Nghiên cứu chiết xuất catechin từ chè xanh tại việt nam

64 151 0
Nghiên cứu chiết xuất catechin từ chè xanh tại việt nam

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

B ộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO • • B ộ Y TÉ • TRƯỜNG ĐẠI HỌC • • • Dược • HÀ NỘI • P H Ù N G M IN H DŨNG NGHIÊN CỨU CHIế T XUẤT CATECHIN TỪ CHÈ XANH VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC sĩ • • Dược HỌC KHĨA • ♦ Chuvên nshành: CƠNG NGHỆ DƯỢC PHẨM - B À O CHế Mã số: 60 73 01 N g i h n g dẫn kh o a học: Gs Lê Quang Toàn PGs TS Phạm Ngọc Bùng IHỜA-, HÀ NỘI, 2005 O i :5i’7 L Ờ I C Ả M ON Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới Gs Lê Quang Toàn PGs.Ts Phạm Ngọc Bùng Là người thầy tận tình hướng dẫn giúp đỡ tơi nghiên cứu hồn thành luận văn Tôi xin cảm ơn môn Bào chế Trườ ng Đại Học Dược, Ban giam đốc, phòng kiểm nghiệm , phòng nghiên cứu phát triển, xưởng sản xuất số Công ty cổ phần dư ợ c T W - M ediplantex, nơi tạo điều kiện m ặt cho tơi q trình nghiên cứu hồn thành luận văn Tơi xin gửi tới Ban giám hiệu, phòng đào tạo sau đại học, thầy cô giáo trườ ng Đại học D ợc Hà Nội lòng biết ơn quan tâm giúp đỡ thời gian học tập nghiên cứu trường Hà Nội, tháng 12 nám 2005 Học viên Phùng Minh Dũng MỤC LỤC CHÚ GLAI CHỦ’ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BANG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẢT VẤN ĐỀ PHẦN 1; TỎNG QUAN 1.1 CÂY C H È 1.1.1 Đặc điểm c h è 1.1.2 Phân bố 1.1.3 Thành phần hoá h ọ c 1.1.4 Tác dụng dược lý công dụng c h è ] HOẠT CH Á T C A T E C H IN T R O N G C H È 1.2.1 Thànli phần hoá học C atechin 1.2.2 Công thức tínli chất hóa h ọ c 10 1.2.3 Tác dụng dược lý catechin 11 1.2.4 Phương pháp định tính catechin c h è 14 1.2.5 Phương pháp định lượng catechin 15 1.3 TÌNH HÌNH NGHIÊN c ứ u VÊ CA TECH IN 15 1.3.1 Một số cơng trìnli nghiên cíai nước g iớ i 15 1.3.2 Một số phương pháp chiết catechm ừong c h è .16 1.3.3 M ột số dạng bào chế catechin: 17 1.4 N G m Ẻ N C Ứ U Đ ộ ỔN ĐỊN H CỦA T H U Ố C : 18 1.4.1.Khái niệm độ ổn định: 18 1.4.2 Mục tiêu nghiên cíni độ ồn đựili: 18 1.4.3 Các tiêu đánh giá độ ổn định th u ố c : 18 ] 4.4 Các yếu tố áp dụng để nchiên cứu độ ổn địnli th u ố c ; 18 PHẦN 2: ĐỔI TU Ợ N G , NGL YÊN VẬT LIỆU, PHƯOTNG TIỆN VÀ PHUONG PHÁP NGHIÊN c ủ 2.1 ĐỐI T ợ n g n g h iê n CÚ X J: 20 20 2.2 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯ'ƠNG TIỆN NGHIÊN c ứ u 20 2.2.1 Nguyên vật liệu, hoá chất; 20 2 Phương tiện nehiên c ứ u 21 2.3 PHU'ONG PHÁP NGHIÊN c ứ u 21 2.3.1 Phương pháp chiết xuất catechin 21 2.3.2 Phương pháp xây dimg tiêu chuẩn sờ bột catechin; .25 2.3.3 Phươnti pháp kháo sát tiêu đánh giá phương pháp kiêm n g hiệm : 26 2.3.4 Phương pháp bào chế viên nén bao phim catechin 27 2.3.5 Phươrm pháp nehiên cứu độ ồn định thuốc: 28 2.3.6 Phươnc pháp phân tích xử lý số liệu thực n g h iệ m : 28 PHÂN 3: KÉT QUẢ NGHIÊN CÚX; VÀ BÀN LUẬN 29 3.1 N G H IÊN C Ủ ÌJ PH Ư Ơ N G PH Á P V À ĐIÊU KIỆN CHIÊT XƯ ẢT C A T E C H ĨN :., 29 3.1.1 Chiết xuất catechin dung môi methanol: 29 3.1.2 Định tính catechin bột chế phẩm thu được: .30 3.1.3 Địnlì tínli, địnli lượng catechin chế phẩm thu sắc ký lỏng hiệu cao: 32 3.1.4 Kiiảo sát yếu tố ảnh hưởng đến lượng bột catechin chiết hàm lượng E G C G : 37 3.1.5 So sánh với phương pháp chiết Catechin khác: 38 3.1 Nghiên cứu xây dimg quy trình chiết xuất catechin qui mơ kg mẻ chiết methanol 43 3.2 XÂY DỤNG TIÊU CHUẨN c s CHO CHẾ PHẨM CATECHIN CHIẾT Đ Ư Ợ C : 46 3.2.1 Khảo tiêu chất lượng chế phẩm Catechin chiết đ ợ c: .46 3.2.2 Dự thảo tiêu chuẩn sở chế phẩm catechin : 47 3.3 BƯỚ C ĐẦU Đ Á N H GIÁ Đ ộ ỔN ĐỊN H C Ủ A C A T E C H IN T R O N G CHÉ PHẨM CHIÊT Được VÀ TRONG V IÊ N 49 3.3.1 Mầu thử độ ổn địnli: 49 3.3.2 Công thức dir kiến cho viên catechin: 50 3.3.3 Điều kiện thử nghiệm : 53 3.3.4 Các tiêu theo dõi phương pháp đánh giá: 53 3.4 BÀN LU Ậ N VỀ KÉT Q U Ả N G H IÊ N C Ú V : 54 PHẢN KÉT LUẬN VÀ ĐÈ XƯẨT 5Ó KÉT L U Ậ N : 56 ĐÈ X U Â T : 56 PHU L U C 59 CHỦ GIẢ ! CHỮ VIẾT TẮT HPMC: H ydroxy propyl m ethyl cellulose PE: Poly ethylen EC: Epicatechin EGC: Epigallocatechin ECG; E picatechingailat EGCG; E pigailocatechingallat PVP: P olyvinylpyrolidon D Đ V N III: Dư ợc điển V iệ t Nam HPLC: High P erfom ance Liquid chrom atography DANH Mưc • CÁC BẢNG Trang T ên bảng Bảrm 3.1: K hảo sát độ ổn định hệ thống sắc ký 32 B ảns 3.2: Khảo sát phụ thuộc nồng độ EGCG diện tích píc 34 Bản ti 3,3: Kết độ xác phương pháp định lượng EGCG 35 Bảng 3.4; Kết xác định độ phương pháp định lượng 36 Bảng 3.5: Kết chiết catechin bằntĩ m ethanol có diệt m en 37 Kết quà chiết catechin methanol không diệt 37 Ả n h h n g thời gian ngâm lạnh đến kết chiết 38 nguyên liệu Bảng 3.6: m en n g u y ê n liệu Bảng 3.7: xuất catechin Bảng 3.8: Kết qu ả lượng bột catechin thu hàm lượng 40 E G C G theo ph n g pháp chiết với nước sôi 45 phút Bảng 3.9: Kết lượng bột catechin thu hàm lượng 40 E G C G theo ph n g ph áp chiết hãm với nướ c sôi B ả n í 3.10: K ết qu ả lượ ng bột catechin thu hàm lượng 42 E G C G theo p h n g pháp chiết với ethanol Bảng 3.11 Kết chiết catechin mẻ kg 43 Bảng 3.12: Kết đánh giá pH hàm ẩm catechin chiết đưọ'c 47 Bảng 3.13; Kết định tính, định lượng EGCG 47 Bảng 3.14: Các công thức viên dự kiến 51 Bảng 3.15: K ết kiểm tra m ộ t số tiêu chất lượng viên 51 Bảng 3.16: C ô ng thức bao phim 52 B ảng 3.17 Kết quà thử độ ổn định điều kiện thử nghiệm cấp tốc 53 B ảng 3.18 khơng khí K ết thử độ ổn định điều kiện có điều hồ 54 DANH MUC CÁC HÌNH • T ên hình Tranơ H ình 2.1; Sơ đồ chiết xuất, tinh chế catechin m ethanol 22 Hình 2.2; Sơ đồ chiết xuất, tinh chế catechin nước nóng 23 H ình 2,3: Sơ đồ chiết xuất tinh chế catechin ethanol 24 Hình 3.1: Sắc kv đồ, sắc ký lớp m ỏ n g m ẫu catechin chiết đưọ'c 31 H ình 3.2: Đồ thị khoảng tuyến tính phương pháp định lưọ'ng 34 Hình 3.3; Sơ đồ bước chiết catechin nước nóng 39 Hình 3.4: Sơ đồ bước chiết catechin ethanol 41 Hình 3.5; Sơ đồ chiết xuất tinh chế catechin 44 ĐẶT VẮN ĐÈ Nghiên cứu sán xuất thuốc từ nguyên liệu thiên nhiên sẵn có nước trone nhừnẹ vần đề quan tâm tro n s năm sần đâv Một số thuốc đơn vị nghiên cứu khoa học, côn Lĩ tv, xí nghiệp san xuất từ nguồn naiiyên liệu thirc vật sẵn có nước đà góp pliần lóii cho cơng tác phòníi chữa bệnh chăm sóc sức klioe nhân dân Nghiên cứu chè xanh hoạt chất có chè Việt Nam năm gần có m ột số cơng trình, mức độ ứng dụng thấp chủ yếu sản phẩm thị trường nhập sản xuất từ nguồn nguyên liệu ngoại nhập Catechin chè xanh biết đến tác nhân chống oxy lioá tốt eiúp cho việc phòng ngừa điều trị số bệnh nan y Trên giới sản phầm từ chè đặc biệt từ catechm sán xuất nhiều dạng khác như: viên nén, viên nang, thuốc tiêm, kem Các chế phẩm ứng dụng rộng rãi dạng thuốc hay thirc phẩm thuốc Xuất phát từ thực tế nên tiến hành đề tài; “ N'ờg h iên u ch iế t x u ấ t C atechin từ ch è x a n h Việt N a m " VỚI mục tiêu sau; X â\' dự ng qiiy trình chiết xuất Catechin X â y dựĩỉ'^ tiêu chuẩn sở chế phẩm Catechin chiết từ chè xanh Việt Nam Bước đầu đánh giá độ ổn định thành phần catechm ch ếp h â m chiếl viên nén bao phim PHẦN TỒNG QUAN 1.1 CÂY CHÈ 1.1.1 Đặc điểm chè Cây chè có tên khoa học Camellia sinensis O Kuntze (Thea sinensis L.), thuộc họ chè - Theaceae Chè m ột loại khoẻ, mọc hoang, khơng cắt xén cao tới 1Om hay nữa, có nơi chè mọc thành rừng gỗ núi đá cao Cây chè nhân dân trồng thường cắt xén để tiện hái búp nên cao Im phân nhánh thấp Lá chè mọc so le, khơng rụng, hình trái xoan, phiến dày bóng, dai, mép có nhiều cưa Hoa chè to, với 5-6 cánh m àu trắng, mọc riêng nách lá, có mùi thơm, nhiều nhị Quả chè nang thường có van, chứa hạt gần tròn, đơi nhăn nheo, phơi nạc Hạt khơng phơi nhũ, mầm lớn, có chứa dầu.[7] [Ì4\ 1.1.2 Phân bố Cam ellia sinensis O Kuntze thuộc họ chè Theaceae phát triển m ạnh từ kỷ XVI, có nguồn gốc từ T rung Quốc, N hật B ản sau phát triển hầu giới.Việt N am m ột quê hương chè, trồng 30 tỉnh nước chủ yếu tập trung tỉnh trung du miền núi như: Thái Ngun, Vĩnh Phú, Hồ Bình, Hà Giang, Tây Nguyên, Lâm Đồng [7] [14] 1.1.3 Thành phần hoá học Cây chè có thành phần hố học phức tạp, cơng trình nghiên cứu giới cho thấy chè có khoảng 130 chất, xếp thành 13 nhóm sau: đường (như glucose fructoza ) pectin, tinh dầu (như methyl salicylat, citronel, eeraniol); protein acid amiii khôn Sĩ thay thế, số sắc tố (diệp lục, caroten, xanthophylin ); chât vô (như sắt, magiê, calci, silic, vitamin (B1,B2,P,C ) ; glycozit phần aglycon phenol, flav o n o id ; tanin; ezym oxy hố; enzym catalase; nlìựa; acid hữu cơ; alcaloid (cafein, theophylin, theobromin) Trong chè có nitin, quercetin, flavonoid anthocyan pectin (6 - %).[6 14 1.1.4 Tác dụng dược lý công dụng chè Cây chè đánh giá dược liệu quý khơng có cơng bảo vệ sức khoẻ m có tác dụng điều trị giúp người chữa nhiều loại bệnh Người Trung Quốc đánh giá chè loại nước uống bồ dưỡng, có giá trị sinh học cao nhờ chữa nhiều bệnh tim mạch, tiêii hoá, loại thuốc lợi tiểu, phòng chống ung thư chống nhiễm xạ [11] [14] Qua kinh nghiệm dân gian nhiều cơng trình nghiên cứu khoa học nước giới cho thấy chè có nhiều tác dụng phons; phú 1.2 H O Ạ T C H Ấ T C A T E C H IN T R O N G CHÈ • Trong thành phần hố học chè, polyphenol thành phần quan trọng hàm lượng tương đối cao chứng minh có nhiều tác dụng y siiih học q người Trong catechin chất hỗn hợp polyphenol Thành phần catechin gồm: epigalỉocatechin (EGC), epicatechin (EC), epigallocatechingallat (EGCG), epicatechingallat (ECG) Nliờ có catechin, chè dùng rộng rãi y học chữa 48 a) Cảm quan: Bột chế phẩm Catechin khơ tơi, màu ngà vàng, có mùi đặc trưng, vị chát b) Đ ộ ẩm: Hàm ẩm chế phẩm Catechin chiết xuất từ chè xanh Việt Nam không 5% c) Đ ộ p H : Độ pH phải nằm khoảng từ 6,0 - 7,0 d) Đ ịnh tính: Trên sắc ký đồ HPLC phần định lượng phải xuất píc có thời gian lưu trùng với thời gian lưu mẫu chuẩn EGCG d) Đ ịnh lượng: Chuẩn bị mẫu thử: Cân xác khoảng 60 mg bột chế phẩm Catechin chiết vào bình định mức 50 ml, th êm 30 ml nước, lắc siêu âm 15 phút, thêm nước vừa đủ đến vạch Hút ml dung dịch cho vào bình định mức 50 ml, thêm nước vừa đủ Chuẩn bị mẫu chuẩn: Cân xác khoảng 60 mg mẫu EGCG chuẩn vào bình định mức 50 ml, thêm 30 ml nước, lắc siêu âm 15 phút, thêm nước vừa đủ đến vạch Hút ml dung dịch cho vào bình định mức 50 ml, thêm nước vừa đủ Điều kiện sắc ký: Dung môi: Acid acetic ; Acetonitrile: Dimethyl formamid : nước = 3:1:15:82 Áp suất cột: 40kg/cm^ Tốc độ dòng chảy: 1,0 ml/ phút 49 Detector u v 280 nm The tích tiêm; 20j.ll Cột Licỉưosorb RP18 Sac kv thực thời gian: 30 phút - Dira v th i gian lưu pic mẫu th ( tương đương VỚI thời eian lưu pic mẫu chuẩn) để xác định có EG CG mẫu thử Dựa vào diện tích pic mẫu chuẩn mẫu thử, tính hàm lượng E G C G chế phẩm Catechin chiết theo công thức; % EGCG= At X Pc X Cc -^ Ac X Pt Trong đó: At, Ac diện tích pic mẫu thử mẫu chuẩn Pt, Pc m ẫu cân mẫu thử mẫu chuẩn Cc hàm lượng chất chuẩn EG CG (nguyên trạng) H àm lượng EG CG chế phẩm không thấp 25% tính theo nguyên trạng 3.3 BƯ Ớ C Đ Ầ U Đ Á N H GIÁ Đ ộ ỔN ĐỊNH CỦA C A TEC H IN TRONG CH Ế P H Ả M C H IẾT Đ Ư Ợ C VÀ TRO NG VIÊN 3.3.1 M ẩu thử ổn đinh: • • Bột catecliin chiết từ chè xanlì Việt Nam, mẫu mẻ thí nghiệ mục 3.1.5, Mầu đóng túi nliơm phủ màng PE, tíu 50 (g) hàn kín 50 Viên nén bao phim bào chế từ catechin chiết từ chè xanh Việt Nam, bào chế theo công thức số 3, bảng 3.3.2 bao phim theo cơng thức bảng 3.16 Mầu đóng vỉ Nhơm/ PVC, vỉ 12 viên, vỉ đóng túi nhơm phủ màng PE hàn kín 3.3.2 Cơng thức cho viên catechin: Bột Catechin (tương đương EGCG 50 mg) Tá dược Vừa đủ 300 mg Với tính chất bột Catechin thu bột khô tơi, tan nước lựa chọn tá dược dập viên sau: Tá dược độn, rã trong: Amidon, Lactose, A vicel Tá dược dính: dung dịch PVP/ cồn 96% Tá dược trơn: Talcum, M agie stearat, acid stearic, aerosil Phương pháp tạo hạt: phương pháp xát hạt ướt Chúng tiến hành thăm dò cơng thức cho mẻ 300 viên với công thức khác dựa yếu tố sau: Yếu tố thay đổi: Tỷ lệ khối lượng tá dược trơn khác để sơ theo dõi mức độ ảnh hưởng ghi bảng 3.14 51 B ả n g 3.14 C ông thức viên dự kiến (đơn vị tính theo mg) thức Thành phần 200,0 200,0 200,0 A vicel 40,0 40,0 40,0 Amidon 25,0 25,0 25,0 Latose 25,0 25,0 25,0 Talcum 2,5 0 M agie stearat 0,5 0 Acid stearic 2,5 Aerosil 0 2,5 Catechin Các y ếu tổ c ố định: Tá dược dính PVP/ cồn 96% nồng độ 10 % lượng vừa đủ Sát hạt qua lưới Inox 1,0 mm Sấy cốm tủ sấy tĩnh, nhiệt độ sấy 60°c, thời gian 20 phút Dập viên máy dập viên chày Trung Quốc Kết kiểm tra số tiêu chất lượng viên sau dập ghi bảng 3.15 B ảng 3.15 K ết kiểm tra m ột sổ tiêu chất lượng viên CT Chỉ tiêu Độ rã (phút) 12,0 8,8 7,5 0,5 0,6 0,5 Lực gây vỡ viên (kN) 12,2 13,2 12,3 Hàm lượng EGCG 45,6 46,8 48,7 Độ mài mòn (%) 52 N hận xét: - Cả công thức đưa đạt tiêu viên nén - Công thức có tá dược bao Talcum, M agie stearat (1) cơng thức có hàm lượng EGCG bị giảm so với ban đầu nhiều thấy tá dược có tính Kiềm ảnh hưởng đến hàm lượng hoạt chất - Cơng thức có tá dược bao Aerosil (3) cơng thức có hàm lượng EGCG bị giảm so với ban đầu Qua việc đánh giá số tiêu chất lượng viên ban đầu hàm lượng EGCG công thức đưa trên, lựa chọn công thức làm công thức pha chế tiếp tục bao phim cho viên với cơng thức bao trình bày bảng 3.16 B ả n g 3.16: D ự kiến công thức bao p h im cho viên catechỉn Tên tá dươc • HPMC Titan dioxyd Talcum Tactrazin lake Đỏ Ponceau Polyetylenglycol 6000 Tween 80 L ượng dùng (m g/viên) 4,2 0,8 1,5 0,1 0,02 0,3 0,03 Các bước tiến hành: Ngâm HPMC dung môi Ethanol 80% 48 cho trưoTig nở hoàn toàn Trộn Titandioxyd,Talcum, Tactrazin lake, đỏ Ponceau theo nguyên tắc đồng lượng Tạo hỗn dịch bao máy xay hỗn dịch , cho HPMC 53 ngâm trương nở vào máy xay, thêm lượng dung mơi lại, cho tiếp hỗn hợp bột kép vào Vận hành máy xay hỗn dịch 15 phút thu khối hỗn dịch đồng màu cam sẫm Bao phim máy bao phim tự động FC 25 3.3.3 Điều kiện thử nghiệm: Các mẫu chế phẩm bột catechin viên catechin thí nghiệm điều kiện: Thử nghiệm cấp tốc: nhiệt độ 40°c ± ^ c độ ẩm tương đối 75% ± 5% Mầu thử đặt bình thuỷ tinh kín, đáy bình có dung dịch Natri clorid bão hồ, bình đặt tủ ấm, thời gian đặt mẫu 45 ngày Thử nghiệm độ ổn định điều kiện phòng có điều hồ khơng khí nhiệt độ từ 20°c - 25°c, độ ẩm tương đối từ 60% - 70%, mẫu thử đựng hộp giấy, thời gian đặt mẫu 90 ngày 3.3.4 Các tiêu theo dõi phương pháp đánh giá: Đánh giá chế phẩm catechin sở tiêu phương pháp theo tiêu chuẩn sở dự thảo Đánh giá viên nén bao phim catechin theo tiêu: cảm quan, độ rã, độ ẩm, định tính, định lượng Kết thử độ ổn định điều kiện thử nghiêm cấp tốc thể qua bảng 3.17; điều kiện có điều hoà bảng 3.18 B ảng K ết thử độ ổn định điều kiện th nghiệm cấp tốc Ban đâu Chỉ Mâul Mâu2 Mâu Mâu viên Mầu Mâu Mâu3 Mâuviên Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt 2,3 6,5 + 2,7 6,3 + 2,2 6,5 + 2,3 3,0 6,3 + 3,0 6,7 + 2,8 + 3,1 6,5 + + 25,6 25,4 25,8 16,6 25,1 24,9 25,3 16,4 tiêu Cảm quan Đơ âm pH Định tính Định lương (%) EGCG sau thời gian thử nghiệm 54 Nhận xét: Các tiêu cảm quan, độ ẩm , pH thay đổi không đáng kể, riêng tiêu hàm lượng EG C G sau thời gian thử nghiệm giảm khoảng 2% so VỚI ban đầu tất mẫu, kể mầu viên B ảng 3.18 K ết qua thử độ ơn định điều kiện thừ nghiệm có điềii hồ không k h ỉ sau tlĩời gian thử nghiệm Ban đầu Chỉ tiêu Cám quan Độ âm pH Định tính Địiửi lượiig Maul Mầu2 Mâu Mấu viên Mầu Mâu Mâu3 Màuviên Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt 2,3 6,5 + 2,7 63 + 2,2 6,5 + 2,3 3,0 6,4 + 3,0 6,5 2,9 + 2,8 6,5 + 25,6 25,4 25,8 16,6 25,3 25 25,5 16 EGCG N hận xét: Các tiêu cảm quan, độ ẩm , pH thay đổi không đáng kể, riêng tiêu hàm lượng E G C G sau thời gian thử nghiệm giảm khoảng 1,5% so với ban đầu tất mẫu, riêng mẫu viên hàm lượng giảm 1% 3.4 B À N LU Ậ N VẺ KÉT Q U Ả N G H IÊ N CLOJ: quy trình chiết xuất catechin từ chè xanh Việt Nam Qui trinh chiết xuất catechin dung mơi nước nóng cho hiệu suất hàm lượng E G C G thấp độ tan catechin nước thấp so VỚI ethanol methanol Hàm lượng E G C G thấp q trình với dung mơi nước kéo dài so với dung môi methanol ethanol 55 D ung môi m ethanol cho hiệu suất chiết hàm lượng EG CG cao catechin tan methanol tốt q trình thu hồi dung mơi methanol nhanh Việc cô thu hồi dung môi áp suất giảm nhiệt độ thấp giúp cho catechin bị phân hiiỷ Phương pháp loại tạp nhằm mục đích loại cafein, chất nhựa, clorophyl phương pháp định lượng E G C G chế phẩm sắc ký lơng hiệu cao Vì khơng có chất chuẩn EC, EGC, ECG nên định lượng thành phần E G C G catechin Tuy nhiên trình bày m ục tiêu luận án E G C G chất có tác dụng nên qua đánh giá chất lượng catechin E G C G chiết xuất xác minh HPLC, có thời gian lưu sát với m ẫu chuẩn vết sắc ký lớp m ỏng tương đương chuẩn độ ổn định chế phẩm catechin : Catechin dễ bị hỏng tác nliân nhiệt độ, độ ẩm, ánh sáng Tuy nhiên với quy trình chiết loại tạp xây dựng bảo quản chế phẩm điều kiện tránh ẩm, nhiệt độ 20 -25°c, tránh ánh sáng Kiểm tra phương pháp lão hoá cấp tốc thấy mức độ phân huỷ tương đối chậm đưa vào sản xuất dạng bào chế Thirc tế theo dõi viên sau tháng chưa thấy có thay đồi cảm quan, đáng ý cơng thước viên chưa dùng chât bảo quản 56 KÉT LUẬN VÀ ĐÈ XUẤT KÉT LUẬN: Sau thòi gian nghiên CÚTI thực nghiệm thu đưọc kết sau: Đã chọn xâv dimg qui trình chiết cateclìin từ chè xaiilì Việt Nam vói dung mơi methanol phương pháp ngấm kiệt, có diệt men nguyên liệu bầng cồn ùirớc kill chiết, loại tạp bầng natri clorid 10% pH 3,5 c ấ t thu hồi dung môi nhiệt độ 60°c áp suất 160 mmHg Phương pháp cho hiệu suất chiết catechin khoảng 8,4% hàm lượng EGCG ữong catechin klioảng 25,4% Cao so với phương pháp dùng dung môi nước nóng hay ethanol Đã xây dựng dự thảo tiêu chiiầi sờ catechm tiêu cảm quan, độ ẩm, pH Định tínli, địnli lượng EGCG ừong cateclún phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao Đã bước đầu đánh giá độ ổn định catechin ừong chế phẩm chiết xuất ữong viên nén bao phim Sơ kết cho ứiấy hàm lượng EGCG tirơng đổi ổn địnli frong điều kiện bảo quản nhiệt độ 20 - 25*^0, bao bì franh ẩm, ừánh ánh sáng tốt.Chế phẩm đưa vào sản xuất dạng bào chế ĐÊ XUẤT: Đánh giá đầy đủ thành phần khác catechin EC, ECG, EGC có chè xanh Việt Nam Khảo sát ảnh hưởng chất chống oxy hố đưa vào trone q trình chiết việc chiết xuất catechÌR từ chè xanh Việt Nam Tiếp tỊic theo dõi độ ổn địnli chế phẩm catechin 57 TÀI LIỆU T H A M KH ẢO Tài liệu tiếng việt: Phạm Ngọc Bùng (] 999); Độ ôn định thuốc cách xác định, tài liệu sau đại học - Chuyên đề sinh dược học dạng bào chế, trường Đại học Dược, Tr 290 Đ ặng Ngọc Dung (2002); Chiết xuất đánh giá sơ thành phần polyphenol chè xanh Việt Nam - Tạp chí nghiên cứu y học Đại học y Hà Nội số 18/2/2002, Tr.35-39 Đỗ Thị Gấm (2001); Nghiên cứu số đặc điểm hoá học tác diing sinh học chất thực vật thứ sinh chè C am ellia sinensis o k u n tze - Luận văn thạc sỹ Dược học, Đại học y Hà Nội, Tr 35 - 50 Vũ Ngọc Hoài, Đỗ Văn Ngọc (1998); Tuyển tập cơng trình nghiên cứu chè , NXB N ông Nghiệp, Tr 20 -30 Nguyễn Khôi (1996); Các chất Catechin chè, Tạp chí Dược học số 12, Tr 26-28 Đ ặng Hanh Khôi (1983); Chè công dụng, NXB Khoa học kỹ thuật Hà NỘI, T r l - Đỗ Tất Lợi ( 2003); N hững thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học Hà NỘI, Tr 187-188 Trịnh Văn Lẩu (1995); Phương pháp nghiên cứu độ ổn định thuốc, Viện kiểm nghiệm, Bộ Y tế Nguyễn Thị Bích Ngọc (2003); Nghiên cứu tác diintĩ hạ gliico huyết dịch chiết chè xanh, luận vãn tốt nghiệp Dược sỳ, Đại học Dược Hà Nội, Tr 25 -28 ỈO Ngô Văn Thành Triệu Quang Điệt (1995); Nghiên cứu tách chiết catechin thử tác dụng bảo vệ phóng xạ chuột nhắt trắng SW ISS - Tạp chí Y học cồ truyền Việt Nam 262/ số 12/1995,Tr 6-8 58 11 V ũ T hy Thư, Đ oàn H ồng T iến (2001 ); C ác hợp chất có chè vả m ột số phương pháp phân tích thơng dụng sàn xuất chè Việt Nam, N X B N ông Nghiệp, Tr.32-57 12 Mai Tun, Vũ Bích Lan, Ngơ Đại Q uang (1999); Nghiên cứu chiết xuất xác định tác dụng kháng oxi hoá Polyphenol từ chè xanh Việt N am ~ H ố học cơng nghiệp hoá chất, số 13 Lê Thế Trung cộng (2000); Nghiên cứu số tác dụng y sinh học chè Bảo Thọ- Tạp chí thơng tin Y Dược số 1/2000, Tr.21-23 14 Bộ môn Dược Liệu - Trường Đại học Dược; Bài giảng dược liệu I, II - N X B Y học Hà Nội Tài iiệu nước ngoài: 15 Beecher G.R, W arden B.A, Merken H (1999); Analysis o f tea polyphenols; Pros Soc Exp Bioemed, 220(4), p p 267-270 16 G raham H N (1992); Green tea composition Consumption, and polyphenol chemistry; Prev Med, 21(3), p p 334-350 17 Han c (1997); Seveem ing o f anti careinogenin ingredients in tea polyphenols; Cancer len, 114(1-2), p p 153-158 18 Pharm aceutical com position containing Catechin for treating degenerative affections o f the articular cartilage/ patent number; GB 2089658/ Applicant: Continental Pharma, pp - 19 Hara Yukihiko (1996) Process for the production o f tea catechins/ Patent number: U S 13672/ Inventor: Hara Yiikihiko/ Applicant: M itsu norin Co Ltd; pp 1-15 20 R ecord to - M E D L IN E (R) on CD 2002/12 - 2003/06 59 PH Ụ LỤC Phụ lục 1: sắ c ký đồ m ẫu chuẩn EG CG máy sắc ký lỏng hiệu cao Phụ lục 2: sắ c ký đồ m ẫu catechin chiết dung môi ethanol Phụ lục 3: sắ c ký đồ m ẫu catechin chiết dung môi methanol Data File C:\HPCHEM\1\DATA\CATECHIN\2 04 05-3.D p k u Lu Mau chuan Inj action Date Sample Name -.cq Operator Method Sam ple Name: P h u U ’C A 4/24/05 11:25:18 AM Mau PG t C G QA C : \HPCKEM\1\METH0DS\CATECHIN.M 4/24/05 11:26:53 AM by QA Vial : (moGiried arter loading) ihao xac dinh linh T? Polyphenol trcng dich die ch Phuong pha DAD1 E, Sig=280,15 R ef=360,100 {C ATEC H IN \240405-3.D ) mAU 14 12 10 - 10 20 15 Area Percent Report Signal Sorted By Multiplier Dilution 1.0000 1.0000 Signal 1: DADl E, sig=280,16 Ref=360,100 Peak RetTime Type # [min] IsyiBD'BB Totals : width [rain] Area [mAU*s] Height [raAU] Area % Õ.9247 976.31726 14.66498 100.0000 976.31726 14.66498 Results obtained with enhanced integrator! '*** End of Report *** Instrument 4/24/05 11:52:07 AM QA Page of Data E-ile C:\HPCHEM\1\DATA\CATECHIN\2 4 05-1.D Irríection DatỄ Samole Name Aoq Oceracor Name: pjr)L! Li j r p p ị ^ u< c thu mau vang H au Sam ple ‘1/24/05 10:31:47 AM Mau chiet vang QA C:\H?CHSM\l\METKCDS\CATECr ■Ị/2 4/05 10:56:19 AM by QA I SC : 4/24/05 1 : : AM by QA (rnodified after leading) '.uor.a phap xac dinh TP PolyDhencl dic changed anh ^O AD I E, Sig=280.16 R ef=3 60 J0 '(C A T E C H IN \2 04 ũ -1 D ) mAU P í 17.5 15 12.5 - 10 2.5 10 20 15 Area Percent Report Sorted By Multiplier Dilution Signal 1: DADl E, Sig=2 0, 16 Ref=360, 100 Peak ReitTime Type # [nin] o Signal 1.0000 1.0000 312 B3 5.033 6.244 vv 7.042 VB 696 pp 12 075 BB 13 139 B3 Width [min] Area [mAU*s] 0.1748 19J7 0.2635 0.2664 9.92454 8.71634e-l 4'7“82 05595e-l 6.60555 114!0902i 318 91812 13.33735 24 31622 6.59506e-l 0.4362 4582 0.7494 Totals Height [mAU] 127.14823 i 31219 4.00710 13.27396 1295.18839 44.51569 Area 0.7663 G 313 3.8083 24.6233 1.8774 9.8170 53.3754 Results obtained with enhanced integrator! Ins-rument 4/24 /05 1:27:34 QA Page of Data File C:\HPCHEM\1\DATA\CATECHIN\2 4 5-2.D Mau chu mau Injection Đâte Saníole Name Sample P K ọ L ụ C , 4/24/05 10:58:22 AM Mau chiet QA C: \HPCHEM\1\MET1!0ĐS\CATH:CH IN.M 4/24/05 10:56:19 AM by QA 4/24/05 IÌỈ 26Ĩ 53 Ăm by QA ' (rriOdified after loadina) TP Polyphenol Poiyphenoi die Phuona phar xac dinn dinh T? ' d a DI E Sig=280,16 R ef=360,10o'{C A T E C H IN \240405-2 D) mAU 15 12.5 10 7,5 2,5 10 20 15 Area Percent Report Sorted By Multiplier Dilution Signal 1.0000 1.0000 Signal 1: DAĐ1 Peak RetTirae Type # Totals 4.324 5.104 6.27 7,068 12.14 18.250 : 3B ?3 FP V3 B3 BB Sig=280,16 Ref=350,100 width [mini c Ĩ57 0.1926 0.2575 Ũ.2591 0.458 0.9006 Area [n\AU*s] Height rmi\u] Area 11.336 01 1.07826 0.7 33 9.28749 6.83259e-l 0.6C62 77.39957 4.66564 5.0517 208.92254 12.35596 13.6360 149.74944 4.31752 9.7739 1075.38969 1.7.i7204 70,1889 1532.13704 40.78268 Results obtained with enhanced integrator! *** End of Report *** instrun'.er.c /2 4/05 11:27:06 AM QA ■ ... sơ thành phần Polyphenol từ chè xanh Việt Nam [2] Một sổ công trĩnh nghiên cứu ừ'ên giới: p.Thompson số nhà khoa học khác nghiên cứu tìm công bổ tanin chè gồm bốn loại catechin cho thấy chúng... sở chế phẩm Catechin chiết từ chè xanh Việt Nam Bước đầu đánh giá độ ổn định thành phần catechm ch ếp h â m chiếl viên nén bao phim PHẦN TỒNG QUAN 1.1 CÂY CHÈ 1.1.1 Đặc điểm chè Cây chè có tên... trình nghiên cứu nước giới M ộ t sổ công trĩnh nghiên cứu Việt Nam Kỹ sư N gô Văn Thành DS Triệu Duy Điệt nghiên cứu tách chiết catechin từ vỏ Xoan Trà từ tỉnh Vĩnh Phú thử tác dụng bảo vệ phóng

Ngày đăng: 23/06/2019, 13:47

Từ khóa liên quan

Tài liệu cùng người dùng

Tài liệu liên quan