Đang tải... (xem toàn văn)
Quy trình định tính Salmonella và Vibrio cholerae, mô tả môi trường cách thực hiện định tính Salmonella và Vibrio cholerae, môn phân tích vi sinh thực phẩm, nêu đặc điểm, bệnh, phòng ngừa
Trường Đại học Công nghiệp Thực phẩm TPHCM Môn: Phân tích vi sinh thực phẩm Đề tài: Quy trình định tính Salmonella Vibrio cholerae Nhóm TPHCM, ngày tháng năm 2019 Nội dung Ngộ độc Đặc điểm vi Quy trình định vi khuẩn khuẩn tính Ngộ độc vi khuẩn Salmonella Nguồn: phủ tạng động vật, thịt gia cầm, cá, sò, ốc, trứng, thịt xay, thịt băm nhỏ… Điều kiện: Thức ăn bị nhiễm lượng đủ lớn vi khuẩn Salmonella Vi khuẩn Salmonella vào thể phải phóng lượng độc tố đủ lớn Hình 1: Nguồn thực phẩm chứa Salmonella gây ngộ độc Ngộ độc vi khuẩn Salmonella Đặc điểm nuôi cấy Phát triển môi trường ni cấy thơng thường Trên mơi trường thích hợp phát triển sau 24h Có thể mọc mơi trường có chất ức chế chọn lọc DCA XLD Khuẩn lạc đặc trưng Salmonella mơi trường tròn, lồi, suốt, có tâm đen Hình 2: Hình dạng vi khuẩn Salmonella Đặc điểm vi khuẩn Lên mên Không lên men glucose saccharose mannitol sinh lactose, không acid sinh indol, khơng phân giải ure Có thể tiết loại độc tố: • Ngoại độc tố • Nội độc tố Nội dung Ngộ độc Đặc điểm vi Quy trình định vi khuẩn khuẩn tính Quy trình định tính Mục đích ý nghĩa quy trình định tính: Quy trình kiểm nghiệm cho phép phân tích tính Salmonella, giúp kết luận có hay khơng có diện Salmonella mẫu Để khẳng định tên chủng phân lập cần gửi chúng đến phòng thí nghiệm chun định danh vi sinh vật Salmonella chứa dòng bệnh rất nguy hiểm nên cần các biện pháp an toàn làm việc Quy trình định tính Salmonella phát quy trình truyền thống gồm bước Tăng sinh chọn lọc Tiền tăng sinh Phân lập Quy trình Khẳng định Phục hồi 10 Các bước tiến hành Bước 5: Khẳng định Các khuẩn lạc xuất sau hồi phục môi trường NA/TSA sử dụng cho thử nghiệm sinh hóa sau: thử nghiệm sinh hóa Thử nghiệm sinh H2S môi trường Thử Thử Thử Thử nghiệm nghiệm nghiệm nghiệm urea VP ONPG LDC Thử nghiệm khả sinh indol KIA 24 Thử nghiệm sinh H2S (+) Mơi trường • Thạch TSI/ KIA Ngun tắc • Xác định khả • Cấy ria bề sử dụng mặt nghiêng nguồn thạch carbohydrate, cấy đâm sâu có khơng xuống đáy có sinh H2S Biểu Cách lấy mẫu • Ủ 37 C có Salmonella • Thạch có màu vàng • • Nứt thạch Xuất vạch đen 24h 25 Kết thu được: • Ống 1: có sinh khí, chứng tỏ lên men có sinh khí • Ống 2: màu đỏ phần thạch nghiêng, màu vàng đáy chứng tỏ VSV lên men glucose • Ống 3: màu đen xuất chứng tỏ có q trình khử lưu huỳnh sinh H2S • Ống 4: mơi trường KIA khơng có VSV Hình 5: thử nghiệm sinh H S 26 Thử nghiệm Urea (-) Mơi trường • Thạch Ure Ngun tắc • Phát khả Biểu Cách lấy mẫu • Cấy ria bề có Salmonella • Mơi trường phân cắt mặt nghiêng không đổi màu Ure thành thạch (vàng cam) amoniac • Ủ 37 C 24h 27 Kết thu được: • Ống 1: mơi trường khơng đổi, vàng cam (-) • Ống 2: từ màu đỏ chuyển thành màu hồng sau chuyển thành màu đỏ hồng (+) Hình 6: thử nghiệm Urea 28 Thử nghiệm VP (-) Mơi trường • Voges – Nguyên tắc • Xác định khả Biểu Cách lấy mẫu • Cho khuẩn lạc có Salmonella • Dịch vi khuẩn Prosk- sinh nghi ngờ vào không bị đổi auer acetylmethylca ống vô trùng màu (vàng) rbinol chứa 3ml mtr (acetoin) VP • Ủ 37 C 24h • Bổ sung thuốc thử 29 Kết thu được: • Ống 1: dịch vi khuẩn màu vàng, khơng đổi màu (-) • Ống 2: xuất màu hồng đến màu đỏ sáng 15p (+) Hình 7: thử nghiệm VP 30 Thử nghiệm ONPG (-) Mơi trường • Dung dịch Ngun tắc • Xác định khả toluen lên men NaCl lactose vi Biểu Cách lấy mẫu • Thêm 0.25ml NaCl giọt toluen vào ống, lắc • sinh vật Cách thủy 37 C có Salmonella • Dịch vi khuẩn khơng bị đổi màu vài phút • Thêm 0.25ml thuốc thử, lắc • Lại cách thủy 37 C 24h 31 Kết thu được: • Ống 1: dịch vi khuẩn khơng bị đổi màu (-) • Ống 2: xuất màu vàng (+) Hình 8: thử nghiệm ONPG 32 Thử nghiệm LDC (+) Mơi Ngun tắc trường • Lysine • Phát vi Cách lấy mẫu • Cấy phía Biểu có Salmonella • Mơi trường decarbo- khuẩn sinh bề mặt giữ xylase enzyme môi trường nguyên màu lỏng, phủ lớp decarbox- paraffin hay dầu ylase tím khống lên bề mặt mơi trường • Ủ 37 C 24h 33 Kết thu được: • Ống 1: mơi trường giữ ngun màu tím (+) • Ống 2: mơi trường có màu vàng (-) Hình 9: thử nghiệm LDC 34 Thử nghiệm khả sinh indol (-) Mơi trường • Trypt-one Ngun tắc • Phát khả Biểu Cách lấy mẫu • Cấy khuẩn lạc có Salmonella • Khơng xuất oxi hóa nghi ngờ vào ống vòng đỏ tryptophan nghiệm chứa 5ml nhỏ thuốc môi trường thành dạng indol tryptone water • Ủ 37 C thử Kovac’s (màu vàng) 24h • Thêm 1ml thuốc thử Kovac’s 35 Kết thu được: • Ống 1: bề mặt môi trường xuất vòng màu vàng (-) • Ống 2: bề mặt mơi trường xuất vòng màu đỏ (+) Hình 10: thử nghiệm Indol 36 Kết luận Sau tiến hành thử nghiệm: Nếu kết là: TSI/KIA: đỏ/vàng, có/khơng có H2S sinh hơi; Ure (-); Indol (-); VP (-); ONPG (-); LDC (+)=> mẫu thử dương tính với Salmonella Nếu có kết thử nghiệm không phù hợp => mẫu thử âm tính với Salmonella 37 THANK FOR WATCHING Nhóm 1.Chang Khánh Vinh 2.Lê Hoàng Thúy An 3.Nguyễn Thị Kim Chi 4.Nguyễn Thị Kim Ánh