Trường Đại học Y Hà Nội Bộ môn Dược lý Cộng hoà xã hội chủ nghĩa Việt Nam Độc lập - Tự - Hạnh phúc KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG TĂNG LỰC CỦA GOLDEN BEER, BIA PILSNER URQUELL, BIA LEFFE TRÊN THỰC NGHIỆM Nơi tiến hành nghiên cứu: Bộ môn Dược lý Trường Đại học Y Hà Nội Thời gian nghiên cứu: 6/2018 Cán tham gia nghiên cứu: PGS TS Phạm Thị Vân Anh PGS TS Vũ Thị Ngọc Thanh ThS Nguyễn Thị Thanh Hà ThS Nguyễn Thị Thanh Loan KTV Nguyễn Kiều Vân KTV Đinh Quang Trường KTV Đàm Đình Tranh KTV Nguyễn Thành Long 1 Chất liệu phương pháp nghiên cứu 1.1 Chất liệu nghiên cứu * Thuốc nghiên cứu - Bia vàng Golden beer, độ cồn 5,3%, chai thủy tinh dung tích 330ml + Thành phần: nước, malt đại mạch, hoa houblon, vẩy vàng nguyên chất - Bia Pilsner Urquell độ cồn 4,4%, chai thủy tinh dung tích 330ml + Thành phần: nước, malt đại mạch - Bia Leffe độ cồn 6,6%, chai thủy tinh dung tích 330ml + Thành phần: nước, malt đại mạch - Thuốc chứng dương: Thuốc chứng dương: sulbutiamin, biệt dược Arcalion, dạng thuốc viên hãng Les Laboratoires Servier Industrie (Pháp) * Hóa chất xét nghiệm - Kit định lượng albumin, glucose hãng DIALAB GmbH (Áo), định lượng máy xét nghiệm sinh hóa bán tự động Erba (Ấn Độ) *Máy móc phục vụ nghiên cứu - Máy xét nghiệm sinh hóa bán tự động Erba (Ấn Độ) - Máy li tâm HETECH - Trục quay Rotarod 7650 - Hãng Ugo-Basile (Italy) - Máy đo sức kéo 7106 – Hãng Ugo-Basile (Italy) - Bình nước hình trụ kích thước 30 x 15x 30 cm 1.2 Động vật thực nghiệm - Chuột nhắt trắng, chủng Swiss, hai giống, khỏe mạnh, trọng lượng 25 ± 2g, Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương - Động vật nuôi từ 7-10 ngày trước nghiên cứu suốt thời gian nghiên cứu thức ăn chuẩn riêng, nước uống tự phòng thí nghiệm Bộ môn Dược lý – Trường Đại học Y Hà Nội 1.3 Phương pháp nghiên cứu Để đánh giá tác dụng tăng lực Golden beer (GB), bia Pilsner Urquell (BPU), bia Leffe (BL) lên chuột nhắt trắng, tiến hành nghiên cứu ba mơ hình thực nghiệm: mơ hình chuột bơi, mơ hình trục quay Rotarod mơ hình đo sức kéo 1.3.1 Nghiên cứu tác dụng loại bia mơ hình chuột bơi Dựa theo mơ hình chuột bơi Brekhman 1980, chuột nhắt trắng chia ngẫu nhiên thành lô, lô 10 [1], [2], [3], [4]: - Lô (chứng sinh học): uống nước 0,2ml/10g - Lô (chứng dương): uống sulbutiamin liều 96mg/kg - Lô 3: uống GB liều 10 ml/kg - Lô 4: uống GB liều 20 ml/kg - Lô 5: uống BPU liều 10 ml/kg - Lô 6: uống BPU liều 20 ml/kg - Lô 7: uống BL liều 10 ml/kg - Lô 8: uống BL liều 20 ml/kg Ngày uống lần vào buổi sáng tuần liên tục Theo dõi tiêu thời điểm: trước uống chế phẩm (T0) sau uống chế phẩm tuần (T1) Trước tiến hành đánh giá thời gian bơi, chuột nhịn đói trước 3h sau đeo chì trọng lượng 8% thể trọng vào đuôi cho chuột vào bình nước hình trụ có đường kính 15cm, chiều cao mực nước 15cm với nhiệt độ 37±2oC Thời gian bơi tính từ lúc chuột thả vào bình nước đến chuột chìm nước giây Ngồi đánh giá thời gian bơi, chuột sau bơi uống chế phẩm tuần lấy máu động mạch để định lượng nồng độ glucose hàm lượng albumin * Nhận định kết quả: so sánh khác thời gian bám bơi nồng độ glucose albumin máu chuột sau bơi lô Tính thời gian bơi trước dùng chế phẩm Cho chuột uống chế phẩm vào buổi sáng liên tục tuần Tính thời gian bơi sau dùng chế phẩm tuần Lấy máu động mạch làm xét nghiệm nồng độ glucose albumin Sơ đồ 2.1 Sơ đồ mô hình chuột bơi 1.3.2 Nghiên cứu ảnh hưởng loại bia lên sức bám chuột Dựa theo mô hình trục quay Rotarod Dunham Miya, chuột nhắt trắng chia lô mục 2.3.2.1, ngày uống lần vào buổi sáng tuần liên tục Theo dõi tiêu thời điểm: trước uống chế phẩm (T0) sau uống chế phẩm tuần (T1) Ở ngày thứ 1, trước chuột uống chế phẩm, ta xác định thời gian bám trước uống chế phẩm, ngày cuối sau chuột uống chế phẩm giờ, thời gian bám sau uống thuốc chuột ghi lại, thời gian bám chuột tính từ đặt lên trục quay chuột rơi khỏi trục quay [3] [4], [5] * Nhận định kết quả: Kết so sánh khác thời gian bám trục quay lô Uống chế phẩm N1 N14 Thời gian bám trước Thời gian bám sau uống (T0) uống 1h (T1) Sơ đồ 2.2 Sơ đồ mơ hình trục quay Rotarod 1.3.3 Nghiên cứu ảnh hưởng loại bia lên sức kéo chuột Dựa mơ hình đo sức kéo Robert Deacon (2013), chuột nhắt trắng chia lô mục 2.3.2.1, ngày uống lần vào buổi sáng tuần liên tục Theo dõi tiêu thời điểm: trước uống chế phẩm (T 0) sau uống chế phẩm tuần (T1), ngày cuối sức kéo ghi thời điểm 1h sau uống chế phẩm Tại thời điểm: hai chi trước chuột đặt lên tay nắm, đuôi kéo theo hướng ngược lại, theo phản xạ chuột bám vào tay nắm để chống lại, chi trước chuột dời máy ghi lại lực kéo tối đa chuột [6], [7], [8] * Nhận định kết quả: so sánh sức kéo (g) lô Uống chế phẩm N1 N14 Sức kéo trước uống Sức kéo sau uống 1h Sơ đồ 2.3 Sơ đồ mơ hình sức kéo 1.4 Xử lý số liệu Các số liệu thu thập xử lý phương pháp thống kê y sinh học theo t- test - Student test trước sau (Avant-après) Biểu diễn ± SD Quy ước (so với lô chứng) *: p < 0,05; **: p < 0,01;***: p < 0,001 Kết nghiên cứu 2.1 Tác dụng loại bia mơ hình chuột bơi 2.1.1 Ảnh hưởng đến thời gian bơi Bảng 2.1 Sự thay đổi thời gian bơi chuột sau uống thuốc tuần Thời gian bơi (giây) Các lô dùng thuốc n Trước uống thuốc Lô 1: Nước 0,2ml/10g Lô 2: Sulbutiamin 96mg/kg Lô 3: GB 10ml/kg Lô 4: GB 20ml/kg Lô 5: BPU 10ml/kg Lô 6: BPU 20ml/kg Lô 7: BL 10ml/kg Lô 8: BL 20ml/kg 10 10 10 10 10 10 10 10 % p so Sau thay với p so uống đổi so trước với thuốc với lô uống lô tuần chứng thuốc 148,20 ± 124,40 ± 30,65 45,71 157,50 ± 351,40 ± 47,12 107,87 130,90 ± 202,60 ± 42,88 134,40 ± 59,40 112,60 ± 56,41 166,20 ± 42,01 124,10 ± 39,12 153,50 ± 36,16 155,90 ± 59,20 141,10 ± 42,10 134,90 ± 49,21 140,60 ± 35,45 101,80 ± 24,64 29,95 p so với lô >0,05 ↑182,5 0,05 39,8 6,83 ± 1,51 > 0,05 > 0,05 < 0,05 14,6 10 10 10 10 10 10 Glucose (mmol/l) 3,80 ± 0,56 4,37 ± 0,45 0,05 16,3 4,28 ± 0,23 < 0,05 > 0,05 > 0,05 12,6 5,26 ± 1,09 < 0,01 < 0,05 38,4 7,85 ± 1,15 < 0,001 < 0,001 < 0,001 106,6 Kết bảng 2.2 cho thấy: - Nồng độ glucose hàm lượng albumin lô dùng sulbutiamin tăng rõ so với lô chứng (p < 0,05) - GB liều 10ml/kg làm tăng nồng độ glucose rõ rệt so với lô chứng, tác dụng mạnh sulbutiamin 96mg/kg GB liều 20ml/kg GB liều 10ml/kg có xu hướng làm tăng nồng độ albumin so với lô chứng khác biệt chưa có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) GB liều 20ml/kg làm tăng rõ nồng độ glucose albumin so với lô chứng (p < 0,001), tác dụng mạnh sulbutiamin 96mg/kg (p < 0,05) - BPU liều 10ml/kg 20ml/kg làm tăng rõ nồng độ glucose albumin so với lô chứng (p < 0,05, p < 0,01) BPU liều có tác dụng tương đương sulbutiamin 96mg/kg (p > 0,05) - BL liều 10ml/kg làm tăng rõ nồng độ glucose albumin so với lô chứng (p < 0,01, p < 0,001) BL liều 10ml/kg làm tăng nồng độ glucose rõ so với sulbutiamin 96mg/kg (p < 0,05) BL liều 20ml/kg làm tăng nồng độ glucose rõ rệt so với lô chứng, tác dụng mạnh sulbutiamin 96mg/kg BL liều 10ml/kg BL liều 10ml/kg có xu hướng làm tăng nồng độ albumin so với lô chứng khác biệt chưa có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) 2.2 Tác dụng loại bia mơ hình trục quay Rotarod Bảng 2.3 Sự thay đổi thời gian bám chuột Thời gian bám (giây) Các lô dùng thuốc Lô 1: Nước cất 0,2ml/10g Lô 2: Sulbutiamin 96mg/kg P so lô Lô 3: GB 10ml/kg P so lô P so lô Lô 4: GB 20ml/kg P so lô P so lô P so liều 10ml/kg Lô 5: BPU 10ml/kg P so lô P so lô Lô 6: BPU 20ml/kg P so lô P so lô P so liều 10ml/kg Lô 7: BL 10ml/kg P so lô P so lô Lô 8: BL 20ml/kg P so lô P so lô P so liều 10ml/kg Trước uống Sau uống thuốc thuốc tuần 10 163,90 ± 50,95 178,10 ± 33,68 10 157,70 ± 36,85 235,80 ± 66,32 > 0,05 147,40 ± 41,63 > 0,05 > 0,05 154,30 ± 37,06 > 0,05 > 0,05 > 0,05 147,80 ± 46,87 > 0,05 > 0,05 144,70 ± 48,90 > 0,05 > 0,05 > 0,05 147,40 ± 49,26 > 0,05 > 0,05 146,40 ± 38,95 > 0,05 > 0,05 > 0,05 0,05 < 0,05 180,40 ± 51,13 > 0,05 > 0,05 > 0,05 179,60 ± 83,90 > 0,05 > 0,05 174,90 ± 51,37 > 0,05 < 0,05 > 0,05 195,80 ± 43,79 > 0,05 > 0,05 182,30 ± 61,10 > 0,05 > 0,05 > 0,05 n 10 10 10 10 10 10 % thay p so với đổi so trước với lô uống chứng thuốc > 0,05 ↑8,7 < 0,01 ↓6,0 > 0,05 ↑1,3 > 0,05 ↑0,8 > 0,05 ↓1,8 > 0,05 ↑9,9 < 0,05 ↑2,4 > 0,05 Kết bảng 2.3 cho thấy: - Sulbutiamin 96mg/kg làm tăng thời gian bám chuột rõ rệt so với trước uống thuốc so với lô chứng (p < 0,05 p < 0,01) - GB liều 20mg/kg có xu hướng làm tăng thời gian bám chuột khác biệt chưa có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) GB liều 10ml/kg không làm tăng thời gian bám chuột 10 - BPU liều 10ml/kg có xu hướng làm tăng thời gian bám chuột khác biệt chưa có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) BPU liều 20ml/kg tác dụng - BL liều 10ml/kg 20ml/kg có xu hướng làm tăng thời gian bám chuột khác biệt chưa có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) BL liều 10ml/kg làm tăng rõ thời gian bám chuột so với trước uống thuốc (p < 0,05) 11 2.3 Tác dụng loại bia mơ hình đo sức kéo Bảng 2.4 Sự thay đổi sức kéo chuột Sức kéo (g) Các lô dùng thuốc Lô 1: Nước cất 0,2ml/10g Lô 2: Sulbutiamin 96mg/kg P so lô Lô 3: GB 10ml/kg P so lô P so lô Lô 4: GB 20ml/kg P so lô P so lô P so liều 10ml/kg Lô 5: BPU 10ml/kg P so lô P so lô Lô 6: BPU 20ml/kg P so lô P so lô P so liều 10ml/kg Lô 7: BL 10ml/kg P so lô P so lô Lô 8: BL 20ml/kg P so lô P so lô P so liều 10ml/kg n Trước uống thuốc Sau uống thuốc tuần 10 697,40 ± 98,98 710,00 ± 66,09 10 640,10 ± 101,39 784,30 ± 37,29 10 10 10 10 > 0,05 < 0,01 724,60 ± 112,91 784,40 ± 30,25 > 0,05 < 0,01 > 0,05 > 0,05 693,60 ± 132,30 792,50 ± 50,34 > 0,05 < 0,01 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 731,60 ± 93,76 813,50 ± 49,50 > 0,05 > 0,05 < 0,001 > 0,05 716,90 ± 133,83 753,70 ± 83,36 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 10 692,40 ± 98,43 746,70 ± 104,17 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 10 709,40 ± 175,45 755,20 ± 77,14 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Kết bảng 2.4 cho thấy: % thay đổi so với lô chứng p so với trước uống thuốc > 0,05 ↑10,5 < 0,01 ↑10,5 >0,05 ↑11,6 < 0,05 ↑14,6 0,05 ↑5,2 >0,05 ↑6,4 > 0,05 - Sulbutiamin liều 96mg/kg làm tăng sức kéo chuột so với thời điểm trước uống thuốc so với lô chứng, khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,01) - GB liều 10ml/kg chưa làm tăng sức kéo rõ rệt so với trước uống thuốc làm tăng rõ so với lô chứng (p < 0,01) GB liều 20ml/kg làm tăng 12 sức kéo chuột so với thời điểm trước uống thuốc thử, khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) tăng rõ so với lô chứng sau tuần uống thuốc (p < 0,01) GB liều có mức tăng tương đương sulbutiamin 96mg/kg (p > 0,05) - BPU liều 10ml/kg làm tăng sức kéo chuột so với thời điểm trước uống thuốc thử, khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05,) tăng rõ so với lô chứng sau tuần uống thuốc (p < 0,001) BPU liều 20ml/kg chưa thể tác dụng - BL liều 10ml/kg 20ml/kg có xu hướng làm tăng sức kéo so với trước uống thuốc so với lơ chứng khác biệt chưa có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Kết luận * Golden beer - Golden beer liều 10mg/kg có tác dụng tăng lực chuột sau uống liên tục tuần, thể qua tác dụng mơ hình chuột bơi (tăng thời gian bơi, tăng nồng độ glucose máu), mơ hình đo sức kéo, khơng có tác dụng mơ hình trục quay Rotarod - Golden beer liều 20mg/kg có tác dụng tăng lực chuột sau uống liên tục tuần, thể qua tác dụng mơ hình đo sức kéo, khơng có tác dụng mơ hình trục quay Rotarod mơ hình chuột bơi làm tăng nồng độ glucose máu albumin máu - Golden beer liều 10mg/kg 20mg/kg có tác dụng sulbutiamin 96mg/kg * Bia Pilsner Urquell - Bia Pilsner Urquell liều 10ml/kg có tác dụng tăng lực chuột sau uống liên tục tuần, thể qua tác dụng mơ hình đo sức kéo, khơng có tác dụng mơ hình chuột bơi mơ hình trục quay Rotarod 13 - Bia Pilsner Urquell liều 20ml/kg khơng có tác dụng tăng lực chuột sau uống liên tục tuần - Tác dụng bia Pilsner Urquell mơ hình đo sức kéo tương đương sulbutiamin 96mg/kg * Bia Leffe - Bia Leffe liều 10ml/kg 20ml/kg tác dụng tăng lực chuột sau uống liên tục tuần, khơng có tác dụng mơ hình chuột bơi, mơ hình trục quay Rotarod mơ hình đo sức kéo * Trong loại bia, Golden beer thể tác dụng tăng lực tốt chuột nhắt trắng sau tuần uống liên tục TÀI LIỆU THAM KHẢO S.Aydin et al (1992), Effects of Alcea pallida L (A.) and Tilia argentea infusion on swimming performance in mice, Phototherapy research, vol.6, pp 219-220 Adem Can et al (2012), The Mouse Forced Swim Test, J Vis Exp ; vol 59, pp 1-5 Lakshmana Rao Bathala (2012), Efficacy of Ocimum sanctum for relieving stress : A preclincal study, the Journal of contemporary dental practice, pp 782-786 R.Duraisami, (2010), Anti stress, adaptogenic activity of standardized dried fruit extract of Aegle marmelos against diverse stressors, Vol 3, Issue Manavi Chatterjee (2009), Comparative evaluation of Bacopa monniera and Panax quniquefolium in experimental anxiety and depressive models in mice, India Journal of experimental biology vol.48, pp 306-313 Ngô Danh Lục (2009) Đánh giá tác dụng thuốc “Nhân sâm dưỡng vinh thang” điều trị chứng hư lao thể tâm tỳ hư, Luận văn tiến sĩ Y học, Đại học Y Hà Nội Robert M.J Deacon (2013), Measuring the Strength of Mice, J Vis Exp.; vol.76, pp 1-4 14 Jarogniew J Łuszczki (2010), No effect of agmatine on the protective activity of clobazam and pregabalin against maximal electroshock-induced seizures in mice, Journal of Pre-Clinical and Clinical Research, Vol 4, No 1, pp 36-39 Hà Nội, ngày tháng năm 2018 Trưởng môn PGS.TS Phạm Thị Vân Anh Trường Đại học Y Hà Nội xác nhận chữ ký PGS.TS Phạm Thị Vân Anh Trưởng phòng Tổ chức Cán 15 ... - Bia Pilsner Urquell liều 20ml/kg khơng có tác dụng tăng lực chuột sau uống liên tục tuần - Tác dụng bia Pilsner Urquell mô hình đo sức kéo tương đương sulbutiamin 96mg/kg * Bia Leffe - Bia Leffe. .. sulbutiamin 96mg/kg * Bia Pilsner Urquell - Bia Pilsner Urquell liều 10ml/kg có tác dụng tăng lực chuột sau uống liên tục tuần, thể qua tác dụng mơ hình đo sức kéo, khơng có tác dụng mơ hình chuột... uống tự phòng thí nghiệm Bộ môn Dược lý – Trường Đại học Y Hà Nội 1.3 Phương pháp nghiên cứu Để đánh giá tác dụng tăng lực Golden beer (GB), bia Pilsner Urquell (BPU), bia Leffe (BL) lên chuột