TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH - KTNN PHÙNG NGỌC MỸ LAN NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG HẤP THỤ THUỐC BERBERINE HYDROCHLORIDE CỦA VẬT LIỆU CELLULOSE TẠO RA TỪ GLUCONACETOBACTERXYLINUS NI CẤY TRONG MƠI TRƯỜNG CHUẨN KHỐ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh lý học người động vật Hà Nội, tháng năm 2019 TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH - KTNN PHÙNG NGỌC MỸ LAN NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG HẤP THỤ THUỐC BERBERINE HYDROCHLORIDE CỦA VẬT LIỆU CELLULOSE TẠO RA TỪ GLUCONACETOBACTERXYLINUS NI CẤY TRONG MƠI TRƯỜNG CHUẨN KHỐ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh lý học người động vật Người hướng dẫn: TS Nguyễn Xuân Thành Hà Nội, tháng năm 2019 LỜI CẢM ƠN Đề tài “Nghiên cứu khả hấp thụ thuốc Berberine hydrochloride vật liệu cellulose tạo từ Gluconacetobacter xylinus nuôi cấy môi trường chuẩn” nội dung em chọn để làm khóa luận tốt nghiệp sau năm học tập khoa Sinh – KTNN trường Đại học Sư phạm Hà Nội Để hồn thành q trình nghiên cứu hồn thiện khóa luận, lời em xin chân thành cảm ơn chân thành tới thầy giáo Nguyễn Xuân Thành, người tận tình hướng dẫn, giúp đỡ em suốt q trình thực khóa luận Em xin trân trọng cảm ơn Ban giám hiệu, thầy cô giáo khoa Sinh – KTNN, thầy cô Viện Nghiên cứu Khoa học Ứng dụng – Trường Đại học Sư phạm Hà Nội tận tình giảng dạy tạo điều kiện thuận lợi thời gian em học tập nghiên cứu trường Đây lần đầu em tham gia nghiên cứu khoa học, kinh nghiệm em nhiều hạn chế Do khơng tránh khỏi sai sót em mong nhận nhận xét đóng góp thầy bạn để đề tài khóa luận em hồn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 20 tháng năm 2019 SINH VIÊN Phùng Ngọc Mỹ Lan LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đề tài tơi thực hướng dẫn TS Nguyễn Xuân Thành Các số liệu kết nghiên cứu khóa luận trung thực, khơng trùng lặp với cơng trình nghiên cứu Hà Nội, ngày 20 tháng năm 2019 SINH VIÊN Phùng Ngọc Mỹ Lan MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục đích nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn NỘI DUNG Chương Tổng quan 1.1 Giới thiệu vật liệu cellulose 1.1.1 Đặc điểm màng vật liệu cellulose 1.1.2 Tính chất màng vật liệu cellulose 1.1.3 Ứng dụng màng vật liệu cellulose 1.2 Giới thiệu thuốc berberine hydrochloride 1.3 Tổng quan tình hình nghiên cứu ngồi nước 1.3.1 Tình hình nghiên giới: 1.3.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 10 Chương Vật liệu phương pháp nghiên cứu 12 2.1 Vật liệu nghiên cứu 12 2.1.1 Giống vi khuẩn 12 2.1.2 Nguyên liệu hóa chất 12 2.1.3 Thiết bị dụng cụ 12 2.1.4 Vật liệu làm môi trường nuôi cấy màng VLC 12 2.2 Phương pháp nghiên cứu 13 2.2.1 Phương pháp tạo màng VLC 13 2.2.2 Phương pháp xây dựng đường chuẩn 14 2.2.3 Phương pháp xác định lượng thuốc hấp thụ vào màng 15 2.2.4 Phương pháp phân tích thống kê 15 Chương Kết nghiên cứu thảo luận 16 3.1 Kết tạo vật liệu VLC 16 3.1.1 Thu màng VLC thô 16 3.1.2 Tạo màng VLC tinh khiết 17 3.2 Đường chuẩn hấp thụ thuốc berberine hydrochloride 17 3.3 Khả hấp thụ thuốc berberine hydrochlorid màng VLC 18 KẾT LUẬN 21 TÀI LIỆU THAM KHẢO 22 DANH MỤC BẢNG Bảng Ứng dụng VLC Bảng Môi trường chuẩn lên men tạo màng VLC 13 Bảng Giá trị OD dung dịch thuốc berberine hydrochloride nồng độ (mg/ml) khác (n = 3) 17 Bảng Giá trị OD dung dịch berberine hydrochlorid 10% ngâm màng VLC (n = 3) môi trường chuẩn 19 Bảng Lượng thuốc berberine hydrochlorid hấp thụ vào màng VLC ( n = 3) 20 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc vật liệu cellulose cellulose thực vật Hình 1.2 Cơng thức cấu tạo berberine hydrochloride Hình 2.1 Sơ đồ quy trình xử lí thu VLC tinh khiết 14 Hình 3.1 Màng VLC thơ lên men từ môi trường chuẩn 16 Hình 3.2 Màng VLC tinh khiết sau xử lí 17 Hình 3.3 Phương trình đường chuẩn berberine hydrochlorid 18 Hình 3.4 Màng VLC hấp thụ thuốc 19 DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Từ viết tắt Tên đầy đủ VLC Vật liệu Cellulose OD Optical Density UV - vis Ultraviolet visible E coli Escherichia coli MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Ngày nay, thời đại cơng nghiệp hóa người trở nên bận rộn với công việc mà có thời gian nấu nướng nên nhiều loại thực phẩm đồ ăn nhanh, đồ ăn đóng hộp đời kèm theo chứng tiêu chảy, viêm đường tiêu hóa ngày xuất nhiều Các bệnh rối loạn đường tiêu hóa ngày xuất nhiều Các bệnh đường tiêu hóa khơng ăn uống mà nguyên nhân khắc căng thẳng, stress, hay thức khuya khơng ngủ đủ giấc, sử dụng chất kích thích rượu, cà phê,… Với phát triển ngành y học có nhiều loại nhằm chữa trị, hạn chế bệnh rối loạn đường tiêu hóa,…trong thuốc berberine hydrochloride Berberine hydrochloride số loại thuốc đường tiêu hóa dùng qua đường uống, khó tan ethanol nước, khơng tan ether Nó có tác dụng chống loại vi khuẩn, ký sinh trùng ruột gây hại cho thể mà không ảnh hưởng tới hoạt động vi sinh vật có lợi đường tiêu hóa Beberine hydrocochloride điều chế thành thuốc nhỏ mắt điều trị viêm kết mạc, đau mắt đỏ yếu tố kích ứng từ môi trường đau mắt hột gây nên berberine hydrochloride có khả ngăn ngừa lây lan nấm, bột nhiễm nấm, chống lại tác hại vi khuẩn tả, E coli Berberine hydrochloride có tác dụng phụ gây táo bón, dùng với liều cao berberine 500 mg gây đau bụng, buồn nôn, nôn mửa, căng thẳng, trầm cảm, nhịp tim chậm, suy tim, co giật, tê liệt, co thắt dẫn đến tử vong Tuy nhiên, berberine hydrochloride có sinh khả dụng thấp, q trình sử dụng bị tác nhân khác gây ảnh hưởng làm giảm hiệu hấp thụ Do đó, cần thiết để thiết kế loại màng giúp thuốc hấp thụ cách nhanh chóng tăng khả điều trị bệnh berberine hydrochloride [2] Với mục đích tạo màng VLC dựa loài vi khuẩn thuộc chủng Gluconacetobacter xylinus, từ chế tạo màng sinh học để khắc phục 2.2.3 Phương pháp xác định lượng thuốc hấp thụ vào màng Khối lượng thuốc hấp thụ vào màng tính theo cơng thức nghiên cứu tác giả Nguyễn Xuân Thành cộng [21] Lượng thuốc berberine hydrochloride hấp thụ vào màng thử nghiệm mẫu: màng VLC dày 0,3cm 0,5cm Cho mẫu màng loại 70% nước vào bình tam giác (mỗi bình 10 màng đục) có chứa 100ml dung dịch berberine hydrochloride 10% Cho bình vào máy lắc 180 vòng/phút 400C Sau giờ; 1,5 giờ; lấy mẫu đo quang phổ để xác định lượng thuốc hấp thụ vào màng đến giá trị OD không đổi Lặp lại thí nghiệm lần lấy giá trị trung bình để tính tốn, xác định lượng thuốc hấp thu vào màng VLC theo công thức : mht = m1 – m2 (mg) (2) Trong đó: mht: khối lượng thuốc hấp thu vào màng m1: khối lượng thuốc ban đầu dung dịch m2: khối lượng thuốc dung dịch sau khoảng thời gian màng hấp thụ thuốc Hiệu hấp thụ thuốc vào màng tính theo cơng thức: EE(%) = � �� �� × 100% (3) Trong đó: EE: phần trăm thuốc nạp vào màng mht (mg/cm3): khối lượng thuốc hấp thụ đơn vị thể tích màng m0 (mg/cm3): khối lượng thuốc đơn vị thể tích ban đầu 2.2.4 Phương pháp phân tích thống kê Các số liệu phân tích xử lý thông qua phần mềm Excel 2013 Kiểm định giả thuyết giá trị trung bình mẫu hàm: t – Test: Two Sample Assuming Unequal Variences với ý nghĩa α = 0,05 (những khác biệt coi có ý nghĩa thống kê giá trị p < 0,05 Tất liệu trình bày theo giả định trung bình độ lệch chuẩn “MEAN ± SD” Chương Kết nghiên cứu thảo luận 3.1 Kết tạo vật liệu VLC 3.1.1 Thu màng VLC thô Vi khuẩn Gluconacetobacter xylinus cho vào môi trường nuôi cấy sử dụng chất dinh dưỡng môi trường để tạo nên màng VLC Độ dày màng phụ thuộc vào thời gian nuôi cấy điều kiện chất dinh dưỡng Sau khoảng 10 – 15 ngày, thu màng VLC có độ dày 0,3cm 0,5cm từ mơi trường chuẩn hình 3.1 a Màng VLC thô 0,3cm b Màng VLC thô 0,5cm c Màng VLC thơ (d = 8cm) Hình 3.1 Màng VLC thơ lên men từ mơi trường chuẩn Qua hình 3.1 thấy: màng VLC thô lên men từ môi trường chuẩn tính chất dai, nhẵn, khả chịu lực khả thấm hút màng tốt 3.1.2 Tạo màng VLC tinh khiết Xử lý màng VLC thô theo quy trình nêu hình 2.1 thu VLC tinh khiết Màng VLC tinh khiết có đặc điểm: khơng tạp chất, khơng mùi chua, mềm mại, độ bền cao, độ đàn hồi tốt, dễ gấp mà không cần thêm vật liệu dẻo Hình ảnh màng VLC tinh khiết trình bày hình 3.2 a Màng VLC tinh khiết (d = 8cm) 1,5cm) b Màng VLC tinh khiết (d = Hình 3.2 Màng VLC tinh khiết sau xử lí 3.2 Đường chuẩn hấp thụ thuốc berberine hydrochloride Giá trị OD dung dịch thuốc berberine hydrochloride nồng độ khác thể bảng Bảng Giá trị OD dung dịch thuốc berberine hydrochloride nồng độ (mg/ml) khác (n = 3) STT Nồng độ (mg/ml) 10 20 30 40 50 Giá trị OD 345nm Lần Lần Lần 0,355 0,351 0,353 0,691 0,719 0,72 1,552 1,52 1,50 2,185 2,21 2,22 3,017 2,98 3,015 3,608 3,59 3,65 Giá trị trung bình 0,353 ± 0,02 0,71 ± 0,016462 1,524 ± 0,02623 2,205 ± 0,018028 3,004 ± 0,020809 3,616 ± 0,03079 Dựng đồ thị biểu diễn lập phương trình đường chuẩn berberine hydrochloride phần mềm Excel 2013, kết đồ thị hình 3.3 OD345nm y = 0,0734x + 0,0056 R² = 0,9986 Mật độ quang OD (Abs 345nm) 3.5 2.5 OD345nm Linear (OD345nm) 1.5 0.5 0 10 20 30 40 50 60 Nồng độ thuốc beberine hydrochlorid (mg/ml) Hình 3.3 Phương trình đường chuẩn berberine hydrochlorid Phương trình đường chuẩn: y = 0,0734x + 0,0056 (R2 = 0,9986) Trong đó: (1) x: Nồng độ berberine hydrochlorid (mg/ml) y: Giá trị OD tương ứng với nồng độ x R : Hệ số tương quan 3.3 Khả hấp thụ thuốc berberine hydrochlorid màng VLC Màng VLC sau xử lí, loại bỏ 70% nước Sau đó, cho 10 màng (d = 1,5cm) vào bình chứa 100ml dung dịch berberine hydrochlorid 10% Đặt bình vào máy lắc 180 vòng/phút 400C tiến hành lấy mẫu giờ; 1,5 giờ; Màng VLC hấp thụ thuốc thể hình 3.4 Hình 3.4 Màng VLC hấp thụ thuốc Sau khoảng thời gian giờ; 1,5 giờ; lấy dung dịch đo quang phổ UV – 2450 để xác định lượng thuốc hấp thụ vào màng Kết đo quang phổ trình bày bảng Bảng Giá trị OD dung dịch berberine hydrochlorid 10% ngâm màng VLC (n = 3) môi trường chuẩn Màng VLC Giá trị OD thời gian Độ dày màng giờ 30 phút 0,3cm 0,554± 0,000111 0,5336± 0,000208 0,5331± 0,000153 0,5cm 0,676± 0,000148 0,635± 0,000154 0,6348± 0,000208 Màng chuẩn Từ bảng ta thấy, màng VLC hấp thụ thuốc, giá trị OD trung bình thuốc giảm dần sau gần khơng giảm Có thể sau hàm lượng thuốc berberine hydrochlorid hấp thụ vào màng đạt cực đại Lấy giá trị OD thu bảng thay vào phương trình đường chuẩn berberine hydrochlorid ta tìm nồng độ berberine hydrochlorid (C%), từ C% ta khối lượng berberine hydrochlorid có dung dịch (m1), lấy khối lượng berberine hydrochlorid có dung dịch thay vào công thức (2) ta khối lượng berberine hydrochlorid hấp thụ vào màng VLC (mht), từ tính tỷ lệ berberine hydrochlorid hấp thụ vào màng theo cơng thức (3) Kết trình bày bảng Bảng Lượng thuốc berberine hydrochlorid hấp thụ vào màng VLC (n = 3) Độ dày màng (cm) 0,3 Thời gian hấp thụ cực đại (giờ) Khối lượng Thể tích thuốc màng hấp thụ (mg) (cm3) 2,8129 ± 5,3 0,0018 0,5 1,427 ± 0,002608 8,8 Cường độ hấp thụ màng EE (%) (mg/cm3) 0,5307 ± 28,129± 0,000351 0,018 0,1621 14,27 ± ± 0,000321 0,026083 Nhận xét: Sau màng VLC có độ dày 0,3cm có cường độ hấp thụ thuốc Berberine hydrochloride trung bình cao nhât 0,5307mg/cm3 màng VLC có độ dày 0,5cm có cường độ hấp thụ thuốc thấp 0,1621mg/cm3 Như vậy, màng VLC mỏng cường độ hấp thụ lớn Qua kiểm định giả thuyết t-Test: Two Sample Assuming Equal Variancess màng 0,3cm 0,5cm, tiến hành kiểm định thu P = 0,000167 < 0,05, có nghĩa sai khác cường độ hấp thụ màng có ý nghĩa thống kê Như màng VLC dày 0,3cm có khả hấp thụ thuốc tốt màng CV dày 0,5cm màng có cường độ hấp thụ cao KẾT LUẬN Kết luận: Từ trình nghiên cứu, thu kết sau: Nuôi cấy thu màng VLC từ vi khuẩn Gluconacetobacter xylinus mơi trường chuẩn: thu màng VLC có độ dày 0,3cm 0,5cm để tiến hành hấp thụ thuốc berberine hydrochloride Màng VLC thu chất lượng phù hợp với nhu cầu làm thí nghiệm Màng VLC có độ dày 0,5cm có khả hấp thụ thuốc berberine hydrochloride màng VLC có độ dày 0,3cm Màng VLC có độ dày 0,3cm có khả hấp thụ thuốc tốt hơn, điều giải thích màng VLC có độ dày 0,3cm mỏng hơn, sợi cellulose hơn, liên kết lỏng lẻo nên thuốc dễ dàng hấp thụ vào màng Kiến nghị: Tiếp tục tiến hành khảo sát khả hấp thụ màng VLC từ vi khuẩn Gluconacetobacter xylinus từ loại môi trường tự nhiên khác: dịch hoa quả, dịch chè xanh,… Tiếp tục tiến hành nghiên cứu khả giải phóng thuốc berberine hydrochloride số thuốc khác điều kiện khác TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt [1] Phạm Thị Hiền (2016), “Nghiên cứu vận tải phân phối thuốc berberine màng bacterial cellilose lên men từ nước vo gạo định hướng sử dụng qua đường uống” [2] Đặng Thị Hồng (2007), “Phân lập, tuyển chọn nghiên cứu số đặc tính sinh học vi khuẩn Acetobacter xylinum chế tạp màng sinh học”, Luận án thạc sỹ Sinh học ĐHSP Hà Nội [3] Nguyễn Thị Nguyệt (2008), “Nghiên cứu vi khuẩn Acetobacter xylinum cho màng Bacterial Cellulose làm mặt nạ dưỡng da Luận án thạc sỹ sinh học”, trường Đại học Sư phạm Hà Nội [4].Nguyễn Xuân Thành (2018), “Đánh giá giải phóng curcumin vật liệu vật liệu cellulose nạp curcumin định hướng dùng qua đường uống” Tạp chí KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ - 184(08): 17 – [5] Nguyễn Xuân Thành: “Đánh giá hấp thụ famotidine cellulose tạo từ Acetobacter xylinum số mơi trường ni cấy”, Tạp chí Khoa học Công nghệ , 180(04), 199-204, 2018 [6] Nguyễn Xuân Thành (2018), “Nghiên cứu số đặc tính mạng lưới 3d-nano-cellulose nạp curcumin sản xuất từ vi khuẩn Acetobacter xylinum” - Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ - 184(08): 83 – 88 [7] Huỳnh Thị Ngọc Lan, Nguyễn Văn Thanh (2006), “Nghiên cứu đặc tính màng vật liệu cellulose từ Acetobacter xylinum sử dụng làm màng trị bỏng” Tạp chí Dược học số 361/2006, trang 18-20 [8] Nguyễn Văn Mã, La Việt Hồng, “Phương pháp nghiên cứu sinh lý học Thực vật” , Nhà xuất Đại học Quốc gia Hà Nội [9] Nguyễn Hoài Nam, Võ Phùng Nguyên, Trần Hùng (2010), “Tác động berberin palmatin trí nhớ hình ảnh không gian chuột nhắt” - Trường Đại học Y dược thành phố Hồ Chí Minh [10] Đinh Thị Kim Nhung, Nguyễn Thị Thuỳ Vân, Trần Như Quỳnh (2012), “Nghiên cứu vi khuẩn Acetobacter tạo màng Bacterial cellulose ứng dụng điều trị bỏng”, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ (50), 453-462 [11] Vũ Bình Dương, Nguyễn Trọng Điệp, Nguyễn Thị Thùy, Hoàng Văn Lương (2010), “Nghiên cứu bào chế viên nén Berberin giải phóng ích đại tràng” - Tạp chí y - dược học quân số [12] Đinh Thị Liên, Vũ Thanh Thảo, Trần Cát Đông, Trần Thành Đạo (2011), “Khảo sát tác động kháng Staphylococcus aureus phối hợp Berberin kháng sinh β-lactam” - Y Học TP Hồ Chí Minh -Tập 15 - Phụ Số [13] Nguyễn Xuân Thành, Triệu Nguyên Trung, Phan Thị Huyền Vy, Bùi Minh Thy, Phùng Thị Kim Huệ (2018) “Tối ưu hóa hiệu suất nạp thuốc famotidin vật liệu vật liệu cellulose lên men từ dịch trà xanh theo phương pháp đáp ứng bề mặt mơ hình Box-Behnken”, Tạp chí dược học (501), trang [14] Hồ Cảnh Hậu, Hoàng Văn Thêm, Nguyễn Thị Lan Hương, Nguyễn Văn Thuận, Nguyễn Cẩm Vân, Nguyễn Tuấn Quang (2015), “Nghiên cứu định lượng berberin chlorid “viên nén đại tràng 105” phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao” - Tạp chí y - dược học quân số [15] Nguyễn Tuấn Quang, Hồ Cảnh Hậu, Hoàng Văn Thêm, Phan Văn Gầy, Nguyễn Văn Chinh, Nguyễn Cẩm Vân (2015), “Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn sở “viên nén đại tràng 105”” - Tạp chí y - dược học quân số Tài liệu tiếng Anh [16] Thanh Xuan Nguyen et al (2014), “Chitosan – coated nano – liposomes for the oral delivery of berberin hydrochloride”, J.Mater.Chem.B, 2, 7149 – 7159 [17] Badshah M, Ullah H, Khan S A, Park J K, Khan T (2017), “Preparation, characterization and in-vitro evaluation of bacterial cellulose matrices for oral drug delivery”, Cellulose, 24(11), pp 5041-5052 [18] Huang L, Chen X, Nguyen Xuan Thanh, Tang H, Zhang L, Yang G (2013), “Nano-cellulose 3D-networks as controlled-release drug carriers”, Journal of Materials Chemistry B (Materials for biology and medicine), 1, pp 2976-2984 [19] Lin Huang, Xiuli Chen, Thanh Xuan Nguyen, Huiru Tang, Liming Zhangc, Guang Yang (2013), “Nano-cellulose 3D-networks as controlled- release drug carriers” - Journal of Materials Chemistry B, 1, 2976 [20] Thanh Xuan Nguyen, Lin Huang, Li Liu, Ahmed Mohammed Elamin Abdalla, Mario Gauthiere, Guang Yang (2014), “Chitosan-coated nano-liposomes for the oral delivery of berberine hydrochloride” - Journal of Materials Chemistry B, 2, 7149 [21] Thanh Xuan Nguyen, Lin Huang, Li Liu, Ahmed Mohammed Elamin Abdalla, Mario Gauthiere, Guang Yang (2014), “Chitosan-coated nano-liposomes for the oral delivery of berberine hydrochloride”, J.Mater.Chem.B, 2, 7149 – 7159 [22] W Chen, D Fan, L Meng, Y Miao, S Yang, Y Weng, H He, X Tang (2012), “Enhancing effects of chitosan and chitosan hydrochloride on intestinal absorption of berberine in rats”, Drug Dev Ind Pharm, 38, pp.104 – 110 [23] Lina Fu, Yue Zhang, Chao Li, Zhihong Wu, Qi Zhuo, Xia Huang, Guixing Qiu, Ping Zhou and Guang Yang (2012), “Skin tissue repair materials from bacterial cellulose by a multilayer fermantation method” ...TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH - KTNN PHÙNG NGỌC MỸ LAN NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG HẤP THỤ THUỐC BERBERINE HYDROCHLORIDE CỦA VẬT LIỆU CELLULOSE TẠO RA TỪ GLUCONACETOBACTERXYLINUS NI CẤY TRONG. .. berberine hydrochloride mơi trường thích hợp Đó lý chọn đề tài: Nghiên cức khả hấp thụ thuốc berberine hydrochloride vật liệu cellulose tạo từ Gluconacetobacter xylinus nuôi cấy môi trường chuẩn ... 2.1.4 Vật liệu làm môi trường nuôi cấy màng VLC Gluconacetobacter xylinus nuôi cấy môi trường chuẩn Thành phần khối lượng chất có mơi trường ni cấy màng VLC thể bảng Bảng Môi trường chuẩn lên