BỘ CƠNG THƯƠNG DNTN TRÀ HỒN NGỌC CHƯƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CÔNG NGHỆ TRỌNG ĐIỂM QUỐC GIA PHÁT TRIỂN CƠNG NGHIỆP HĨA DƯỢC ĐẾN NĂM 2020 BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ ĐỀ TÀI “NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CƠNG NGHỆ TẠO CHẾ PHẨM PHỊNG CHỐNG KHỐI U TỪ CÂY HOÀN NGỌC PSEUDERANTHEMUM PALATIFERUM (NEES) RALDK.” Mã số: CNHD ĐT 030/11-12 Cơ quan chủ trì đề tài: DNTN Trà Hoàn Ngọc Chủ nhiệm đề tài: TS Nguyễn Thị Minh Hằng HÀ NỘI - 2012 BỘ CƠNG THƯƠNG DNTN TRÀ HỒN NGỌC CHƯƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CÔNG NGHỆ TRỌNG ĐIỂM QUỐC GIA PHÁT TRIỂN CƠNG NGHIỆP HĨA DƯỢC ĐẾN NĂM 2020 BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ ĐỀ TÀI “NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CƠNG NGHỆ TẠO CHẾ PHẨM PHỊNG CHỐNG KHỐI U TỪ CÂY HOÀN NGỌC PSEUDERANTHEMUM PALATIFERUM (NEES) RALDK.” Mã số: CNHD ĐT 030/11-12 Chủ nhiệm đề tài Cơ quan chủ trì đề tài Giám đốc TS Nguyễn Thị Minh Hằng Ban chủ nhiệm Chương trình HÀ NỘI - 2012 Bộ Cơng thương DOANH NGHIỆP TƯ NHÂN TRÀ HỒN NGỌC CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc Hà Nội, ngày tháng năm 2012 BÁO CÁO THỐNG KÊ KẾT QUẢ THỰC HIỆN ĐỀ TÀI KHCN I THÔNG TIN CHUNG Tên đề tài/dự án: Nghiên cứu quy trình cơng nghệ tạo chế phẩm phòng chống khối u từ Hồn Ngọc Pseuderanthemum palatiferum (Nees) Radlk Mã số đề tài: CNHD.ĐT.030/11-12 Thuộc: - Chương trình (tên, mã số chương trình): Chương trình nghiên cứu khoa học công nghệ trọng điểm quốc gia phát triển cơng nghiệp hóa dược đến năm 2020 Chủ nhiệm đề tài: Họ tên: Nguyễn Thị Minh Hằng Ngày, tháng, năm sinh: 07/08/1979 Nam/ Nữ: Nữ Học hàm, học vị: Tiến sỹ Chức danh khoa học: Nghiên cứu viên Chức vụ: Phó giám đốc Trung tâm Nghiên cứu Phát triển thuốc - Viện Hóa sinh biển Điện thoại: Tổ chức: 04-37916337 Nhà riêng: 04-38538754 Mobile: 0947216181 Fax: 04-37917054 E-mail: minhhang@imbc.vast.vn Tên tổ chức công tác: Viện Hóa sinh biển - Viện Khoa học Cơng nghệ Việt Nam Địa tổ chức: Viện Hóa sinh biển Địa nhà riêng: số 41 ngõ 132 phố Khương Trung, Thanh Xuân, Hà Nội Tổ chức chủ trì đề tài: Tên tổ chức chủ trì đề tài: Doanh nghiệp Tư nhân Trà Hoàn Ngọc Điện thoại: 066 3621121 Fax: 066 3621121 E-mail: hoanngoc7nga@yahoo.com Website: www.hoanngoctea.com Địa chỉ: 37 Nguyễn Trọng Cát; F - Hiệp Ninh; Thị Xã Tây Ninh Họ tên thủ trưởng tổ chức: Bùi Kim Nga Số tài khoản: 5700211001399 Ngân hàng: Nông nghiệp phát triển nông thôn Tây Ninh Tên quan chủ quản đề tài: Tỉnh Tây Ninh II TÌNH HÌNH THỰC HIỆN Thời gian thực đề tài/dự án: - Theo Hợp đồng ký kết: từ tháng 02/ 2011đến tháng 02/ 2012 - Thực tế thực hiện: từ tháng 02/2011 đến hết tháng 05/2012 - Được gia hạn (nếu có): - Lần từ tháng 03 năm 2012 đến tháng 05 năm 2012 - Lần … Kinh phí sử dụng kinh phí: a) Tổng số kinh phí thực hiện: 880tr.đ, đó: + Kính phí hỗ trợ từ SNKH: 880 tr.đ + Kinh phí từ nguồn khác: 0tr.đ + Tỷ lệ kinh phí thu hồi dự án (nếu có): ………… b) Tình hình cấp sử dụng kinh phí từ nguồn SNKH: Theo kế hoạch Thực tế đạt Số TT Thời gian Kinh phí Thời gian Kinh phí (Tháng, năm) (Tr.đ) (Tháng, năm) (Tr.đ) 08/2011 612,9 08/2011 612,9 01/2012 267,1 12/2011 267,1 … Ghi (Số đề nghị toán) c) Kết sử dụng kinh phí theo khoản chi: Đối với đề tài: Đơn vị tính: Triệu đồng Số TT Nội dung khoản chi Trả công lao động (khoa học, phổ thông) Nguyên, vật liệu, lượng Thiết bị, máy móc Xây dựng, sửa chữa nhỏ Chi khác Tổng cộng Theo kế hoạch Tổng SNKH 437 Thực tế đạt Tổng SNKH 437 Nguồn khác 437 437 Nguồn khác 150 150 150 150 70 70 70 70 223 880 223 880 0 223 880 223 880 0 - Lý thay đổi (nếu có): Khơng thay đổi Các văn hành q trình thực đề tài/dự án: (Liệt kê định, văn quan quản lý từ công đoạn xác định nhiệm vụ, xét chọn, phê duyệt kinh phí, hợp đồng, điều chỉnh (thời gian, nội dung, kinh phí thực có); văn tổ chức chủ trì đề tài, dự án (đơn, kiến nghị điều chỉnh có) Số Số, thời gian ban TT hành văn Quyết định số 0154/QĐ-BCT ngày 12 tháng 01 năm 2011 Tên văn Quyết định việc giao kế hoạch khoa học cơng nghệ năm 2011 thuộc “Chương trình nghiên cứu khoa học công nghệ trọng điểm quốc gia phát triển cơng nghiệp hóa dược đến năm 2020” Quyết định số 4024/ QĐ-BCT ngày 29 tháng 07 năm 2011 Hợp đồng số 030/2011/HĐĐTCNHD ngày 14 tháng năm 2011 Công văn số Công văn việc thay đổi nội dung đề tài 2674/BCTCNHD.ĐT.030/11-12 BĐHHD ngày 29 tháng 03 năm 2012 Quyết định việc phê duyệt kinh phí đề tài, dự án KHCN năm 2011 thuộc “Chương trình nghiên cứu khoa học cơng nghệ trọng điểm quốc gia phát triển cơng nghiệp hóa dược đến năm 2020” Hợp đồng nghiên cứu khoa học phát triển công nghệ Ghi Tổ chức phối hợp thực đề tài, dự án: Số TT Tên tổ chức đăng ký theo Thuyết minh Viện Hóa sinh biển - Viện KHCNVN Viện kiểm nghiệm thuốc trung ương Tên tổ chức tham gia thực Viện Hóa sinh biển Viện KHCNVN Viện kiểm nghiệm thuốc trung ương Nội dung tham gia chủ yếu Sản phẩm chủ yếu đạt - Xác định - Báo cáo thành phần thành phần tritecpen có tritecpen có Hồn Ngọc rễ vây Hồn Ngọc - Xây dựng quy trình chiết xuất tổng tritecpen từ Hồn Ngọc - Báo cáo quy trình chiết xuất tổng tritecpen từ Hoàn Ngọc - Thử độc tính cấp độc tính bán trường diễn hoạt tính kháng u sản phẩm - Báo cáo độc tính hoạt tính kháng u sản phẩm Xây dựng tiêu chuẩn sở cho sản phẩm tổng tritecpen từ rễ Hoàn ngọc, kiểm nghiệm sản phẩm theo tiêu chuẩn sở đánh giá độ ổn định sản phẩm Tiêu chuẩn sở cho sản phẩm - Lý thay đổi (nếu có): khơng thay đổi - Phiếu kiểm nghiệm chất lượng sản phẩm - Kết luận độ ổn định sản phẩm Ghi chú* Cá nhân tham gia thực đề tài, dự án: (Người tham gia thực đề tài thuộc tổ chức chủ trì quan phối hợp, không 10 người kể chủ nhiệm) Tên cá nhân đăng Tên cá nhân Nội dung ký theo Thuyết tham gia thực tham gia minh TS Nguyễn Thị TS Nguyễn Thị Nghiên cứu Minh Hằng Minh Hằng qui trình chiết xuất thành phần hóa học sản phẩm Bùi Phước Hòa Bùi Phước Hòa Trồng, thu hái cung cấp nguyên liệu Hồn Ngọc Báo cáo tình hình trồng thu hái Hoàn Ngọc Bùi Kim Nga Bùi Kim Nga Trồng, thu hái cung cấp nguyên liệu Hồn Ngọc Báo cáo tình hình trồng thu hái Hoàn Ngọc PGS TS.Nguyễn PGS TS.Nguyễn Nghiên cứu Văn Hùng Văn Hùng qui trình chiết xuất thành phần hóa học sản phẩm Báo cáo thành phần trotecpen Hoàn Ngọc TS Đoàn Thị Mai TS Đoàn Thị Mai Nghiên cứu Hương Hương, qui trình chiết xuất thành phần hóa học sản phẩm Báo cáo thành phần trotecpen Hoàn Ngọc TS Phạm Cường Văn Nghiên cứu qui trình chiết xuất thành phần hóa học sản phẩm Báo cáo thành phần trotecpen Hoàn Ngọc CN Nguyễn Thị CN Nguyễn Thị Nghiên cứu Tú Oanh Tú Oanh qui trình chiết xuất thành phần hóa học Báo cáo thành phần trotecpen Hoàn Số TT Văn TS Phạm Cường Sản phẩm chủ yếu đạt Báo cáo thành phần trotecpen Hồn Ngọc, quy trình chiết xuất tổng tritecpen Ghi chú* sản phẩm Ngọc CN Hà Thị Thoa CN Hà Thị Thoa Nghiên cứu qui trình chiết xuất thành phần hóa học sản phẩm Báo cáo thành phần trotecpen Hoàn Ngọc TS Đỗ Thị Thảo TS Đỗ Thị Thảo Thử độc tính khả kháng u Báo cáo độc tính khả kháng u - Lý thay đổi ( có): Khơng thay đổi Tình hình hợp tác quốc tế: Theo kế hoạch Số TT Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số đồn, số lượng người tham gia ) (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số đoàn, số lượng người tham gia ) Đi khảo sát Vườn thực vật Bắc Kinh Trung Quốc Đi khảo sát Vườn thực vật Bắc Kinh, Trung Quốc Thời gian: tháng 8/2011 Thời gian: tháng 8/2011 Số đoàn: 01 gồm 05 người Số đoàn: 01 gồm 04 người Kinh phí: 115,9 triệu đồng Kinh phí: 115,9 triệu đồng Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Do thay đổi tỷ giá USD/VND nên kinh phí dự tốn đủ cho đồn 04 người Tình hình tổ chức hội thảo, hội nghị: Số TT Theo kế hoạch Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm ) (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm ) Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Tóm tắt nội dung, công việc chủ yếu: (Nêu mục 15 thuyết minh, không bao gồm: Hội thảo khoa học, điều tra khảo sát nước nước ngoài) Số TT Các nội dung, công việc chủ yếu (Các mốc đánh giá chủ yếu) Thời gian (Bắt đầu, kết thúc - tháng … năm) Người, quan thực Theo kế hoạch Thực tế đạt Tổng quan tài liệu xây dựng đề cương Nội dung 1: Xây dựng tiêu chuẩn nguyên liệu Nguyễn Thị Minh Hằng Chăm sóc Hồn Ngọc theo độ tuổi năm thu hái nguyên liệu theo độ tuổi: - Thu hái Hoàn Ngọc theo độ tuổi năm xử lí ngun liệu thành dạng bột khơ Nghiên cứu thành phần tổng tritecpen từ Hoàn Ngọc theo độ tuổi năm: - Phân lập chất tritecpen từ mẫu Hoàn Ngọc 1/20116/2011 1/20116/2011 1/20116/2011 Bùi Kim Nga Bùi Phước Hòa cộng 1/20116/2011 N T Minh Hằng Ng Văn Hùng Phạm Văn Cường Đ T Mai Hương N T Tú Oanh Hà Thị Thoa Bùi Kim Nga Bùi Phước Hòa 7/20118/2011 N T Minh Hằng Ng Văn Hùng Phạm Văn Cường Đ T Mai Hương N T Tú Oanh Hà Thị Thoa Bùi Kim Nga Bùi Phước Hòa 7/20118/2011 N T Minh Hằng Ng Văn Hùng Phạm Văn Cường Đ T Mai Hương N T Tú Oanh Hà Thị Thoa Bùi Kim Nga Bùi Phước Hòa - Xác định cấu trúc hóa học chất phân lập Nội dung 2: Nghiên cứu quy trình cơng nghệ chiết xuất tổng tritecpen có Hồn Ngọc 7/20118/2011 - Nghiên cứu qui trình chiết xuất tổng tritecpen - Nghiên cứu qui trình tinh chế tổng tritecpen Nội dung 3: Xây dựng quy trình chiết xuất tổng tritecpen từ Hồn Ngọc quy mơ 0,5 kg sản phẩm/mẻ 7/20118/2011 - Hồn thiện quy trình nghiên cứu nội dung - Sản xuất 10 kg sản phẩm 8/201111/2011 8/201111/2011 N T Minh Hằng Ng Văn Hùng Phạm Văn Cường Đ T Mai Hương N T Tú Oanh Hà Thị Thoa Bùi Kim Nga Bùi Phước Hòa 8/201111/2011 8/201102/2012 Đỗ Thị Thảo Nguyễn Thị Thu Hà Nội dung Nghiên cứu hoạt tính chống khối u sản phẩm tritecpen 8/201112/2011 8/201102/2012 Đỗ Thị Thảo Nguyễn Thị Thu Hà Nội dung 7: Xây dựng tiêu chuẩn sở cho sản phẩm 08/201101/2012 08/201103/2012 Th khốn chun mơn Viện kiểm nghiệm thuốc TW Tập hợp kết viết báo cáo tổng kết đề tài 02/2012 04/2012 Nguyễn Thị Minh Hằng Nội dung 4: Chứng minh cấu trúc thành phần sản phẩm tổng tritecpen - Phân lập chất có sản phẩm tổng tritecpen - Ghi phổ xác định cấu trúc chất phân lập Nội dung Nghiên cứu tính an tồn tiền lâm sàng mẫu sản phẩm tổng tritecpen: - Nghiên cứu độc tính cấp - Nghiên cứu độc tính bán trường diễn - Lý thay đổi (nếu có): Một số nội dung có thực chậm tiến độ đăng ký số yếu tố khách quan trình làm thực nghiệm III SẢN PHẨM KH&CN CỦA ĐỀ TÀI, DỰ ÁN Sản phẩm KH&CN tạo ra: a) Sản phẩm Dạng I: kiểm tra khối lượng đo kích thước khối u sơ cấp ngày/1 lần tính từ thời điểm tiêm tế bào LLC Kết trình bày bảng 3.12 Bảng 3.12 Kết nghiên cứu khả ức chế khối u sơ cấp phát triển Lơ thí nghiệm 10 ngày 15 ngày 20 ngày 25 ngày 30 ngày 24,63 ±0,95 22,55 ±1,12 26,13 ±0,48 26,75 ± 0,50 27,13 ± 0,25 27,18 ± 0,35 26,78 ± 0,72 150,33 ± 36,66 1257,33 ±75,11 1859,33 ±95,20 3369,00 ±92,15 5181,00 ±138,16 7412,17 ±71,51 Số chuột chết 0 0 0 % ức chế 0 0 0 24,00 ± 0,54 24,50 ± 0,21 25,28 ± 0,36 26,06 ± 2,30 27,50 ± 2,66 28,50 ± 3,26 30,04 ± 3,20 u (mm ) 73,88 ± 22,75 1068,00 ± 40,28 1462,75 ± 87,36 3215,38 ± 76,62 4728,38 ±103,03 Số chuột chết 0 0 0 6791,75 ± 150,50 % ức chế 50,85 15,06 21,33 4,56 8,74 8,37 24,63 ±0,11 25,05 ±0,61 24,80 ±0,90 25,05 ±0,61 25,50 ± 1,31 26,95 ± 2,08 26,93 ± 2,35 73,88 ±22,75 764,75 ±86,99 1201,13 ±74,27 2991,5 ±86,61 4397,63 ±184,51 Số chuột chết 0 0 0 6299,13 ± 153,71 % ức chế 50,86 39,18 35,40 11,21 15,12 15,02 24,75 ± 0,29 25,58 ± 0,85 25,63 ± 1,03 25,58 ± 0,85 24,00 ± 2,45 23,33 ± 2,82 22,73 ± 2,42 u (mm3) 74,83 ± 19,71 757,50 5,95 1141,67 ± 40,06 1870,50 ±101,58 2601,00 ±165,50 3694,50 ±148,29 Số chuột chết 0 0 0 % ức chế 50,22 40,55 38,60 44,48 49,80 50,16 Lô 1: Đối Khối lượng chứng trung bình (gram/con) Thể tích khối u (mm ) Lơ 2: 1000 Khối lượng mg/kgP/ngày trung bình (gram/con) Thể tích khối Lơ 3: 2000 Khối lượng mg/kgP/ngày trung bình (gram/con) Thể tích khối u (mm ) Lơ 4: 3000 Khối lượng mg/kgP/ngày trung bình (gram/con) Thể tích khối 77 Kết bảng 3.12 cho thấy:  Khả bảo vệ chung kéo dài tuổi thọ cho động vật nghiên cứu cao dịch chiết etanol 96% từ Trà vàng Hồn Ngọc Chuột thí nghiệm uống Cao dịch chiết etanol 96% từ Trà vàng Hoàn Ngọc liều 1000 2000 mg/kgP/ngày không bị chết thời điểm kết thúc thí nghiệm, lơ sử dụng Cao dịch chiết etanol 96% từ Trà vàng Hồn Ngọc liều cao 3000 mg/kgP/ngày có chuột bị chết Chuột lô đối chứng (bị gây u mà không uống hoạt chất bảo vệ) bị chết chuột Như vậy, Cao dịch chiết etanol 96% từ Trà vàng Hồn Ngọc liều cao có tác dụng ức chế phát triển khối u sơ cấp so với đối chứng lại ảnh hưởng đến thể động vật thí nghiệm, làm khối lượng thể giảm chưa thể rõ khả bảo vệ chung kéo dài tuổi thọ cho động vật bị u cho uống liều cao dài ngày Cao dịch chiết liều thấp 2000 mg/kgP/ngày khơng gây chết chuột có khả ức chế khối u nên cho thấy khả kéo dài tuổi thọ cho chuột bị u Tuy nhiên, kết ban đầu cần nghiên cứu cấp độ sâu với số lượng chuột lớn  Khả ức chế khối u phát triển Thông qua so sánh phát triển khối u nhận thấy: - Sử dụng Cao dịch chiết etanol 96% từ Trà vàng Hoàn Ngọc liều 1000 mg/kgP/ngày, sau 30 ngày thí nghiệm ức chế 8,37% phát triển khối u sơ cấp so với lô đối chứng (chuột bị gây u không uống hoạt chất) - Sử dụng Cao dịch chiết etanol 96% từ Trà vàng Hoàn Ngọc liều 2000 mg/kgP/ngày sau 30 ngày thí nghiệm ức chế 15,02% phát triển khối u sơ cấp so với lô đối chứng (chuột bị gây u không uống hoạt chất) - Sử dụng Cao dịch chiết etanol 96% từ Trà vàng Hoàn Ngọc liều 3000 mg/kgP/ngày cho thấy rõ việc ức chế phát triển khối u cách rõ ràng, có ý nghĩa thống kê (p< 0,05) so với lô đối chứng (không uống 78 hoạt chất) Phần trăm ức chế phát triển khối u liều sau 30 ngày cho uống hoạt chất 50,16% Thể tích khối u sau q trình thí nghiệm có sai khác có ý nghĩa thống kê (p