Đang tải... (xem toàn văn)
Nghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu và phân loại cây bảy lá một hoa (Paris) thu thập ở Lai ChâuNghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu và phân loại cây bảy lá một hoa (Paris) thu thập ở Lai ChâuNghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu và phân loại cây bảy lá một hoa (Paris) thu thập ở Lai ChâuNghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu và phân loại cây bảy lá một hoa (Paris) thu thập ở Lai ChâuNghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu và phân loại cây bảy lá một hoa (Paris) thu thập ở Lai ChâuNghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu và phân loại cây bảy lá một hoa (Paris) thu thập ở Lai ChâuNghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu và phân loại cây bảy lá một hoa (Paris) thu thập ở Lai ChâuNghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu và phân loại cây bảy lá một hoa (Paris) thu thập ở Lai ChâuNghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu và phân loại cây bảy lá một hoa (Paris) thu thập ở Lai ChâuNghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu và phân loại cây bảy lá một hoa (Paris) thu thập ở Lai ChâuNghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu và phân loại cây bảy lá một hoa (Paris) thu thập ở Lai ChâuNghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu và phân loại cây bảy lá một hoa (Paris) thu thập ở Lai Châu
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM NGÔ THÙY LINH NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI, GIẢI PHẪU VÀ PHÂN LOẠI CÂY BẢY LÁ MỘT HOA (PARIS) THU THẬP Ở LAI CHÂU LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Thái Nguyên, năm 2018 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM NGÔ THÙY LINH NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI, GIẢI PHẪU VÀ PHÂN LOẠI CÂY BẢY LÁ MỘT HOA (PARIS) THU THẬP Ở LAI CHÂU Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 42 01 21 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Cán hướng dẫn khoa học: PGS.TS Vũ Thị Thu Thủy Thái Nguyên, năm 2018 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tơi hướng dẫn PGS.TS Vũ Thị Thu Thủy Các kết nghiên cứu trung thực chưa công bố cơng trình khác Thái Ngun, tháng 11 năm 2018 Tác giả Ngô Thùy Linh i LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới PGS.TS Vũ Thị Thu Thủy, khoa Sinh học trường Đại học sư phạm Thái Nguyên người bảo, hướng dẫn em suốt trình nghiên cứu hoàn thành luận văn Em xin gửi lời cảm ơn cảm ơn sâu sắc tới thầy cô khoa Sinh học, Trường Đại học Sư Phạm - ĐH Thái Nguyên tận tình hướng dẫn, truyền dạy kiến thức cho em suốt khóa học Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy giáo, cô giáo Ban giám hiệu trường Đại học Sư phạm - ĐH Thái Ngun, thầy, phịng ban chức tạo điều kiện giúp đỡ em thời gian học tập trường Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới bạn bè gia đình ln quan tâm, động viên, ủng hộ giúp đỡ em Luận văn sản phẩm đề tài cấp Bộ có mã số B2017-TNA-04-QG PGS.TS Vũ Thị Thu Thủy môn Sinh học đại Giáo dục sinh học làm chủ nhiệm Thái Nguyên, tháng 11 năm 2018 Tác giả Ngô Thùy Linh ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC NHỮNG TỪ VÀ CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH vi MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu đề tài Nội dung nghiên cứu Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung Bảy hoa 1.1.1 Đặc điểm, phân loại Bảy hoa 1.1.2 Phân bố, vai trò Bảy hoa 1.2 Các phương pháp định danh thực vật 1.2.1 Phương pháp so sánh hình thái, giải phẫu 1.2.2 Phương pháp sinh học phân tử Chương 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Vật liệu thực vật 14 2.2 Địa điểm nghiên cứu, hóa chất thiết bị 14 2.2.1 Địa điểm nghiên cứu 14 2.2.2 Hóa chất, dụng cụ 14 2.3 Phương pháp nghiên cứu 14 2.3.1 Phương pháp hình thái, giải phẫu 15 2.3.2 Phương pháp sinh học phân tử 15 2.3.3 Phương pháp phân tích trình tự nucleotide 18 iii Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 19 3.1 Kết nghiên cứu đặc điểm hình thái giải phẫu Bảy hoa 19 3.1.1 Đặc điểm hình thái mẫu Bảy hoa 19 3.1.2 Đặc điểm giải phẫu mẫu Bảy hoa 20 3.2 Kết nghiên cứu đặc điểm mã vạch DNA mẫu Bảy hoa 23 3.2.1 Kết tách chiết DNA tổng số 23 3.2.2 Kết khuếch đại phân tích trình tự nucleotide đoạn gen matK 23 3.2.3 Kết khuếch đại phân tích trình tự nucleotide vùng gen ITS 29 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 34 Kết luận 34 Đề nghị 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO 35 iv DANH MỤC NHỮNG TỪ VÀ CHỮ VIẾT TẮT CBOL : Consortium for the Barcode of Life DNA : Deoxyribonucleic acid ITS : Internal Transcribed Spacer kb : Kilobase matK : MaturaseK NCBI : The National Center for Biotechnology Information PCR : Polymerase Chain Reaction rpoC : Retained products of conception SH : Sìn Hồ iv DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Mồi matK sử dụng kỹ thuật PCR 17 Bảng 2.2 Thành phần phản ứng PCR 17 Bảng 2.3 Chu kỳ nhiệt cho phản ứng PCR 17 Bảng 2.4 Mồi ITS sử dụng kỹ thuật PCR 18 Bảng 2.5 Thành phần phản ứng PCR 18 Bảng 2.6 Chu kỳ nhiệt cho phản ứng PCR 18 Bảng 3.1 Một số trình tự đoạn gen matK sử dụng để xác định độ tương đồng sai khác với mẫu SH 27 Bảng 3.2 Độ tương đồng phân ly dựa trình tự gen matK 27 Bảng 3.3 Một số trình tự vùng gen ITS sử dụng để xác định độ tương đồng sai khác với mẫu SH 32 Bảng 3.4 Độ tương đồng phân ly dựa trình tự vùng gen ITS 32 v DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 2.1: Mơ hình thí nghiệm tổng quát 15 Hình 3.1 Hình thái quan sinh dưỡng mẫu Bảy hoa thu thập huyện Sìn Hồ, tỉnh Lai Châu 19 Hình 3.2 Cấu tạo giải phẫu cuống 20 Hình 3.3 Cấu tạo giải phẫu thân 21 Hình 3.4 Cấu tạo giải phẫu rễ 22 Hình 3.5 Kết tách chiết DNA tổng số Bảy hoa 23 Hình 3.6 Hình ảnh điện di sản phẩm khuếch đại gen matK kỹ thuật PCR 24 Hình 3.7 Kết Blast trình tự gen matK 25 Hình 3.8 Trình tự nucleotide đoạn gen matK phân lập từ mẫu Bảy hoa thu thập Sìn Hồ, Lai Châu 26 Hình 3.9 Sơ đồ mơ tả mối quan hệ di truyền loài Bảy hoa chi Paris dựa trình tự nucleotide đoạn gen matK 28 Hình 3.10 Hình ảnh điện di sản phẩm khuếch đại vùng gen ITS kỹ thuật PCR 29 Hình 3.11 Kết Blast trình tự vùng gen ITS 30 Hình 3.12 Trình tự nucleotide vùng gen ITS phân lập từ mẫu Bảy hoa thu thập Sìn Hồ, Lai Châu 31 Hình 3.13 Sơ đồ mơ tả mối quan hệ di truyền mẫu Bảy hoa chi Paris dựa trình tự nucleotide vùng ITS 33 vi MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Bảy hoa tên gọi chung mẫu thuộc chi Paris Cây Bảy hoa gọi Thất diệp chi mai, Độc cước liên, Thiết đăng đài, Chi hoa đầu, Tảo hưu, Thảo hà xa, Trọng lâu, Thất tử liên, Đăng đài thất, Cúa dô (H’Mông)… Hiện nay, chi Paris cơng bố có 24 lồi, lồi gồm nhiều giống khác Chỉ riêng loài Paris polyphylla kết thống kê cho thấy có giống Nhiều giống mơ tả chi tiết mặt hình thái, ban đầu để nhận dạng phát có mặt quý [30] Ở Việt Nam, Bảy hoa tạm gọi tên khoa học Paris polyphylla Sm [12], [30] Đây lồi thảo mộc có giá trị chữa số bệnh cầm ho, giảm hen, cầm máu, ức chế trực khuẩn lị, thương hàn… Đặc biệt, chữa số bệnh nan y ung thư, rắn cắn có nhiều giá trị mà Bảy hoa bị khai thác bừa bãi, có nguy tuyệt chủng Từ năm 1999, Phạm Hồng Hộ mơ tả đặc điểm hình thái lồi [5] Đến năm 2016, Nguyễn Quỳnh Nga cộng lập khóa phân loại chi tiết cho loài giống [20] Tuy nhiên, tiềm Bảy hoa Việt Nam phong phú cần thiết khai thác thêm Có nhiều phương pháp định danh thực vật làm thuốc đảm bảo độ xác hiệu Các phương pháp thường dùng nghiên cứu so sánh đặc điểm hình thái, giải phẫu, sinh lý, hóa sinh hướng nghiên cứu thành công số đối tượng trồng Ngô đồng đỏ, Rong câu chỉ, Ráng thư dực [2], [3], [4]… Tuy nhiên, không cịn ngun vẹn, hay chế biến phương pháp nhận diện hiệu Sự phát triển công nghệ sinh học đại năm gần có bổ sung vào hệ thống phân loại sinh vật phương pháp phân loại học phân tử Đây phương pháp có độ xác cao, đặc biệt cần thực vật dùng làm thuốc muốn xác định cấp độ loài, chế biến Việc xác M SH 1000 bp 800 bp 750 bp Hình 3.6 Hình ảnh điện di sản phẩm khuếch đại gen matK kỹ thuật PCR M: maker kb; SH: sản phẩm PCR gen matK mẫu Sìn Hồ Kết khuếch đại đoạn gen matK cho thấy, hình ảnh điện di xuất băng sản phẩm với kích thước khoảng 800 bp phù hợp với tính tốn lý thuyết kích thước đoạn gen matK nhân kỹ thuật PCR Sau tinh sản phẩm PCR, mẫu đem giải trình tự máy giải trình tự tự động Viện Công nghệ Sinh học Gen matK tinh đọc trực tiếp máy xác định trình tự máy đọc trình tự tự động blast NCBI, kết Blast trình bày hình 3.7 24 Hình 3.7 Kết Blast trình tự gen matK Theo hình 3.7 đoạn gen matK Bảy hoa thu Sìn Hồ so sánh với trình tự GenBank với độ tương đồng 98% Kết nghiên cứu khẳng định trình tự mẫu nghiên cứu trình tự đoạn matK thuộc chi Paris Kết phân tích đoạn trình tự nucleotide phần mềm Bioedit thu đoạn có chiều dài 836 nucleotide, trình bày hình 3.8 25 Hình 3.8 Trình tự nucleotide đoạn gen matK phân lập từ mẫu Bảy hoa thu thập Sìn Hồ, Lai Châu Sử dụng trình tự đoạn gen matK lồi thuộc chi Paris, với 14 giống khác để so sánh tương đồng khác biệt đoạn gen matK Các trình tự gen matK sử dụng trình bày bảng 3.1 26 Bảng 3.1 Một số trình tự đoạn gen matK sử dụng để xác định độ tương đồng sai khác với mẫu SH STT Mã số gen Tên lồi/ giống Năm cơng bố GU178944 P fargesii var fargesii voucher 2010 KM242781 P forrestii 2015 HG475403 P mairei 2014 GU178946 P marmorata voucher 2011 KM242788 P polyphylla var yunnanensis 2015 KM242785 P polyphylla var chinensis 2015 GU178949 P polyphylla var pseudothibetica voucher 2016 GU178947 P polyphylla var stenophylla voucher 2011 GU178952 P polyphylla var yunnanensis voucher 2010 10 GU178945 P polyphylla var pseudothibetica voucher 2011 11 JN417377 2012 12 KM242789 P rugosa 2015 13 GU178948 P vietnamensis voucher 2011 14 KM242792 P vietnamensis 2011 15 SH (mẫu thu thập huyện Sìn Hồ, tỉnh Lai Châu) P pubescens voucher Dựa trình tự nucleotide gen matK, phần mềm DNAstar thiết lập bảng độ tương đồng phân ly bảng 3.2 Bảng 3.2 Độ tương đồng phân ly dựa trình tự gen matK P fargesii var fargesii voucher P forrestii P mairei P marmorata voucher P polyphylla var yunnanensis P polyphylla var chinensis P polyphylla var pseudothibetica voucher P polyphylla var stenophylla voucher P polyphylla var yunnanensis voucher P polyphylla var pseudothibetica voucher P pubescens voucher P rugosa P vietnamensis voucher P vietnamensis SH 27 Theo kết bảng 3.2, trình tự nucleotide gen matK mẫu SH (thu thập huyện Sìn Hồ, tỉnh Lai Châu) có độ tương đồng dao động từ 97,4 % đến 99,9 % Có trình tự độ tương đồng đạt 99,7 % với mẫu SH, P fargesii voucher, P forrestii, P mairei, P polyphylla var chinensis, P Polyphylla var pseudothibetica voucher, P vietnamensis voucher, P vietnamensis Lồi P marmorata voucher có độ tương đồng đạt 99,8 % Có lồi có độ tương đồng 99,6 % P rugosa, P pubescens voucher Trình tự P polyphylla var yunnanensis có độ tương đồng 99,0 %, P polyphylla var yunnanensis voucher 99,5 % Trình tự P polyphylla var.stenophylla độ tương đồng thấp nhất, đạt 97,4 % Mối quan hệ di truyền trình tự nucleotide gen matK thể sơ đồ hình 3.10 Kết biểu diễn hình 3.10 cho thấy phân bố loài chi Paris, giống lồi có phân tán, phân bố tạo thành nhánh Đoạn gen matK mẫu SH nằm nhánh thứ có tới 14 mẫu Như vậy, dựa vào trình tự đoạn gen matK mẫu SH có quan hệ gần với tất loài so sánh Khoảng cách xa đoạn gen matK mẫu SH với giống lồi Paris polyphylla nằm độc lập nhánh Paris polyphylla var chinensis Paris pubescens voucher Paris polyphylla var yunanensis Paris polyphylla var yunnanensis voucher Paris mairei Paris vietnamensis Paris forrestii Paris rugosa Paris fargesii var Fargesii SH Paris marmorata Paris polyphylla var pseudothibetica Paris vietnamensis voucher Paris polyphyla stenophylla Paris polyphylla Hình 3.9 Sơ đồ mô tả mối quan hệ di truyền loài Bảy hoa chi Paris dựa trình tự nucleotide đoạn gen matK 28 3.2.3 Kết khuếch đại phân tích trình tự nucleotide vùng gen ITS Sau tách chiết tinh DNA tổng số, tiến hành nhân vùng gen ITS kỹ thuật PCR với cặp mồi ký hiệu ITS-F ITS-R (bảng 2.4) Sản phẩm PCR điện di kiểm tra gel agarose % thể hình 3.10 Kết khuếch đại vùng gen ITS cho thấy, hình ảnh điện di xuất băng sản phẩm với kích thước khoảng 800 bp Sau tinh sản phẩm PCR, mẫu đem giải trình tự máy giải trình tự tự động Viện Công nghệ Sinh học M 1000 bp 750 bp SH 800 bp 800 bp Hình 3.10 Hình ảnh điện di sản phẩm khuếch đại vùng gen ITS kỹ thuật PCR M: maker kb; SH: sản phẩm PCR vùng gen ITS mẫu Sìn Hồ Vùng gen ITS đọc trực tiếp máy đọc trình tự tự động Blast NCBI, kết Blast trình bày hình 3.11 29 Hình 3.11 Kết Blast trình tự vùng gen ITS Theo hình 3.11, đoạn gen ITS so sánh với trình tự GenBank với độ tương đồng dao động từ 96 % đến 98 % So với loài Paris fargesii (, Paris dunniana, Paris cronguistii, Trillium tschonoskii, Paris polyphylla var mẫu SH có độ tương đồng lên đến 98 %; Paris cronguistii, Paris vaniotii độ tương đồng 97 %, Paris polyphylla cultivar 96 % Kết phân tích đoạn trình tự nucleotide phần mềm Bioedit thu đoạn có chiều dài 751 nucleotide trình bày hình 3.12 30 Hình 3.12 Trình tự nucleotide vùng gen ITS phân lập từ mẫu Bảy hoa thu thập Sìn Hồ, Lai Châu 31 Để xác định mức độ tương đồng khác biệt trình tự nucleotide vùng gen ITS, chúng tơi sử dụng trình tự cơng bố Genbank Các trình tự vùng ITS sử dụng trình bày bảng 3.3 Bảng 3.3 Một số trình tự vùng gen ITS sử dụng để xác định độ tương đồng sai khác với mẫu SH STT Mã số gen Tên lồi/ giống Năm cơng bố KX146546 P fargesii var brevipetalata 2016 AY192536 P fargesii 2003 DQ663684 P fargesii 2009 KX146531 P polyphylla var chinensis 2016 SH (mẫu thu thập huyện Sìn Hồ, tỉnh Lai Châu) KX146539 P polyphylla var polyphylla 2016 AY192538 P polyphylla var stenophylla 2003 Dựa trình tự nucleotide vùng gen ITS, phần mềm DNAstar thiết lập bảng hệ số tương đồng hệ số phân ly bảng 3.4 Bảng 3.4 Độ tương đồng phân ly dựa trình tự vùng gen ITS P fargesii var brevipetalata P fargesii P fargesii P polyphylla var chinensis SH P polyphylla var polyphylla P polyphylla var stenophylla Theo bảng 3.4, độ tương đồng trình tự nucleotide vùng gen ITS mẫu SH với trình tự gen cơng bố GenBank dao động từ 98 % đến 99,5 % Độ tương đồng cao với mẫu SH trình tự mẫu P fargesii 32 (DQ663684), đạt 99,5% Sự khác biệt mẫu SH với mẫu nghiên cứu từ 1,9 % đến 2,5 % Mối quan hệ di truyền trình tự nucleotide vùng gen ITS thể sơ đồ hình 3.13 Kết phân tích mối quan hệ di truyền loài Bảy hoa thuộc chi Paris dựa trình tự nucleotide đoạn vùng gen ITS sơ đồ hình 3.13 cho thấy từ mẫu Bảy hoa chia làm hai nhánh Paris fargesii var brevipetalata Paris fargesii Paris polyphylla var chinensis SH Paris polyphylla var stenophylla Paris polyphylla var polyphylla Paris polyphylla var polyphylla Hình 3.13 Sơ đồ mô tả mối quan hệ di truyền mẫu Bảy hoa chi Paris dựa trình tự nucleotide vùng ITS Vùng gen ITS mẫu SH nằm nhánh thứ gồm mẫu, có lồi Paris farrgesii Nhánh thứ hai có trình tự mẫu Paris polyphylla.var.polyphylla Kết hợp đặc điểm nghiên cứu hình thái, giải phẫu, trình tự đoạn gen matK vùng gen ITS từ mẫu Bảy hoa thu thập huyện Sìn Hồ, tỉnh Lai Châu, kết nghiên cứu mẫu Bảy hoa có kí hiệu SH thuộc lồi Paris Fargesii 33 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận Mẫu Bảy hoa thu thập huyện Sìn Hồ, tỉnh Lai Châu có thân thẳng, trơn nhẵn dài 50 cm, có tầng mọc vịng gồm Hoa mọc đỉnh cành, cuống hoa dài 14 cm Nhụy màu tím đỏ, cuống dài 3cm Phiến hình trứng với gân hình cung Phần thân củ nằm mặt đất có nhiều rễ phụ kích thước tương đối đồng Phía gốc có số thối hóa thành vảy bao lấy phần thân phía Mẫu thuộc lồi Paris Fargesii Đoạn gen matK mẫu SH có kích thước 836 bp, có độ tương đồng với lồi thuộc chi Paris từ 97,4 – 99,9 % Đoạn gen matK mẫu SH có quan hệ với lồi Paris fargesii (GU178944) với độ tương đồng 99,7 % Vùng gen ITS mẫu SH có kích thước 751 bp, độ tương đồng với loài thuộc chi Paris từ 98% đến 99,5% Vùng gen ITS mẫu SH có quan hệ với lồi Paris fargesii (DQ663684), độ tương đồng 99,5 % Mẫu Bảy hoa thu thập huyện Sìn Hồ, tỉnh Lai Châu có đặc điểm hình thái, giải phẫu trình tự đoạn gen matK, vùng gen ITS gần với loài Paris fargesii Đề nghị Sử dụng liệu đặc điểm hình thái, giải phẫu đặc điểm đoạn gen matK vùng gen ITS để nhận dạng Bảy hoa 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Nguyễn Tiến Dũng, Nguyễn Quỳnh Nga, Trần Ngọc Lân, Nguyễn Thị Thu, Ninh Thị Phíp, Đồn Thị Thanh Nhàn, Lê Thị Thu Hiền, Nguyễn Nhật Linh (2017), Đặc điểm hình thái mã vạch DNA loài Bảy hoa Paris vietnamensis (Takht) H.Li Việt Nam, Tạp chí khoa học Nơng Nghiệp Việt Nam,16(4): 282-289 Vũ Văn Dũng, Đinh Thị Phương Anh (2016), Đặc điểm hình thái sinh thái ngô đồng đỏ Cù Lao Chàm, Báo cáo khoa học nghiên cứu giảng dạy sinh học Việt Nam, trang 197-203 Lê Ngọc Hân, Ngô Đức Phương (2006), Đặc điểm hình thái phân loại chi họ Ban (Hypericaceae Juss) Việt Nam, Báo cáo khoa học sinh thái tài nguyên sinh vật, NXB Khoa học tự nhiên công nghệ, trang 166-169 Lê Như Hậu (2009), Sự đa dạng hình thái lồi Rong câu (Graxinlaria tenuistipitata trangenxya, Graxinlariales, Rhodophyta) Việt Nam, Báo cáo hội nghị sinh học toàn quốc, NXB Đại học Thái Nguyên, trang 113 Phạm Hoàng Hộ (1999), Cây cỏ Việt Nam, tập 1, Nxb Trẻ Tp Hồ Chí Minh, trang 473-475 Khuất Văn Quyết, Đỗ Thị Xuyến (2017), Một số dẫn liệu phân loại chi Mua (Melastoma L) Việt Nam, Báo cáo khoa học sinh thái tài nguyên sinh vật, NXB Khoa học tự nhiên công nghệ, trang 345-354 Hoàng Thị Sản, Phan Nguyên Hồng, Nguyễn Tế Chinh, (2003), Hình thái giải phẫu thực vật, Nxb giáo dục Dỗn Hồng Sơn, Trần Thế Bách, Trần Đức Bình, Phạm Quỳnh Anh (2017), Đặc điểm hình thái chi họ Ráng thư dực (Thelypteridaceae Ching ex pic.serm) Việt Nam, Báo cáo khoa học sinh thái tài nguyên sinh vật, NXB Khoa học tự nhiên công nghệ, trang 355-362 35 Vũ Thị Thu Thủy, Tạ Thị Thu Hương, Chu Hoàng Mậu (2017), Đặc điểm trình tự vùng ITS phân lập từ Bảy hoa, Tạp chí khoa học & công nghệ, 168(08):29 – 33 10 Vũ Thị Thu Thủy, Hoàng Phú Hiệp, Nguyễn Thị Thu Ngà, Chu Hồng Mậu (2016), Đặc điểm trình tự gen rpoC1 phân lập từ Thất diệp chi hoa thu Lạng Sơn Việt Nam, Tạp chí khoa học công nghệ Đại học Thái Nguyên, 1464 (01): 159-164 11 Vũ Thị Thu Thủy, Nguyễn Thị Thu Ngà, Hoàng Phú Hiệp, Chu Hoàng Mậu (2017), Sử dụng mã vạch DNA việc định loại loài dược liệu Thất diệp chi hoa Việt Nam, Tạp chí khoa học công nghệ Đại học Thái Nguyên, 161 (01): 81-87 12 Viện dược liệu (2003), “Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam” NXB KH & KT, Hà Nội, tập I, 182-184 Tiếng Anh 13 Berbee M.L., Yoshimura A., Sugiyama J., Taylor J.W (1995), Is Penicillium monophyletic an evaluation of phylogeny in the family Trichocomaceae from 18S, 5.8S and ITS ribosomal DNA sequence data, Mycologia 87, pp 210-222 14 Borsch T., Hilu K.W., Quandt D., Wilde V., Neinhuis C., Barthlott W (2003), Noncoding plastid trnT-trnF sequences reveal a well resolved phylogeny of basal angiosperms, J Evol Biol, (6), pp 558-576 15 Doyle J J., Doyle J L (1987), A rapid DNA isolation procedure for small quantities of fresh leaf tissue, Phytochemmical Bulletin, Vol.19, pp.11-15 16 Flora of China 24: 88-95, (2000) 17 Gao T., Yao H., Song J., Zhu Y., Ma X., Pang X., Xu H., Chen S (2010), Identification of medicinal plants in the family Fabaceae using a potential DNA barcode ITS2 Journal of Ethnopharmacology, (130), pp 116–121 36 18 Hebert P D N, Cywinska A., Ball S L., Waard J R, (2003), Biological identifications through DNA barcodes, Proc R Soc Lond B Biol Sci, (270), pp 313 - 321 19 Muthumeenakshi S, Mills P R, Brown A E, Seaby D A (1994) Intraspecific molecular variation among Trichoderma harzianum S isolates colonizing mushroom compost in the British Isles, Microbiology 1994, (140), pp 769–777 20 Nguyen Quynh Nga, Pham Thanh Huyen, Pham Van Truong, Hoang Van Toan (2016), “Taxonomy of the genus Paris L (Melanthiaceae) in Vietnam”, Tạp chí sinh học, 38 (3), pp, 333-339 21 Shaw J., Lickey E.B., Schilling E E., Small R.L (2007),” Comparison of whole chloroplast genome sequences to choose noncoding regions for phylogenetic studies in angiosperms”, The tortoise and the hare III Amer J Bot, (94), pp 275-288 22 Van DeWiel C C M., Van Der Schoot J., Van Valkenburg J L., Duistermaat C H., Smulders (2009), “DNA barcoding discriminates the noxious invasive plant species, floating pennywort (Hydrocotyle ranunculoides L.f.), from non-invasive relatives”, Molecular Ecology Resources (9), pp.1086-1091 23 Vijayan K., Tsou C H (2010), “DNA barcoding in plants: taxonomy in a new perspective”, Current science, vol 99, pp 1530 - 1540 24 Wang G X., Han J., Zhao L W., Jiang D X, Liu Y T., Liu X L (2010), “Anthelmintic activity of steroidal saponins from Paris polyphylla”, Phytomedicine 17, pp 1102-1105 25 Weiguo Z, Yile P, Shihai ZJ, Xuexia M, Yongping H (2005), Phylogeny of the genus Morus (Urticales: Moraceae) inferred from ITS and trnL-F sequences, (6), pp 563-569 37 26 Wu F., Mueller L A., Crouzillat D., Petiard V., Tanksley S D (2006), “Combining bioinformatics and phylogeneticộng to identify large sets of single-copy orthologous genes (COSII) for comparative, evolutionary and systematic studies: A test case in the euasterid plant clade”, Geneticộng (174), pp 1407-1420 27 Yao H., Song J., Liu C., Luo K., Han J (2010), Use of ITS2 region as the universal DNA barcode for plants and animals, PLoS ONE (5) 28 Yong H L., Jinlan R., Shilin C., Jingyuan S., Kun L., Dong L., Hui Y (2010), “Authentication of Taxillus chinensis using DNA barcoding technique”, Journal of Medicinal Plants Research Vol 4(24), pp 2706-2709 29 Zhang Z., Kudo T., Nakajima Y., Wang Y., (2001) Clarification of the relationship between the members of the family Thermomonosporaceae on the basis of the rDNS, 16S-23S rRNA internal transcribed spacer and 23S rDNA sequences and chemotaxonomic analysis Int J Syst Evol Microbiol, (51), pp 373-383 Tài liệu khác 30 http://botanyvn.com/default.asp 31 http://khoahoc.tv/ma-vach-dna-dung-trong-nhan-dien-thuc-vat-19296 (16/02/2008) 32 https://en.wikipedia.org/wiki/Paris_polyphylla#Taxonomy 33 https://www.dnabank.vn/publication?id=28 34 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/GU178944/ (KM242781/ HG475403/ GU178946/ KM242788/ KM242785/ GU178949/ GU178947/ GU178952/ GU178945/ JN417377/ KM242789/ GU178948/ KM242792/ KX146546/ AY192536/ DQ663684/ KX146531/ KX146539/ AY192538) 35 https://www.thaythuoccuaban.com/vithuoc/baylamothoa.htm 38 ... LINH NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI, GIẢI PHẪU VÀ PHÂN LOẠI CÂY BẢY LÁ MỘT HOA (PARIS) THU THẬP Ở LAI CHÂU Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 42 01 21 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Cán hướng dẫn khoa... QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 19 3.1 Kết nghiên cứu đặc điểm hình thái giải phẫu Bảy hoa 19 3.1.1 Đặc điểm hình thái mẫu Bảy hoa 19 3.1.2 Đặc điểm giải phẫu mẫu Bảy hoa 20 3.2 Kết nghiên. .. điểm hình thái, giải phẫu phân loại mẫu Bảy hoa (Paris) thu thập Lai Châu? ?? Mục tiêu đề tài Xây dựng liệu đặc điểm hình thái, giải phẫu đặc điểm đoạn gen matK, vùng gen ITS dùng phân loại thực vật