Mã số đề tài: BÁO CÁO CHUYÊN ĐỀ NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG ĐIỀU TRỊ TRĨ CỦA VIÊN TRĨ THIÊN DƯỢC TRÊN MƠ HÌNH GÂY TRĨ THỰC NGHIỆM Hà Nội – 2018 MỤC LỤC I ĐẶT VẤN ĐỀ .1 II TỔNG QUAN 2.1 Cây rau sam (Portulaca oleracea L., họ Portulacaceae) 2.2 Cây dền gai (Amaranthus spinosus L., họ Amaranthaceae) III ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Đối tượng nghiên cứu 3.1.1 Thuốc nghiên cứu 3.1.2 Động vật thí nghiệm 3.1.3 Thuốc hóa chất phục vụ nghiên cứu 3.2 Phương pháp nghiên cứu 3.3 Xử lý số liệu 3.4 Địa điểm nghiên cứu IV KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 4.1 Gây mô hình trĩ thực nghiệm hỗn hợp dầu croton 4.2 Đánh giá tác dụng điều trị trĩ viên Trĩ Thiên Dược mơ hình gây trĩ thực nghiệm hỗn hợp dầu croton 15 V BÀN LUẬN 31 VI KẾT LUẬN 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO 34 I ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh trĩ tình trạng yếu tố học làm giãn, lỏng lẻo hệ thống nâng đỡ gây sa giãn búi mạch ống hậu môn gây chảy máu [1], [2] Trĩ bệnh thường gặp với tần suất ngày gia tăng lối sống đại Dựa vào vị trí giải phẫu bệnh chia thành ba loại: Trĩ nội - búi trĩ nằm khoang niêm mạc đường lược; trĩ ngoại - búi trí nằm khoang cạnh hậu môn, đường lược sa ngồi ống hậu mơn; trĩ hỗn hợp – thường trĩ nội trĩ ngoại phân cách với đường lược Bệnh trĩ ảnh hưởng tới sống bệnh nhân triệu chứng phân máu, sa búi trĩ, đau rát đại tiện, sưng nề vùng hậu mơn Bên cạnh đó, tượng sa lồi búi trĩ yếu tố thuận lợi gây viêm nhiễm vùng hậu môn dẫn tới sưng đau hậu môn ngứa thường xuyên tượng viêm xuất tiết xung quanh búi trĩ sa [1] Bệnh trĩ bệnh thường gặp bệnh hậu mơn-trực tràng, đó, nhu cầu thuốc điều trị trĩ lớn [3] Ngày nay, số thuốc lưu hành thị trường dược phẩm nước tiên tiến Pháp, Mỹ, với giá nhập cao không phù hợp với mức sống người lao động Việt Nam Vì vậy, việc sử dụng thuốc y học cổ truyền dần trở thành xu hướng phổ biến vừa có hiệu điều trị, lại gặp tác dụng khơng mong muốn Hơn nữa, nước ta có nhiều thuốc với nhóm chất có hoạt tính sinh học điều trị bệnh trĩ cần nghiên cứu phát triển, có rau sam (Portulaca oleracea L.) dền gai (Amaranthus spinosus L.) Hiện nay, giới có nhiều loại thuốc điều trị bệnh trĩ đa phần flavonoid Daflon, Ginkgo Fort … Vì cần tìm nhóm hoạt chất có tác dụng sinh học phân đoạn flavonoid có tác dụng chữa trị bệnh trĩ dền gai phân đoạn có hoạt tính sinh học rau sam, sau phối hợp phân đoạn với để tìm tỷ lệ thích hợp để viên thuốc có hiệu điều trị bệnh Tác dụng điều trị bệnh trĩ viên Trĩ Thiên Dược gồm thành phần cao phân đoạn flavonoid dền gai rau sam nghiên cứu mơ hình dược lý thực nghiệm Mục tiêu chuyên đề: Đánh giá tác dụng điều trị trĩ viên Trĩ Thiên Dược mơ hình gây trĩ thực nghiệm II TỔNG QUAN 2.1 Cây rau sam (Portulaca oleracea L., họ Portulacaceae) Cây rau sam có tên khoa học (Portulaca oleracea L.) thuộc họ rau sam Portulacaceae Theo Võ Văn Chi (1997a), thảo mọc bò có thân mọc màu đỏ tím nhạt Lá dày bóng, hình bầu dục, khơng cuống, giống hình ngựa Hoa màu vàng, mọc đầu cành thân Quả nang hình cầu, mở nắp (quả hộp) chứa nhiều hạt đen bóng (Hình 2.1) Hình 2.1 Hình ảnh rau sam (Portulaca oleracea L.) Theo Võ Văn Chi (1997b), rau sam có số hoạt chất sau: glycosid, saponin, chất nhầy, acid hữu cơ, muối kali, vitamin A, B, C, PP Theo y học cổ truyền có vị chua, tính hàn, có tác dụng nhiệt, tán huyết, sát trùng Rau sam thường dùng dân gian để chữa huyết nhiệt, đái máu, ho máu, ung nhọt, lở ngứa, đại tiện táo bón, ho gà, ngồi dùng để trị giun kim, giun đũa Về thành phần hóa học rau sam, tùy vùng thổ nhưỡng, rau sam tích lũy nitrat, chất tiêu thụ mức độ vừa phải, sắc tố rau sam betacyanidin acetyl hóa (Viện Dược liệu, 2004) Theo tài liệu khác, rau sam chứa 3-6,49% carbohydrat, 0,5% lipid, 1,4-1,8% protein, 85 mg % Ca, 56 mg % P, 1-5mg % Fe, 26 mg % vitamin C, 0,32 mg % caroten, 0,03mg % vitamin B1, 0,11 mg % vitamin B2 0,7mg % PP Ước tính 100g rau sam chứa 4900 đơn vị quốc tế vitamin A, 20 đơn vị quốc tế vitamin B 280 đơn vị quốc tế vitamin C Một tài liệu khác cho biết rau sam mọc Đài Loan chứa acid hữu cơ, kali nitrat, kali sulfat muối kali khác; ngồi ra, có 71-100 μg/gcarotenoid bao gồm lutein β-caroten với hàm lượng 29,8 μg/g Lá rau sam chứa 54-61% lutein violaxanthin, 24-31% β-caroten, 10-14% neoxanthin α-ryptoxanthin Tác dụng dược lý đề cập đến rau sam tác dụng điều trị trĩ, lợi tiểu, tác dụng lỵ trực khuẩn, ho lâu ngày, chữa mụn nhọt, sưng đau Cao nước rau sam làm giảm đáng kể trương lực số bệnh nhân co cứng, gấp duỗi, nhận thấy giảm 50% điện đồ Cao rau sam ức chế áp lực co giật kích thích điện gián tiếp qua dây thần kinh hoành nửa hoành (Viện Dược liệu, 2004) Tác giả Nguyễn Thị Ngọc Trâm chiết xuất năm phân đoạn cao rau sam đưa thử tác dụng dược lý mơ hình (cơ trơn thành mạch, trương lực nhu động ruột, tác dụng q trình đơng - cầm máu, huyết áp, khả giảm đau, chống viêm, kháng khuẩn) Kết nghiên cứu cho thấy có phân đoạn đạt điểm cao có tác dụng tốt nhất, phân đoạn sử dụng làm nguyên liệu sản xuất thuốc điều trị bệnh trĩ, Bộ Y Tế đề nghị tiếp tục thực nghiên cứu đề tài 2.2 Cây dền gai (Amaranthus spinosus L., họ Amaranthaceae) Cây dền gai có tên khoa học Amaranthus spinosus L thuộc họ rau dền Amaranthaceae Dền gai thảo hàng năm, cao 0,30-0,70 m, phân cành nhiều, khơng lơng Lá mọc so le, hình thn dài, cuống dài có cánh, gốc có gai dài 3-15 mm, mặt phiến màu xanh Hoa mọc thành sim xếp sít nách thành dài, bắc gai 7-8 mm Quả túi hình trứng nhọn đầu Hạt đen óng ánh (Võ Văn Chi, 1997b) (Hình 2.2) Hình 2.2 Hình ảnh dền gai (Amaranthus spinosus L.) Cây dền gai có thành phần hóa học chứa tỷ lệ cao kali nitrat, rễ Dền gai có vị nhạt, tính lạnh, có tác dụng nhiệt, lợi tiểu, trừ thấp, thu liễm ngừng tả Dền gai sử dụng dân gian để điều trị phù thũng, bệnh thận, bệnh lậu, chữa lỵ làm thuốc điều kinh Phần mặt đất dùng để trị bỏng, đắp tiêu viêm mụn nhọt Lá có tác dụng long đờm, dùng trị ho bệnh đường hô hấp Hạt dùng hạt mào gà đắp để băng bó chỗ gãy Nhân dân dùng hạt rễ trị bệnh đau tim Theo Viện Dược liệu, thành phần hóa học dền gai gồm: Rễ dền gai chứa spinasterol, toàn chứa sterol (β – sitosterol, stigmasterol, campesterol, cholesterol, n – alkan, acid béo (acid stearic, acid oleic, acid linoleic); phần mặt đất chứa rutin 1,9%; có rutin 1,9%, acid hydrocyanic, kali 4,5% Ngồi ra, dền gai có 3-methyl-1-butanol, 34 hexen-1-ol, 3-methylbutanal, 2-heptanon Dền gai có tác dụng hoạt tính kích thích thực bào, cao nước có tác dụng diệt nấm Cercospora cruenta Tác giả Nguyễn Thị Ngọc Trâm chiết xuất sáu phân đoạn cao dền gai thử tác dụng dược lý trơn thành mạch, trương lực nhu động ruột, tác dụng q trình đơng – cầm máu, huyết áp, khả giảm đau, chống viêm, kháng khuẩn Kết cho thấy có hai phân đoạn đạt điểm cao nhất, hai phân đoạn sử dụng làm nguyên liệu sản xuất thuốc điều trị bệnh trĩ tiếp tục nghiên cứu đề tài III ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Đối tượng nghiên cứu 3.1.1 Thuốc nghiên cứu - Thuốc nghiên cứu: Viên nang cứng Trĩ Thiên Dược sản xuất Công ty TNHH Thiên Dược, đạt tiêu chuẩn sở Bảng 3.1 Bảng cơng thức đóng viên nang Trĩ Thiên Dược STT Thành phần Cao khô (Hỗn hợp phân đoạn Tỷ lệ % viên (mg) 90,77% 590 rau dền gai rau sam) Aerosil 0,62% Tinh bột 6,15% 40 Sodium Starch Glycolat 1,54% 10 Talc 0,46% Magnesi stearate 0,46% Tổng cộng 100% 650 Mỗi viên nang chứa 590mg hỗn hợp phân đoạn rau dền gai rau sam (gọi cao phân đoạn) Liều dùng dự kiến người: viên/ngày 3.1.2 Động vật thí nghiệm - Chuột cống trắng chủng Wistar trưởng thành, khỏe mạnh, cân nặng 200g - 250g - Chuột nuôi ngày trước nghiên cứu suốt thời gian nghiên cứu điều kiện phòng thí nghiệm với đầy đủ thức ăn nước uống Bộ môn Dược lý - Trường Đại học Y Hà Nội 3.1.3 Thuốc hóa chất phục vụ nghiên cứu - Daflon® có thành phần gồm phân đoạn flavonoid tinh khiết dạng vi hạt chứa diosmin 450 mg, hesperidin 50 mg, sản xuất Công ty Les Laboratoires Servier Industrie, Pháp; - Dầu croton (lọ 10 g) sản xuất Sigma Aldrich, St Louis, USA; - Pyridin (chai 500ml) sản xuất Kanto Chemical Co.,Inc, Nhật - Diethyl ether (chai 500ml) sản xuất Xilong Chemical Co.,Ltd, Trung Quốc; - Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) Kit for Tumor Necrosis Factor Alpha (TNF-α) sản xuất Cloud-Clone Corp; - Các hóa chất xét nghiệm làm tiêu mơ bệnh học 3.2 Phương pháp nghiên cứu Gây mơ hình trĩ thực nghiệm đánh giá tác dụng Viên trĩ Thiên Dược mơ hình trĩ thực nghiệm Tiến hành theo phương pháp Nishiki Mohammed Azeemuddin [4], [5]: Chia lô chuột: - Chuột chia thành lô, lô 10 con: + Lô 1A (chứng sinh học): Uống nước cất + Lô 1B (chứng sinh học): Uống nước cất + Lơ 2A (mơ hình): Uống nước cất + Lơ 2B (mơ hình): Uống nước cất + Lô (chứng dương): Uống daflon liều 360mg/kg/ngày (liều tương đương người viên/ngày) + Lô (lô trị 1): Uống Trĩ Thiên Dược liều 0,566g cao phân đoạn/kg/ngày (liều có tác dụng tương đương người, tính theo hệ số 6) + Lô (lô trị 2): Uống Trĩ Thiên Dược liều 1,698g cao phân đoạn/kg/ngày (gấp lần lơ trị 1) Gây mơ hình trĩ thực nghiệm hỗn hợp dầu croton: Gây trĩ thực nghiệm cho chuột lô hỗn hợp dầu croton gồm: Nước/Pyridin/Diethylether/Dung dịch dầu croton 6% diethylether với tỉ lệ 1:4:5:10 - Lô 1A lô 1B: Nhúng tăm bơng sạch, đường kính 4mm vào 100µl nước muối sinh lý phút Nhét tăm tẩm nước muối sinh lý vào trực tràng với độ sâu 2cm tính từ đầu hậu mơn Giữ tăm bơng vòng 30 giây - Từ lơ đến lô 5: Nhúng tăm sạch, đường kính 4mm vào 100µl hỗn hợp dầu croton phút Nhét tăm tẩm hỗn hợp dầu croton vào trực tràng với độ sâu 2cm tính từ đầu hậu mơn Giữ tăm bơng vòng 30 giây để đảm bảo hỗn hợp dầu croton tiếp xúc lên bề mặt niêm mạc trực tràng - Với lô chuột 1B, 2B, sau gây trĩ thực nghiệm 24 chuột đánh giá đại thể, đánh giá mơ bệnh học tính hệ số RAC (Rectoanal coefficient) Đánh giá tác dụng Trĩ Thiên Dược mơ hình gây trĩ thực nghiệm - Sau gây trĩ thực nghiệm 24 giờ, lô chuột 1A, 2A, 3, 4, uống nước cất thuốc thử liên tục vòng ngày Các thơng số đánh giá Định lượng nồng độ TNF-α - Ngày thứ 7, sau uống nước cất/thuốc thử lấy máu chuột để định lượng nồng độ TNF-α Đánh giá đại thể - Quan sát hậu môn trực tràng để đánh giá tình trạng tiết dịch, tấy đỏ, phù - Phẫu tích tồn đoạn ruột dưới, mổ theo chiều dọc đánh giá dấu hiệu kích ứng, tổn thương biểu mơ hậu mơn trực tràng tình trạng hoại tử - So sánh tình trạng hậu mơn trực tràng chuột nhóm dùng thuốc thử với nhóm chứng Tính hệ số RAC (Rectoanal coefficient) - Lấy đoạn trực tràng - hậu môn dài 2cm Cân đoạn trực tràng – hậu mơn - Tính hệ số RAC cân nặng đoạn trực tràng - hậu môn (mg) đoạn dài 2cm/trọng lượng chuột (g) Đánh giá mô bệnh học - Lấy đoạn trực tràng-hậu môn dài 2cm làm giải phẫu bệnh - Điểm đánh giá vi thể tính cho chuột Điểm tối đa 12 Bảng 3.2 Bảng đánh giá tính điểm mức độ tổn thương mô bệnh học Tổn thương Điểm Biểu mơ Bình thường, ngun vẹn Biểu mơ phát triển, chưa phủ tồn vẹn Tế bào bị thối hóa phẳng Dị sản Có ổ bào mòn Thâm nhiễm bạch cầu Khơng có Ít (dưới 25) Nhẹ (26 đến 50) Trung bình (51 đến 100) Nhiều (> 100) Sung huyết mạch Khơng có Ít Nhẹ Vừa Đáng kể, có vỡ mạch máu - Sau gây mơ hình trĩ thực nghiệm sau 24 giờ, kiểm tra cấu trúc vi thể hậu môn-trực tràng 50% số chuột lô 1B 2B Sau ngày uống nước cất/thuốc thử, 100% số chuột lơ lại mổ để đánh giá cấu trúc vi thể hậu mơ-trực tràng theo bảng đánh giá tính điểm mức độ tổn thương mơ - Trên hình ảnh đại thể, hậu môn - trực tràng chuột lô chứng sinh học có hình trụ, có co thắt trực tràng thành đốt, màu sáng, khơng có phân ứ đọng - Hình ảnh đại thể chuột lơ mơ hình cho thấy hỗn hợp dầu croton có tác dụng gây trĩ thực nghiệm chuột cống trắng với triệu chứng trực tràng bị viêm mạnh, phù nề, sung huyết, kích thước trực tràng lớn nhiều so với lơ chứng sinh học - Trên hình ảnh đại thể trực tràng lô chứng dương uống Daflon liều 360mg/kg/ngày tình trạng viêm phù nề Tuy nhiên, mức độ viêm phù nề giảm rõ rệt so với lơ mơ hình sau ngày uống thuốc, kích thước trực tràng nhỏ hơn, giảm ứ phân, giảm hoại tử mơ màu sắc trực tràng thâm đen so với mơ hình - Sau ngày uống thuốc thử, lô trị uống Viên Trĩ Thiên Dược liều 0,566g cao phân đoạn/kg/ngày liều 1,698g cao phân đoạn/kg/ngày tình trạng viêm phù nề, triệu chứng viêm, phù nề giảm so với lô mô hình, kích thước trực tràng nhỏ hơn, giảm ứ phân, giảm hoại tử mơ màu sắc trực tràng thâm đen so với mơ hình 20 Bảng 4.7 Điểm đánh giá vi thể cho lô nghiên cứu Lô chuột n Tổn Thâm Sung Tổng thương nhiễm huyết điểm mạch vi thể 0 biểu mô bạch cầu Lơ 1A: Chứng sinh học 10 Lơ 2A: Mơ hình 10 (1 - 2) (1 - 4) (1 - 3) (5 - 9) < 0,001 < 0,001 < 0,001 10 (1 - 1) (0 - 3) (0 - 1) (1 - 4) < 0,001 < 0,001 < 0,001 10 (1 - 1) (2 - 4) (0 - 1) (3 - 6) p so lô chứng sinh học Lô 3: Chứng dương Daflon liều 360mg/kg/ngày p so lô mô hình 0 < 0,001 < 0,001 Lơ 4: Viên Trĩ Thiên Dược liều 0,566g cao phân đoạn/kg/ngày p so lơ mơ hình < 0,001 < 0,05 < 0,01 < 0,001 Lô 5: Viên Trĩ Thiên Dược liều 1,698g cao phân 10 (1 - 1) (1 - 4) (0 - 1) (2 - 6) đoạn/kg/ngày p so lơ mơ hình < 0,001 < 0,01 < 0,001 < 0,001 p so liều thấp > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Số liệu biểu diễn dạng: Trung vị (giá trị cực tiểu – giá trị cực đại) 21 Nhận xét: - Lô chứng sinh học: Trực tràng khơng thấy tổn thương, khơng thối hóa, hoại tử Mô kẽ không thấy xâm nhập loại tế bào viêm, không tăng sinh xơ Cấu trúc lớp biểu mô, tuyến lớp đệm, niêm tầng niêm mạc khơng có hình ảnh bất thường - Lơ mơ hình: Xen lớp biểu mơ mao mạch, tĩnh mạch sung huyết, số tế bào biểu mô phủ, biểu mơ tuyến thối hóa Có nhiều tế bào bạch cầu, lympho thâm nhiễm lớp đệm - Lô uống daflon liều 360mg/kg/ngày làm giảm rõ rệt số lượng mật độ tế bào viêm lớp đệm niêm mạc so với lơ mơ hình Biểu mơ phủ bò dần sang biểu mơ bị thối hóa bong sau gây mơ hình trĩ thực nghiệm Vùng biểu mô bong lô chứng dương giảm rõ rệt so với lơ mơ hình - Lơ uống Trĩ Thiên Dược liều 0,566g cao phân đoạn/kg/ngày liều 1,698g cao phân đoạn/kg/ngày: Biểu mô lan dần sang vùng biểu mô bị bong Mạch máu tân tạo tăng sinh nhiều vùng biểu mô bong Số lượng tế bào thâm nhiễm giảm có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình Mức giảm thâm nhiễm bạch cầu liều 1,698g cao phân đoạn/kg/ngày rõ rệt liều 0,566g cao phân đoạn/kg/ngày Thuốc thử Trĩ Thiên Dược liều làm giảm rõ rệt sung huyết mạch so với lơ mơ hình Hình ảnh vi thể hậu mơn - trực tràng lô nghiên cứu Lô chứng sinh học: 22 Hình 4.16 Hình ảnh vi thể hậu môn – trực tràng chuột lô chứng sinh học (chuột số 03) (H.E x 250): Cấu trúc lớp biểu mô, tuyến lớp đệm, niêm tầng niêm mạc khơng có hình ảnh bất thường Hình 4.17 Hình ảnh vi thể hậu môn – trực tràng chuột lô chứng sinh học (chuột số 04) (H.E x 250): Cấu trúc lớp biểu mô, tuyến lớp đệm, niêm tầng niêm mạc khơng có hình ảnh bất thường 23 Hình 4.18 Hình ảnh vi thể hậu mơn – trực tràng chuột lô chứng sinh học (chuột số 06) (H.E x 250): Cấu trúc lớp biểu mô, tuyến lớp đệm, niêm tầng niêm mạc khơng có hình ảnh bất thường Lơ mơ hình: Hình 4.19 Hình ảnh vi thể hậu môn – trực tràng chuột lô mô hình (chuột số 22) (H.E x 250): Giữa lớp biểu mô mao mạch, tĩnh mạch sung huyết, đa số tế bào biểu mô phủ, biểu mô tuyến bị thối hóa 24 Hình 4.20 Hình ảnh vi thể hậu mơn – trực tràng chuột lơ mơ hình (chuột số 27) (H.E x 250): Đa số tế bào biểu mơ phủ biểu mơ tuyến bị thối hóa, xen có mao mạch sung huyết Tế bào viêm thâm nhiễm nhiều vùng lớp đệm tầng niêm mạc Hình 4.21 Hình ảnh vi thể hậu mơn – trực tràng chuột lơ mơ hình (chuột số 29) (H.E x 250): Đa số tế bào biểu mô phủ biểu mơ tuyến bị thối hóa, xen có mao mạch sung huyết Tế bào viêm thâm nhiễm nhiều vùng lớp đệm tầng niêm mạc 25 Lơ chứng dương: Daflon liều 360mg/kg/ngày Hình 4.22 Hình ảnh vi thể hậu mơn – trực tràng chuột lô chứng dương (chuột số 41) (H.E x 250): Biểu mơ phủ bò dần sang vùng biểu mơ bị thối hóa bong sau gây mơ hình viêm Mật độ tế bào viêm giảm Hình 4.23 Hình ảnh vi thể hậu môn – trực tràng chuột lô chứng dương (chuột số 44) (H.E x 250): Vùng biểu mô phủ bò dần sang vùng biểu mơ bị thối hóa 26 Hình 4.24 Hình ảnh vi thể hậu mơn – trực tràng chuột lô chứng dương (chuột số 47) (H.E x 250): Biểu mô tuyến tăng sinh vùng biểu mô bị bong Lô uống viên Trĩ Thiên Dược liều 0,566g cao phân đoạn/kg/ngày Hình 4.25 Hình ảnh vi thể hậu môn – trực tràng chuột lô uống viên Trĩ Thiên Dược liều 0,566g cao phân đoạn/kg/ngày (chuột số 51) (H.E x 100): Biểu mô tái tạo phủ vùng mơ bị bong 27 Hình 4.26 Hình ảnh vi thể hậu môn – trực tràng chuột lô uống viên Trĩ Thiên Dược liều 0,566g cao phân đoạn/kg/ngày (chuột số 59) (H.E x 100): Tế bào viêm thâm nhiễm vùng biểu mơ bị bong Mạch máu tân tạo tăng sinh Hình 4.27 Hình ảnh vi thể hậu mơn – trực tràng chuột lô uống viên Trĩ Thiên Dược liều 0,566g cao phân đoạn/kg/ngày (chuột số 60) (H.E x 100): 28 Biểu mô tăng sinh lan dần sang vùng mô bị bong Tế bào thâm nhiễm vùng mô bị bong Lô uống viên Trĩ Thiên Dược liều 1,698g cao phân đoạn/kg/ngày Hình 4.28 Hình ảnh vi thể hậu mơn – trực tràng chuột lô uống viên Trĩ Thiên Dược liều 1,698g cao phân đoạn/kg/ngày (chuột số 61) (H.E x 250): Biểu mô lan dần sang vùng biểu mô bị bong Mạch máu tân tạo tăng sinh nhiều vùng biểu mơ bong 29 Hình 4.29 Hình ảnh vi thể hậu môn – trực tràng chuột lô uống viên Trĩ Thiên Dược liều 1,698g cao phân đoạn/kg/ngày (chuột số 62) (H.E x 100): Biểu mô phủ, biểu mô tuyến tăng sinh lan dần sang vùng biểu mô bị bong Mạch máu tân tạo tăng sinh nhiều vùng biểu mơ bong Hình 4.30 Hình ảnh vi thể hậu môn – trực tràng chuột lô uống viên Trĩ Thiên Dược liều 1,698g cao phân đoạn/kg/ngày (chuột số 66) (H.E x 100): Biểu mô phủ biểu mô tuyến tăng sinh sang vùng biểu mô bị bong Nhận xét: - Lô chứng sinh học: Tất chuột lô chứng sinh học có cấu trúc lớp biểu mơ, tuyến lớp đệm, niêm tầng niêm mạc hình ảnh bất thường - Lơ mơ hình: Hình ảnh vi thể hậu môn – trực tràng cho thấy lớp biểu mô mao mạch, tĩnh mạch sung huyết, số tế bào biểu mô phủ, biểu mơ tuyến thối hóa Lớp đệm có nhiều tế bào thâm nhiễm - Lô chứng dương: Tất chuột uống Daflon liều 360mg/kg/ngày cho thấy hình ảnh vi thể có biểu mơ bò dần sang vùng biểu mơ bị thối hóa bong sau gây mơ hình Xen vùng biểu mô bị bong viêm vùng biểu mơ bình thường Đang dần xuất nhiều mạnh máu tân tạo, tế bào viêm giảm rõ rệt so với lơ mơ hình 30 - Lơ uống viên Trĩ Thiên Dược liều 0,566g cao phân đoạn/kg/ngày liều 1,698g cao phân đoạn/kg/ngày: Hình ảnh vi thể hậu mơn – trực tràng cho thấy biểu mô lan dần sang vùng biểu mô bị bong Mạch máu tân tạo tăng sinh nhiều vùng biểu mô bong Tế bào thâm nhiễm giảm so với lơ mơ hình V BÀN LUẬN Bệnh trĩ hình thành giãn mức đám rối tĩnh mạch hậu môn - trực tràng, dẫn đến tình trạng viêm mơ xung quanh, phù nề, sung huyết Viêm thường với triệu chứng đau, sa trĩ, chảy máu Viêm làm tăng giãn mạch máu nên làm nặng thêm tình trạng sa trĩ chảy máu Viêm làm tăng cảm giác đau gây sưng, chèn ép mơ giải phóng chất trung gian hóa học prostaglandin, kinin,… kích thích tận thần kinh đau [1] Để đánh giá tác dụng điều trị trĩ thuốc thử cần xây dựng mô hình gây trĩ thực nghiệm Có hai phương pháp sử dụng để gây trĩ động vật thực nghiệm thắt tĩnh mạch trĩ sử dụng hóa chất kích ứng gây viêm hậu mơn – trực tràng Mơ hình gây trĩ thắt tĩnh mạch mơ tả Hélio Plapler dựa chế hình thành búi trĩ giãn đám rối tĩnh mạch trĩ Tuy nhiên, mơ hình tiến hành phức tạp, u cầu kỹ thuật cao khó thực động vật nhỏ chuột thỏ [6] Với mô hình gây trĩ thực nghiệm hóa chất, hỗn hợp dầu croton sử dụng nhiều Sử dụng dầu croton tác nhân gây trĩ mô tả Nishiki cộng Hỗn hợp dầu croton chất gây viêm mạnh, tiếp xúc với hậu môn gây viêm phá hủy mô, đặc biệt mạch máu dẫn đến giãn mạch, tăng tính thấm thành mạch, thâm nhiễm tế bào viêm, phù nề tương tự bệnh trĩ, qua đánh giá xác tác dụng thuốc thử bệnh trĩ [4] Trong nghiên cứu này, hỗn hợp dầu croton gồm nước cất, pyridin, diethyl ether, dầu croton 6% diethyl ether theo tỷ lệ thể tích tương ứng 1: 4: 5: 10 dùng để gây kích ứng hậu môn – trực tràng Sự phát triển 31 viêm trực tràng nhận thấy bắt đầu sau đến sử dụng hỗn hợp dầu croton Trọng lượng động vật thực nghiệm nghiên cứu 200g – 250g thuận tiên cho trình gây trĩ Viêm gây giãn mạch, thoát dịch ứ dịch rỉ viêm dẫn đến tăng trọng lượng hậu môn - trực tràng chuột Vì nghiên cứu việc cân trọng lượng hậu môn – trực tràng xác định nồng độ TNF-α để đánh giá mức độ viêm lô chuột thực nghiệm Để đánh giá tác dụng điều trị trĩ thuốc nghiên cứu cách xác nhất, mô bệnh học trực tràng chuột đánh giá cho điểm dựa mức độ hoại tử, sung huyết, mật độ số lượng tế bào viêm Kết nghiên cứu cho thấy sau 24 gây mơ hình trĩ thực nghiệm, chuột lơ chứng sinh học có cấu trúc lớp biểu mơ, tuyến lớp đệm, niêm, tầng niêm mạc khơng có hình ảnh bất thường vi thể Trong đó, hình ảnh vi thể hậu môn – trực tràng lô mô hình cho thấy lớp biểu mơ mao mạch, tĩnh mạch sung huyết, số tế bào biểu mơ phủ, biểu mơ tuyến thối hóa Lớp đệm có nhiều tế bào thâm nhiễm Điều phù hợp với hình ảnh đại thể lơ mơ hình lơ chứng sinh học kết cân nặng đoạn hậu môn – trực tràng dài 2cm hệ số RAC so sánh lơ mơ hình lơ chứng sinh học Như vậy, mơ hình gây trĩ thực nghiệm thành công Sau ngày gây mô hình trĩ thực nghiệm hỗn hợp dầu croton, viên Trĩ Thiên Dược liều 0,566g cao phân đoạn/kg/ngày liều 1,698g cao phân đoạn/kg/ngày uống làm giảm nồng độ TNF-α có ý nghĩa so với lơ mơ hình Ngồi ra, viên Trĩ Thiên Dược có tác dụng làm giảm rõ rệt trọng lượng hậu môn – trực tràng hệ số RAC so với lơ mơ hình Khơng nhận thấy có khác biệt lơ uống viên Trĩ Thiên Dược liều 0,566g cao phân đoạn/kg/ngày liều 1,698g cao phân đoạn/kg/ngày Hơn nữa, hình ảnh vi thể hậu mơn – trực tràng lô uống Trĩ Thiên Dược liều 0,566g cao phân 32 đoạn/kg/ngày liều 1,698g cao phân đoạn/kg/ngày cho thấy biểu mô lan dần sang vùng biểu mô bị bong, mạch máu tân tạo tăng sinh nhiều vùng biểu mô bong, số lượng tế bào thâm nhiễm giảm có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình Mức giảm thâm nhiễm bạch cầu liều 1,698g cao phân đoạn/kg/ngày rõ liều 0,566g cao phân đoạn/kg/ngày Thuốc thử Trĩ Thiên Dược liều làm giảm rõ rệt sung huyết mạch so với lơ mơ hình Như vậy, Viên Trĩ Thiên Dược liều 0,566g cao phân đoạn/kg/ngày liều 1,698g cao phân đoạn/kg/ngày có tác dụng điều trị trĩ mơ hình gây trĩ thực nghiệm thông qua làm giảm nồng độ TNF-α, trọng lượng hậu môn – trực tràng hệ số RAC, đẩy nhanh phục hồi biểu mô, giảm rõ rệt tình trạng thâm nhiễm bạch cầu, sung huyết mạch so với lơ mơ hình gây trĩ thực nghiệm VI KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu, rút kết luận sau: Viên Trĩ Thiên Dược liều 0,566g cao phân đoạn/kg/ngày liều 1,698g cao phân đoạn/kg/ngày làm giảm nồng độ TNF-α, trọng lượng hậu môn – trực tràng chuột hệ số RAC (Rectoanal coefficient), đẩy nhanh phục hồi biểu mô, giảm rõ rệt tình trạng thâm nhiễm bạch cầu, sung huyết mạch so với lơ mơ hình Như vậy, viên Trĩ Thiên Dược liều 0,566g cao phân đoạn/kg/ngày liều 1,698g cao phân đoạn/kg/ngày có tác dụng điều trị trĩ mơ hình gây trĩ thực nghiệm 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ môn Ngoại – Trường Đại học Y Hà Nội (2006) Bệnh học ngoại dùng cho Sau Đại học Nhà xuất Y học, 1, 326-332 Ngô Quý Châu (2012) Bệnh học nội khoa Nhà xuất Y học, 2, 890 Scott C Thornton, Kyle R Perry, Adam J Rosh (2017) Hemorrhoids Available at: http://emedicine.medscape.com/article/775407-overview#a7 Nishiki K et al (1988) Croton oil-induced hemorrhoid model in rat: comparison of anti-inflammatory activity of diflucortolone valerate with other glucocorticoids Nippon Xakurigaku Zasshi, 92(4), pp 215-225 Mohammed Azeemuddin et al (2014) An improved experimental model of hemorrhoids in rats: Evaluation of antihemorrhoidal activity of an herbal formulation Hindawi Publishing Corporation, 530931, pp 1-7 Plapler H (2006) Hemorrhoids: an experimental model in monkeys Acta Cirurgica Brasileira, 21(5), pp 354-356 Hà Nội, ngày tháng năm 2018 Trưởng nhóm nghiên cứu PGS.TS Phạm Thị Vân Anh Trường Đại học Y Hà Nội xác nhận chữ ký PGS TS Phạm Thị Vân Anh Trưởng phòng Tổ chức Cán 34 ... thích hợp để viên thuốc có hiệu điều trị bệnh Tác dụng điều trị bệnh trĩ viên Trĩ Thiên Dược gồm thành phần cao phân đoạn flavonoid dền gai rau sam nghiên cứu mơ hình dược lý thực nghiệm Mục tiêu... Cloud-Clone Corp; - Các hóa chất xét nghiệm làm tiêu mơ bệnh học 3.2 Phương pháp nghiên cứu Gây mơ hình trĩ thực nghiệm đánh giá tác dụng Viên trĩ Thiên Dược mơ hình trĩ thực nghiệm Tiến hành theo phương... sau gây trĩ thực nghiệm 24 chuột đánh giá đại thể, đánh giá mơ bệnh học tính hệ số RAC (Rectoanal coefficient) Đánh giá tác dụng Trĩ Thiên Dược mơ hình gây trĩ thực nghiệm - Sau gây trĩ thực nghiệm