BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG I HC Y H NI NGUYN TH THANH THO Đánh giá giá trị HOS test mẫu tinh trïng bÊt ®éng Chun ngành : Mơ học - Phơi thai học Mã số : NT 62720101 LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP BÁC SỸ NỘI TRÚ Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS NGUYỄN KHANG SƠN HÀ NỘI - 2017 LỜI CẢM ƠN Tôi xin trân trọng cảm ơn Ban giám hiệu, phòng Đào tạo sau đại học, Trường Đại học Y Hà Nội giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi q trình học tập nghiên cứu để tơi hồn thành luận văn Tơi xin trân trọng gửi lời cảm ơn, biết ơn chân thành đến PGS TS Nguyễn Khang Sơn, phó trưởng môn Mô – Phôi, Trường Đại học Y Hà Nội, người thầy hướng dẫn bảo tận tình giúp đỡ tơi q trình học tập hồn thành luận văn Tôi xin trân trọng cảm ơn thầy cô, anh chị môn Mô – Phôi, Trường Đại học Y Hà Nội bên cạnh giúp đỡ tơi để tơi có điều kiện tốt vừa học tập vừa hồn thành luận văn Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới anh chị em đồng nghiệp bạn bè quan tâm động viên, khích lệ giúp đỡ tơi lúc khó khăn suốt thời gian học tập Cuối tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến bác mẹ kính yêu, người thân gia đình thơng cảm, động viên bên tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Xin trân trọng cảm ơn! LỜI CAM ĐOAN Tôi Nguyễn Thị Thanh Thảo, học viên lớp nội trú khóa XXXIX, Trường Đại học Y Hà Nội, chuyên ngành Mô – Phôi Thai học, xin cam đoan: Đây luận văn thân trực tiếp thực hướng dẫn PGS TS Nguyễn Khang Sơn Cơng trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thông tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực, khách quan, xác nhận chấp thuận sở nơi nghiên cứu Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trước pháp luật cam kết Hà Nội, ngày tháng 10 năm 2017 Người viết cam đoan Nguyễn Thị Thanh Thảo DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DNA HOST, HOS Test ICSI IVF PVP WHO : Deoxyribonucleic Acid : Hypo – Osmotic Swelling Test : Intra Cytoplasmic Sperm Injection Tiêm tinh trùng vào bào tương noãn : In Vitro Fertilization Thụ tinh ống nghiệm cổ điển : Polyvinylpyrrolidone : World Health Organization Tổ chức y tế giới MỤC LỤC DANH MỤC BIỂU ĐỒ DANH MỤC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ Kỹ thuật ICSI đời phương pháp điều trị hiệu cho cặp vợ chồng vô sinh, đặc biệt nguyên nhân nam giới với tinh trùng ít, yếu kèm hình dạng bất thường cao tinh trùng thu nhận từ mào tinh, tinh hồn Tinh trùng tươi trữ đơng sau lọc rửa lựa chọn để tiêm vào trứng dựa hình thái khả di động chúng Tuy nhiên, nhiều trường hợp, mẫu tinh trùng thu nhận bất động hồn tồn gây khó khăn cho việc lựa chọn Thực tế cho thấy, số trường hợp mẫu tinh trùng bất động hoàn toàn có tỉ lệ đáng kể tinh trùng sống Việc lựa chọn cách ngẫu nhiên hay dựa vào hình thái tinh trùng mẫu tinh trùng bất động hoàn toàn để thực ICSI gây giảm đáng kể tỉ lệ thụ tinh có thai Để cải thiện kết ICSI trường hợp này, nhiều phương pháp mô tả để lựa chọn tinh trùng bất động sống Một số phương pháp để xác định tinh trùng sống: kỹ thuật nhuộm eosin, trypan blue, kích hoạt tinh trùng cách bổ xung pentoxyfilline, kích thích học - kỹ thuật laser, nhiên tất phương pháp có nhược điểm gây độc cho tinh trùng, ảnh hưởng đến khả sống tinh trùng [1] HOS Test đời khắc phục hạn chế Khi đưa tế bào vào môi trường áp lực thẩm thấu thấp (mơi trường nhược trương) nước vào tế bào để cân áp lực bên bên màng tế bào; tế bào sống với chức màng nguyên vẹn có biểu trương phồng lên Ứng dụng điều năm 1984, Jeyendran cộng thử nghiệm đánh giá tính tồn vẹn chức màng bào tương tinh trùng người dung dịch có áp suất thẩm thấu thấp [2] Màng tinh trùng khơng có vai trò quan trọng trình trao đổi chất, đảm bảo sống cho tinh trùng mà cần thiết q trình thụ tinh nỗn tinh trùng tham gia vào q trình hoạt hóa tinh trùng, phản ứng cực đầu, giúp tinh trùng bám bề mặt noãn Nghiệm pháp HOS Test ban đầu xem tiêu chí đánh giá tỷ lệ sống tinh trùng mẫu tinh trùng hoàn toàn bất động, WHO 1992, 2010 ghi nhận phương pháp đánh giá tỷ lệ sống, áp dụng rộng rãi cho xét nghiệm tinh dịch Sau dùng để đánh giá khả thụ tinh mẫu tinh trùng [3], [4] Với phát triển mạnh mẽ ngành hỗ trợ sinh sản nay, HOS Test có vai trò quan trọng việc phát tinh trùng sống mẫu tinh trùng bất động hồn tồn với mục đích sử dụng tinh trùng sống để tiêm vào bào tương nỗn (ICSI) Sự kết hợp HOS Test với ICSI làm tăng hiệu chu kỳ ICSI với mẫu tinh trùng bất động hoàn [2], [5] Trong trường hợp mẫu tinh trùng bất động hoàn toàn, việc kiểm tra sống tinh trùng quan trọng, định thành công IVF Chọn nhầm tinh trùng chết để ICSI đưa đến tỉ lệ thụ tinh thấp không tạo phôi Với mong muốn đánh giá cách đầy đủ giá trị HOS Test mẫu tinh trùng bất động, làm tăng tỉ lệ thành công chu kỳ ICSI, đặc biệt với mẫu tinh trùng bất động hoàn toàn, thực nghiên cứu với mục tiêu: Đánh giá giá trị HOS Test mẫu tinh trùng bất động 10 CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tình hình vơ sinh giới Việt Nam Vơ sinh tình trạng cặp vợ chồng quan hệ tình dục đều, khơng dùng biện pháp tránh thai mà khơng có thai tự nhiên thời gian năm (ở phụ nữ < 35 tuổi) khơng có thai tự nhiên sau tháng (ở phụ nữ > 35 tuổi) [6] Vô sinh ảnh hưởng tới tâm lý, tình hình kinh tế, dẫn đến tổn thương mặt y học, căng thẳng, đặc biệt xã hội mà vấn đề sinh trọng Vô sinh vấn đề suy giảm khả sinh sản mối quan tâm lớn nhà y học, vấn đề lâm sàng có ý nghĩa lớn, ảnh hưởng tới -12% cặp vợ chồng toàn giới Trong tất trường hợp vô sinh, khoảng 40 - 50% vô sinh nam - vô sinh yếu tố nam giới Các bất thường đơn độc kết hợp với mật độ tinh trùng thấp, khả di động kém, hình thái bất thường Tỉ lệ vô sinh nước phát triển cao nguyên nhân chủ yếu ảnh hưởng bệnh truyền nhiễm [7] Mặc dù chưa có số liệu xác tỉ lệ vơ sinh tồn cầu, ước tính gần 72,4 triệu cặp vợ chồng tồn giới gặp vấn đề sinh sản Theo ước tính WHO có khoảng 60.000.000 - 80.000.000 cặp vợ chồng tồn giới bị vơ sinh Tại Mỹ, theo trung tâm quốc gia thống kê y tế, khả sinh sản suy giảm phụ nữ tăng 2,7 triệu, từ 4,56 triệu năm 1982 lên 7,26 triệu năm 2002 Hơn tỉ lệ sinh sản nam giới 30 tuổi suy giảm 15% toàn giới [8], [9] 10 Esteves SC, Sharma RK, Thomas AJ, et al (1996) Suitability of the hypo-osmotic swelling test for assessing the viability of cryopreserved sperm Fertil Steril, 66(5): 798-804 11 Trần Thị Phương Mai (2001) Tình hình điều trị vô sinh kĩ thuật cao Báo Cáo Tại Hội Thảo Tình Hình Điều Trị Vơ Sinh Và Thụ Tinh Trong Ống Nghiệm Bộ Tế Và UN FDA Đà Nẵng 12 Nguyễn Thị Được (2001) Một số nhận xét nguyên nhân vô sinh bệnh nhân đến khám phòng khám sản Trường Đại học Y Thái Bình từ 6/1999 đến 6/2001 Nội San Sản Phụ Khoa Năm 2002, 101–102 13 Hồ Mạnh Tường (2006) Kĩ thuật hỗ trợ sinh sản Y học sinh sản Nhà xuất y học, Thành phố Hồ Chí Minh 14 Omu AE, Dashti H, Al-Othman S (1998) Treatment of asthenozoospermia with zinc sulphate: andrological, immunological and obstetric outcomeur Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol, 79(2): 179-184 15 Vandekerckhove P, Lilford R, Vail A, et al (2000) Bromocriptine for idiopathic oligo/asthenospermia Cochrane Database Syst Rev, (2):152 16 Ortega C, Verheyen G, Raick D, et al (2011) Absolute asthenozoospermia and ICSI: what are the options? Human Reproductive, 17(5): 684-692 17 Henkel R (2012) Sperm preparation: state-of-the-art physiological aspects and application of advanced sperm preparation methods Asian J Androl, 14(2): 260-269 18 Berkovitz A, Eltes F, Lederman H (2006) How to improve IVF-ICSI outcome by sperm selection Reproductive BioMedicine Online, 12(5): 634 -638 19 David K, Potros R, Rizk M, et al (2001) Human Assisted Reproductive Technology Cambridge University, First 20 Jacques J, Samuel S (2011) Principles and Practice of Preservation Cambridge University, First 21 Sakkas D, Ramalingam M, Garrido N, et al (2015) Sperm selection in natural conception: what can we learn from Mother Nature to improve assisted reproduction outcomes? Hum Reprod Update, 21(6): 711-26 22 Yetunde I, Vasiliki M (2013) Effects of advanced selection methods on sperm quality and ART outcome Hum Reprod Update, 65(5): 487-96 23 Trịnh Bình (2007) Mô-Phôi Nhà xuất y học, Vol 24 Moskovtsev SI, Librach CL (2013) Methods of sperm vitality assessment Methods in Molecular Biology, 927: 13 - 25 Soares JB, Glina S, Antunes N, et al (2003) Sperm tail flexibility test: a simple test for selecting viable spermatozoa for intracytoplasmic sperm injection from semen samples without motile spermatozoa Rev Hosp Clin Fac Med Sao Paulo, 58: 250–253 26 Oliveira M, Vaca R, Rodriguez S, et al (2004) Pregnancy with frozenthawed and fresh testicular biopsy after motile and immotile sperm microinjection, using the mechanical touch technique to assess viability Hum Reprod, 19: 262–265 27 Nordhoff A, Schüring N, Krallmann C, et al (2013) Optimizing TESE-ICSI by laser-assisted selection of immotile spermatozoa and polarization microscopy for selection of oocytes Adrology, Vol 1, 1: 67–74 28 Montag M, Rink K, Delacretaz G, et al (2000) Laser-induced immobilization and plasma membrane permeabilization in human spermatozoa Hum Reprod, 15: 846–852 29 Ebner T, Moser M, Yaman C, et al (2002) Successful birth after laser assisted immobilization of spermatozoa before intracytoplasmic injection Fertil Steril, 78: 417–418 30 Ebner T, Moser M, Tews G (2005) Possible applications of a noncontact 1.48 mm wavelength diode laser in assisted reproduction technologies Hum Reprod Update, 11: 425–435 31 Taşdemir I, Tademir M, Tavukỗuolu S (1998) Effect of pentoxifylline on immotile testicular spermatozoa Journal of Assisted Reproduction and Genetics, 15(2): 90–92 32 Tasdemir M, Tasdemir I, Kodama H, et al (1993) Pentoxifyllineenhanced acrosome reaction correlates with fertilization in vitro Hum Reprod, 8: 2102-2107 33 Laokirkkiat P, Kunathikom S, Choavaratana R, et al (2007) Comparison between sperm treated with pentoxifylline and 2deoxyadenosine using hypo-osmotic swelling test J Med Assoc Thai 90(2): 211-5 34 Ponce A, Cuneo M, Ruiz R, et al (1999) Influence of pentoxifylline on sperm membrane functional integrity Arch Androl 43(1):77-84 35 Phạm Thị Minh Đức (2007) Sinh Lý Học Nhà xuất y học, Vol 36 Alberts, Johnson, Lewis et al (2008) Molecular Biology of the Cell Garland Science, fifth 37 Nguyễn Như Hiền, (2012) Sinh học tế bào Nhà xuất giáo dục Việt Nam 38 Jeyendran RS, Van der Ven HH, Zaneveld LJ (1992) The hypoosmotic swelling test: an update Andrology, 29(2): 105-16 39 Aiken R (1990) Evalution of human sperm funtion Br Med Bull, 46: 654-674 40 Moce E, Vicente JS, Lavara F, et al (2004) Differences in the response of the spermatozoa from three rabbit lines to the hypo-osmotic swelling test Reprod Domest Anim, 39:265 41 Lodhi LA, Zubair M, Qureshi ZI, et al (2008) Correlation between hypo-osmotic swelling test and various conventional semen evaluation parameters in fresh nili-ravi buffalo and sahiwal cow bull semen Pakistan Vet J, 28:186– 188 42 Fonseca JF, Torres C, Maffili V, et al (2005) The hypo-osmotic swelling test in fresh goat spermatozoa Anim Repod, 2:139–144 43 Zubair M, Ahmad I, Ahmad M, et al (2013) Development of the best hypo-osmotic swelling solution for evaluation of functional membrane integrity of spermatozoa of Nili-Ravi buffalo bull Asian J Agri Biol, 1: 63–66 44 Bourne H, Richings N, Liu DY, et al (1995) Sperm preparation for intracytoplasmic sperm injection: methods and relationship to fertilization results Reprod Fertil Dev, 7: 177–183 45 Casper RF, Meriano JS, Jarvi KA, et al (1996) The hypoosmotic swelling test for selection of viable sperm for intracytoplasmic sperm injection in men with complete asthenozoospermia Fertil Steril, 65: 972–976 46 Liu J, Tsai YL, Katz E, et al (1997) High fertilization rate obtained after intracytoplasmic sperm injection with 100% nonmotile spermatozoa selected by using a simple modified hypo-osmotic swelling test Fertil Steril, 68(2): 373-5 47 Verheyen G, Joris H, Crits K, et al (1997) Comparison of different hypo-osmotic swelling solutions to select viable immotile spermatozoa for potential use in intracytoplasmic sperm injection Hum Reprod update, 3(3): 195 - 203 48 Vazquez JM, Martio A, Martio C, et al (1997) Hypo-osmotic swelling of boar spermatozoa compared to other methods for analysing the sperm membrane Theriogenology, 47:913–922 49 Hossain AM, Rizk B, Barik S, et al (1998) Time course of hypoosmotic swellings of human spermatozoa: evidence of ordered transition between swelling subtypes Human Reproduction, 13(6): 1578 - 83 50 Matson P, Kappelle W, Malecki I (2009) The use of a hypo-osmotic swelling (HOS) test on sperm of the pig (Sus scrofa domesticus), emu (Dromaius novaehollandiae), Asian elephant (Elephas maximus), hamadryas baboon (Papio hamadryas hamadryas), and central rock rat (Zyzomys pedunculatus) Reprod Biol, 9: 181-187 51 Neild D, Chaves G, Flores M, et al (1999) Hypoosmotic test in equine spermatozoa Theriogenology, 51: 721-727 52 James D, Stanger L, John L, et al (2010) Hypo-osmotic swelling test identifies individual spermatozoa with minimal DNA fragmentation Reproductive BioMedicine Online, 21(4): 474-484 53 Chan S, Wang C, Ng M, et al (1989) Evaluation of computerized analysis of sperm movement characteristics and differential sperm tail swelling patterns in predicting human sperm in vitro fertilizing capacity J Androl, 10: 133–138 54 Kumi J (1993) Subjecting canine semen to the hypoosmotic test Theriogenology, 39:1279–1289 55 Watson PF, Duncan AE (1988) Effect of salt concentration and unfrozen water fraction on the viability of slowly frozen ram spermatozoa Cryobiology, 25:131–142 56 Rodriguez J, Rigau T (1996) Effects of ouabain on the response to osmotic changes in dog and boar spermatozoa Theriogenology, 45:873–883 57 Vidament M, Cognard E, Yvon J, et al (1998) Evaluation of stallion semen before and after freezing Reprod Domest Anim, 33: 271–277 58 Samardzija M, Tomislav D, Suzana K, et al (2008) The use of the hypoosmotic swelling test and supravital staining in evaluation of sperm quality in boars Vet Arhiv, 78: 279–287 59 Khalili M, Farzaneh M, Kalantar S, et al (1999) Application of Vitality Tests on Asthenozoospermic Semen from Infertile Men Iranian Biomedical Journal, 3(3 &4): 77 - 81 60 Seibel M, Zilbertain M et al (1995) The diagnosis of male infertility by semen quality Human reproduction,10: 247-252 61 Trịnh Văn Bảo (2008), Di truyền y học Vol 1, nhà xuất y học 62 Borini, A., Tarozzi, N., Bizzaro, D et al Sperm DNA fragmentation: paternal effect on early post-implantation embryo development in ART Hum Reprod 2006; 21: 2876–2881 63 Stanger, Vo J, Yovich L, et al (2010) Hypo-osmotic swelling test identifies individual spermatozoa with minimal DNA fragmentation Reproductive BioMedicine Online, 21(4): 474-484 64 Leroy T, Hummelen P, Anard D, et al (1996) Evaluation of three methods for the detection of DNA single-strand breaks in human lymphocytes: alkaline elution, nick translation and single-cell gel electrophoresis J Toxicol Environ Health, 47: 409–422 65 Tesarik J, Mendoza R, Mendoza C (2006) Sperm nuclear DNA damage: update on the mechanism, diagnosis and treatment Reprod Biomed Online, 12:715–721 66 Evenson DP, Larson KL, Jost LK (2002) Sperm chromatin structure assay: its clinical use for detecting sperm DNA fragmentation in male infertility and comparisons with other techniques J Androl, 23: 25–43 67 Mitchell LA, Iuliis GN, John R (2010) The TUNEL assay consistently underestimates DNA damage in human spermatozoa and is influenced by DNA compaction and cell vitality: development of an improved methodology Int J Androl, 34: 2–13 68 Fernández JL, Muriel L, Goyanes V, et al (2005) Halosperm is an easy, available, and cost-effective alternative for determining sperm DNA fragmentation Fertil Steril, 84(4): 860 69 Nasim C (2014) Hypo osmotic swelling test enables selection of sperm with superior DNA integrity Punmed, 8(1): 21–28 70 Farzaneh B, Marziyeh T, Hossein M (2013) Correlation between Different Patterns of Hypo-Osmotic Swelling and Sperm Functional Tests Int J Fertil Steril, 7(3): 193–198 71 Robert F, Casper M, James S, et al (1996) The hypo-osmotic swelling test for selection of viable sperm for intracytoplasmic sperm injection in men with complete asthenozoospermia Fertility and Sterility, 65(5): 972-976 72 Kahraman S, Tasdemir M, Tasdemir I, et al (1996) Pregnancies achieved with testicular and ejaculated spermatozoa in combination with intracytoplasmic sperm injection in men with totally or initially immotile spermatozoa in the ejaculate Hum Reprod , 11: 1343 –1346 73 Vandervorst M, Tournaye H, Camus M, et al (1997) Patients with absolutely immotile spermatozoa and intracytoplasmic sperm injection Hum Reprod, 12: 2429–2433 74 Nagy ZP, Verheyen G, Tournaye H, et al (1998) Special applications of intracytoplasmic sperm injection: the influence of sperm count, motility, morphology, source and sperm antibody on the outcome of ICSI Hum Reprod, 13(1): 143–154 75 Shulman A, Feldman B, Madgar I, et al (1999) In-vitro fertilization treatment for severe male factor: the fertilization potential of immotile spermatozoa obtained by testicular extraction Hum Reprod, 14: 749–752 76 Nour AM, Mayman HA, Jaroudi KI, et al (2001) Effects of the hypoosmotic swelling test on the outcome of intracytoplasmic sperm injection for patients with only nonmotile spermatozoa available for injection: a prospective randomized trial Fertil Steril, 75(3): 480-4 77 Yetunde I, Vasiliki M et al (2013) Effects of advanced selection methods on sperm quality and ART outcome Hum Reprod, 65(5): 487-96 78 Sakkas D (2013) Novel technologies for selecting the best sperm for in vitro fertilization and intracytoplasmic sperm injection Fertil Steril, 99(4): 1023-9 79 Buckett WM (2003) Predictive value of hypo-osmotic swelling test to identify viable non-motile sperm Human reproduction, 5(3): 209-212 80 Tsai YL, Liu J, Garcia JE, et al (1997) Establishment of an optimal hypo-osmotic swelling test by examining single spermatozoa in four different hypo-osmotic solutions Hum Reprod, 12(5):1111-3 81 Kingshuk M, Gita R, Bupathy A (2001) A study of the hypo-osmotic swelling test of spermatozoa in both fertile and infertile male subjects and its relationship with the standard spermiogram Indian Juornal of 82 Urology, 17(2): 156-158 Takahashi K, Uchida K, Kitao A (1990) Hypo-osmotic swelling testof sperm Arch Androl, 25: 225–242 83 Holstein AF, Roosen EC (1981) Atlas of Human Spermatogenesis Grosse Verlag, 195–219 84 Holt WV (1984) Membrane heterogeneity in the mammalian spermatozoon Int Rev Cytol, 87: 159–194 85 Olson GE, Winfrey VP, Flaherty SP (1987) Cytoskeletal assemblies of mammalian spermatozoa Ann NY Acad Sci, 513: 222–246 86 Fawcett DW, Bedford JM (1979) The Spermatozoon: Maturation, Motility and Comparative Aspects Urban & Schwarzenberg, 357 87 Sathananthan AH, Trounson AO, Wood C (1986) Atlas of Fine Structure of Human Sperm Penetration, Eggs and Embryos Cultured In Vitro Praeger Scientific, New York 88 Schrader SM, Platek SF, Zaneveld JLD, et al (1986) Sperm viability: a comparison of analytical methods Andrologia,18: 530–538 89 Farzaneh B, Marziyeh T, Hossein M (2013) Correlation between Different Patterns of Hypo-Osmotic Swelling and Sperm Functional Tests Int J Fertil Steril, 7(3): 193–198 90 Tsai YL, Liu J, Garcia JE, et al (1997) Establishment of an optimal hypo-osmotic swelling test by examining single spermatozoa in four different hypo-osmotic solutions Hum Reprod, 12(5): 1111-3 91 Misro M, Chaki S (2008) Development of a rapid, sensitive, and reproducible laboratory test kit for the assessment of plasma membrane integrity of human sperm Fertil steril, 89(1):223-7 92 Kooij RT, Balerna M, Roatti A, et al (1986) Oocyte penetration and acrosome reactions of human sperms, correlation with other seminal parameters Andrologia, 18(11):503-508 93 Avery S, Bolton VM, Mason B (1990) An evaluation of the hypoosmotic sperm swelling test as a predictor of fertilizing capacity in in vitro Int J Androl, 13:93-99 94 Coetzee K, Krunger TF, Menkveld R, Lombard CJ, Swanson RJ (1989): Hypoosmotic swelling test in the prediction of male fertility Arch Androl, 23: 13 - I38 95 Munuce M (2000) Does the hypoosmotic swelling test predict human sperm viability? Andrology, 44: 207–212 96 VanderVen HH, Jeyendran RS, Hasani S, et al (1986) Correlation between human sperm swelling in hypoosmotic medium (hypoosmotic swelling test) and in vitro fertilization J Androl, 7: 190-196 97 Chan S, Wang C (1987) Correlation between semen adenosine triphosphate and sperm fertilizing capacity Fertil Steril, 47: 717-719 98 Chan S, Wang C, So W, et al (1988) Multivariate discriminant analysis of the relationship between the hypoosmotic test and the in-vitro fertilizing capacity of human sperm Int J Androl, 11:369-378 99 Rogers BJ, Parker RA (1991) Relationship between the human sperm hypoosmotic swelling test and sperm penetration assay J Androl, 12: 152-158 100 Kersti L, Brita S, Hamberger L (1997) The relationship between sperm morphology and rates of fertilization, pregnancy and spontaneous abortion in an in-vitro fertilization/intracytoplasmic sperm injection programme Human Reproduction, 12(12): 2676–2681 101 Hauser R, Yogev L, Botchan A, et al (2001) Intrauterine insemination in male factor subfertility: significance of sperm motility and morphology assessed by strict criteria Andrologia 33(1): 13-17 102 Karabinus DS, Gelety T (1997) The impact of sperm morphology evaluated by strict criteria on intrauterine insemination Fertil Steril, 67:536-541 103 Wainer R (2004) Influence of the number of motile spermatozoa inseminated and of their morphology on the success of intrauterine insemination Hum Report, 19(9): 2060-2065 PHỤ LỤC QUY TRÌNH HOS TEST Trong đánh giá mẫu tinh dịch  Dụng cụ hóa chất cần thiết a Chuẩn bị dung dịch áp suất thẩm thấu thấp: trộn môi trường IVF với nước cất theo tỉ lệ 1:1 b Tinh trùng thu thập thủ dâm vào lọ nhựa vơ trùng Để ly giải hồn tồn, c  a b c d rửa môi trường, để lại 0,5ml cặn Lam, lamen, máy đếm, kính hiển vi, pipette, đầu cơn, ống đáy tròn, tủ ấm Phương pháp Ủ ấm 1ml dung dịch HOS Test 37 độ C 10 phút Thêm 0,1ml cặn tinh trùng trộn trên, trộn nhẹ nhàng Ủ hỗn hợp 30 phút tủ ấm 37 độ C Sau 30 phút trộn nhẹ nhàng, nhỏ giọt lên lam, đậy lamen, quan sát kính hiển vi độ phóng đại 400 lần Đếm số lượng tinh trùng có biểu cuộn e Đánh giá mẫu tinh địch dựa kết vừa thu Trong ICSI Trong nghiên cứu đánh giá mẫu tinh dịch nói chung, thời gian tinh trùng tiếp xúc với dung dịch HOS Test phù hợp 30 phút Tuy nhiên thực ICSI thời gian ủ tinh trùng dung dịch HOS Test khuyến cáo vòng phút đầu, có tinh trùng có biểu phản ứng HOS Test tiến hành dùng kim chuyển tinh trùng sang môi trường cân để tránh tổn thương stress áp suất thẩm thấu thấp Lúc tinh trùng sẵn sàng cho kỹ thuật ICSI PHỤ LỤC DANH SÁCH ĐỐI TƯỢNG THAM GIA NGHIÊN CỨU Số thứ tự 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 Họ tên Phạm Đình T Nguyễn Thanh H Dương Quang Th Đào Quốc K Vũ Đại Th Nguyễn Thắng H Nguyễn Văn H Nguyễn Văn T Dương Đức Th Trần Văn Ngh Tôn Mạnh D Vũ Xuân H Phạm Xuân N Trần Hải H Đỗ Hữu Th Đặng Văn D Lệ Việt Q Nguyễn Văn H Đàm Ngọc T Đào Quốc K Phạm Văn T Ngô Văn C Nguyễn Văn N Lê Văn Q Dương Quốc B Nguyễn Văn N Đặng Trọng V Nguyễn Tiến G Năm sinh 1991 1985 1983 1975 1972 1989 1984 1987 1991 1982 1975 1989 1990 1986 1982 1982 1984 1984 1990 1975 1985 1987 1990 1984 1984 1990 1983 1986 29 30 31 32 33 34 35 36 37 Trần Ngọc Đức A Vũ Đại T Nguyễn Thanh H Trần Hải H Nguyễn Thắng H Trần Văn Ngh Nguyễn Đăng H Đinh Xuân Th Nguyễn Văn Ph 1994 1972 1985 1986 1989 1982 1985 1992 1988 Hà Nội, ngày tháng năm 201 TRƯỞNG BỘ MÔN MÔ PHÔI TS Nguyễn Mạnh Hà PHỤ LỤC Mẫu đánh giá tinh dịch đồ PHIẾU XÉT NGHIỆM TINH DỊCH MS: Họ tên: Địa chỉ: …………… ……………… Tuổi: Điện thoại:…………………… Chẩn đốn lâm sàng: Kiêng giao hợp: …… Mục đích xét nghiêm: ………………… ngày Kiểm tra: XN lần thứ: Rửa: Bảo quản: KẾT QUẢ Màu Thể tích Hóa lỏng Độ qnh pH (Trắng sữa) (1.5 ml) (