1 ĐẶT VẤN ĐỀ Tính cấp thiết đề tài Cùng với phát triển kinh tế xã hội, tỷ lệ vô sinh ngày gia tăng nỗi lo cho nhiều cặp vợ chồng Ra đời vào năm 1970 kỷ trước, nói phương pháp thụ tinh ống nghiệm “in vitro fertilization - IVF” trở thành cứu cánh cho nhiều cặp vợ chồng vơ sinh mong muốn có đứa Phương pháp mang lại niềm vui, niềm hạnh phúc cho bao cặp vợ chồng khắp nơi giới, nhiên cặp vợ chồng may mắn sinh đứa mong muốn phương pháp Tỷ lệ thành công phương pháp đạt 35% tùy theo quốc gia Có nhiều yếu tố ảnh hưởng đến thành công phương pháp như: tuổi bố mẹ, tình trạng sức khỏe, tinh thần tâm lý, chất lượng tinh trùng trứng… đặc biệt chất lượng phôi sau thụ tinh Các phơi bất thường nhiễm sắc thể (NST) thường hay NST giới tính làm giảm khả mang thai sau cấy phôi vào buồng tử cung, gây sảy thai sinh đứa không khỏe mạnh Để làm giảm tỷ lệ sinh đứa không khỏe mạnh làm tăng tỷ lệ thành công phương pháp thụ tinh ống nghiệm, thời gian gần nhà khoa học áp dụng quy trình sàng lọc phơi “Pre-Implantion Genetic Diagnosis, PGD” gọi “chẩn đốn di truyền trước làm tổ” nhằm có phơi tốt cho q trình chuyển phơi Hemophilia A (bệnh ưa chảy máu) bệnh di truyền thiếu hụt bất thường chức yếu tố đông máu VIII Hemophilia A bệnh di truyền alen lặn NST X khơng có alen NST Y, nên người mẹ mang gen bệnh di truyền cho trai biểu bệnh lâm sàng Theo thống kê tổ chức hemophilia A giới, có khoảng 250.000 bệnh nhân mắc bệnh hemophilia A có khoảng 50.000 điều trị đặc hiệu Tại Việt Nam, ước tính có khoảng 6000 người bị bệnh hemophilia A khoảng 30.000 người mang gen bệnh hemophilia Biểu lâm sàng chủ yếu chảy máu nơi thể, chảy máu kéo dài: chảy máu khớp, chảy máu cơ, chảy máu não, chảy máu cổ ngực… Mức độ biểu lâm sàng liên quan trực tiếp nồng độ yếu tố VIII huyết tương Việc tầm soát trước sinh bệnh hemophilia A việc làm quan trọng giúp cho việc sinh đứa trẻ hoàn toàn khỏe mạnh Việc xác định đột biến gen gây bệnh, sàng lọc người lành mang gen bệnh chẩn đoán trước sinh bệnh hemophilia A nghiên cứu nhiều Việt Nam.Việc quản lý bệnh nhân người mang gen bệnh lý tiền đề vững để triển khai thành công quy trình chẩn đốn trước làm tổ sàng lọc phôi Phương pháp giúp giảm biến chứng di chứng cho người mẹ mang thai bệnh lý, giảm chấm dứt thai kỳ phát bệnh thai nhi chẩn đoán tiền sản, mang lại niềm vui hạnh phúc cho cặp vợ chồng mang gen bệnh, đồng thời giảm tỷ lệ mắc bệnh cộng đồng Cùng với phát triển sinh học phân tử, có nhiều kỹ thuật áp dụng để phát đột biến gây bệnh hemophilia A multiplex polymerase chain reaction (PCR), kỹ thuật lai huỳnh quang chỗ (FISH) Kỹ thuật microsatellite DNA kỹ thuật sử dụng primer gắn huỳnh quang short tandem repeat (STR) marker phân tích kích thước chúng thông qua điện di mao quản máy giải trình tự gen để xác định bất thường nhiễm sắc thể Kỹ thuật có nhiều ưu điểm tính bền vững cao, dễ dàng phát dị hợp tử mà không cần xác định đột biến trực tiếp, giảm chi phí cho gia đình bệnh nhân Hiện kỹ thuật mẻ Việt Nam ứng dụng chẩn đoán bệnh lý di truyền Mục tiêu đề tài Xác định người lành mang gen bệnh hemophilia A kỹ thuật microsatellite DNA Chẩn đoán trước làm tổ cho người mẹ mang gen bệnh hemophilia A kỹ thuật microsatellite DNA Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Bệnh lý di truyền nhóm bệnh khơng phổ biến số nhóm bệnh khác thực tế cho thấy hàng năm có lượng lớn đứ trẻ sinh bị dị tật mắc bệnh lỹ di truyền Hemophilia A bệnh khó điều trị để lại hậu nặng nề sức khỏe, tinh thần chất lượng sống Vì vấn đề đặt phải giải sớm nhằm giảm tỷ lệ sinh bị bệnh Bệnh hemophilia A di truyền qua nhiều hệ nhiều người mắc bệnh gia đình.Việc xác định đột biến gen phát người lành mang gen bệnh cần thiết để có tư vấn thích hợp giúp ngăn ngừa làm giảm tỉ lệ mắc bệnh Chẩn đoán trước sinh biện pháp thực phổ biến Việt Nam cho bệnh lý di truyền nói chung, bệnh hemophilia A nói riêng giúp cho bà mẹ có khả sinh đứa khỏe mạnh, kỹ thuật rẻ tiền, nhiên việc sinh khỏe mạnh phụ thuộc vào xác suất ngẫu nhiên lần mang thai, trường hợp thai nhi bị bệnh phải đình thai nghén tuổi thai lớn 17 tuần ảnh hưởng đến tâm sinh lý sức khỏe người mẹ Chẩn đoán trước làm tổ giúp chủ động chọn phôi không bị bệnh để cấy vào buồng tử cung Nghiên cứu sử dụng kỹ thuật microsatellite DNAtrong chẩn đoán trước làm tổ bệnh hemophilia A Đây kỹ thuật gián tiếp phát alen đột biến dị hợp tử mà không cần xác định đột biến trực tiếp Cấu trúc luận án - Luận án trình bày 139 trang (không kể tài liệu tham khảo phần phụ lục) Luận án chia làm phần: + Đặt vấn đề: trang + Chương 1: Tổng quan tài liệu 42 trang + Chương 2: Đối tượng phương pháp nghiên cứu 18 trang + Chương 3: Kết nghiên cứu 45 trang + Chương 4: Bàn luận 30 trang + Kết luận: trang + Kiến nghị: trang Luận án gồm bảng, 35 hình Sử dụng 107 tài liệu tham khảo gồm tiếng Việt tiếng Anh Phần phụ lục gồm: Bảng mã acid amin, Bảng tổng kết sử dụng marker khuếch đại cho 112 thành viên ( bệnh nhân + người nhà bệnh nhân) danh sách 35 bệnh nhân hemophilia A 77 thành viên nữ gia đình hemophilia A Chương TỔNG QUAN 1.1 ĐẶC ĐIỂM CHUNG BỆNH HEMOPHILIA A 1.1.1 Định nghĩa Bệnh hemophilia A bệnh di truyền thiếu hụt bất thường chức yếu tố đông máu huyết tương - thiếu hụt yếu tố VIII gây bệnh hemophilia A, thiếu hụt yếu tố IX gây bệnh hemophilia B, thiếu hụt yếu tố XI gây bệnh hemophilia C Bệnh hemophilia A bệnh rối loạn đông máu di truyền hay gặp 1.1.2 Chẩn đoán bệnh  Chẩn đoán xác định - Dựa vào lâm sàng: Có vết bầm tím, tụ máu, chảy máu - Dựa vào tiền sử gia đình - Dựa vào xét nghiệm máu: + Số lượng tiểu cầu bình thường, PT (Prothrombin Time: thời gian prothrombin) bình thường, fibrinogen bình thường, APTT (Activated Partial Thromboplastin Time: thời gian thromboplastin phần hoạt hóa) kéo dài > 1,5 giá trị bình thường + Hoạt tính yếu tố VIII huyết tương giảm 40% + Yếu tố Von Willebrand bình thường + Các xét nghiệm khác: Mixtest xác định kháng thể kháng yếu tố VIII  Chẩn đoán mức độ bệnh Nồng độ yếu tố VIII Mức độ Biểu chảy máu (%) (hoạt tính(UI/ml)) Chảy máu tự nhiên không liên Nặng C p.lle1698 Thr HA50 14 c 4026G>T p Glu1342stop HA61 Thành viên gia đình Mẹ Dì Bác gái Mẹ Em gái Mẫu ối Mẹ Chị gái Mẹ Bác Chị họ Chị họ c 435-450del15bp) Mẹ p.135 -139 Tyr-Val Microsatellite DNA Không Không Mang Mang mang mang gen gen gen gen Sequencing + + - + + + + + + + + + + + + + + - - + + + + 13 Nhận xét: Kết cho thấy, kết phát người lành mang gen bệnh kỹ thuật giải trình tự gen kỹ thuật MicrosatelliteDNA hồn tồn trùng khớp Hình 3.1 Hình ảnh giải trình tự gen gia đình mã số HA16 (Mũi tên đỏ vị trí đột biến) Nhận xét: Hình ảnh giải trình tự exon 14 gen F8 người mẹ bác bệnh nhân HA16 xuất đỉnh chồng lên sau điểm đột biến c.4996-4997insA, chứng tỏ mẹ bác bệnh nhân mang gen F8 đột biến trạng thái dị hợp tử Dì bệnh nhân khơng xuất đỉnh đột biến, nên dì bệnh nhân người bình thường 14 Hình 3.2 Ảnh điện di vùng trình tự lặp lại sử dụng cặp mồi DXS9901 DXS9897 gia đình HA16 Nhận xét: Kết cho thấy vùng trình tự lặp lại DXS 9798, DXS9901, mẹ bệnh nhân xuất đỉnh, đỉnh tương ứng với alen Ở đỉnh trùng với đỉnh bệnh nhân đỉnh alen đột biến, tức bệnh nhân nhận alen đột biến từ người mẹ, mẹ bệnh nhân mang gen F8 đột biến trạng thái dị hợp tử Bác bệnh nhân xuất đỉnh trùng với alen đột biến bệnh nhân nên bác bệnh nhân mang gen bệnh Dì bệnh nhân xuất hai đỉnh khơng trùng với bệnh nhân, nên dì bệnh nhân người bình thường Kết xác định người lành mang gen bệnh kỹ thuật microsatellie DNA Bảng 3.3 Tỷ lệ phát người lành mang gen bệnh kỹ thuật microsatellite-DNA 15 Mang gen Không mang gen Tổng bệnh bệnh số n (%) n (%) Mẹ bệnh nhân 35(100) 0(0) 35 Thành viên nữ khác 33(78,6) (21,4) 42 Tổng 68/77(88,3) 9/77 (11,7) 77 Chú thích: Thành viên nữ khác bao gồm: em gái, chị, dì, bác gái, bà ngoại, chị họ, em họ bệnh nhân 3.2 KẾT QUẢ CHẨN ĐOÁN TRƯỚC LÀM TỔ BỆNH HEMOPHILIA BẰNG KỸ THUẬT MICROSATTELITE DNA Thành viên gia đình Hình 3.3 Kết multiplex PCR xác định phơi nam bình thường gia đình HA28 Nhận xét: Kết cho thấy xuất đỉnh vùng marker giới tính Amel tương ứng với nhiễm sắc thể giới tính X Y, đỉnh vùng marker giới tính SRY tương ứng với nhiễm sắc thể giới tính Y chứng tỏ phơi nam Với marker FXS1108, phơi xuất đỉnh kích thước 166bp tương ứng với đỉnh alen bình thường, khơng xuất đỉnh kích thước 177bp tương ứng với đỉnh alen đột biến Tương tự vậy, với marker DXS9897 phôi xuất đỉnh 260 bp tương ứng với đỉnh alen bình thường, khơng xuất đỉnh kích thước 256bp tương ứng với đỉnh alen đột biến Kết khẳng định phơi nam bình thường khơng mang alen đột biến gen F8 người mẹ 16 Hình 3.4 Kết multiplex PCR xác định phơi nam bệnh lý gia đình HA28 Nhận xét: Kết cho thấy xuất đỉnh vùng marker giới tính SRY tương ứng với nhiễm sắc thể giới tính Y, chứng tỏ phôi nam Với marker FXS 1108, phôi xuất đỉnh kích thước 177bp tương ứng với đỉnh alen bệnh lý trùng với đỉnh alen bệnh nhân, không xuất đỉnh kích thước 166bp tương ứng với đỉnh alen bình thường Tương tự vậy, với marker DXS9897 phôi xuất đỉnh 256 bp tương ứng với đỉnh alen bệnh lý trùng với đỉnh alen bệnh nhân, khơng xuất đỉnh kích thước 260 bp tương ứng với đỉnh alen bình thường Với kết khẳng định phôi nam bệnh lý mang alen đột biến gen F8 người mẹ Hình 3.5 Kết multiplex PCR xác định phơi nữ mang gen gia đình HA28 Nhận xét: 17 Kết cho thấy xuất đỉnh 103 bp vùng marker giới tính Amel X, marker khuếch đại nhiễm sắc thể X, có vùng trình tự lặp lại giống nhiễm sắc thể X, nên có đỉnh Kết chứng tỏ phôi nữ Với marker DXS FXS1108, phơi xuất kích thước 177bp tương ứng với đỉnh alen đột biến (alen bệnh lý) Tương tự vậy, với marker DXS9897 phôi xuất đỉnh đỉnh kích thước 256 bp tương ứng với đỉnh alen đột biến Cả marker không xuất đỉnh alen bình thường Kết khẳng định phơi nữ mang gen Hình 3.6 Kết multiplex PCR xác định phôi nữ không mang gen gia đình HA28 Nhận xét: Kết cho thấy xuất đỉnh 103 bp vùng marker giới tính Amel X, marker khuếch đại nhiễm sắc thể X, có vùng trình tự lặp lại giống nhiễm sắc thể X, nên có đỉnh Kết chứng tỏ phơi nữ Với marker DXS1108, phơi xuất kích thước 166bp tương ứng với đỉnh alen bình thường Tương tự vậy, với marker DXS9897 phôi xuất đỉnh kích thước 260 bp tương ứng với đỉnh alen bình thường Cả marker khơng xuất đỉnh 18 alen bệnh lý Kết khẳng định phơi nữ khơng mang gen 19 * Sơ đồ phả hệ phôi gia đình HA28 Hình 3.7 Sơ đồ phả hệ gia đình HA28 Nhận xét: Gia đình HA28 sau thụ tinh ống nghiệm, sinh thiết thơi chẩn đốn thu 01 phơi nam bình thường (II 2), 01 phơi nữ bình thường (II5), 01 phơi nam bất thường (II3), 01 phôi nữ mang gen bệnh (II4) 20 * Tỷ lệ phơi sau chẩn đốn gen kỹ thuật microsatellite DNA Biểu đồ 3.2: Tỷ lệ phôi bất thường không bất thường gen Nhận xét: Với việc sử dụng kỹ thuật microsatelite DNA chẩn đoán trước làm tổ 12 gia đình bệnh nhân Hemophilia A có nguyện vọng sinh khỏe mạnh Trong tổng số 75 phơi sinh thiết đển làm xét nghiệm chẩn đốn gen, có 26/75 phơi phát mang đột biến gen gây bệnh hemophilia A, gồm phôi nam phôi nữ bị bệnh, chiếm tỷ lệ 34,7% Còn lại 49/75 phơi, chiếm tỷ lệ 65,3%, có kiểu hình bình thường; gồm phơi nam, nữ bình thường phơi nữ mang gen Chương BÀN LUẬN * Kết xác định người lành mang gen bệnh kỹ thuật microsatellite DNA Bệnh hemophilia A bệnh di truyền thiếu hụt bất thường chức yếu tố VIII, với tỷ lệ 1-2 10.000 tồn giới, khơng có khác biệt chủng tộc Từ năm 1984, từ nghiên cứu Gitschite cộng cho thấy hiểu biết đầy đủ cấu trúc phân tử gen F8 tổng hợp protein yếu tố VIII: Gen F8 gen lớn thể, có kích thước 186 kb gồm 26 exon Yếu tố FVIII glycoprotein lớn có chức đồng yếu tố cần thiết cho kích hoạt phân giải protein yếu tố X kích hoạt yếu tố IX đường đông máu nội sinh Gen F8 mã hóa cho protein FVIII gồm 2332 acid amin có trọng lượng phân tử khoảng 300 kD Khi gen F8 bị đột biến, tế bào giảm khả tổng hợp yếu tố FVIII gây nên bệnh hemophilia A Hiểu biết đầy đủ cấu trúc phân tử gen F8 mở đường cho nghiên cứu chế bệnh học phân tử hemophilia A dạng đột biến gen F8 gây bệnh hemophilia Sự đời phát triển sinh học phân tử giúp phát dạng, vị trí đột biến gen F8 gây bệnh hemophilia A Hiện nay, hàng năm có nhiều đột biến cơng bố sở liệu HAMSTeRS (Hemophilia A Mutation, Search, Test and Resource Site) 21 trang quản lý thông tin bệnh hemophilia A nước Anh: đến tháng 1/2013 có 2158 đột biến vị trí khác gen F8 công bố, hay sở liệu CDC (The Centers for Disease Control and Prevention) trang quản lý thông tin Hoa Kỳ bệnh hemophilia A có tổng số 2556 vị trí đột biến gây bệnh cơng bố Hiện giới sử dụng nhiều phương pháp khác để phát người lành mang gen bệnh hemophilia A Năm 2004, Lê Nhật Minh cộng nghiên cứu người lành mang gen bệnh hemophilia A cách sử dụng kỹ thuật enzym cắt giới hạn (PCR-RFLP) Năm 2014, Bùi Thị Thu Hương cộng sử dụng kỹ thuật I-PCR kỹ thuật giải trình tự gen để xác định người lành mang gen bệnh gia đình xác định đột biến điểm bệnh nhân Hiện nay, việc phát người lành mang gen bệnh thường thực kỹ thuật phát đột biến trực tiếp gen F8 dựa vào đột biến điểm bệnh nhân Tuy nhiên, chi phí cho việc phát đột biến gen F8 cao kích thước lớn (186kb) với 26 exon hông phải bệnh nhân có điều kiện xét nghiệm gen, ngồi số bệnh nhân xét nghiệm gen, tỉ lệ định (khoảng 10%) bệnh nhân chưa phát đột biến gen F Xuất phát từ thực tế nhóm nghiên cứu thực phương pháp gián tiếp microsatellite-DNA xác định người lành mang gen bệnh hemophilia A thành viên nữ gia đình bệnh nhân hemophilia A chưa xác định đột biến điểm để xác định marker dị hợp tử có hướng tư vấn di truyền chẩn đoán trước làm tổ cho gia đình có nhu cầu sinh hồn tồn khỏe mạnh Nghiên cứu thực 112 thành viên gia đình hemophilia A với việc sử dụng STR thu tỷ lệ dị hợp tử STR DXS 9897 DXS 9901 cao 55,2%, STR F8in22 FXS1108 tỷ lệ dị hợp tử thấp Điều khẳng định tính đa hình cao tỷ lệ dị hợp tử tăng Vì với việc sử dụng STR có tính đa hình cao khả phát người lành mang gen bệnh cao có ý nghĩa việc quản lý bệnh nhân hemophilia A nói riêng bệnh lý di truyền nói chung Như với việc phát tính đa hình cao STR ứng dụng phát người lành mang gen chẩn 22 đoán trước làm tổ bệnh lý di truyền Như thực đồng thời kỹ thuật sequencing Microsatellite-DNA thành viên gia đình bệnh nhân HA61, HA16, HA37, HA30, HA50 xác định đột biến điểm thu kết 13 thành viên nữ (mẹ, bà ngoại, bác gái, chị bệnh nhân) mang gen bệnh thành viên nữ (mẫu ối mẹ bệnh nhân, chị họ bệnh nhân) không mang gen bệnh Như vậy, quy trình kỹ thuật microsatellite-DNA có sử dụng cặp mồi DXS9897, DXS9901, FXS1108, DXS9901, F8int22 đánh dấu huỳnh quang để khuyếch đại vùng trình tự lặp lại STR chuẩn hóa quy trình multiplex PCR, sản phẩm khuếch đại PCR điện di hệ thống sequencing hãng Beckman coulter phân tích kết phần mềm Genome lab system xây dựng để xác định người lành mang gen bệnh hemophilia A cho kết xác với phương pháp giải trình tự gen Vì quy trình kỹ thuật microsatellite-DNA chuẩn hóa để áp dụng chẩn đoán trước làm tổ Với kỹ thuật microsatellite DNA có nhiều ưu điểm so với kỹ thuật khác có tính bền vững cao hơn, u cầu thao tác kỹ thuật hơn, phù hợp với chẩn đốn có cỡ mẫu lớn, chẩn đốn trước làm tổ mẫu DNA tách chiết từ tế bào Kỹ thuật phương pháp hữu hiệu để phát người lành mang gen bệnh Việt Nam Sự thành công kỹ thuật mở ứng dụng việc giảm sinh đứa bị bệnh cách tư vấn chẩn đoán trước làm tổ Nghiên cứu thực với 35 gia đình hemophilia A với 77 thành viên nữ, không sử dụng đột biến điểm mà dựa vào chẩn đoán lâm sàng Sử dụng kỹ thuật microsatellite DNA xác định alen đột biến Kết cho thấy 35/35 người mẹ mang gen đột biến trạng thái dị hợp tử chiếm 100% 68/77 thành viên nữ người lành mang gen đột biến F8 35/35 người mẹ mang gen bệnh (chiếm 100%) Kết xác định tình trạng mang gen người mẹ quan trọng: người mẹ mang gen bệnh truyền bệnh cho trai truyền gen bệnh cho gái họ,, bệnh di truyền qua nhiều hệ có nhiều người mắc bệnh gia đình Khơng có trường hợp người mẹ khơng mang gen bệnh 23 nên đột biến gen F8 người bị bệnh tượng khảmhoặc đột biến phát sinh (denovo mutation), thành viên nữ gia đình bệnh nhân có nguy mang gen bệnh 68/77 người lành mang gen bệnh 35 gia đình bệnh nhân hemophilia A (chiếm 88,3%) kết cao nghiên cứu Shetty S (2001) 102 gia đình bệnh nhân hemophilia A (Ấn Độ) thấy tỷ lệ người lành mang gen bệnh 64,5%, cao nghiên cứu Bùi Thị Thu Hương (2014) 50 gia đình bệnh nhân hemophilia A thấy tỷ lệ người lành mang gen bệnh 53,6 Có khác biệt kết thu cỡ mẫu nhỏ nên chưa thể kết luận được, đối tượng nghiên cứu có tiền sử bệnh khác nhau, mà thành viên nữ gia đình có tiền sử bệnh rõ ràng có nguy mang gen bệnh cao hơ Trong nghiên cứu thành viên nữ gia đình hemophillia A chưa đến đầy đủ tham gia nghiên cứu có thành viên nữ gia đình bệnh nhân mặc cảm hay lo sợ nên chưa đến kiểm tra để xác định tình trạng mang gen Với 68 người mang gen bệnh cần tư vấn tư vấn di truyền, ngăn ngừa sinh đứa trẻ bị bệnh hemophilia A, tăng hiệu tác phòng ngừa bệnh tật Việc xác định người lành mang gen bệnh quan trọng, người mẹ mang gen bệnh mẹ có tính chất di truyền, truyền gen bệnh cho trai biểu bệnh lâm sàng Qua nghiên cứu cho thấy người phụ nữ mang gen bệnh cần phải có kế hoạch dự phòng để đảm bảo sức khỏe chung sức khỏe sinh sản nói riêng nhằm nâng cao chất lượng sống thân, gia đình xã hội Kết có phụ nữ khơng mang gen bệnh, giúp cho người phụ nữ hoàn toàn yên tâm thoát khỏi nỗi ám ảnh bệnh tật, lo lắng sống Người phụ nữ với thiên chức làm mẹ vất vả, người phụ nữ mang gen bệnh hemophilia A có nỗi ám ảnh, nỗi lo lắng vất vả nhiều, lo cho việc sinh đứa bị bệnh, khó khăn việc sinh đẻ nguy chảy máu sản khoa Tuy nhiên có khó khăn có người phụ nữ khơng biết mang gen bệnh thiếu hiểu biết bệnh không tuyên truyền tư vấn hôn nhân Mặc dù kỹ thuật sinh học phân tử xác định người lành mang gen bệnh Năm 2014 Bùi Thị thu 24 Hương cộng sử dụng kỹ thuật I-PCR phát người lành mang gen bệnh dựa vào đột biến điểm, kỹ thuật cho kết xá Tuy nhiên với kỹ thuật phải dựa vào đột biến điểm bệnh nhân kỹ thuật sequencing kỹ thuật khó, vất vả tốn Trong gia đình bệnh nhân hemophilia A gia đình khó khăn, nên việc thực kỹ thuật I-PCR để phát đột biến bị hạn chế Vì kỹ thuật microsatellite DNA đời nhằm giúp cho bệnh nhân hemophilia A có khả thực cao kỹ thuật nhanh chóng, đơn giản để phân tích liên kết bệnh hemophillia A gia đình khơng thể xác định đột biến Kết chẩn đoán trước làm tổ Việc phát người lành mang gen bệnh sở quan trọng để tiến hành chẩn đoán trước sinh nhằm phát sớm thai nhi mang gen bệnh, giảm sinh đứa trẻ bị bệnh Với việc tầm soát trước sinh thực cách lấy mẫu ối tuần thai 15-18, nghiên cứu kỹ thuật I-PCR Tuy nhiên, với việc sàng lọc mang thai có nhược điểm xác định thai nhi bị bệnh phải đình thai tuần thai lớn, ảnh hưởng đến tâm sinh lý người mẹ, ảnh hưởng chất lượng lần mang thai sau Vì vậy, kỹ thuật chẩn đốn trước làm tổ giúp cho cặp vợ chồng có khả sinh đứa hoàn toàn khỏe mạnh mà khơng phải đình thai Đối tượng cần chẩn đốn trước làm tổ nghiên cứu chúng tơi người phụ nữ mang gen bệnh chưa sinh bị bệnh hemophillia A xác định có mang gen bệnh trạng thái dị hợp tử kỹ thuật microsattellite DNA Nghiên cứu thực 75 phôi bào sinh thiết, kết thu 49/75 (65,3%)phơi bình thường, 26/75 (34,7%) phơi bất thường Điều cho thấy: khơng có chẩn đốn gen trước làm tổ xác suất sinh đứa trẻ bị bệnh cộng đồng 34,7% nỗi gánh nặng cho gia đình xã hội Như với phát triển đất nước, kỹ thuật sinh học phân tử ngày phát triển, từ việc phát đột biến gen trực tiếp bệnh nhân, đến việc chấn đoán sớm thai phụ tuần thai thứ 15 làm ảnh hưởng đến chất lượng, tâm sinh lý người phụ nữ, ngày kỹ thuật microsatellite DNA đời giải hạn chế 25 phương pháp Vì vậy, việc sinh đứa trẻ khỏa mạnh gia đình có người mắc bệnh hemophilia A điều khơng khó khăn Đối với gia đình khó khăn cái, mong mỏi có đứa lớn, phơi sinh thiết phôi mang gen bệnh.Những phôi thai sau lớn lên chắn phải tư vấn di truyền chẩn đoán trước sinh, chẩn đoán trước làm tổ KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu đưa số kết luận sau: Phát người lành mang gen F8 bị đột biến kỹ thuật microsatellite DNA Trong 35 gia đình có bị bệnh hemophilia A chẩn đoán lâm sàng: - 35/35 người mẹ mang gen F8 đột biến trạng thái dị hợp tử, chiếm tỷ lệ 100% - 33/42 thành viên nữ (gồm bà ngoại, bác, dì, chị, em gái…) mang gen bệnh trạng thái dị hợp tử, chiếm tỷ lệ 78,6%; 9/42 thành viên nữ không mang gen bệnh, chiếm tỷ lệ 21,4% Chẩn đoán trước làm tổ bệnh hemophilia A kỹ thuật microsatellite DNA 12/35 thai phụ người lành mang gen bệnh thực chẩn đốn trước làm tổ - Tổng số phơi xét nghiệm gen 75 phơi, số phơi bất thường gen chiếm 34,7%, số phơi bình thường chiếm 65,3% - 9/12 người mẹ bệnh nhân có phơi bình thường sau phân tích gen  ... nữ không mang gen bệnh, chiếm tỷ lệ 21,4% Chẩn đoán trước làm tổ bệnh hemophilia A kỹ thuật microsatellite DNA 12/35 thai phụ người lành mang gen bệnh thực chẩn đoán trước làm tổ - Tổng số phôi... kỹ thuật mẻ Việt Nam ứng dụng chẩn đoán bệnh lý di truyền Mục tiêu đề tài Xác định người lành mang gen bệnh hemophilia A kỹ thuật microsatellite DNA Chẩn đoán trước làm tổ cho người mẹ mang gen. .. định người lành mang gen bệnh hemophilia A cho kết xác với phương pháp giải trình tự gen Vì quy trình kỹ thuật microsatellite- DNA chuẩn h a để áp dụng chẩn đoán trước làm tổ Với kỹ thuật microsatellite