TÓM TẮT Những năm gần đây, việc sử dụng vi khuẩn lactic chất thay kháng sinh thực phẩm quan tâm Sự thích nghi tự nhiên nhiều vi khuẩn lactic môi trường ruột chất kháng khuẩn chúng tạo acid hữu bacteriocin cho vi khuẩn lactic thuận lợi cạnh tranh so với vi sinh vật khác Do có nhiều nghiên cứu chứng minh nhóm vi khuẩn lactic phân lập loại thực phẩm lên men có khả sinh chất kháng khuẩn Dạng chất kháng khuẩn có khả chống lại phát triển mầm bệnh ứng dụng chất bảo quản thực phẩm.Vì đề tài tiểu luận: “ Khảo sát khả ức chế Escherichia Coli Salmonella typhimurium vi khuẩn acid lactic phân lập từ rau muối chua” thực với mục tiêu phân lập tuyển chọn số dòng vi khuẩn lactic có khả sinh chất kháng khuẩn thực phẩm len men tự nhiên Nội dung khảo sát phân lập mẫu vi khuẩn lactic từ sản phẩm rau muối chua Quan sát đặc điểm hình thái, kiểm tra đặc tính sinh hóa nhuộm gram, catalase, oxydase, citrate, để dịnh sơ bộ, cuối khảo sát khả sinh chất kháng khuẩn phương pháp khuếch tán giếng thạch phương pháp nhỏ giọt kết hợp với vi khuẩn thị Escherichia coli Salmonella typhimurium Kết từ 85 mẫu thu thập như: măng chua, dưc cải muối chua, dưa leo muối chua, giá đỗ, củ kiệu, kim chi tiến hành phân lập thu 10 mẫu vi khuẩn lactic Về đặc điểm hình thái khuẩn lạc hầu hết có dạng hình tròn, màu trắng đục trắng ngà, bìa nguyên, bề mặt trơn láng bóng khơ, độ lài lài Kiểm tra sinh hóa: tiến hành nhuộm gram 10 mẫu vi khuẩn lactic có dạng hình que dài hình que ngắn, xếp thành chuỗi dài có mẫu hình chuỗi ngắn; kết thử catalase 10 mẫu vi khuẩn lactic cho kết âm tính (-) khơng có tượng sủi bọt; kết thử oxydase 10 mẫu vi khuẩn lactic cho kết âm tính (-) khơng chuyển màu; kết thử citrate 10 mẫu vi khuẩn lactic cho kết âm tính (-) có màu xanh Kết thử khả kháng khuẩn sau 24 từ 10 mẫu vi khuẩn lactic phân lập có mẫu: DL1A, MC2, MC3B, KC3B, DC9, GĐ1 có xuất vùng sáng vơ khuẩn xung quanh bề mặt vi khuẩn lactic với kích thước khác Phương pháp khuếch tán giếng thạch từ vi khuẩn đối chứng Escherichia coli tiêu biểu mẫu KC3A có đường kính vòng sáng rộng 13,66mm thể tính kháng khuẩn mạnh Phương pháp khuếch tán giếng thạch từ vi khuẩn đối chứng Salmonella typhimurium tiêu biểu mẫu MC2 có đường kính vòng sáng rộng 12,33mm thể tính kháng khuẩn mạnh Phương pháp nhỏ giọt từ vi khuẩn đối chứng Escherichia coli tiêu biểu mẫu DL1A có đường kính vòng sáng rộng 13,66mm nên thể tính kháng khuẩn mạnh Cuối phương pháp nhỏ giọt từ vi khuẩn đối chứng Salmonella typhimurium tiêu biểu mẫu DL1A có đường kính vòng sáng rộng 14,33mm, thể tính kháng khuẩn mạnh Tuy tất mẫu vi khuẩn lactic có khả tổng hợp chất kháng khuẩn tính kháng khuẩn chúng yếu Vì vậy, mẫu vi khuẩn lactic mẫu phân lập sinh kháng khuẩn yếu Do cần khảo sát thêm đặc tính khác vi khuẩn lactic ( sinh acid hữu cơ) Bên cạnh định danh vi khuẩn cần kết hợp linh hoạt hai phương pháp truyền thống ( hệ thống phân loại Bergey) đại ( giải trình tự gen 16s rRNA ) để có kết tin cậy, đồng thời tiết kiệm thời gian chi phí MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN .i CAM KẾT KẾT QUẢ .ii TÓM TẮT iii DANH SÁCH BẢNG ix DANH SÁCH HÌNH x DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT xii CHƯƠNG MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU TỔNG QUAN KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN CỦA VI KHUẨN LACTIC .3 1.1 Bacteriocin .3 1.1.1 Giới thiệu chung Bacteriocin 1.1.2 Khả kháng khuẩn Bacteriocin .3 1.2 Khả kháng khuẩn axit hữu TỔNG QUAN VỂ VI KHUẨN LACTIC 2.1 Đặc điểm chung .4 2.2 Sự phân bố .6 2.3 Phân loại vi khuẩn lactic 2.4 Nhu cầu dinh dưỡng yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng vi khuẩn lactic 2.5 Những ứng dụng vi khuẩn lactic 2.6 Tính kháng khuẩn vi khuẩn lactic 11 2.7 Quá trình lên men vi khuẩn lactic 11 TỔNG QUAN VỀ VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI (E.COLI) VÀ SALMONELLA TYPHIMURIUM (SAL) 12 3.1 Vi khuẩn Escherichia coli (E.coli) .12 3.1.1 Phân loại khoa học (Castellani & Chalmers, 1919) 12 3.1.2 Đặc điểm Escherichia Coli (Nguyễn Lân Dũng, 2008) 12 3.2 Vi khuẩn Salmonella typhimurium (SAL) 13 3.2.1 Giới thiệu chung .13 3.2.2 Đặc diểm Salmonella typhimurium: .13 3.2.3 Hình thể tính chất bắt màu 14 3.2.4 Nuôi cấy, phân lập 14 TỔNG QUAN VỀ CÁC SẢN PHẨM LÊN MEN 15 4.1 Khái niệm .15 4.2 Nguyên liệu 16 4.2.1 Dưa cải muối chua 16 4.2.2 Dưa leo muối chua 16 4.2.3 Cà pháo tím 16 4.3 Gia vị sản phẩm lên men 17 4.4 Vi sinh vật 17 4.5 Cơ chế trình 17 4.6 Qui trình cơng nghệ muối chua 18 4.7 Điều kiện thích hợp 18 4.8 Đánh giá sản phẩm lên men 19 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU VI KHUẨN LACTIC TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC 19 5.1 Tình hình nghiên cứu vi khuẩn lactic nước 19 5.2 Tình hình nghiên cứu vi khuẩn lactic ngồi nước 20 CHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 ĐỊA ĐIỂM VÀ THỜI GIAN NGHIÊN CỨU 21 MẪU NGHIÊN CỨU .21 THIẾT KẾ NGHIÊN CỨU .21 CÔNG CỤ NGHIÊN CỨU 21 4.1 Phương pháp lấy mẫu: 21 4.2 Thiết bị dụng cụ nghiên cứu: 21 4.3 Mơi trường hóa chất 21 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 5.1 Phân lập vi khuẩn lactic từ mẫu: dưa cải muối chua, măng chua, kim chi, dưa leo muối chua, giá đỗ 22 5.2 Quan sát đặc điểm hình thái kiểm tra đặc tính sinh hóa để nhận diện vi khuẩn lactic 22 5.2.1 Quan sát đặc điểm hình thái .22 5.2.2 Kiểm tra đặc tính sinh hóa .23 5.3 Khảo sát khả sinh chất kháng khuẩn chủng vi khuẩn lactic phân lập 26 5.3.1 Khoanh giấy kháng sinh 26 5.3.2 Chuẩn bị môi trường 27 5.3.3 Chuẩn bị vi khuẩn lactic 27 5.3.4 Chuẩn bị vi khuẩn đối chứng Escherichia Coli Salmonella typhimurium 27 5.3.5 Thử khả sinh chất kháng khuẩn .27 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 KẾT QUẢ PHÂN LẬP MẪU VI KHUẨN LACTIC TRONG 85 MẪU SẢN PHẨM, QUAN SÁT ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI KHUẨN LẠC VÀ KIỂM TRA SINH HÓA CÁC MẪU VI KHUẨN PHÂN LẬP ĐƯỢC 29 1.1 Kết phân lập mẫu vi khuẩn lactic 85 mẫu thu thập quan sát hình thái khuẩn lạc chúng 29 1.2 Kết kiểm tra sinh hóa mẫu vi khuẩn phân lập 32 1.2.1 Kết nhuộm gram mẫu vi khuẩn phân lập 32 1.2.2 Kết thử catalase, thử oxydase thử citrate mẫu vi khuẩn phân lập 33 1.3 Kết xác định chọn lọc mẫu vi khuẩn lactic có tính kháng khuẩn cao 38 THẢO LUẬN .44 CHƯƠNG 5.KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 46 KẾT LUẬN .46 ĐỀ NGHỊ 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO .47 PHỤ LỤC A 49 PHỤ LỤC B 51 PHỤ LỤC C .52 DANH SÁCH BẢNG Tran Bảng 2.1 Các chi vi khuẩn lactic, kiểu lên men sản phẩm ( Lê Văn Việt Mẫn, 2014) 7Y Bảng 2.1 Các chi vi khuẩn lactic, kiểu lên men sản phẩm ( Lê Văn Việt Mẫn, 2014) Bảng 4.1 Kết phân lập mẫu vi khuẩn quan sát đặc điểm hình thái khuẩn lạc 30 Bảng 4.2 Kết nhuộm gram mẫu vi khuẩn lactic phân lập .32 Bảng 4.3 Kết thử catalase, thử oxydase thử citrate mẫu vi khuẩn lactic phân lập 34 Bảng 4.4 Kích thước vòng kháng khuẩn mẫu vi khuẩn từ vi khuẩn đối chứng Escherichia Coli phương pháp khuếch tán giếng thạch 38 Hình 4.13 Vòng kháng khuẩn mẫu MC2, DL1A, KC3A, MC3B, DC9, GĐ1 39 Bảng 4.5: Kích thước vòng kháng khuẩn mẫu vi khuẩn từ vi khuẩn đối chứng Salmonella typhimurium phương pháp khuếch tán giếng thạch 40 Bảng 4.6 Kích thước vòng kháng khuẩn mẫu vi khuẩn từ vi khuẩn đối chứng Escherichia Coli phương pháp nhỏ giọt 42 Bảng 4.7 Kích thước vòng kháng khuẩn mẫu vi khuẩn từ vi khuẩn đối chứng Salmonella typhimurium phương pháp nhỏ giọt 43 DANH SÁCH HÌNH Trang Hình 2.1 Vi khuẩn lactic hình cầu Hình 2.2 Vi khuẩn lactic hình que .5 (Hoàng Văn Vinh, 2006)(Hoàng Văn Vinh, 2006) .5 Hình 2.3 Vi khuẩn E.coli (Lynn Yarris, 2011) Hình 2.4 Khuẩn lạc vi khuẩn E.coli (Madprime, 2005)…………………………………………………………………… 13 Hình 2.5 Salmonella typhimurium lam nhuộm 14 Hình 2.6 Khuẩn lạc Salmonella môi trường SS Macconkey 15 Hình 2.7 Dưa cải muối chua 16 Hình 2.8 Dưa leo muối chua 16 Hình 2.9 Cà pháo tím muối chua .16 Hình 2.10 Gia vị sản phẩm lên men 17 Hình 2.11 Quá trình lên men .17 Hình 2.12 Qui trình cơng nghệ muối chua .18 Hình 2.13 Đánh giá sản phẩm lên men 19 Hình 3.1 Sơ đồ quy trình nhuộm Gram .24 Hình 3.2 Thử Catalase 25 Hình 3.3 Thử Oxidase .26 Hình 3.4 Thử Citrate 26 Hình 3.5 Mơ tả dòng kháng khuẩn đĩa Petri .28 Hình 4.1 Hình thái khuẩn lạc mẫu măng chua: MC2, giá đỗ: GĐ1 31 Hình 4.2 Hình thái khuẩn lạc mẫu Dưa cải muối chua: DC9, kim chi: KC3A 31 Hình 4.3 Hình thái khuẩn lạc mẫu Dưa leo muối chua: DL1A 31 Hình 4.5 Hình thái tế bào vi khuẩn mẫu DC9 mẫu KC3B 33 Hình 4.6 Hình thái tế bào vi khuẩn mẫu MC2 mẫu DL1A 33 Hình 4.7 Kiểm tra sinh hóa mẫu MC2 35 Hình 4.8 Kiểm tra sinh hóa cuả mẫu GĐ1 35 Hình 4.9 Kiểm tra sinh hóa mẫu DL1A 36 Hình 4.10 Kiểm tra sinh hóa mẫu KC3A 36 Hình 4.11 Kiểm tra sinh hóa mẫu DC9 .37 Hình 4.12 Kiểm tra sinh hóa mẫu MC3B 37 Hình 4.13 Vòng kháng khuẩn mẫu MC2, DL1A, KC3A, MC3B, DC9, GĐ1 vi khuẩn đối chứng Escherichia Coli phương pháp khuếch tán giếng 39 41 Hình 4.14 Vòng kháng khuẩn mẫu MC2, DL1A, KC3A, MC3B, DC9, GĐ1 vi khuẩn đối chứng Salmonella typhimurium phương pháp khuếch tán giếng 41 Hình 4.15 Vòng kháng khuẩn mẫu DL1A, KC3A, MC3B, DC9, GĐ1, MC2 vi khuẩn đối chứng Escherichia Coli phương pháp nhỏ giọt 42 Hình 4.16 Vòng kháng khuẩn mẫu DL1A, KC3A, MC3B, DC9, GĐ1, MC2 vi khuẩn đối chứng Salmonella typhimurium phương pháp nhỏ giọt 44 DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Vi khuẩn lactic Escherichia coli Salmonella typhimurium LAB E.coli SAL 10 Hình 4.12 Kiểm tra sinh hóa mẫu MC3B 4.12a kết kiểm tra catalase oxydase 4.12b kết kiểm tra citrate Dựa vào kết trên, ta kết luận: Những mẫu vi khuẩn phân lập mang đặc điểm thiết yếu vi khuẩn lactic Tuy mẫu vi khuẩn lactic phân lập giống đặc tính chúng khác hình dạng khuẩn lạc, tế bào nguồn gốc mẫu phân lập, chứng tỏ hệ vi khuẩn lactic sống khắp nơi đa dạng loài đặc trưng cho sản phẩm 1.3 Kết xác định chọn lọc mẫu vi khuẩn lactic có tính kháng khuẩn cao Sau 24 giờ, 10 mẫu vi khuẩn lactic phân lập từ 85 mẫu sản phẩm có mẫu: DL1A, MC2, MC3B, KC3B, DC9, GĐ1 có xuất vùng sáng vô khuẩn xung quanh bề mặt vi khuẩn lactic với kích thước khác Đối với mẫu vi khuẩn tạo vòng kháng khuẩn kích thước vòng kháng khuẩn thể bảng 4.4 Bảng 4.4 Kích thước vòng kháng khuẩn mẫu vi khuẩn từ vi khuẩn đối chứng Escherichia Coli phương pháp khuếch tán giếng thạch Kích thước vòng kháng khuẩn (mm) Mẫu phân lập Đánh giá Lần Lần Lần Trung bình DL1A 13 11 11 11,66 Kháng khuẩn mạnh DC9 10 10 11 10,33 Kháng khuẩn mạnh Kháng khuẩn mạnh KC3A 13 15 13 13,66 MC2 10 14 11 Kháng khuẩn mạnh MC3B 11 13 12 12 Kháng khuẩn mạnh 0 0 GĐ1 Khơng kháng 36 khuẩn Hình 4.13 Vòng kháng khuẩn mẫu MC2, DL1A, KC3A, MC3B, DC9, GĐ1 vi khuẩn đối chứng Escherichia Coli phương pháp khuếch tán giếng Theo kết ta thấy:  Phương pháp khuếch tán giếng từ vi khuẩn đối chứng Escherichia Coli: mẫu vi khuẩn DL1A, DC9, KC3A, MC2, MC3B có đường kính vòng sáng lớn 10mm nên thể tính kháng khuẩn mạnh Tiêu biểu, mẫu KC3A có đường kính vòng sáng rộng 13,66mm, thể tính kháng khuẩn mạnh Trong mẫu GĐ1 khơng có vòng kháng khuẩn 37 Bảng 4.5: Kích thước vòng kháng khuẩn mẫu vi khuẩn từ vi khuẩn đối chứng Salmonella typhimurium phương pháp khuếch tán giếng thạch Kích thước vòng kháng khuẩn (mm) Mẫu phân lập Đánh giá Lần Lần Lần Trung bình DL1A 12 12 11 11,66 DC9 10 KC3A 11 13 12 12 MC2 12 12 13 12,33 MC3B 10 14 12 12 GĐ1 0 0 38 Kháng khuẩn mạnh Kháng khuẩn trung bình Kháng khuẩn mạnh Kháng khuẩn mạnh Kháng khuẩn mạnh Khơng kháng khuẩn Hình 4.14 Vòng kháng khuẩn mẫu MC2, DL1A, KC3A, MC3B, DC9, GĐ1 vi khuẩn đối chứng Salmonella typhimurium phương pháp khuếch tán giếng Theo kết ta thấy:  Phương pháp khuếch tán giếng từ vi khuẩn đối chứng Salmonella typhimurium : mẫu vi khuẩn MC2, KC3A, MC2B, DL1A có đường kính vòng sáng lớn 10mm nên thể tính kháng khuẩn mạnh Tiêu biểu, mẫu MC2 có đường kính vòng sáng rộng 12,33mm, thể tính kháng khuẩn mạnh Bên cạnh đó, mẫu vi khuẩn DC9 cho vòng vơ khuẩn nằm khoảng 510mm, biểu tính kháng khuẩn mức trung bình Trong mẫu GĐ1 khơng có vòng kháng khuẩn Bảng 4.6 Kích thước vòng kháng khuẩn mẫu vi khuẩn từ vi khuẩn đối chứng Escherichia Coli phương pháp nhỏ giọt Mẫu phân lập 39 Kích thước vòng kháng khuẩn (mm) Đánh giá Lẩn Lần Lần Trung bình DL1A 0 0 Không kháng khuẩn DC9 10 10 11 10,33 Kháng khuẩn mạnh KC3A 0 0 Không kháng khuẩn MC2 0 0 Không kháng khuẩn MC3B 10 10 10 10 GĐ1 0 0 Kháng khuẩn trung bình Khơng kháng khuẩn Hình 4.15 Vòng kháng khuẩn mẫu DL1A, KC3A, MC3B, DC9, GĐ1, MC2 vi khuẩn đối chứng Escherichia Coli phương pháp nhỏ giọt Theo kết ta thấy:  Phương pháp nhỏ giọt từ vi khuẩn đối chứng Escherichia Coli: mẫu vi khuẩn DC9 có đường kính vòng sáng lớn 10mm nên thể tính kháng khuẩn mạnh Bên cạnh đó, mẫu vi khuẩn MC3B cho vòng vơ khuẩn nằm 40 khoảng 5- 10mm, biểu tính kháng khuẩn mức trung bình Trong có mẫu MC2, GĐ, KC3A, DL1A khơng có vòng kháng khuẩn Bảng 4.7 Kích thước vòng kháng khuẩn mẫu vi khuẩn từ vi khuẩn đối chứng Salmonella typhimurium phương pháp nhỏ giọt Kích thước vòng kháng khuẩn (mm) Mẫu phân lập Lẩn Lần Lần Trung bình DL1A 15 13 15 14,33 DC9 10 8,33 KC3A 0 0 MC2 0 0 MC3B 12 12 10 11,33 GĐ1 0 0 Theo kết ta thấy: 41 Đánh giá Kháng khuẩn mạnh Kháng khuẩn trung bình Khơng kháng khuẩn Khơng kháng khuẩn Kháng khuẩn mạnh Không kháng khuẩn  Phương pháp nhỏ giọt từ vi khuẩn đối chứng Salmonella typhimurium: mẫu vi khuẩn DL1A, MC3B có đường kính vòng sáng lớn 10mm nên thể tính kháng khuẩn mạnh Tiêu biểu, mẫu DL1A có đường kính vòng sáng rộng 14,33mm, thể tính kháng khuẩn mạnh Bên cạnh đó, mẫu vi khuẩn DC9 cho vòng vơ khuẩn nằm khoảng 5-10mm, biểu tính kháng khuẩn mức trung bình Trong có chủng MC2, GĐ1, KC3A khơng có vòng kháng khuẩn Hình 4.16 Vòng kháng khuẩn mẫu DL1A, KC3A, MC3B, DC9, GĐ1, MC2 vi khuẩn đối chứng Salmonella typhimurium phương pháp nhỏ giọt  Tuy nhiên, sau khoảng 48 vùng sáng đĩa kháng khuẩn nhanh chóng bị vi khuẩn Escherichia coli, Salmonella typhimurium mọc lên Nguyên nhân mẫu phân lập có tính kháng khuẩn yếu Vì vậy, kết chưa phân lập dòng vi khuẩn lactic có tính kháng khuẩn mạnh THẢO LUẬN  Về đặc điểm khuẩn lạc: Trên MRS đặc có 0,5% CaCO sau 48 cấy, xung quanh khuẩn lạc vi khuẩn có màu suốt CaCO tan acid tiết từ khuẩn lạc Trên MRS đặc sau 48 cấy tất mẫu vi khuẩn có khuẩn lạc tròn, bóng, bìa ngun, hầu hết khuẩn lạc có màu trắng đục  Về đặc điểm tế bào: Dưới kính hiển vi quang học, tất mẫu vi khuẩn có dạng hình que, chiếm tỉ lệ cao ( Journal of Science – 2015)  Về đặc điểm sinh hóa: mẫu vi khuẩn phân lập vi khuẩn gram (+), catalase âm tính (-), oxidase (-), citrate (-) Tóm lại đặc điểm hình thái sinh hóa mẫu vi khuần phân lập phù hợp với đặc điểm nhóm LAB mô tả Axelsson (2004); Karna, Emata, Barraquio (2007); Khunajakr cs (2008) Vì vậy, kết luận mẫu vi khuẩn phân lập vi khuẩn lactic 42  Tất mẫu vi khuẩn lactic sinh trưởng 40 0C, kết tương tự báo cáo Niamsup cs (2003)  Kết kiểm tra tính kháng khuẩn phương pháp nhỏ giọt cho thấy sau 24 giờ, vùng sáng xung quanh bề mặt vi khuẩn lactic xuất đĩa Kết kiểm tra trình bày qua bảng 4.6 bảng 4.7, cho thấy mẫu vi khuẩn lactic, có mẫu thể khả tính kháng khuẩn, có mẫu có tính kháng khuẩn mạnh với đường kính vòng vơ khuẩn lớn 10mm, mẫu có tính kháng khuẩn trung bình với đường kính vòng vơ khuẩn 5-10mm Qua phương pháp cho thấy hoạt tính thành phần kháng khuẩn có sẵn tế bào vi khuẩn lactic có tác động kháng lại vi khuẩn khác Theo Ouwehand Satu Vesterlund (2004), tế bào vi khuẩn lactic chứa sẵn hợp chất có tính kháng khuẩn reterin, reutericyclin, acid 2pyrrolidone-5-carboxylic chúng sinh trưởng tạo thêm thành phần kháng khuẩn khác bao gồm acid lactic, bacteriocin, CO 2, H2O2 diacetyl  Kết kiểm tra tính kháng khuẩn phương pháp khuếch tán giếng cho thấy sau 24 giờ, vùng sáng xung quanh bề mặt vi khuẩn lactic xuất đĩa Kết kiểm tra trình bày qua bảng 4.4 bảng 4.5, cho thấy tronmg mẫu vi khuẩn lactic, thí có mẫu thể khả tính kháng khuẩn, mẫu có tính kháng khuẩn lớn 10m, thể tính kháng khuẩn mạnh mẫu lại Tiêu biểu, mẫu KC3A, MC2 có đường kính vòng sáng rộng 13,66mm 12,33mm thể tính kháng khuẩn mạnh Bên cạnh có mẫu cho vòng vơ khuẩn nằm khoảng 510mm, biểu tính kháng khuẩn mức trung bình mẫu khơng có khả kháng khuẩn Như vậy, mẫu vi khuẩn phân lập từ sản phẩm len men tư nhiên có tính kháng khuẩn bacteriocin mạnh mẫu phân lập từ nhiều nguồn khác Kết có tính khả quan so với kết nghiên cứu Onda et al (1999) 43 CHƯƠNG 5.KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ KẾT LUẬN Dựa vào kết thu sau trình tiến hành thí nghiệm, đưa kết luận rằng: Từ 85 loại sản phẩm thực phẩm lên men phân lập 10 mẫu vi khuẩn lactic sinh acid lactic có đặc tính thuộc hệ vi khuẩn lactic: Gram dương, catalase âm tính, oxydase âm tính, citrate âm tính Kết khảo sát tính kháng khuẩn phương pháp khuếch tán giếng thạch phương pháp nhỏ giọt, phát mẫu vi khuẩn lactic: DL1A, MC2, MC3B, KC3B, DC9, GĐ1 có tính kháng khuẩn tính kháng khuẩn chúng yếu Vì vậy, khẳng định vi khuẩn lactic mẫu phân lập có tính kháng khuẩn yếu ĐỀ NGHỊ Do điều kiện vật chất, phương tiện khảo sát, thời gian khảo sát phạm vi kiến thức nhiều hạn chế nên tiến hành phân lập mẫu vi khuẩn lactic từ sản phẩm khác, khảo sát tìm hiểu số đặc tính ứng dụng vi khuẩn lactic nghiên cứu đời sống Vì vậy, đề nghị hướng khảo sát để phát triển thêm đề tài: - Phân lập thêm mẫu vi khuẩn lactic khác từ loại sản phẩm lên men khác địa bàn khác - Phân lập, tìm dòng vi khuẩn lactic có tính kháng khuẩn mạnh loại thực phẩm lên men khác - Khảo sát môi trường điều kiện thích hợp cho sản xuất chất kháng khuẩn vi khuẩn lactic - Sau tuyển chọn dòng vi khuẩn lactic có khả cao định danh dòng vi khuẩn lactic thu phương pháp sinh hóa phương pháp sinh Định danh phương pháp đại giải mã trình tự gen 16s rRNA - Khảo sát thêm đặc tính khác vi khuẩn lactic ( sinh acid hữu cơ) - Tinh chế vi khuẩn lactic thu để ứng dụng vào thực tế, sống ( Dược, Y, thực phẩm…) 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO Axelsson, Lars (2004) Acid lactic Bacteria: Classification and Physiology Acid lactic Bacteria microbiological and Functional Aspects Third Edition, Revised and Expanded MATFORSK, Norwegian Food Research Institute, A°s, Norway, 19-67 Cintas, L.M., Herranz, C., Hernández, P.E., Casaus, M.P and Nes, L.F (2001), Review: Bacteriocins of lactic acid bacteria Food Sci Tech Int., 7, pp 281-305 De Martinis, E.C.P., Públio, M.R.P., Santarosa, P.R and Freitas, F.Z (2001), Antilisterial activity of lactic acid bacteria isolated from vacuum-packaged Brazilian meat and meat products Braz J Microbiol., 32, pp 32-37 Deegan, L.H.; Cotter, P.D.; Hill, C and Ross, P (2006), Bacteriocins: Biological tools for bio-preservation and shelf-life extension Int Dairy J., 16, pp 1058-1071 Đinh Nguyễn Mỹ Hồng (2008) Phân lập tuyển chọn vi khuẩn sinh acid lactic cao từ cơm mẻ Luận văn tốt nghiệp kỹ sư ngành công nghệ sinh học Khoa NN-TNTN, Trường đại học An Giang Đồng Thanh Thu (2003) Sinh hóa ứng dụng TPHCM NXB đại học quốc gia TPHCM Lê Xuân Phương Vi sinh vật công nghiệp – Nhà xuất xây dựng Hà Nội – 2001 Lê Văn Nhương (2009) Cơ sở công nghệ sinh học - tập 4: công nghệ vi sinh NXB Giáo dục Lê Văn Việt Mẫn (2004) Công nghệ sản xuất sản phẩm từ sữa thức uống – tập NXB Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh 10 Lindgren, S.E., and & Dobrogosz, W.J 1990 Antagonistic activities of lactic acid bacteria in food and feed fermentations FEMS Microbiology Reviews 87, 149-164 11 Lương Đức Phẩm (2005) Vi sinh vật vệ sinh an tồn thực phẩm NXB Nơng nghiệp, Hà Nội 12 Nguyễn Đức Lượng (2004) Công nghệ vi sinh vật, NXB nông nghiệp, Hà Nội.Nguyễn 13 Nguyễn Đức Lượng (2006) Công nghệ vi sinh - tập NXB đại học quốc gia TP Hồ Chí Minh 14 Nguyễn Lân Dũng et al., (2000) Vi sinh vật học NXB giáo dục TP Hồ Chí Minh 15 Nguyễn Lân Dũng et al., (1976) Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật học - tập NXB Khoa học Kỹ thuật Hà Nội 45 16 Nguyễn Lân Dũng (2010) Vi sinh vật học NXB Giáo dục Hà Nội 17 Nguyễn Văn Bá (2008) Bài giảng công nghệ sinh học truyền thống Tài liệu Internet 18 Hồng Văn Vinh 28.03.2006 Muốn nhận biết có mặt lactic acid [trực tuyến].http://vietsciences.free.fr/nhipcaubandoc/thacmachoiai/Uffelmannacidlactic.htm Huỳnh Ngọc Nhiều 23.01.2014 Phương pháp làm cơm mẻ [trực tuyến] Đọc từ: http://123doc.org/document/993301-tai-lieu-phuong-phaplam-com-me-ppt.htm (đọc ngày 15.04.2015) 19 Luanvan 28.03.2014 Phân lập tuyển chọn vi khuẩn Lactic có khả kháng khuẩn từ sản phẩm thủy sản lên men [trực tuyến] Đọc từ: http://luanvan.net.vn/luan-van/luan-van-phan-lap-va-tuyen-chon-vi-khuanlactic-co-kha-nang-khang-khuan-tu-cac-san-pham-thuy-san-len-men-60462 20 Menvisinh „khơng ngày tháng‟ Đặc tính điều trị chủng vi khuẩn sinh axit lactic [trực tuyến] Đọc từ: http://menvisinh.org/content/dac-tinh-dieu-tri-cuachung-vi-khuan-sinh-axit-lactic 21 Nguyễn Thị Thúy Hiền 25.12.2013 Tình hình nghiên cứu sản xuất ứng dụng probiotic thức ăn chăn nuôi [trực tuyến] Đọc từ: http://doc.edu.vn/tai-lieu/khoa-luan-tim-hieu-tinh-hinh-nghien-cuu-san-xuat-vaung-dung-probiotic-trong-thuc-an-chan-nuoi-52391 22 Pharmacity.vn „không ngày tháng‟ Antibio Đọc từ: http://nhathuoconline.vn /antibio 23 Slideshare 17.12.2013 Phân lập, tuyển chọn chủng vi khuẩn lactic từ bã sắn [trực tuyến] Đọc từ: http://www.slideshare.net/ngocdungmt/lv-phn-lp-tuynchn-cc-chng-vi-khun-lactic-t-b-sn 24 Scribd „khơng ngày tháng‟ Các q trình lên men [trực tuyến] Đọc từ: http://vi scribd.com/doc/98362808/cac-qua-trinh-len-men#scribd 25 Tài liệu-Ebook 25.04.2013 Ứng dụng công nghệ lên men lactic từ thịt heo tươi chế biến thực phẩm truyền thống [trực tuyến] Đọc từ: http://doc.edu.vn/tai-lieu/de-tai-ung-dung-cong-nghe-len-men-lactic-tu-thitheo-tuoi-trong-che-bien-thuc-pham-truyen-thong-10708 26 Tạp chí Khoa học 2011:19a 176-184 Trường Đại học Cần Thơ 46 PHỤ LỤC A Một số thiết bị, dụng cụ hóa chất nghiên cứu 47 48 PHỤ LỤC B Các mẫu vi khuẩn lactic phân lập 49 PHỤ LỤC C Kết nhuộm gram mẫu vi khuẩn lactic phân lập 50 ... muối chua thực với mục tiêu phân lập tuyển chọn số dòng vi khuẩn lactic từ rau muối chua có khả ức chế vi khuẩn Escherichia Coli Salmonella typhimurium Nội dung nghiên cứu: 1 Phân lập vi khuẩn lactic. .. kháng khuẩn cao để ứng dụng vào sản xuất chất bảo quản thực phẩm tự nhiên Vì đề tài tiểu luận “ Khảo sát khả ức chế Escherichia Coli Salmonella typhimurium vi khuẩn acid lactic phân lập từ rau muối. .. KẾT QUẢ PHÂN LẬP MẪU VI KHUẨN LACTIC TRONG 85 MẪU SẢN PHẨM, QUAN SÁT ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI KHUẨN LẠC VÀ KIỂM TRA SINH HÓA CÁC MẪU VI KHUẨN PHÂN LẬP ĐƯỢC 29 1.1 Kết phân lập mẫu vi khuẩn lactic