TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM BỘ MÔN DƯỢC LÝ Độc lập – Tự – Hạnh phúc KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG ĐIỀU CHỈNH RỐI LOẠN LIPID MÁU CỦA VINATAN TRÊN THỰC NGHIỆM Nơi tiến hành nghiên cứu: Bộ môn Dược lý Trường Đại học Y Hà Nội Thời gian nghiên cứu: 5/2016 Cán tham gia nghiên cứu: PGS TS Nguyễn Trọng Thông Ths Phạm Thanh Tùng ThS Nguyễn Thị Thanh Hà KTV Nguyễn Kiều Vân KTV Đinh Quang Trường KTV Đàm Đình Tranh KTV Nguyễn Thành Long 1 Chất liệu phương pháp nghiên cứu 1.1 Chất liệu nghiên cứu * Thuốc nghiên cứu - Thuốc bột Vinatan, thành phần: + Bột cao khô Giảo cổ lam 350mg, bột polyphenol chè xanh 150mg + Liều dùng người: 0,1g/kg/ngày * Hóa chất dụng cụ xét nghiệm - Poloxamer 407 (Sigma – Singapore) - Atorvastatin viên nén 20mg (STADA–Việt Nam) - Kit định lượng chất chuyển hóa máu: TC, TG, HDL-C, hãng DIALAB GmbH (Áo), định lượng máy xét nghiệm sinh hóa bán tự động XC – 55 chemistry analyzer (Trung Quốc) *Máy móc phục vụ nghiên cứu - Máy xét nghiệm sinh hóa bán tự động XC – 55 chemistry analyzer - Máy li tâm HETECH 1.2 Động vật thực nghiệm - Chuột nhắt trắng, chủng Swiss, hai giống, khỏe mạnh, trọng lượng 25 ± 2g, Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương - Động vật nuôi từ 7-10 ngày trước nghiên cứu suốt thời gian nghiên cứu thức ăn chuẩn riêng, nước uống tự phòng thí nghiệm Bộ mơn Dược lý – Trường Đại học Y Hà Nội 1.3 Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu mơ hình gây tăng lipid máu nội sinh Chuẩn bị dung dịch P-407 2% cách pha 0,4g P-407 nước muối sinh lý 0,9% vừa đủ 20 mL, để tủ lạnh qua đêm để làm tăng độ tan P-407 Kim xylanh dùng để tiêm chuột ngâm nước đá trước sử dụng Chuột nhắt trắng chia làm lô, lô 10 Các lô tiêm uống thuốc sau: - Lô (chứng sinh học): Tiêm màng bụng nước muối sinh lý 0,9% với thể tích 0,1mL/10g thể trọng chuộtvà uống nước cất - Lơ (mơ hình): Tiêm màng bụng dung dịch P-407 2% liều 200 mg/kg (0,1mL/10g) uống nước cất - Lô (uống atorvastatin): Tiêm màng bụng dung dịch P-407 2% liều 200 mg/kg (0,1mL/10g) uống atorvastatin liều 100 mg/kg - Lô (lô trị 1): Tiêm màng bụng dung dịch P-407 5% liều 200 mg/kg (0,1 mL/10g), uống Vinatan liều 1,2g/kg/ngày (tương đương liều lâm sàng) - Lô (lô trị 2): Tiêm màng bụng dung dịch P-407 5% liều 200 mg/kg (0,1 mL/10g), uống Vinatan liều 3,6g/kg/ngày (gấp lần liều lâm sàng) Chuột uống nước cất thuốc thử ngày liên tục trước tiêm màng bụng dung dịch P-407 Sau tiêm P-407, chuột cho nhịn đói hoàn toàn uống nước tự Sau 24 kể từ tiêm P-407, tất chuột lấy máu động mạch cảnh làm xét nghiệm định lượng TG, TC, HDL-C Non - HDL-C tính theo cơng thức: Non-HDL-C = TC – HDL-C (mmol/L) Uống nước N1 N7 Tiêm màng bụng P407/NaCl 0,9% N8 Định lượng TC, TG, LDL-C, HDL-C Sơ đồ nghiên cứu 1.4 Xử lý số liệu Các số liệu thu thập xử lý phương pháp thống kê y sinh học theo t- test - Student test trước sau (Avant-après) Biểu diễn ± SD Quy ước (so với lô chứng) *: p < 0,05; **: p < 0,01; ***: p < 0,001 Kết nghiên cứu Tác dụng điều chỉnh lipid máu mơ hình nội sinh Bảng 2.1 Mơ hình rối loạn lipid máu Poloxamer 407 Chỉ số lipid Chứng sinh học Mơ hình (n = 10) (X ± SD, mmol/L) (n = 10) (X ± SD, mmol/L) TC 2,34 ± 0,26 6,43 ± 0,80 *** TG 0,85 ± 0,17 9,87 ± 1,33 *** HDL-C 1,44 ± 0,14 2,28 ± 0,25 *** non-HDL-C 0,90 ± 0,28 4,15 ± 0,82 *** Kết bảng 2.1 cho thấy: tiêm màng bụng dung dịch P-407 2% liều 200 mg/kg (0,1mL/10g) có tác dụng gây rối loạn lipid máu rõ rệt: lơ mơ hình, TG tăng gấp 11,61 lần; TC tăng 2,75 lần; HDL-C tăng 1,58 lần non-HDL-C tăng 4,61 lần Bảng 2.2 Tác dụng HVT lên nồng độ cholesterol toàn phần máu chuột nhắt trắng Lơ nghiên cứu Lơ 2: Mơ hình (n=10) Lơ 3: Atorvastatin Nồng độ Mức giảm cholesterol tồn so với lơ phần (mmol/L) mơ hình p so với lô p so với lô 6,43 ± 0,80 5,42 ± 1,03 15,70 % p < 0,05 6,05 ± 1,21 5,90 % p > 0,05 p > 0,05 5,45 ± 0,78 15,24 % p < 0,05 p > 0,05 100mg/kg (n=10) Lô 4: Vinatan liều 1,2g/kg (n=10) Lô 5: Vinatan liều 3,6g/kg (n=10) Bảng 2.2 thể nồng độ số cholesterol toàn phần chuột nhắt trắng lơ mơ hình lơ dùng thuốc thời điểm 24 sau tiêm màng bụng dung dịch P-407 để gây rối loạn lipid máu nội sinh - Lô uống atorvastatin liều 100mg/kg làm giảm rõ nồng độ cholesterol tồn phần so với lơ mơ hình, khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) - Lơ uống Vinatan liều 1,2g/kg/ngày có xu hướng làm giảm nồng độ cholesterol tồn phần so với lơ mơ hình khác biệt chưa có ý nghĩa thống kê (p>0,05) - Lô uống Vinatan liều 3,6g/kg/ngày làm giảm nồng độ cholesterol tồn phần rõ rệt so với lơ mơ hình, khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Tác dụng tương đương tác dụng atorvastatin 100mg/kg/ngày Bảng 2.3 Tác dụng Vinatan lên nồng độ triglycerid máu chuột nhắt trắng Lô nghiên cứu Lơ 2: Mơ hình (n=10) Lơ 3: Atorvastatin Nồng độ Mức giảm Triglycerid so với lô mô (mmol/L) hình p so với lơ p so với lơ 9,87 ± 1,33 9,09 ± 2,00 7,90 % p > 0,05 7,73 ± 1,85 21,68 % p < 0,01 p > 0,05 7,20 ± 1,28 27,05 % p < 0,001 p < 0,05 100mg/kg (n=10) Lô 4: Vinatan liều 1,2g/kg/ngày (n=10) Lô 5: Vinatan liều 3,6g/kg/ngày (n=10) Bảng 2.3 thể nồng độ triglycerid máu chuột nhắt trắng lơ mơ hình lơ dùng thuốc thời điểm 24 sau tiêm màng bụng dung dịch P-407 để gây rối loạn lipid máu nội sinh - Lơ uống atorvastatin liều 100mg/kg có xu hướng làm giảm nồng độ triglycerid so với lơ mơ hình khác biệt chưa có ý nghĩa thống kê (p>0,05) - Lô uống Vinatan liều 1,2g 3,6g/kg/ngày làm giảm nồng độ triglycerid máu rõ rệt so với lơ mơ hình, khác biệt chưa có ý nghĩa thống kê (p < 0,01 p < 0,001) Lô uống Vinatan liều 3,6g/kg/ngày có tác dụng rõ liều 1,2g/kg/ngày Bảng 2.4 Tác dụng Vinatan lên nồng độ HDL-cholesterol máu chuột nhắt trắng Lô nghiên cứu Nồng độ HDL-C p so với lô (mmol/L) Lô 2: Mơ hình (n=10) 2,28 ± 0,25 Lơ 3: Atorvastatin 2,31 ± 0,22 100mg/kg (n=10) (↑ 1,32%) Lô 4: Vinatan liều 2,37 ± 0,36 1,2g/kg/ngày (n=10) (↑ 3,95%) Lô 5: Vinatan liều 2,41 ± 0,40 3,6g/kg/ngày (n=10) (↑ 5,70%) p so với lô p > 0,05 p > 0,05 p > 0,05 p > 0,05 p > 0,05 Bảng 2.4 thể nồng độ HDL-cholesterol máu chuột nhắt trắng lơ mơ hình lơ dùng thuốc thời điểm 24 sau tiêm màng bụng dung dịch P-407 để gây rối loạn lipid máu nội sinh - Các lô uống atorvastatin 100mg/kg/ngày Vinatan liều 1,2g/kg/ngày liều 3,6g/kg/ngày có xu hướng làm tăng nồng độ HDL-cholesterol máu so với lơ mơ hình, nhiên khác biệt chưa có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Bảng 2.5 Tác dụng Vinatan lên nồng độ non-HDL-Cholesterol máu chuột nhắt trắng Nồng độ Non- Lô nghiên cứu HDL Cholesterol giảm so với (mmol/L) Lơ 2: Mơ hình (n=10) Lơ 3: Atorvastatin 100mg/kg (n=10) Mức độ mơ hình p so với lơ p so với lô 4,15 ± 0,82 3,11 ± 1,01 25,06 % p < 0,05 3,68 ± 1,17 11,32 % p > 0,05 p > 0,05 3,04 ± 0,82 26,75 % p < 0,01 p > 0,05 Lô 4: Vinatan liều 1,2g/kg/ngày (n=10) Lô 5: Vinatan liều 3,6g/kg/ngày (n=10) Bảng 2.5 thể nồng độ Non- HDL- Cholesterol máu chuột nhắt trắng lơ mơ hình lô dùng thuốc thời điểm 24 sau tiêm màng bụng dung dịch P-407 để gây rối loạn lipid máu nội sinh - Lô uống atorvastatin liều 100mg/kg làm giảm rõ nồng độ non-HDL Cholesterol so với lơ mơ hình, khác biệt có ý nghĩa thống kê (p< 0,05), - Lơ uống Vinatan liều 1,2g/kg/ngày có xu hướng làm giảm nồng độ nonHDL- Cholesterol so với lơ mơ hình, khác biệt chưa có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) - Lô uống Vinatan liều 3,6g/kg/ngày làm giảm rõ rệt nồng độ non-HDLCholesterol so với lơ mơ hình, khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,01) Tác dụng tương đương tác dụng atorvastatin 100mg/kg/ngày Kết luận - Vinatan liều 1,2g/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng người) có tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu gây P-407 chuột nhắt trắng thông qua làm giảm nồng độ triglycerid - Vinatan liều 3,6g/kg/ngày (liều tương đương gấp lâm sàng người) có tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu gây P-407 chuột nhắt trắng thông qua làm giảm nồng độ cholesterol toàn phần, triglycerid nồng non-HDL-Cholesterol 10 TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Trọng Thông(2011), “Thuốc điều trị rối loạn lipoprotein máu”, Dược lý học, tập 2, Nhà xuất Giáo dục Việt Nam, tr 176-185 Seidl PR(2002), “Pharmaceuticals from natural products: current trends”, Aninals of the Brazilian Academy of Sciences, 74(1), pp 145-150 Millar JS, Cromley DA, McCoy MG(2005), “Determining hepatic triglyceride production in mice: comparison of poloxamer 407 with Triton WR-1339”, Journal of Lipid Research, 46, pp 2023-2028 Friedewald WT, Levy RI, Fredrickson DS(1972), “Estimation of the Concentration of Low-Density Lipoprotein Cholesterol in Plasma,Without Use of the Preparative Ultracentrifuge”, Clinical Chemistry, 18(6), pp 499-502 National Cholesterol Education Program (NCEP) Expert Panel (2002), “Third report of the National Cholesterol Education Program (NCEP) Expert Panel on Detection, Evaluation, and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult Treatment Panel III) final report”, Circulation, 106(25), pp 3143-3421 Johnston TP, Palmer WK (1993), “Mechanism of poloxamer 407-induced hypertriglyceridemia in the rat”, Biochem Pharmacol, 46(6), pp 1037-1042 Johnston TP, Nguyen LB, Chu WA and Shefer S (2001), “Potency of select statin drugs in a new mouse model of hyperlipidemia and atherosclerosis”, International Journal of Pharmaceutics, 229(1-2), pp 75-86 Leon C, Wasan KM, Sachs-Barrable K, Johnston TP (2006), “Acute P-407 administration to mice causes hypercholesterolemia by inducing cholesterolgenesis and down-regulating low-density lipoprotein receptor expression”, Pharm Res, 23(7), pp 1597-607 Li H, Dong B, Park SW et al (2009), “Hepatocyte nuclear factor 1α plays a critical role in PCSK9 gene transcription and regulation by the natural hypocholesterolemic compound berberine”, J Biol Chem, 284(42), pp 28885-28895 11 10 Cao Y, Bei W, Hu Y et al (2012), “Hypocholesterolemia of Rhizoma Coptidis alkaloids is related to the bile acid by up-regulated CYP7A1 in hyperlipidemic rats”, Phytomedicine, 19(8-9), pp 686-692 11 Dan H, Wu J, Peng M et al (2011), “Hypolipidemic effects of Alismatis rhizome on lipid profile in mice fed high-fat diet”, Saudi Med J, 32(7), pp 701-707 Hà Nội, ngày tháng năm 2016 Trưởng nhóm nghiên cứu PGS.TS Nguyễn Trọng Thông Trường Đại học Y Hà Nội xác nhận chữ ký PGS.TS Nguyễn Trọng Thông Trưởng phòng Tổ chức Cán 12 ... nước uống tự phòng thí nghiệm Bộ mơn Dược lý – Trường Đại học Y Hà Nội 1.3 Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu mơ hình gây tăng lipid máu nội sinh Chuẩn bị... < 0,05; **: p < 0,01; ***: p < 0,001 Kết nghiên cứu Tác dụng điều chỉnh lipid máu mơ hình nội sinh Bảng 2.1 Mơ hình rối loạn lipid máu Poloxamer 407 Chỉ số lipid Chứng sinh học Mơ hình (n = 10)... Kết luận - Vinatan liều 1,2g/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng người) có tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu gây P-407 chuột nhắt trắng thông qua làm giảm nồng độ triglycerid - Vinatan liều