TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC TƠN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƯỞNG VÀ HỢP CHẤT HỮU CƠ ĐẾN QUÁ TRÌNH NUÔI CẤY IN VITRO LAN TRẦM ĐIỆN BIÊN (Dendrobium parishii) Giảng viên hướng dẫn: TS PHAN TƯỜNG LỘC Sinh viên thực hiện: NGUYỄN TRỌNG QUANG Lớp: 14060301 Khoá: 18 THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2018 TỔNG LIÊN ĐỒN LAO ĐỘNG VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƯỞNG VÀ HỢP CHẤT HỮU CƠ ĐẾN Q TRÌNH NI CẤY IN VITRO LAN TRẦM ĐIỆN BIÊN (Dendrobium parishii) Giảng viên hướng dẫn: TS PHAN TƯỜNG LỘC Sinh viên thực hiện: NGUYỄN TRỌNG QUANG Lớp: 14060301 Khố: 18 THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2018 LỜI CÁM ƠN Quãng đường đại học bốn nắm, nghe dài lặng lẽ trơi qua Rồi đến lúc hệ sinh viên cất cao đôi cánh dời khỏi giảng đường đại học để dấn thân vào cống hiến cho xã hội, cho gia đình Thời gian ngồi mái trường Đại học Tôn Đức Thắng khơng q dài cho tơi kỉ niệm không quên từ môn học chuyền lượng cho nhiệt huyết cháy bỏng đến không gian sơi động hoạt động giải trí Khóa luận tốt nghiệp cột mốc cuối đánh dấu kết thúc chặng đường mở chặng đường Nhân dịp muốn gửi lời cảm ơn chân thành đến đấng sinh thành dưỡng dục Chắc hẳn khơng có lời cám ơn đáp lại cho đủ cơng ơn bố mẹ, cám ơn bố mẹ ln chỗ dựa vững cho dù hoàn cảnh nào, hậu phương vững để tiến bước vào tương lại tươi sáng Tôi muốn gửi lời cám ơn trường thân thương tôi, trường Đại học Tôn Đức Thắng Nơi mà đươc mở mang tri thức giúp xây dựng ước mơ Cho môi trương thật tốt để học tập rèn luyện thân Cám ơn khoa Khoa học ứng dụng thầy cô khoa tận tình bảo tơi khơng kiến thức mà cho bao học đối nhân sử giúp tự tin giao tiếp Tôi muốn gửi lời cám ơn chân đến Công ty TNHH Nông Vinh tạo điều kiện tốt cho tơi hồn thành nhiệm vụ khóa luận Nhân muốn gửi lời cám ơn đến thầy Phan Tường Lộc, người hướng dẫn để giúp tơi hồn thành tốt khóa luận này, khơng người mà tối đặc biệt kính trọng Tơi thán phục giảng viên lớn tuổi ln tìm tòi đổi để giúp chúng tơi có tảng tốt mơn học Cuối muốn gửi lời chúc sức khỏe có sống hạnh phúc tới người thân thương LỜI CAM ĐOAN CÔNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC TƠN ĐỨC THẮNG Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng hướng dẫn khoa học TS Phan Tường Lộc Các nội dung nghiên cứu, kết đề tài trung thực chưa cơng bố hình thức trước Những số liệu bảng biểu phục vụ cho việc phân tích, nhận xét, đánh giá tác giả thu thập từ nguồn khác có ghi rõ phần tài liệu tham khảo Ngồi ra, luận văn sử dụng số nhận xét, đánh số liệu tác giả khác, quan tổ chức khác có trích dẫn thích nguồn gốc Nếu phát có gian lận tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm nội dung luận văn Trường Đại học Tôn Đức Thắng không liên quan đến vi phạm tác quyền, quyền gây q trình thực (nếu có) TP Hồ Chí Minh, ngày tháng năm Tác giả TĨM TẮT NGUYỄN TRỌNG QUANG, Đại học Tôn Đức Thắng, tháng 2/2019 “KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƯỞNG VÀ HỢP CHẤT HỮU CƠ ĐẾN Q TRÌNH NI CẤY IN VITRO LAN TRẦM ĐIỆN BIÊN (Dendrobium parishii)” Giảng viên hướng dẫn: TS Phan Tường Lộc Đề tài thực phồng thí nghiệm cơng ty TNHH Nơng Vinh đối tượng lan Trầm Điện Biên (Dendrobium parishii): Khảo sát khả nhân chồi môi trường MS bổ sung BAP; BAP Kinetin kết hợp NAA Khảo sát sinh trưởng lan Trầm Điện Biên (Dendrobium parishii) mơi trường ½ MS, 25g/L đường, 8g/L agar bổ dung dịch chiết hữu Đồng thời khảo sát khả tạo rễ chồi in vitro mơi trường ½ MS + 0,5g/L than hoạt tính bổ sung NAA nồng độ khác Môi trường MS có chứa 25g/L đường, 8g/L agar, 100ml nước dừa, bổ sung 1,0mg/L BAP cho kết nhân chồi tốt đạt 7,67 ± 0,34 chồi/mẫu cấy, chồi cao 2,49 ± 0,06cm, 6,22 ± 0,19 nuôi cấy in vitro lan Trầm Điện Biên (Dendrobium parishii) sau 60 ngày Môi trường nhân chồi tối ưu sau 60 ngày nuôi cấy in vitro lan Trầm Điện Biên (Dendrobium parishii) mối trường MS chứa 25g/L đường, 8g/L agar, 100ml nước dừa, bổ sung 2,0mg/L BAP 1,0mg/L NAA cho kết đạt 6,89 ± 0,96 chồi/mẫu cấy, chiều cao chồi 1,76 ± 0,05cm Trong mơi trường ½ MS có bổ sung 20 g/L khoai tây cho kết tốt việc thúc đẩy trình sinh trưởng lan Trầm Điện Biên (Dendrobium parishii) sau 60 ngày ni cấy; chiều cao chồi trung bình đạt 3,78 ± 0,09 cm; chồi có 6,99 ± 0,22 lá; 8,22 ± 0,69 rễ/ mẫu cấy chiều dài rễ 1,06 ± 0,14cm Mơi trường thích hợp cho giai đoạn tạo rễ nuôi cấy in vitro lan Trầm Điện Biên (Dendrobium parishii) 1/2MS bổ sung 2,0mg/L NAA 0,5g/L than hoạt tính Kết thu được; 10,89 ± 0,51 rễ/mẫu cấy rễ dài 0,66 ± 0,05cm sau 60 ngày nuôi cấy MỤC LỤC LỜI CÁM ƠN .i LỜI CAM ĐOAN ii TÓM TẮT iii MỤC LỤC iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT .vii DANH MỤC HÌNH .viii DANH MỤC BẢNG ix DANH MỤC BIỂU ĐỒ .x Chương MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu 1.3 Nội dung thí nghiệm Chương 2: TỔNG QUAN 2.1 Tổng quan nuôi cấy mô 2.1.1 Lich sử nuôi cấy mô .3 2.1.2 Các phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật [2] 2.1.3 Môi trường nuôi cấy 2.1.3.1 Khoáng đa lượng [2] 2.1.3.2 Khoáng vi lương [2] [3] .4 2.1.3.3 Đường [2] 2.1.3.4 Vitamin [3] 2.1.3.5 Các chất điều hòa sinh trưởng [3] [2] 5 2.1.3.6 Các yếu tố khác 2.1.4 Các loại môi trường 2.2 Tổng quan đối tượng nghiên cứu 2.2.1 Sơ lược chi lan hoàng thảo Dendrobium 2.2.1.1 Phân loại, đa dạng phân bố [4] 2.2.1.2 Đặc điểm hình thái .9 2.2.1.3 Các yếu tố tác động đến phát triển Dendrobium 12 2.2.2 Phân loại lan Trầm rừng Điện Biên (Dendrobium parishii) 14 2.2.3 Sơ lược lan trẩm rừng Điện Biên (Dendrobium parishii) .14 2.3 Tình hình nghiên cứu 15 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 3.1 Địa điểm 17 3.2 Thời gian 17 3.3 Vật liệu thí nghiệm 17 3.4 Thiết bị dụng cụ thí nghiệm 17 3.5 Môi trường nuôi cấy 17 3.6 Điều kiện nuôi cấy 17 3.7 Phương pháp thí nghiệm 18 3.7.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân chồi lan trầm Điện Biên (Dendrobium parishii) in vitro 18 3.7.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng kết hợp BAP, Kinetin NAA đến hình thành chồi lan trầm Điện Biên (Dendrobium parishii) in vitro 19 3.7.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng môi trường nuôi cấy bổ sung chất hữu đến sinh trưởng lan trầm Điện Biên (Dendrobium parishii) in vitro .20 3.7.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả tạo rễ lan trầm Điện Biên (Dendrobium parishii) in vitro 21 3.8 Phương pháp lấy số liệu 21 3.9 Phương pháp xử lý số liệu 22 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .23 4.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân chồi lan trầm Điện Biên (Dendrobium parishii) in vitro 23 4.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng kết hợp BA, Kinetin NAA đến hình thành chồi lan trầm Điện Biên (Dendrobium parishii) in vitro 28 4.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng môi trường nuôi cấy bổ sung chất hữu đến sinh trưởng lan trầm Điện Biên (Dendrobium parishii) in vitro .33 4.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả tạo rễ lan trầm Điện Biên (Dendrobium parishii) in vitro 36 CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 39 5.1 Kết luận .40 5.2 Kiến nghị 40 PHỤ LỤC .40 PHỤ LỤC .41 TÀI LIỆU THAM KHẢO .54 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ANOVA : Analysis Of Variance (Phân tích phương sai) BAP : 6-benzylaminopurine CV : Coeff Var (hệ số biến thiên) NAA : α-naphthaleneaceticd DANH MỤC HÌ Hình 1: Dendrobium Phalaenopsis [31] Hình 2: Dendrobium nobile [30] .9 Hình 3: Cấu tạo lan Dendrobium [32] .10 Hình 4: Dendrobium parishii [33] 14 Hình 5: Dendrobium parishii var.semi alba [33] 15 Hình 6: Dendrobium var.alba [34] .15Y Hình 1: Ảnh hưởng nông độ BAP đến hình thành chồi lan Trầm Điện Biên (Dendrobium paishii) in vitro ngày 30 .24 Hình 2: Ảnh hưởng nơng độ BAP đến hình thành chồi lan Trầm Điện Biên (Dendrobium paishii) in vitro ngày 60 .26 Hình 3: Ảnh hưởng kết hợp BA, Kinetin NAA đến hình thành chồi lan trầm Điện Biên (Dendrobium parishii) in vitro ngày 60 32 Hình 4: Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy bổ sung chất hữu đến sinh trưởng lan Trầm Điện Biên (Dendrobium parishii) in vitro ngày 60 .34 Hình 5: Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả tạo rễ lan Trầm Điện Biên (Dendrobium parishii) in vitro ngày 60 37 42 KI 0,83 Na2MoO4.2H2O 0,25 CuSO4.5H2O 0,025 CoCl2.6H2O 0,025 Vitamin amino acid Thiamin-HCl 0,1 Nicotinic Acid 0,1 Pirydoxine 0,1 Biotin 0,01 Meso-inosito 100 PHỤ LỤC XỬ LÝ SỐ LIỆU Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân chồi lan trầm Điện Biên (Dendrobium parishii) in vitro ANOVA : SỐ LÁ 43 ANOVA: SỐ CHỒI 44 45 ANOVA: CHIỀU CAO CHỒI (cm) Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng kết hợp BA, Kinetin NAA đến hình thành chồi lan trầm Điện Biên (Dendrobium parishii) in vitro 46 ANOVA: SỐ CHỒI ANOVA: SỐ LÁ 47 ANOVA: CHIỀU CAO CHỒI 48 49 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng môi trường nuôi cấy bổ sung chất hữu đến sinh trưởng lan trầm Điện Biên (Dendrobium parishii) in vitro ANOVA: SỐ LÁ 50 ANOVA: CHIỀU CAO CHỒI 51 ANOVA: SỐ RỄ 52 ANOVA: CHIỀU DÀI RỄ 53 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả tạo rễ lan trầm Điện Biên (Dendrobium parishii) in vitro ANOVA: SỐ RẾ 54 ANOVA: CHIỀU DÀI RỄ 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Đào Thanh Vân Đặng Thị Tố Nga (2008), Giáo trình hoa lan, NXB Nơng nghiệp Dương Công Kiên (2002), Nuôi cấy mô thực vật, Nhà xuất đại học quốc gia TP HCM Ngô Xn Bình (2010), Ni cấy mơ tế bào thực vật NXB Khoa học kỹ thuật Dương Công Kiên (2006), Nuôi cấy mô tập kỹ thuật nhân giống – lai tạo trồng số giống lan (orchid) thông dụng có giá trị kinh tế Việt Nam, Tủ sách đại học khoa học tự nhiên Trần Văn Bảo, Kỹ thuật nuôi trồng phong lan, Nhà xuất trẻ Nguyễn Thanh Tùng cộng (2010), Áp dụng phương pháp nuôi cấy lát mỏng tế bào nhan giống in vitro lan Hoàng thảo thân gẫy (Dendrobium aduncum), tạp chí cơng nghệ sinh học tập số Nguyễn Văn Việt (2017),Ứng dụng kỹ thuật ni cấy in vitro nhân giống lan Hồng Thảo kèn (Dendrobium lituiflorum Lindley), Tạp chí khoa học công nghệ lâm nghiệp số 4-2017 Nguyễn Văn Song (2011), Nhân nhanh in vitro lan Kim Điệp (Dendrobium chrysotoxum)- Một số loại lan rừng có nguy tiệt chủng, Tạp chí khoa học số 64 Nguyễn Văn Kết, Nguyễn Văn Vinh (2010), Nghiên cứu khả nhân giống loài lan Hoàng Thảo sáp (Dendrobium crepidatum Lindl.& Paxt) in vitro, Tạp chí khoa học cơng nghệ tập 48 số 10 Lê Thị Thúy (2016), Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật mơi trường nuôi cấy lên khả tăng sinh chồi rễ in vitro lan Hoàng thảo Shavin white (Dendrobium shavin white) Tài liệu Tiếng Anh 56 11 George EF, Hall MA, Deklerk GJ (2008) Plant propagation by tissue culture Springer, 1: 206-217 12 Husen A, Pal M (2007) Metabolic changes during adventitious root primordium development in Tectona grandis Linn f (teak) cuttings as affected by age of donor plants and auxin (IBA and NAA) treatment New Forests, 33: 309-323 13 Ket N V., E J Hahn, S Y Park, D Chakrabarty, and K Y Paek - Micropropagation of an Endangered Orchid Anoectochilus formosanus, Biologia Plantarum 48 (3) (2003) 339-344 14 Laurain D., Chenieux J., TremouillauxGuiller C J., 1993 Direct embryogenesis from female haploid protoplasts of Ginkgo balboa L., a medicinal woody species Plant Cell Rep., 12: 656-660 Tài liệu internet 15 www.kopf-orchideen.de/en/Species/Spezies-from-D-to-H/Dendrobium-nobile 16 www.overstock.com/Home-Garden/Silk-31.5-inch-Phalaenopsis-Orchids-Setof-12-31.5-H-x-8.5-W-x-3-D/5169604/product.html 17 vietnamnongnghiepsach.com.vn 18 www.currlin.com/en 19 www.orchidee-diffusion.com/en 20 https://vi.wikipedia.org/wiki/Nước_dừa ... NGHIỆP KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƯỞNG VÀ HỢP CHẤT HỮU CƠ ĐẾN QUÁ TRÌNH NUÔI CẤY IN VITRO LAN TRẦM ĐIỆN BIÊN (Dendrobium parishii) Giảng viên hướng dẫn: TS PHAN TƯỜNG LỘC Sinh viên... chồi lan trầm Điện Biên (Dendrobium parishii) in vitro 28 4.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng môi trường nuôi cấy bổ sung chất hữu đến sinh trưởng lan trầm Điện Biên (Dendrobium parishii) in. .. chồi lan trầm Điện Biên (Dendrobium parishii) in vitro 19 Bảng 3: Các nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng môi trường nuôi cấy bổ sung chất hữu đến sinh trưởng lan trầm Điện Biên (Dendrobium parishii)