fertilization clinics Genetics IN Medicine, 10 (9), 685– 690 54 H J C Harton G.L, Coonen E,et.al (2010) ESHRE PGD consortium best practice guidelines for fluorescence in situ hybridization-based PGD Human Reproduction,, (0), 1-8 55 K E Handyside AH, Hardy K, Winston RM (1990) Pregnancies from biopsied human preimplantation embryos sexed by Y-specific DNA amplification nature, 344, 768–770 56 L J Handyside AH, Tarin JJ,et.al (1992) Birth of a normal girl after in vitro fertilization and preimplantation diagnostic testing for cystic fibrosis N Engl J Med, 327, 905–509 57 H A Griffin D K, Harper JC, et al (1994) Clinical experience with preimplantation diagnosis of sex by dual fluorescent in situ hybridization J Assist Reprod Genet, 11, 132–143 58 H J C D JD (1996) Detection of chromosomal abnormalities in human preimplantation embryos using FISH J Assist Reprod Genet, 13, 137–139 59 V O Rechitsky S, et al (2002) Preimplantation genetic diagnosis for cancer predisposition Reprod Biomed Online, 5, 148-155 60 V A Van de Velde, Sermon K,et al (2000) Embryo implantation after biopsy of one or two cells from cleavage-stage embryos with a view to preimplantation genetic diagnosis Prenat Diag,, 20, 1030–1037 61 V S A De Vos A (2001) Aspects of biopsy procedures prior to preimplantation genetic diagnosis Prenat Diagn, 21, 767–780 62 C S Chen HS, Ma GC, et al (2017) Preimplantation genetic diagnosis and screening: Current status and future challenges Journal of the Formosan Medical Association, 1-7 63 W L Mertzanidou A, Cheng J, et al (2013) Microarray analysis reveals abnormal chromosomal complements in over 70% of 14 normally developing human embryos Human Reproduction, 28, 256–264 64 A S Fragouli E, Daphnis D.D, et al (2011) Cytogenetic analysis of human blastocysts with the use of FISH, CGH and aCGH: scientific data and technical evaluation Human Reproduction, 26, 480–490 65 B S Vassena R, Gonzalez-Roca E, et al (2011) Waves of early transcriptional activation and pluripotency program initiation during human preimplantation development Development, 38, 3699–3709 66 L M Fragouli E, Ross R , et al (2008) Comprehensive molecular cytogenetic analysis of the human blastocyst stage Human Reproduction, 23, 2596–2608 67 S M Veiga A, Benkhalifa M,et al (1997) Laser blastocyst biopsy for preimplantation diagnosis in the human Zygote, 5, 351–354 68 Sermon (2002) Current concepts in preimplantation genetic diagnosis (PGD): a molecular biologist's view Hum Reprod, 8, 1–10 69 S J Wells D (1998) Strategies for preimplantation genetic diagnosis of single gene disorders by DNA amplification Prenat Diagn, 18, 1389–1401 70 B A Fiorentino F, Nuccitelli A (2006) Strategies and clinical outcome of 250 cycles of Preimplantation Genetic Diagnosis for single gene disorders Hum Reprod, 21 (3), 670–684 71 M K I Woodson A.H, Lin H, et.al (2014) Breast Cancer, BRCA Mutations, and Attitudes Regarding Pregnancy and Preimplantation Genetic Diagnosis TheOncologist, 19, 797–804 72 F F Mullis K, Scharf S,et.al (1986) Specific enzymatic amplification of DNA in vitro: the polymerase chain reaction Cold Spring Harb Symp Quant Biol, 51 (1), 263–273 73 J L Dreesen JC, Bras M, et.al (2000) Multiplex PCR of polymorphic markers flanking the CFTR gene, a general approach for preimplantation genetic diagnosis of cystic fibrosis Mol Hum Reprod, (5), 391–396 74 V M Ray PF, Munnich A (2001) Single cell multiplex PCR amplification of five dystrophin gene exons combined with gender determination Mol Hum Reprod, , (5), 489–494 75 H A Griffin DK, Harper JC, et al (1994) Clinical experience with preimplantation diagnosis of sex by dual fluorescent in situ hybridization J Assist Reprod Genet, 11, 132–143 76 H J Harton GL, Coonen E, et al (2001) ESHRE PGD consortium best practice guidelines for fluorescence in situ hybridization-based PGD Hum Reprod, 26 (1), 25–32 77 W I Malmgren.H, Johansson.S,et.al (2006) PGD for dystrophin gene deletions using fluorescence in situ hybridization Molecular Human Reproduction, 12 (5), 353-356 78 E T Colls P, Cekleniak N, et al (2007) Increased efficiency of preimplantation genetic diagnosis for infertility using „„no result rescue" Fertility and Sterility, 88, 53–61 79 Q P Findlay I, Hall J & Rutherford A (1996) Fluorescent PCR: a new technique for PGD of sex and single-gene defects J Assist Reprod Genet, 13, 96–103 80 D V A Sermon K, Velde HV,et al (1998) Fluorescent PCR and automated fragment analysis for the clinical application of preimplantation genetic diagnosis of myotonic dystrophy (Steinert's disease) Mol Hum Reprod 4,791–796 81 M Y Miah G , Rafii,et.al (2013) A Review of Microsatellite Markers and Their Applications in Rice Breeding Programs to Improve Blast Disease Resistance .Int J Mol Sci., 14, 22499-22528 82 A P Raquel M Fernández, et.al (2015) Experience of Preimplantation Genetic Diagnosis for Hemophilia at the University Hospital Virgen Del Rocío in Spain: Technical and Clinical Overview BioMed Research International, 1-9 83 P L A T Trần vân Khánh, Nguyễn Quý Hoài,et.al (2016) Chẩn đoán tiền làm tổ bệnh hemophillia A kỹ thuật microssatelite T p chí nghiên cứu y học, 100 (2), 10-17 84 D H Hussey ND, Froiland DA,et.al (1999) Analysis of five Duchenne muscular dystrophy exons and gender determination using conventional duplex polymerase chain reaction on single cells Mol Hum Reprod, (11), 1089-1094 85 H A M Laurie.AD, AHarraw.J.M, et.al (2010) Preimplantation genetic diagnosis for hemophilia A using indirect linkage analysis and direct genotyping approaches Journal of Thrombosis and Haemostasis, 8, 783–789 86 H A M Laurie A.D, Harraway, et al (2010) Preimplantation genetic diagnosis for hemophilia A using indirect linkage analysis and direct genotyping approaches J Thromb Haemost 8,783 -789 87 M P S a P M G J R Harrawy (2006) A highly informative, multiplexed assay for the indirect detection of hemophilia A using five-linked microsatellites Journal of Thrombosis and Haemostasis, 4, 587 - 590 88 M.-A E Machado FB (2009) High-resolution combined linkage physical map of short tandem repeat loci on human chromosome band Xq28 for indirect haemophilia A carrier detection Haemophilia, 15 (1), 297-308 89 N S Saha A, mani K.R,et.al (2011) A set of five microsatellite markers linked to F8 gene can detect haemophilia A carriers across India Haemophilia, 17, e928 - e935 90 D S Shrestha.S, Li.Z (2016) Evaluation of factor VIII polymorphic short tandem repea markers in linkage analysis for carrier diagnosis of hemophilia A BIOMEDICAL REPORTS, 5, 228 - 232 91 R Y Slaoui M, Ferrandis M ,et.al (2007) Factor VIII (FVIII) gene mutations in 120 patients with hemophilia A: detection of 26 novel mutations and correlation with FVIII inhibitor development Thrombosis and Haemostasis,, 5, 1469–1476 92 L V Dũng (2014) Nghiên cứu xác định đột biến gen F8 gây bệnh hemophillia A Luận án tiến sĩ y học, 93 L Y L Ding.L.Q, _Dai J,et al (2012) Characterisation and validation of a novel panel of the six short tandem repeats for genetic counselling in Chinese haemophilia A pedigrees Haemophilia, 1-5 94 T H T Bùi Thị Thu Hƣơng, Nguyễn Thị Hà,et al (2014) Phát ngƣời lành mang gen bệnh chẩn đoán trƣớc sinh bệnh Hemophilia A T p chí nghiên cứu y học, 88 (3), 1-9 95 N T M Nguyễn Anh Trí, Nguyễn Thị Nữ, et al (2012) Nghiên cứu phát hemophilia dựa vào phả hệ gia đình bệnh nhân đ đƣợc chẩn đoán viện Huyết học – Truyền máu TW Y học Việt Nam, 8, 566 - 571 96 Goodeve A.C (1998) Advances in carrier detection in haemophilia Haemophilia, 4(4), 358-364 97 Shetty S, Ghosh K, Bhide A cộng (2001) Carrier detection and prenatal ldiagnosis in families with hemophilia Natl Med J India, 14,81–83 98 Machado FB Medina-Acosta E (2009) High-resolution combined linkage physical map of short tandem repeat loci on human chromosome band Xq28 for indirect haemophilia A carrier detection Haemophilia, 15(11), 297308 99 W C E V massaro J.D, Muniz Y.C.n, et.al (2011) Analysis of five polymorphic DNA markers for indirect genetic diagnosis of haemophilia A in the Brazilian population Haemophilia, 17, 936 - 943 100 Bộ trƣởng Bộ Y tế (2016) Hƣớng dẫn chẩn đoán điều trị bệnh Hemophilia A Quyết định s 4984/QD-BYT, Hà nội, ngày 17 tháng 19 năm 2016 101 Josephson N (2013) The hemophilias and their clinical management Hematology Am Soc Hematol Educ Program, 261-267 102 World Federation of Hemophilia (2012) Carriers and women with hemophilia.WFH 50 years of advancing treatment for all 103 Gill Swallow ( 2013) Guideline for the Obstetric Management of Carriers of Haemophilia A and B, NHS Nottingham University Hospitals Cookie Disclaime 104 Trần Thị Liên Trần Thị Thanh Hƣơng (2014 ) Di truyền đơn gen, Di truyền y học Nhà xuất giáo dục, 146-149 105 Leuer M, Oldenburg J Lavergne JM (2001) Somatic mosaicism in hemophilia A: a fairly common event Am J Hum Genet, Epub 2001 Jun 14, 69(61), 75-87 106 S Lavery (2008) Preimplantation genetic diagnosis of haemophilia British Journal of Haematology, 144, 303 - 307 107 S J Kulkarni R, Lusher J, et al (2009) Haemophilia Treatment Center Network Investigators; Sites of initial bleeding episodes, mode of delivery and age of diagnosis in babies with haemophilia diagnosed before the age of years a report from The Centers for Disease, PHỤ LỤC Bảng mã acid amin Codon Tên axit amin Viết tắt Viết tắt (3 chữ (1 chữ cái) cái) Codon Tên axit amin Viết tắt Viết tắt (3 chữ (1 chữ cái) cái) TTT Phenylalanine Phe F ATT Isoleucine Ile I TTC Phenylalanine Phe F ATC Isoleucine Ile I TTA Leucine Leu L ATA Isoleucine Ile I TTG Leucine Leu L ATG Methionine Met M TCT Serine Ser S ACT Threonine Thr T TCC Serine Ser S ACC Threonine Thr T TCA Serine Ser S ACA Threonine Thr T TCG Serine Ser S ACG Threonine Thr T TAT Tyrosine Tyr Y AAT Asparagine Asn N TAC Tyrosine Tyr Y AAC Asparagine Asn N TAA Termination Ter X AAA Lysine Lys K TAG Termination Ter X AAG Lysine Lys K TGT Cystein Cys C AGT Serine Ser S TGC Cystein Cys C AGC Serine Ser S TGA Termination Ter X AGA Arginine Arg R TGG Tryptophan Trp W AGG Arginine Arg R CTT Leucine Leu L GTT Valine Val V CTC Leucine Leu L GTC Valine Val V CTA Leucine Leu L GTA Valine Val V CTG Leucine leu L GTG Valine Val V CCT Proline Pro P GCT Alanine Ala A CCC Proline Pro P GCC Alanine Ala A CCA Proline Pro P GCA Alanine Ala A CCG Proline Pro P GCG Alanine Ala A CAT Histidine His H GAT Aspartate Asp D CAC Histidine His H GAC Aspartate Asp D CAA Glutamine Gln Q GAA Glutamate Glu E CAG Glutamine Gln Q GAG Glutamate Glu E CGT Arginine Arg R GGT Glycine Gly G CGC Arginine Arg R GGC Glycine Gly G CGA Arginine Arg R GGA Glycine Gly G CGG Arginine Arg R GGG Glycine Gly G Bảng tổng kết sử dụng marker khuếch đại cho 112 thành viên ( bệnh nhân + ngƣời nhà bệnh nhân) TT GĐ H3 H4 H28 H9 H13 H14 H15 H16 H17 Mã số Họ tên H3.0 H3.1 H4.0 H4.1 H28.0 H281 H28.2 H28.3 H9.0 H9.1 H9.2 H13.0 H13.1 H13.2 H14.0 H14.1 Nguyễn Tiến Đ mẹ: Nguyễn Thị H Nguyễn Gia B mẹ: Hoàng Thị Ng Nguyễn Duy A mẹ: Nguyễn Thị Thu H Nguyễn Thị Bích Hƣờng (?) Em gái: nguyễn Hà M Trần Minh T Phạm Thị Thanh V Trần Thị Thanh Nh Nguyễn Đức Tr Mẹ Nguyễn Đức Tr ối nuôi cấy H13.1 H Lê Thị Ch H15.0 H15.1 H16.0 H16.1 H16.2 H16.3 H17.0 Đột biến Kich thƣớc Marker (10) FXS1108 (11) DXS9897 (14) F8int22 (15) DXS9901 34,9 34,4 45,8 12,9 86.5 167 167/178 179 179 167 167/178 167/178 180 178 178/180 178/180 178 168/178 168 167 167/178 256 256 252 252/264 256 256/264 256 264 255 248/255 248/255 257 253/257 253 252 256 213 213 212 214 215 215 215 214 214 214 212/214 216 214/216 214 214 215 202 201 214 214/216 216 216 216 202 202 202/212 194/202 202 202/204 204 208 194/208 Nguyễn Khánh D mẹ: Bùi Khánh L 6545G>A 29.7 167 167/178 248 248/260 215 215 196 196 Vƣơng Đức M Phan thị H Dì: Phan Thị Ph bác: Phan Thị Th Nguyễn Văn Đ c.4996-4997insA, 167 167 167/178 167 178 252 248/252 252/254 256 260 213 213/217 213/215 213/217 217 195 195/198 212 195/212 202 17 8.7 10,7 15.6 48.1 20.8 c.2777-78, p.907ins 9,8 12,9 20.7 41.1 37.8 23.8 10 H19 12 H22 13 H23 14 H25 15 H26 16 H27 17 H06 18 H30 H17.1 H19.0 H19.1 H22.0 H22.1 H23.0 H23.1 H23.2 H25.0 H25.1 H26.0 H26.2 H27.0 H27.2 H06.0 H06.1 H06.2 H06.3 H06.4 H06.5 H30.0 H30.1 H30.2 H30.3 H30.4 Vũ Thị L C Mẹ Nguyễn Thị MinhV Nghuễn Văn A Mẹ Lê Thị Thanh H Lâm Quang Kh Mẹ Dƣơng Thị Thu H bác ruột: Dƣơng Thị Ph Lê Minh Qu Mẹ Lê Thị H Lê Thanh Toàn em gái: Lê Thị Hồng B Nguyễn Thành B Nguyễn Thị X (con gái) Hoàng Quốc V mẹ: Phạm Thị Th dì: Đặng Thị Th dì: Đặng Thị H chị em họ: Dƣơng Huyền Tr chị em họ: Dƣơng Trà M Nguyễn Thành Phát Nguyễn Thị H (mẹ) Nguyễn Thị Th Nguyễn Vân Tr (em Ph) ối Nguyễn Thị H 8.4 16.7 13.4 58.2 c2196T>A 10.2 6.7 8.9 54.7 intron22 23.7 13.8 20.9 7.9 6.1 2.6 24.3 5.4 16.9 1095-1096insG 15.1 23.9 27.9 16.9 178 167 167/178 167 167/178 176 166/176 166/177 176 166/176 176 176 177 166/177 176 166/176 176 166/176 166/176 166/176 166 166/177 177 166/177 177 256/260 244 244 252 256 224 224 256 247 247/251 256 251/256 256 256/260 252 248/256 244/260 248/252 248/252 252/260 256 251/256 256 251/256 251 215/217 215 215/217 212 215 213 213/215 213/215 214 212 214 214 215 215 212 212/214 212/214 212/214 212 212/214 214 214 214 214 214 199/202 202 198/202 202 212 200 200/216 200/216 214 214/218 208 202/208 194 194 194 194/216 198/202 198/202 198/206 198/206 208 202/208 208 202/208 202 19 H36 20 H37 21 22 H42 H44 23 H46 24 H47 25 H48 26 H49 H36.0 H36.1 H36.2 H37.0 H37.1 H37.2 H37.3 H37.4 H37.5 H42.0 H42.1 H42.2 H44.0 H44.1 H44.2 H46.0 H46.1 H47.0 H47.1 H48.0 H48.3 H48.4 H49.0 H49.1 H49.2 H49.3 H49.4 Tạ Công M mẹ: Nguyễn Thị Ng em gái: Tạ Thị L Vũ Hải Đ mẹ: Nguyễn Thị Thanh Nh Bác Nguyễn T S Bác Nguyễn Thị Y Bác Nguyễn Thanh Ng Chị họ Bùi Diệu H Nguyễn Kiên Q Mẹ Nguyễn Thị Th Bác Nguyễn Thị Th Phạm Hoàng N Mẹ Phạm Hoàng N chị gái: Phạm Lan Phƣơng Trần Sỹ Ph Mẹ Phạm Thị T Nguyễn Đức A Mẹ Phạm Thị L Nguyễn Tuấn M Lƣu Thị L(dì BN) Tạ Thị H (bà ngoại BN) Nguyễn Mạnh D Mẹ Nguyễn mạnh D dì: Nguyễn Thị H chị họ: Nguyễn Khánh L dì: Hồng Thị H 9.8 174.6 184.5 5092 T>C 34.8 23.8 30.7 31 21.9 eexon 8G>A 23.8 34.9 9.8 39.5 40.6 21.9 30.3 17.8 57.5 15.9 27.8 30.8 12.9 25.7 34.9 8.6 35.5 166 166/177 166/177 177 177 177 177 177 166 166/177 177 166 166/177 166/177 177 177 177 166/177 166 166 166/177 175 175/177 175/177 175/177 175/177 255 251/255 251/255 251 251/255 251/259 247/259 251/255 251/255 252 251 251 251 251/255 251/255 251 251/255 256 256/260 248 248/260 248/256 248 248/259 248 255/259 255/259 212 214 214 214 214 214 214 214 212 212/214 212/214 214 214/216 214/216 212 212 214 212/214 214 214 214 214 214/216 212/214 214/216 214/216 202 202/206 202/206 198 198/202 198/202 198/202 198/215 198/202 198 198/204 198/202 194 194/202 194/202 194 194/202 202 202 208 204/208 208/212 194 194/202 204 194/202 194/202 27 H50 28 H51 29 H54 30 H56 31 H57 32 H58 33 H59 H50.0 H50.1 H50.2 H50.3 H50.4 H50.5 H51.0 H51.1 H54.0 H54.1 H54.2 H56.0 H56.1 Lê Trần Tr Mẹ Lê Trần Tr chị họ: Lê Hồng L Nguyễn Hồng Nh chị họ: Nguyễn Quỳnh H bác: Nguyễn Thị H Lục Săm P mẹ: Lục Thị H Nguyễn Hoàng Ph Nguyễn Thị Kim D Nguyễn Thị H(Dì) Gia H Hoàng Thị Ng (Mẹ BN) 4026G>T 24.8 29 111.9 73.2 5.4 34.5 120 23.9 149.3 82.6 43.9 27.5 167 167/178 178 167/178 167/178 167 166 166/177 177 177 177 176 176 256 252/256 252/256 248/252 252/256 252/256 252 252/260 256 256/260 256 256 256/264 213 213/215 215 213/215 213/215 213/215 212 212/214 214 214 214 212 212/214 204 195/204 195/204 195/204 202 199/202 212 206/212 202 202/204 216/218 216 214/216 H57.0 H57.1 H57.2 H57.3 H57.4 H58.0 H58.1 H58.2 H58.3 H59.0 H59.1 H59.2 Phùng Danh H(2016) Lƣơng Thị L( 1979) Lƣơng Thị T (1999( Lƣơng Thị y 2004 Lƣơng Thị D 2001 Nguyễn văn Tr 1979 Nguyễn Thùy D 2003 Nguyễn Thị H 2008 Nguyễn Thị Ph1999 Nguyễn Đăng D 2008 Hoàng Thị Mỹ D 1979 Hoàng Thị L 1950 45.6 102.8 57.8 34.9 43.9 12.5 34.8 23.9 28.9 23.8 34.9 30.8 167 167/177 166/177 167/177 167/177 167 167 177 167/177 176 174/176 174 252 252/260 252/264 252/264 260/264 251 251/263 251 251/260 255 255/259 251 212 212/214 212/214 212/214 214 214 214 216 214/217 214 214/216 212 216 200/216 200/216 200/216 200/216 197 197/212 212/214 197/202 202 194/204 204 H60.0 H60.1 H60.2 H60.3 34 H60 H60.4 H60.5 H60.6 H60.7 35 H61 H61.0 H61.1 Đỗ bá Th1958 Đỗ Thị H 1979 Đỗ Thị H 1978 Đỗ Thị H 1983 Nguyễn Thị Hồng Ng (con H60.1) Nguyễn Thị Minh A 1998 Đỗ Thị Huế 1986 Lê Hƣơng Gi (con H60.3)23,9 Nguyễn Văn H Nguyễn Thị Th 75.5 23.9 34.7 45.9 176 166/176 176 176 252 252 252 252/260 214 212/214 214 214 202 194/202 202/206 202/206 23,9 23.6 14.8 176 176 176 244/252 244/252 252 214 214 214 202 202 202 176 252/260 214 202 23.9 166 255 212 202 56.7 166/177 248/255 212/214 202 ... Phát ngƣời lành mang gen bệnh chẩn đoán trƣớc làm tổ bệnh hemophilia A kỹ thuật microsatellite DNA đƣợc đ a vào nghiên cứu với mục tiêu: Xác định người lành mang gen bệnh hemophilia A kỹ thuật. .. kỹ thuật microsatellite DNA Chẩn đoán trước làm tổ cho người mẹ mang gen bệnh hemophilia A kỹ thuật microsatellite DNA 4 CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 ĐẶC ĐIỂM CHUNG BỆNH HEMOPHILIA A 1.1.1 Định... MICROSATELLITE DNA 64 3.1.1 Kết xác định marker dị hợp tử gen F8 bệnh nhân ngƣời lành mang gen bệnh kỹ thuật microsatellite DNA 64 3.1.2 Kết phát ngƣời lành mang gen bệnh hemophilia A kỹ thuật