TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM BỘ MÔN DƯỢC LÝ Độc lập – Tự – Hạnh phúc KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ CÁC ĐỘT BIẾN NHIỄM SẮC THỂ TINH NGUYÊN BÀO Ở ĐỘNG VẬT CÓ VÚ CỦA TD0025 1 Nguyên liệu, đối tượng phương pháp nghiên cứu 1.1 Nguyên liệu đối tượng nghiên cứu 1.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu: Viên nang TD0025 - Thành phần STT THÀNH PHẦN Chiết xuất Rễ đinh lăng (Rhizoma Polyscias fruticosa extract) Đơn Khối lượng/1 vị viên nang cứng mg 132 Chiết xuất Lá bạch (Ginkgo biloba extract) mg 40 Chiết xuất Tảo đỏ (Haematococcus pluvialis extract) mg 270 Chiết xuất bá bệnh (Eurycoma longifolia extract) mg 45 Chiết xuất Bạch tật lê (Tribulus terrestris extract) mg 99 Tá dược (CaCO3, Talc, Mg stearat, Natribenzoat) vừa đủ viên - Nơi sản xuất: Công ty Cổ phần Sao Thái Dương - Liều dùng người: uống 1viên/ngày, tương đương 586 mg dược liệu/ngày Thuốc pha dung môi nước cất trước cho động vật thí nghiệm uống 1.1.2 Đối tượng nghiên cứu Chuột nhắt trắng chủng Swiss, giống, khoẻ mạnh, trọng lượng 20 – 25g Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương cung cấp Chuột nuôi phòng thí nghiệm Bộ mơn Dược lý 5-10 ngày trước nghiên cứu suốt thời gian nghiên cứu thức ăn chuẩn dành riêng cho chuột (do Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương cung cấp), uống nước tự 1.2 Thuốc, hóa chất máy móc phục vụ nghiên cứu - Dụng cụ vật liệu dùng cho phẫu thuật động vật: kính hiển vi phẫu thuật, kéo, nỉa, panh, kìm, chỉ, bơng, băng, gạc, bơm tiêm,… 1.3 Phương pháp nghiên cứu Chuột đực chia ngẫu nhiên thành nhóm, nhóm có chuột - Lô 1: chứng sinh học: uống nước với thể tích 0,2 mL/10 g trọng lượng chuột nhắt đực 2 - Lô 2: chứng dương: tiêm màng bụng cyclophosphamid 50 mg/kg trọng lượng chuột nhắt đực - Lô 3: TD0025 liều thấp: uống TD0025liều 140,64 mg dược liệu/kg trọng lượng chuột nhắt đực (liều tương đương lâm sàng) - Lô 4: TD0025 liều cao gấp 2: uống TD0025 liều 281,28 mg dược liệu/kg trọng lượng chuột nhắt đực - Lô 5: TD0025 liều cao gấp 4: uống TD0025 liều 562,56 mg dược liệu/kg trọng lượng chuột nhắt đực Chuột lô dùng liều thuốc chứng dương thuốc thử, sau 24 (thời gian thuốc thử hấp thu, chuyển hóa ảnh hưởng đến chu kì tế bào đảm bảo đủ thời gian để có thể phát đột biến cấu trúc NST) tiêm màng bụng colchicin liều 4mg/kg cho lô đến Sau tiêm colchicin, giết chuột lấy tinh hoàn Tinh hoàn nghiền thành dịch huyền phù sau làm tiêu bản, nhuộm màu đánh giá đột biến số lượng nhiễm sắc thể xảy chuột, lô nghiên cứu 1.4 Xử lý số liệu Các số liệu nghiên cứu biểu diễn dạng X ± SD Các số liệu xử lý thống kê theo thuật toán thống kê T-test Student, test Anova: Single factor phần mềm Microsoft Excel 2010 Khác biệt so với lô chứng trắng (lô 1) Khác biệt so với lô tiêm cyclophosphamid 3 p ≤ 0,05 * ∆ p ≤ 0,01 ** ∆∆ p ≤ 0,001 *** ∆∆∆ Kết nghiên cứu Bảng 2.1 Tỷ lệcụm NST bình thường chuột đực uống TD0025 Lô Thuốc Tỷ lệ cụm NST bình thường 0.921 ± 0.040 0.715 ± 0.132** 0.913 ± 0.046∆∆ 0.932 ± 0.043∆∆ 0.931 ± 0.045 Nước cất CYP 50 mg/kg TD0025 liều thấp TD0025 liều gấp TD0025 liều gấp Kết bảng 2.1 cho thấy: tiêm màng bụng cyclophosphamid liều 50 mg/kg làm giảm rõ rệt tỷ lệ cụm NST bình thường tinh hồn chuột được, khác biệt có ý nghĩa thống kê với p < 0,01.Tỷ lệ cụm NST bình thường tinh hoàn chuột đực uống TD0025 liều khơng có khác biệt so với lơ chứng sinh học (p > 0,05) khơng có khác biệt so sánh nhóm chuột đực uống TD0025 mức liều nghiên cứu (p>0,05; F = 0.0078 < Fcrit = 3.6823) 4 Bảng 2.2 Tỷ lệ đột biến số lượng NST chuột đực uống TD0025 Lô Thuốc Nước cất CYP 50 mg/kg TD0025 liều thấp TD0025 liều gấp TD0025 liều gấp Tỷ lệ cụm NST đột biến số lượng (Đột biến 19 NST, đột biến đa bội) 0.079 ± 0.044 0.285 ± 0.132** 0.087 ± 0.046∆∆ 0.068 ± 0.043∆∆ 0.069 ± 0.045∆∆ Biểu đồ 2.1 Tỷ lệ đột biến số lượng NST chuột đực uống TD0025 Kết bảng 2.2 biểu đồ 2.1 cho thấy: tỷ lệ đột biến số lượng NST tăng cao rõ rệt lô tiêm màng bụng cyclophosphamid 50 mg/kg, khác biệt có ý nghĩa thống kê với p < 0,01 Tỷ lệ đột biến số lượng NST lơ chuột đực uống TD0025 khơng có khác biệt so với lô chứng sinh học (p > 0,05), khơng có khác biệt tỷ lệ đột biến số lượng NST so sánh lô uống TD0025 mức liều nghiên cứu (p > 0,05; F = 0.3272 < Fcrit = 3.6823) Hình 2.1 Hình ảnh đột biến 19 NST lơ chứng sinh học (chuột số 6) 5 Hình 2.2 Hình ảnh cụm NST bình thường (20 NST) lơ chứng sinh học (chuột số 10) Hình 2.3 Hình ảnh đột biến đa bội lô chứng sinh học (chuột số 6) 6 Hình 2.4 Hình ảnh đột biến đa bội lơ tiêm cyclophosphamid50 mg/kg (chuột số 1) Hình 2.5 Hình ảnh đột biến 19 NST lô tiêm cyclophosphamid 50 mg/kg (chuột số 2) 7 Hình 2.6 Hình ảnh cụm NST bình thường (20 NST) lô uống TD0025 liều thấp (chuột số 12) Hình 2.7 Hình ảnh đột biến đa bội lơ uống TD0025 liều thấp (chuột số 14) 8 Hình 2.8 Hình ảnh đột biến đa bội lơ uống TD0025 liều cao gấp 2lần (chuột số 24) Hình 2.9 Hình ảnh cụm NST bình thường lơ uống TD0025 liều cao gấp (chuột số 22) 9 Hình 2.10 Hình ảnh đột biến đa bội lô uống TD0025 liều cao gấp lần (chuột số 22) Hình 2.11 Hình ảnh cụm NST bình thường (20 NST) lơ uống TD0025 liều cao gấp 4lần (chuột số 27) 10 10 Hình 2.11 Hình ảnh đột biến 19 NST lơ uống TD0025 liều cao gấp lần (chuột số 29) 11 11 Kết luận - TD0025 liều 140,64 mg dược liệu/kg trọng lượng chuột nhắt đực (liều tương đương lâm sàng), liều 281,28 mg dược liệu/kg trọng lượng chuột nhắt đực (liều tương đương gấp lần lâm sàng) liều 562,56 mg dược liệu/kg trọng lượng chuột nhắt đực (liều tương đương gấp lần lâm sàng) không làm tăng tỷ lệ đột - biến số lượng NST tinh nguyên bào so với nhóm chuột nhắt đực uống nước cất Khơng có khác biệt tỷ lệ đột biến số lượng NST tinh nguyên bào chuột nhắt đực so sánh lô uống TD0025 mức liều nghiên cứu TÀI LIỆU THAM KHẢO 12 12 OECD 483 (2015), OECD Guideline For Testing of Chemicals: Mammalian Spermatogonial Chromosomal Aberration Test Çelikler S, Aydemir N, Bilaloğlu R (2007).A Comparative Study on the Genotoxic Effect of Pyrimethamine inBone Marrow and Spermatogonial Mice Cells.Z Naturforsch,62c, 679-683 Jay R Anand, (2012).Protective RamMohan Dandotiya, Effect Esculetin InducedChromosomal of Aberration, Harish against Micronuclei Rijhwani et al Cyclophosphamide Formation and OxidativeStress in Swiss Albino Mice.Am J PharmTech Res, 2(6), 667-679 Hà Nội, ngày 12 tháng 12 năm 2016 Trưởng nhóm nghiên cứu Nguyễn Trần Thị Giáng Hương Trường Đại học Y Hà Nội xác nhận chữ ký PGS.TS Nguyễn Trần Thị Giáng Hương Trưởng phòng Tổ chức Cán 13 13 ... Tỷ lệ đột biến số lượng NST chuột đực uống TD0025 Lô Thuốc Nước cất CYP 50 mg/kg TD0025 liều thấp TD0025 liều gấp TD0025 liều gấp Tỷ lệ cụm NST đột biến số lượng (Đột biến 19 NST, đột biến đa... tăng tỷ lệ đột - biến số lượng NST tinh nguyên bào so với nhóm chuột nhắt đực uống nước cất Khơng có khác biệt tỷ lệ đột biến số lượng NST tinh nguyên bào chuột nhắt đực so sánh lô uống TD0025 mức... Tỷ lệ đột biến số lượng NST lơ chuột đực uống TD0025 khơng có khác biệt so với lô chứng sinh học (p > 0,05), khơng có khác biệt tỷ lệ đột biến số lượng NST so sánh lô uống TD0025 mức liều nghiên