BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y T Ế TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI VŨ HỒNG ANH GÓP PHẦN NGHIÊN cứu TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM CỦA CHẾ PHẨM c h ứ a PAPAIN Chuyên ngành : Dược lý - Dược lâm sàng Mã sô : 03.02.02 LUẬN VÃN THẠC s ĩ Dược HỌC NGƯÒI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS NGUYỄN XUÂN THẮNG HÀ N Ộ I— 1999 QcAm ơqí T xin bày tỏ lòng biết ơn sầu sắc tới ^?íạtíựềềt (^M người thày đ ã tận tình hướng dẫn tơi hồn thành luận văn T ôi xin chân thành cảm ơn cha mẹ, thày giáo, cô giáo trường Đ ại học D ược H N ội, đặc biệt thày giáo, cô giáo, cô kỹ thuật viên Bộ m ôn H oá sinh - V i sinh, anh, chị, bạn bè đồng nghiệp đ ã động viên, giúp đ ỡ tơi nhiệt tình suốt thời gian học tập thực đ ề tài H N ội, ngày 29 tháng 12 năm 1999 ( ĩ) ũ 'T õềttg c  n h BẢNG CÁC CHỮ VIẾT TẮT Globulin miễn dịch Ig Immuno-globulin Tĩ, Interleukin INF Interferon NSAID Non-steroid anti-inflammatory drug Thuốc chống viêm phi steroid PAF Platelet activating factor Yếu tố hoạt hoá tiểu cầu TNF Tumor necrosis factor Yếu tố hoại tử khối u M ỤC LỤC Trang Phần Đặt vấn đề Phần Tổng quan 2.1 Tổng quan lý thuyết viêm 2.2 Tổng quan enzym chống viêm 14 2.3 Một số dược liệu có tác dụng chống viêm 18 Phần Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu 20 Phần Thực nghiệm kết 28 Phần Bàn luận 54 Phần Kết luận 58 Tài liệu tham khảo 61 M ỤC LỤC Trang Phần Đặt vấn đề Phần Tổng quan 2.1 Tổng quan lý thuyết viêm 2.2 Tổng quan enzym chống viêm 14 2.3 Một số dược liệu có tác dụng chống viêm 18 Phần Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu 20 Phần Thực nghiệm kết 28 Phần Bàn luận 54 Phần Kết luận 58 Tài liệu tham khảo 61 PH ẦN ĐẶT VẤN ĐỂ Viêm trình bệnh lý phổ biến, gặp nhiều bệnh, nhiều nguyên nhân gây Nhìn chung, viêm phản ứng bảo vệ thể, giúp thể chống lại tác nhân gây viêm Tuy nhiên, viêm nặng kéo dài dẫn đến rối loạn chức quan, phận thể, gây nhiều ảnh hưcmg xấu, có nguy hiểm tới tính mạng ngưòi bệnh, Vì vậy, việc phát huy tác dụng bảo vệ ngăn ngừa yếu tố có hại viêm cần thiết quan trọng Để đáp ứng u cầu đó, ngưòi ta nghiên cứu nhiều loại thuốc chống viêm thuốc có cấu trúc steroid, thuốc chống viêm phi steroid (NSAID) Các thuốc đa phần có nguồn gốc hố dược, sử dụng từ nhiều năm Bên cạnh tác dụng tốt, chúng chứa đựng yếu tố bất lọi đối vói thể gây suy giảm miễn dịch, xốp xương, kích ứng đưòfng tiêu hố, ảnh hưởng tód q trình đơng máu, tạo máu Từ ngun nhân trên, ngưòi ta hướng đến tìm kiếm thuốc chống viêm chế tạo từ chất gần gũi với thể người, thuốc chống viêm có chứa enzym protease (papain, a- chymotrypsin ), đời Tuy nhiên, số lượng thuốc chống viêm có nguồn gốc enzym Việt Nam ít, phần lớn nước ngồi sản xuất, Trong đó, nước ta lại có nhiều nguồn nguyên liệu, dược liệu, tách chiết enzym để sử dụng, ví dụ papain có nhựa đu đủ Đây điều kiện thuận lọi để tự sản xuất loại thuốc chống viêm có chứa enzym, góp phần làm giảm giá thành thuốc nhập nước ngồi Trước đây, Việt Nam có nhiều cơng trình nghiên cứu papain chủ yếu tập trung vào khía cạnh trợ giúp tiêu hố mà chưa quan tâm tìm hiểu tác dụng chống viêm Do đó, chúng tơi tiến hành đề tài: “Góp phần nghiên cứu tác dụng chống viêm chế phẩm chứa papain” Đề tài nhằm số mục tiêu sau đây: © Sơ theo dõi tác dụng chống viêm chế phẩm chứa papain dùng bôi ngồi da ® Thử kết hợp tác dụng chống viêm papain vài dược liệu chống viêm khác ® Theo dõi biến đổi vài số hố sinh q trình viêm, tác dụng chế phẩm chứa papain Giới hạn phạm vi đề tài: - Thuật ngữ “chế phẩm” sử dụng đề tài khơng dùng để dạng thuốc hồn chỉnh mà dùng để dạng pha chế đơn giản phục vụ cho trình nghiên cứu - Thuật ngữ “papain” sử dụng theo nghĩa rộng để enzym có nhựa đu đủ mà thành phần papain PH ẦN TỔNG QUAN 2.1 Tổng quan lý thuyết viêm Theo Ado (1973), viêm phản ứng chỗ mạch máu, tổ chức liên kết hệ thần kinh tác nhân gây bệnh có liên hệ với tính phản ứng thể, Theo Vũ Triệu An, viêm phản ứng bảo vệ thể mà tảng phản ứng tế bào, phản ứng hình thành phát triển phức tạp dần q trình tiến hố sinh vật [2, 62] Trong Từ điển Bách khoa Dược học định nghĩa: Viêm phản ứng chỗ thể, mơ bị kích thích thương tổn Đó phản ứng phức tạp mô liên kết tuần hoàn mao mạch nơi bị tác động, biểu triệu chứng sưng, nóng, đỏ, đau rối loạn chức phận [15, 630] 2.1.1 Nguyên nhân gây viêm: [2, 62], [10, 6-8] Có nhiều nguyên nhân gây viêm, chia thành hainhóm sau: 2.1.1.1 Nguyên nhân bên ngoài: - Sinh vật: nhiễm vi khuẩn, virus, ký sinh trùng - Vật lý: học (đụng dập, chấn thương), nhiệt (bỏng nóng bỏng lạnh), xạ ion - Hố học: chất hòa tan gây hoại tử tế bào dung dịch hoá chất (acid, kiềm, muối ) chất đặc gây thực bào bạch cầu 2.1.1.2 Nguyên nhân bên trong: Các nguyên nhân bên gặp hoại tử tổ chức, xuất huyết, tắc mạch, rối loạn thần kinh dinh dưỡng (viêm tắc động mạch), phản ứng kháng nguyên — kháng thể Tuy nhiên, khó phân biệt rõ ràng hai loại nguyên nhân gây viêm thực tế, nguyên nhân bên thường kèm theo biến đổi thể từ lại tạo nguyên nhân bên 2.1.2 Các phản ứng xảy trình viêm: Trong trình viêm, ổ viêm thể diễn hàng loạt phản ứng, theo nhiều giai đoạn khác 2.1.2.1 Các phản ứng ổ viêm: Tại ổ viêm, có hai loại phản ứng xảy ra: [2, 62], [10, 49-80], [24, 1-31 a ) Phản ứng tuần hoàn; Phản ứng xảy sớm sau tổn thưcttig phát ưiển mức độ khác nhau, phụ thuộc vào trầm trọng tổn thương mơ theo trình tự sau: a/ Co mạch chdfp nhoáng tiểu động mạch xảy sau có tác nhân kích thích, hưng phấn thần kinh co mạch trơn bị kích thích Tiếp sau có tượng giãn mạch Đầu tiên giãn tiểu động mạch mao mạch tiểu tĩnh mạch dẫn đến tăng tuần hoàn chỗ nhằm cung cấp lượng cho hoạt động ổ viêm (gây nóng đỏ) đưa nhiều bạch cầu tới làm nhiệm vụ bảo vệ Nguyên nhân tượng giãn mạch ba yếu tố chính: + Hưng phấn thần kinh giãn mạch vùng động mạch tiểu động mạch + Do tác động yếu tố tìiể dịch có mặt ổ viêm histamin, bradykinin, leucotrien gây co tế bào nội mô; cytokin (IL-1, TNF, ĨNF-y ) gây nên tái tổ chức cấu trúc xưofng tế bào, dẫn đến hình thành vùng nối gian bào rộng, lỗ hổng tế bào + Các sợi liên kết vùng mao mạch bị tổn thưong số enzym nội bào phá huỷ norepinephrine, chất cần thiết để trì trương lực mao mạch (Norepinephrine thường tìm thấy khoảng gian bào), b/ Phản ứng tuần hoàn mạnh dẫn tới rối loạn nghiêm ưọng giãn mạch cực độ, dòng máu chảy chậm dần, gây tăng tính thấm thành mạch làm địch ri viêm giàu protein vào mô quanh huyết quản Do chèn ép dịch rỉ viêm số yếu tố mạch máu liệt thần kinh vận mạch, tế bào nội mạc sưng to, tăng độ nhớt máu gây máu làm tuần hoàn từ đông mạch sang tĩnh mạch, thiếu ôxi gây rối loạn chuyển hoá nghiêm ưọng, tổn thương tổ chức viêm phát triển toàn diện (biểu lâm sàng phù đau) P) Phản ứng tế bào; Đây phản ứng phản ánh khả bảo vệ thể chống viêm phản ứng này, bạch cầu đóng vai trò quan trọng Do tốc độ tuần hoàn chậm lại, bạch cẩu, chủ yếu bạch cầu đa nhân trung tính dạt vào thành mạch, bám vào nội mô dừng lại điểm, gọi vách tụ bạch cầu Dưới tác dụng chất trung gian hoá học IL-1, TNF nội độc tố, bạch cầu tế bào nội mơ bộc lộ hai loại phân tử dính ưên bề mặt selectin, integrin Nhờ đó, khả dính bạch cầu với tế bào nội mô tăng lên rõ rệt Sau dính vào tế bào nội mơ, bạch cầu chuyển động nhẹ dọc theo bề mặt nội mồ, luồn chân giả vào khe hở tế bào nội mô Chúng xuyên qua vùng nối giãn rộng tế bào nội mồ để xen vào tế bào nội mô màng đáy, từ vào khoảng gian bào ngồi mao mạch Hiện tượng xảy tác đụng số chất hoá ứng động (nên gọi tượng hoá ứng động bach cầu): sản phẩm vi khuẩn (các peptid có aciđ amin tận N-formyl-methionin ), thành phần hệ thống bổ tíiể bị hoạt hoá (C3a, C5a, C5b, 6, 7), sản phẩm chuyển hố acid arachidonic theo đưòfng lipogenase hố (đặc biệt leucotrien B4), cytokin, mảnh vụn sợi tạo keo sản phẩm phân huỷ tế bào, tơ huyết sản phẩm phân huỷ tơ huyết [10, 61-67] Tại ổ viêm, bạch cầu hoạt hoá hoạt hoá, khả thực bào chúng tăng lên rõ rệt Hình Đồ thị biểu diễn biến đổi hàm lượng seromucoid lơ chuột theo thòi gian thí nghiệm Chú thích *** p < 0,001 Thời điểm ỉ: Chuột hình thường Thời điểm 2: Chuột bắt đầu có biểu viêm (khoảng ỉ ỉ ngày sau gây bỏng) Thời điểm :5 ngày sau chuột hắt đầu có hiểu viêm Thời điểm 4: Khi chuột ỉành (Riêng với ỉô thời điểm ngày thứ 29 kể từ chuột hắt đầu có hiểu viêm thuốc) — [”l— Lơ chuột hình thường — ■— Lô chuột khỏi viêm — — -Lô ỉ, chứnẹ -A— Lô , bôi ch ế phẩm chứa papain thô — Lô 3, hôi chế phẩm chứa papain đơng khơ -•— Lơ 4, bơi ch ế phẩm chứa hydrocortison acetat 51 Số liệu cho thấy, lô chuột chứng, thời điểm ngày sau bắt đầu có biểu viêm, hàm lượng seromucoid tiếp tục tăng cao gấp 4,4 lần so với chuột bình thường (P < 0,001), so vói lơ khởi viêm tăng 2,0 lần (P < 0,001) Điều chứng tỏ, lơ chúng tình trạng viêm nặng lên nhiều Sau đó, tiếp tục theo dõi, ta thấy hàm lượng seromucoid giảm dần đến chuột lành bệnh số trở mức bình thưcmg (sự khác so với lơ binh thưòfng khơng có ý nghĩa thống kê với p > 0,05) Đối với lô chuột bôi thuốc, thời điểm ngày sau bôi thuốc, trị số seromucoid tiếp tục tăng so với lô khởi viêm (P 0,05) Riêng lô bôi chế phẩm chứa hydrocortison acetat, thời điểm 29 ngày sau bôi thuốc, tức lô chuột khác lành, trị số seromucoid lại tiếp tục tăng cách rõ rệt từ 184,0% lên 272,2% (P < 0,001) Các kết cho thấy, bơi thuốc khoảng ngày thuốc hạn chế phản ứng viêm Nhưng tiếp tục bơi thuốc tiếp chế phẩm có chứa papain có tác dụng chống viêm, làm lành vết thương chuột Riêng chế phẩm chứa hydrocortison acetat đùng kéo dài không làm giảm trình viêm mà ngược lại, khiến cho trinh viêm trở nên nặng hơn, kể so với chuột khơng dùng thuốc Nếu so sánh hai lô bôi chế phẩm chứa papain thô papain đơng khơ giá trị thu thời điểm tương đưong nhau, 52 khác khơng có ý nghĩa thống kê với p > 0,05 Điểu chứng tỏ, tác dụng hai chế phẩm chứa papain thô papain đông khô ỉà tương đương 53 PHẦN BÀN LUẬN ỉ Trong q trình thí nghiệm, hai loại nguyên liệu papain thô papaiĩi đông khô sử dụng Trong thành phần papain thồ, ngồi thành phần có hoạt tính enzym có chất nhựa Khi đơng khơ, thành phần nhựa papain thơ loại Do đó, hàm lượng protein nguyên liệu papain đông khô tăng lên Khi so sánh hoạt tính enzym/ Img protein hai dạng ngun liệu thấy hoạt tính khơng khác Kết chứng tỏ protein ưong nguyên liệu enzym lượng protein có hoạt tính enzym giống Điều cho thấy lượng enzym bảo toàn ngun vẹn, khơng bị ưong q trình tinh chế phưcíng pháp đơng khơ Trong đề tài sử dụng hai mơ hình gây viêm khác để thử tác dụng papain - Mơ hình gây phù chân chuột dung dịch dextran 6%: Đây mơ hình kinh điển, áp dụng từ nhiều năm đưa lại kết tưcmg đối xác Dung dịch dextran 6% gây phù chân chuột cực đại vào thcfi điểm khoảng sau tiêm vào bề mặt gan bàn chân Vì vậy, để đánh giá tác dụng chống viêm thuốc, phải đo chân chuột vào tíiời điểm độ sưng phù đạt giá trị cao so sánh với lơ chứng - Mơ hình gây viêm ngồi da bỏng nhiệt: Mơ hình gây bỏng cho chuột dùi sắt vùi cát nóng 350°c tạo vết thương da chuột làm biến đổi số hoá sinh chuột tỷ số A/G giảm, hàm lượng Albumin huyết giảm, Globulin a , p, y tăng, hàm lượng seromucoid tăng Các số biến đổi cách đồng thòi, phù hợp với lý thuyết phản ứng viêm [1, 329-330], [7, 860], [17, 27-40, 347j, 122, 28], 54 [37, 298-3001 Điều chứng tỏ bỏng nhiệt tạo ổ viêm thể chuột, thời gian trung bình từ gây bỏng đến chuột bắt đầu có biểu viêm 11 ngày Cách gây viêm đảm bảo đáp ứng yêu cầu thí nghiệm áp dụng rộng rãi nghiên cứu tác dụng chế phẩm chống viêm dùng da Ngoài ra, việc theo dõi số hố sinh ưên góp phần đánh giá hiệu chế phẩm thử Với mô hình gây phù chân chuột, sử dụng nguyên liệu papain đông khô để thử tác dụng chống viêm dựa khả dễ tan papain đông khồ nước, thuận tiện cho chuột uống Nguyên liệu papain thô, chất nhựa nên khơng tan hồn tồn nước, khơng thích hợp cho chuột uống Papain đơng khơ cho chuột uống vào thời điểm 90 phút trước, 30 phút trước 30 phút sau gây phù nhằm phát tác dụng papain dù tác dụng xuất sớm hay muộn Riêng Aspirin, xác định thuốc đạt nồng độ tối đa máu khoảng - sau uống thuốc, nên cho chuột uống 30 phút trước gây viêm Kết thí nghiệm cho thấy papain đơng khồ với liểu 5ƠOmg/ kg/ lần X lần có tác dụng giảm phù chân chuột tương đưcíng với tác dụng Aspirin, liều uống o ^ g / kg Tác dụng papain nửa tác dụng ngưu tất hoàng cầm dùng với liều lượng thời điểm Tuy nhiên, kết hợp papain với ngưu tất hoàng cầm, liều dùng 500 mg papain + 500 mg dược liệu/ kg/ lần X lần trên, thấy tác dụng giảm phù tăng lên rõ rệt, tổng tác dụng giảm phù papain với ngưu tất papain với hồng cầm Như vậy, có hiệp cộng tác dụng papain dược liệu Từ kết mở số hướng nghiên cứu khả kết hợp papain vófi dược liệu chống viêm khác nhằm ứiu hiệu chống viêm tốt tận dụng nguồn dược liệu sẩn có nước Với mơ hình gây viêm ngồi da nhiệt, sử dụng hai loại nguyên liệu ià papain thô papain đông khồ để đánh giá hiệu chúng Kết 55 thí nghiệm cho thấy, chế phẩm có chứa papain có tác đụng chống viêm tốt Trong q trình bơi thuốc, lồ chuột vết thương chóng khơ hn so với lơ chứng, lượng dịch xuất tiết giảm thời gian lành bệnh giảm nửa Các chế phẩm chứa papain thô papain đông khô đem lại kết tưcmg đưong hàm lượng protein, lượng enzym, hai chế phẩm 1% Như vậy, chế phẩm dùng da, thành phần nhựa nguyên liệu papain hoàn toàn khống ảnh hưởng đến tác dụng thuốc dùng trực tiếp papain thơ pha chế thuốc Nhưng bên cạnh đó, số cá thể, papain gây phản ứng dị ứng làm ngứa, rộp dùng da [26, 403J Vì vậy, cần nghiên cứu sâu tìm hiểu liệu chất thành phần nhựa papain thơ có phải tác nhân gây đị ứng hay khơng? Ngồi ra, chế phẩm so sánh, có chứa hydrocortison acetat, sử dụng Lý khiến lựa chọn hoạt chất nay, thị trưcmg có nhiều loại thuốc bơi dùng ngồi có chứa cortìcoid với định chống viêm ngồi da Diprosone [28, 275], Eumovate, Ftorocort [28, 381] Tuy nhiên, kết ứií nghiệm cho thấy, dùng đom độc, thời gian dài, hydrocortison acetat khơng có tác dụng làm lành vết thưcttig, kéo dài thời gian viêm Có thể giải thích điều hoạt chất coiticoiđ có tác dụng chống viêm đùng dài ngày làm chậm ửiời gian lành sẹo ức chế q trình hình thành mơ hạt, làm giảm lượng mucopolysaccharid, ức chế tổng hợp chondroitin sulfat (là chất cần thiết cho chuyển hố chất nội bào mơ liên kết) [19] khiến cho vết thưcíng chuột khơng liền miệng Từ tác dụng chống viêm tốt chế phẩm papain hai mơ hình gây viêm ưên đặt hướng nghiên cứu tác dụng papain trưòmg hợp viêm bên thể 56 Việc theo dõi biến đổi số hoá sinh góp phần đánh giá hiệu chống viêm chế phẩm papain, hai lô chuột bôi chế phẩm chứa papain thô papain đông khô, số hố sinh thay đổi so với lô chuột chứng Xét thời điểm ngày sau bồi thuốc, hai lô chuột bôi chế phẩm chứa papain, tỷ số A/G giữ mức ngang vói mức trước bơi thuốc khoảng 0,50 — 0,55 (lúc chuột bắt đầu có biểu viêm), lô chứng, tỷ số tiếp tục giảm tới 0,32 Tưcfng tự, hàm lưọfng Albumin huyết giảm hcfn, đến mức khoảng 33% so với mức giảm đến 24,0% lơ chứng; đó, Globulin a tăng hcfn 16,7 — 18,7% so với 26,9%, Globulin y tăng hom khoảng 17% so với 18,5%; Globulin |3 tăng đến mức 31 % lồ Ngoài ra, số hàm lượng seromucoid lô bôi chế phẩm chứa papain tăng khoảng 160% so với mức tãng cao, tới 438,8%, lô chứiig Kết cho thấy, lô chứng, phản ứng viêm tiếp tục phát triển mạnh lơ bơi chế phẩm chứa papain, phản ứng viêm phát triển hcfn, tức papain có tác dụng hạn chế q trình viêm Riêng với lơ chuột bơi chế phẩm chứa hydrocortison acetat, vào thời điểm ngày sau bơi thuốc, số hố sinh thu có giá trị ngang lơ bơi papain, nghĩa biến đổi hcfn so với lồ chứng Điều cho thấy, hydrocortison acetat góp phần hạn chế trình viêm chuột so vói lơ chứng Tuy nhiên, tiếp tục bơi thuốc, vào ngày thứ 29 sau bôi ihuốc, lồ khác chuột lành (kể lơ chứng), tìiì lơ chuột này, sơ hoá sinh tiếp tục biến đổi theo chiẻu hướng xấu, phản ứng viêm tăng lên Kết góp phần khẳng định giả thiết nêu phần dùng kéo dài, hydrocortison acetat khơng có tác dụng làm lành vết thưofng, kéo dài thcfi gian viêm ức chế trình liền sẹo vết thương 57 PHẦN KẾT LUẬN Qua q trình thí nghiệm, chúng tơi rút số kết luận sau: Papain đơng khơ có tác dụng chống viêm cấp tưong đối tốt, với liều uống 500 mg/ kg/ lần X lần, phần trăm ức chế phù chân chuột 22,3%, tương đưcfng với tác dụng Aspirin, liều uống o ^ g / kg/ lần (P > 0,05) Khi kết hợp papain ngưu tất với liều cho chuột uống 500 mg papain + 500 mg ngưu tấự kg/ lần X lần, tác đụng ức chế phù tăng tói 78,8% (P < 0,001) Khi kết hợp papain hoàng cầm với liều cho chuột uống 500 mg papain + 500 mg hoàng cầm/ kg/ lần X lần, tác dụng ức chế phù tăng tói 66,9% (P < 0,001) Các chế phẩm chứa papain thô chứa papain đơng khơ có tác dụng chống viêm tốt vết thương da bỏng Hai loại chế phẩm có tác dụng tương đưcíng làm giảm thời gian lành vết thưcfng từ 23 ngày (ở lơ chứng) xuống - 1 ngày Chế phẩm chứa hydrocortison acetat đùng kéo dài làm cho vết thương khó lành, đến ngày thứ 29 sau bôi thuốc, vết thưomg chưa có biểu lành Tác dụng chống viêm chế phẩm chứa papain thô papain đông khỏ thể việc hạn chế giảm giá trị tỷ số A/G trình viêm Vào ngày thứ sau bôi thuốc, tỷ số A/G giảm từ trị số bình thưòmg ỉà 0,91 xuống 0,50 (ở lơ bôi chế phẩm chứa papain thô) 0,55 (ở lô bôi chế phẩm chứa papain đông khô) Các giá ưị vản cao so với mức 0,32 lô chứng Riêng lô chuột bôi chế phẩm chứa hydrocortison acetat, vào ngày thứ 29 sau bôi thuốc, tỷ số A/G tiếp tục giảm xuống 0,42, lô chuột khác tỷ số trở giá trị bình thưòíng 58 Tác dụng chống viêm chế phẩm chứa papain thô papain đông khô thể việc hạn chế thay đổi tỷ ỉệ thành phần protein huyết q trình viêm Vào ngày thứ sau bơi thuốc, hàm lượng Albumin, Globulin a , p, Y thay đổi từ giá trị bình ứiường tưofng ứng 46,3%, 19,7%, 23,6%, 10,4% đến mức 33,1%, 18,7%, 31,7%, 16,5% (ở lô bôi chế phẩm chứa papain thô) 35,3%, 16,7%, 313% , 16,7% (ở lô bôi chế phẩm chứa papain đơng khơ) Mức thay đổi so với giá trị tưcmg ứng thu lô chứng 24,0%, 26,9%, 30,6% 18,5% Riêng lô chuột bôi chế phẩm chứa hydrocortison acetat, vào ngày thứ 29 sau bôi thuốc, hàm lượng Albumin vẵn giữ mức thấp 27,3%, Globulin a , p mức cao 29,3% 31 J % , lô chuột khác giá trị trở mức bình thường Tác dụng chống viêm chế phẩm chứa papain thồ papain đông khô thể hạn chế tăng hàm lượng seromucoid trình viêm Vào ngày thứ sau bôi thuốc, hàm lượng seromucoid tăng 158,6% (ở lô bôi chế phẩm chứa papain thô) 167,1% (ở lô bôi chế phẩm chứa papain đông Idiô); thấp hofn nhiều so với mức tăng 438,8% lô chứng Riêng lô chuột bôi chế phẩm chứa hydrocortison acetat, vào ngày thứ 29 sau bôi thuốc, hàm lượng seromucoid giữ mức cao 272,2%, lô chuột khác trị số trở giá trị bình thưòng Từ kết thu q trình thí nghiệm, chúng tơi đưa số đề xuất sau: Tiếp tục nghiên cứu ữiành phần nhựa papain, tìm hiểu tác nhản gây phản ứng dị ứng số cá thể Hoàn thiện phương pháp tinh chế papain phù hợp với điều kiện kỹ thuật nước Tiến hành so sánh tác dụng sinh học, dược lý hoạt tính enzym nguyên liệu papain nước với papain tinh khiết 59 Áp dụng mơ hình gây bỏng thí nghiệm gây viêm da việc theo dõi biến đổi chi số hoá sinh ưong đánh giá hiệu thuốc chống viêm Tiếp tục tiến hành thử kết hợp tác dụng chống viêm papain với liệu khác sẵn có nước với hoạt chất chống viêm có nguồn gốc hố được, kháng sinh Tiếp tục nghiên cứu tác dụng chống viêm papain trường họfp viêm bên thể5 Tiếp tục nghiên cứu dược lực học, dược động học papain in vivo, tìm hiểu chế tác dụng chống viêm papain Tiếp tục nghiên cứu để chế tạo thàiih phẩm thuốc chống viêm có chứa papain 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Bộ mơn Hố sinh, Trường Đại học Y Hà Nội, Hố sình, NXB Y học, Hà Nội, 1991 [2] Bộ môn Sinh lý bệnh, Trưcmg Đại học Y Hà Nội, Bài giảng sình lý hênh, NXBYhọc, 1990 [3] Bộ Y tế, Dược điển Việt Nam //, tập 3, NXB Y học, 1994 [4J Tào Duy Cần, Thuốc Biệt dược, NXB Y học 1994 [5] Võ Vãn Chi, Từ điển thuốc Việt Nam, NXB Y học, 1997 [6] ĐỖ Trung Đàm, Đánh giá mơ hình gây phù thực nghiệm cao lanh carragenin đ ể nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp thuốc, Tạp chí dược học, số 12/ 1997, 18-21 [7] Nguyễn Thế Khánh, Phạm Tử Dưcfng, Xét nghiệm sử dụng lâm sàng, NXBYhọc, 1999 [8] ĐỖ Tất Lợi, Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, 1999 [9] Nguyễn Hạnh Phúc, Nguyên Thị Hảo, Đoàn Thị Thuỷ, Nguyễn Thị Hoà, Tinh ch ế papain từ mủ đu đủ tươi, dùng ni cấy tế bào, Tạp chí dược học, số 2/ 1984, 12-14 [101- Lê Đình Roanh, Nguyễn Đình Mão, Bệnh học viêm hệnh nhiễm khuẩn, NXB Y học, 1997 í 11] Đỗ Thị Thanh, Nguyễn Xuân Thắng, Papain từ đu đủ - dạng thuốc siro theo dõi hoạt tính enzym, Tạp chí dược học, số 4/ 1994, 16-17 [12] Nguyễn Xuân Thắng, Đặc tính protease thực vật dùng lầm thuốc, Tạp chí dược học, sô' 6/ 1995, 19-21 [13] Nguyễn Xuân Thắng, Papain từ đu đủ - tá dược sử dụng theo dõi hoạt tính men, Tạp chí dược học, số 2/1991, 22-24 [14] Nguyễn Xuân Thắng, Sự ổn định tính chất papain chứa 61 viên nang theo thời gian bảo quản, Tạp chí dược học, số 7/ 1997, 12-17 115] Từ điển hách khoa dược học, NXB Từ điển bách khoa, Hà Nội, 1999 [16] Vidal Việt Nam ỉ 999, Edition du Vidal, 1999 117] Vũ Đình Vinh, Hướng dẫn sử dụng xét nghiệm sinh hoá, NXB Y học, 1998 í 18] Vũ Đình Vinh, Đặng Hanh Phức, Đỗ Đình Hồ, Kỹ thuật y sinh hố, Trường Đại học Quân ỵ, 1974 [19] B R Bhussry and Saroja Rao, Histochemical response to experimental skin injury in rats Pharmacology, Supplement, Pergamon Press, 1968, 51-62 [20J Derek R Buckle and Charles J F Hedgecock, Drug targets in inflammation and immunomodulation Reviews, Vol 2, No August 1997, 325-332 [211 R J Flower, G J Blackwell, Anti-inflammatory steroids induce biosynthesis o f a phosphoUpase A inhibitor which prevents prostaglandin generation Nature Vol 278, 29 March 1979,456-459 [22], E Myles Glenn, Barbara J Bowman and T c Koslowske, The systemic response to inflammation Pharmacology, Supplement, Pergamon Press, 1968,27-49 [23] Goodman and Gilman’s, The pharmacological basis o f therapy, 9"’ edition The Me Graw-Hill companies, Inc, 1996 [24] J c Houck, A personal overview o f inflammation Biochemical Pharmacology, Supplement, Pergamon Press, 1968, 1-3 [25] F Klaschka, Oral enzymes - New approach to cancer treatment Forum Medizin, 1996 26], Albert Y Leung and Steven Foster, Encyclopedia o f common natural ingredients uses in foods, drugs and cosmetics, 62 edition, John Wiley & sons, Inc, 1996 [27] Martindale^ edition, The Royal pharmaceutical society, 1996 [28] Mims annual Vietnam 97Ì98, 5"* edition, Medi - Media International Group, 1997 [29] Bengt Samuelsson, Leucotriens: Mediators of immediate hypersensitivity reaction and inflammation Science Vol 220, May 1983,568-575 [30] Bengt Samuelsson, Sven-Erik Dahlén, Jan Ake Lindgren, Carol A Rouzer, Charles N Serhan, Leucotriens and Lipoxinx: Structures, Biosynthesis, and Biological Effects, Science Vol 237, September 1987, 1171-1176 [31J Charles N Serhan, Jesper z Haeggstrom, Christina c Leslie, Lipid mediator networks in cell sìgnaỉinẹ: update an impact o f cytokines, The FASEB Journal, Vol 10 August 1996, 1147-1158 [32] Charles N Serhan, Signaling the fa t controller, Nature Vol 384, November 1996, 23-43 [33] Larry w Tjoelker et al., Anti-inflammatory properties o f a platelet activating factor acetyỉhydrolase, Nature Vol 374, April 1995, 549­ 553 [34J The United States pharmacopeia 23, The national formulary 18 — Vol I, United States pharmacopeial convention, Inc, 1995 [35], R A Turner and p Hebom, Screening methods in pharmacology, Vol II, New York Academic Press, 1971 36] c A Winter et al., Carrageenin - induced oedema in hind paw o f the rat as an assay fo r anti-inflammatory drugs, Proc Soc Exp Biol Med, No 111, 1962, 544-547 37] Lucien Hartmann, Techniques modernes de laboratoire et explorations 63 fonctionnelles Tome 1, L’expansion scientifique frangaise, 1971 [38] Genevieve Lemaừe, ỉmmunoỉogie - Biochimie des sysĩémes intégrés BC2, Paris onze edition, 1995 64 PHỤ LỤC K J Hình Hình ảnh điện dì protein huyết của: A Người B Chuột bình tìhưcmg c Chuột bị bỏng sau 11 ngày (Chuột bắt đầu có biểu viêm) D Chuột chứng sau bắt đầu có biểu viêm ngày E Chuột chứng lành F Chuột bơi chế phẩm chứa papapin tìiơ, sau bôi thuốc ngày G Chuột bôi chế phẩm chứa papapin thô, lành H Chuột bôi chế phẩm chứa papapin đông khô, sau bôi thuốc ngày I Chuột bôi chế phẩm chứa papapin đông khô, lành J Chuột bôi chế phẩm chứa hydrocortison acetat, sau bồi thuốc ngày K Chuột bôi chế phẩm chứa hydrocortison acetat, sau bôi thuốc 29 ngày ... hiểu tác dụng chống viêm Do đó, chúng tơi tiến hành đề tài: Góp phần nghiên cứu tác dụng chống viêm chế phẩm chứa papain Đề tài nhằm số mục tiêu sau đây: © Sơ theo dõi tác dụng chống viêm chế phẩm. .. chế phẩm chứa papain dùng bôi ngồi da ® Thử kết hợp tác dụng chống viêm papain vài dược liệu chống viêm khác ® Theo dõi biến đổi vài số hố sinh q trình viêm, tác dụng chế phẩm chứa papain Giới... lý thuyết viêm 2.2 Tổng quan enzym chống viêm 14 2.3 Một số dược liệu có tác dụng chống viêm 18 Phần Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu 20 Phần Thực nghiệm kết 28 Phần Bàn luận 54 Phần Kết luận