Đang tải... (xem toàn văn)
Nghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu và phân loại cây bảy lá một hoa (Paris) thu thập ở Lai ChâuNghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu và phân loại cây bảy lá một hoa (Paris) thu thập ở Lai ChâuNghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu và phân loại cây bảy lá một hoa (Paris) thu thập ở Lai ChâuNghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu và phân loại cây bảy lá một hoa (Paris) thu thập ở Lai ChâuNghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu và phân loại cây bảy lá một hoa (Paris) thu thập ở Lai ChâuNghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu và phân loại cây bảy lá một hoa (Paris) thu thập ở Lai ChâuNghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu và phân loại cây bảy lá một hoa (Paris) thu thập ở Lai ChâuNghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu và phân loại cây bảy lá một hoa (Paris) thu thập ở Lai ChâuNghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu và phân loại cây bảy lá một hoa (Paris) thu thập ở Lai ChâuNghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu và phân loại cây bảy lá một hoa (Paris) thu thập ở Lai ChâuNghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu và phân loại cây bảy lá một hoa (Paris) thu thập ở Lai ChâuNghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu và phân loại cây bảy lá một hoa (Paris) thu thập ở Lai ChâuNghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu và phân loại cây bảy lá một hoa (Paris) thu thập ở Lai Châu
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM NGÔ THÙY LINH NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI, GIẢI PHẪU VÀ PHÂN LOẠI CÂY BẢY LÁ MỘT HOA (PARIS) THU THẬP Ở LAI CHÂU LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Thái Nguyên, năm 2018 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM NGÔ THÙY LINH NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI, GIẢI PHẪU VÀ PHÂN LOẠI CÂY BẢY LÁ MỘT HOA (PARIS) THU THẬP Ở LAI CHÂU Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 42 01 21 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Cán hướng dẫn khoa học: PGS.TS Vũ Thị Thu Thủy Thái Nguyên, năm 2018 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tơi hướng dẫn PGS.TS Vũ Thị Thu Thủy Các kết nghiên cứu trung thực chưa công bố cơng trình khác Thái Ngun, tháng 11 năm 2018 Tác giả Ngô Thùy Linh i LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới PGS.TS Vũ Thị Thu Thủy, khoa Sinh học trường Đại học sư phạm Thái Nguyên người bảo, hướng dẫn em suốt trình nghiên cứu hoàn thành luận văn Em xin gửi lời cảm ơn cảm ơn sâu sắc tới thầy cô khoa Sinh học, Trường Đại học Sư Phạm - ĐH Thái Nguyên tận tình hướng dẫn, truyền dạy kiến thức cho em suốt khóa học Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy giáo, cô giáo Ban giám hiệu trường Đại học Sư phạm - ĐH Thái Ngun, thầy, phòng ban chức tạo điều kiện giúp đỡ em thời gian học tập trường Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới bạn bè gia đình ln quan tâm, động viên, ủng hộ giúp đỡ em Luận văn sản phẩm đề tài cấp Bộ có mã số B2017-TNA-04-QG PGS.TS Vũ Thị Thu Thủy môn Sinh học đại Giáo dục sinh học làm chủ nhiệm Thái Nguyên, tháng 11 năm 2018 Tác giả Ngô Thùy Linh ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC NHỮNG TỪ VÀ CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH vi MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu đề tài Nội dung nghiên cứu Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung Bảy hoa 1.1.1 Đặc điểm, phân loại Bảy hoa 1.1.2 Phân bố, vai trò Bảy hoa 1.2 Các phương pháp định danh thực vật 1.2.1 Phương pháp so sánh hình thái, giải phẫu 1.2.2 Phương pháp sinh học phân tử Chương 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Vật liệu thực vật 14 2.2 Địa điểm nghiên cứu, hóa chất thiết bị 14 2.2.1 Địa điểm nghiên cứu 14 2.2.2 Hóa chất, dụng cụ 14 2.3 Phương pháp nghiên cứu 14 2.3.1 Phương pháp hình thái, giải phẫu 15 2.3.2 Phương pháp sinh học phân tử 15 2.3.3 Phương pháp phân tích trình tự nucleotide 18 iii Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 19 3.1 Kết nghiên cứu đặc điểm hình thái giải phẫu Bảy hoa 19 3.1.1 Đặc điểm hình thái mẫu Bảy hoa 19 3.1.2 Đặc điểm giải phẫu mẫu Bảy hoa 20 3.2 Kết nghiên cứu đặc điểm mã vạch DNA mẫu Bảy hoa 23 3.2.1 Kết tách chiết DNA tổng số 23 3.2.2 Kết khuếch đại phân tích trình tự nucleotide đoạn gen matK 23 3.2.3 Kết khuếch đại phân tích trình tự nucleotide vùng gen ITS 29 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 34 Kết luận 34 Đề nghị 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO 35 iv DANH MỤC NHỮNG TỪ VÀ CHỮ VIẾT TẮT CBOL : Consortium for the Barcode of Life DNA : Deoxyribonucleic acid ITS : Internal Transcribed Spacer kb : Kilobase matK : MaturaseK NCBI : The National Center for Biotechnology Information PCR : Polymerase Chain Reaction rpoC : Retained products of conception SH : Sìn Hồ iv DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Mồi matK sử dụng kỹ thuật PCR 17 Bảng 2.2 Thành phần phản ứng PCR 17 Bảng 2.3 Chu kỳ nhiệt cho phản ứng PCR 17 Bảng 2.4 Mồi ITS sử dụng kỹ thuật PCR 18 Bảng 2.5 Thành phần phản ứng PCR 18 Bảng 2.6 Chu kỳ nhiệt cho phản ứng PCR 18 Bảng 3.1 Một số trình tự đoạn gen matK sử dụng để xác định độ tương đồng sai khác với mẫu SH 27 Bảng 3.2 Độ tương đồng phân ly dựa trình tự gen matK 27 Bảng 3.3 Một số trình tự vùng gen ITS sử dụng để xác định độ tương đồng sai khác với mẫu SH 32 Bảng 3.4 Độ tương đồng phân ly dựa trình tự vùng gen ITS 32 v DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 2.1: Mơ hình thí nghiệm tổng quát 15 Hình 3.1 Hình thái quan sinh dưỡng mẫu Bảy hoa thu thập huyện Sìn Hồ, tỉnh Lai Châu 19 Hình 3.2 Cấu tạo giải phẫu cuống 20 Hình 3.3 Cấu tạo giải phẫu thân 21 Hình 3.4 Cấu tạo giải phẫu rễ 22 Hình 3.5 Kết tách chiết DNA tổng số Bảy hoa 23 Hình 3.6 Hình ảnh điện di sản phẩm khuếch đại gen matK kỹ thuật PCR 24 Hình 3.7 Kết Blast trình tự gen matK 25 Hình 3.8 Trình tự nucleotide đoạn gen matK phân lập từ mẫu Bảy hoa thu thập Sìn Hồ, Lai Châu 26 Hình 3.9 Sơ đồ mơ tả mối quan hệ di truyền loài Bảy hoa chi Paris dựa trình tự nucleotide đoạn gen matK 28 Hình 3.10 Hình ảnh điện di sản phẩm khuếch đại vùng gen ITS kỹ thuật PCR 29 Hình 3.11 Kết Blast trình tự vùng gen ITS 30 Hình 3.12 Trình tự nucleotide vùng gen ITS phân lập từ mẫu Bảy hoa thu thập Sìn Hồ, Lai Châu 31 Hình 3.13 Sơ đồ mơ tả mối quan hệ di truyền mẫu Bảy hoa chi Paris dựa trình tự nucleotide vùng ITS 33 vi MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Bảy hoa tên gọi chung mẫu thuộc chi Paris Cây Bảy hoa gọi Thất diệp chi mai, Độc cước liên, Thiết đăng đài, Chi hoa đầu, Tảo hưu, Thảo hà xa, Trọng lâu, Thất tử liên, Đăng đài thất, Cúa dô (H’Mông)… Hiện nay, chi Paris cơng bố có 24 lồi, lồi gồm nhiều giống khác Chỉ riêng loài Paris polyphylla kết thống kê cho thấy có giống Nhiều giống mơ tả chi tiết mặt hình thái, ban đầu để nhận dạng phát có mặt quý [30] Ở Việt Nam, Bảy hoa tạm gọi tên khoa học Paris polyphylla Sm [12], [30] Đây lồi thảo mộc có giá trị chữa số bệnh cầm ho, giảm hen, cầm máu, ức chế trực khuẩn lị, thương hàn… Đặc biệt, chữa số bệnh nan y ung thư, rắn cắn có nhiều giá trị mà Bảy hoa bị khai thác bừa bãi, có nguy tuyệt chủng Từ năm 1999, Phạm Hồng Hộ mơ tả đặc điểm hình thái lồi [5] Đến năm 2016, Nguyễn Quỳnh Nga cộng lập khóa phân loại chi tiết cho loài giống [20] Tuy nhiên, tiềm Bảy hoa Việt Nam phong phú cần thiết khai thác thêm Có nhiều phương pháp định danh thực vật làm thuốc đảm bảo độ xác hiệu Các phương pháp thường dùng nghiên cứu so sánh đặc điểm hình thái, giải phẫu, sinh lý, hóa sinh hướng nghiên cứu thành công số đối tượng trồng Ngô đồng đỏ, Rong câu chỉ, Ráng thư dực [2], [3], [4]… Tuy nhiên, không ngun vẹn, hay chế biến phương pháp nhận diện hiệu Sự phát triển công nghệ sinh học đại năm gần có bổ sung vào hệ thống phân loại sinh vật phương pháp phân loại học phân tử Đây phương pháp có độ xác cao, đặc biệt cần thực vật dùng làm thuốc muốn xác định cấp độ loài, chế biến Việc xác 18 Hebert P D N, Cywinska A., Ball S L., Waard J R, (2003), Biological identifications through DNA barcodes, Proc R Soc Lond B Biol Sci, (270), pp 313 - 321 19 Muthumeenakshi S, Mills P R, Brown A E, Seaby D A (1994) Intraspecific molecular variation among Trichoderma harzianum S isolates colonizing mushroom compost in the British Isles, Microbiology 1994, (140), pp 769–777 20 Nguyen Quynh Nga, Pham Thanh Huyen, Pham Van Truong, Hoang Van Toan (2016), “Taxonomy of the genus Paris L (Melanthiaceae) in Vietnam”, Tạp chí sinh học, 38 (3), pp, 333-339 21 Shaw J., Lickey E.B., Schilling E E., Small R.L (2007),” Comparison of whole chloroplast genome sequences to choose noncoding regions for phylogenetic studies in angiosperms”, The tortoise and the hare III Amer J Bot, (94), pp 275-288 22 Van DeWiel C C M., Van Der Schoot J., Van Valkenburg J L., Duistermaat C H., Smulders (2009), “DNA barcoding discriminates the noxious invasive plant species, floating pennywort (Hydrocotyle ranunculoides L.f.), from non-invasive relatives”, Molecular Ecology Resources (9), pp.1086-1091 23 Vijayan K., Tsou C H (2010), “DNA barcoding in plants: taxonomy in a new perspective”, Current science, vol 99, pp 1530 - 1540 24 Wang G X., Han J., Zhao L W., Jiang D X, Liu Y T., Liu X L (2010), “Anthelmintic activity of steroidal saponins from Paris polyphylla”, Phytomedicine 17, pp 1102-1105 25 Weiguo Z, Yile P, Shihai ZJ, Xuexia M, Yongping H (2005), Phylogeny of the genus Morus (Urticales: Moraceae) inferred from ITS and trnL-F sequences, (6), pp 563-569 37 26 Wu F., Mueller L A., Crouzillat D., Petiard V., Tanksley S D (2006), “Combining bioinformatics and phylogeneticộng to identify large sets of single-copy orthologous genes (COSII) for comparative, evolutionary and systematic studies: A test case in the euasterid plant clade”, Geneticộng (174), pp 1407-1420 27 Yao H., Song J., Liu C., Luo K., Han J (2010), Use of ITS2 region as the universal DNA barcode for plants and animals, PLoS ONE (5) 28 Yong H L., Jinlan R., Shilin C., Jingyuan S., Kun L., Dong L., Hui Y (2010), “Authentication of Taxillus chinensis using DNA barcoding technique”, Journal of Medicinal Plants Research Vol 4(24), pp 2706-2709 29 Zhang Z., Kudo T., Nakajima Y., Wang Y., (2001) Clarification of the relationship between the members of the family Thermomonosporaceae on the basis of the rDNS, 16S-23S rRNA internal transcribed spacer and 23S rDNA sequences and chemotaxonomic analysis Int J Syst Evol Microbiol, (51), pp 373-383 Tài liệu khác 30 http://botanyvn.com/default.asp 31 http://khoahoc.tv/ma-vach-dna-dung-trong-nhan-dien-thuc-vat-19296 (16/02/2008) 32 https://en.wikipedia.org/wiki/Paris_polyphylla#Taxonomy 33 https://www.dnabank.vn/publication?id=28 34 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/GU178944/ (KM242781/ HG475403/ GU178946/ KM242788/ KM242785/ GU178949/ GU178947/ GU178952/ GU178945/ JN417377/ KM242789/ GU178948/ KM242792/ KX146546/ AY192536/ DQ663684/ KX146531/ KX146539/ AY192538) 35 https://www.thaythuoccuaban.com/vithuoc/baylamothoa.htm 38 ... LINH NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI, GIẢI PHẪU VÀ PHÂN LOẠI CÂY BẢY LÁ MỘT HOA (PARIS) THU THẬP Ở LAI CHÂU Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 42 01 21 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Cán hướng dẫn khoa... QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 19 3.1 Kết nghiên cứu đặc điểm hình thái giải phẫu Bảy hoa 19 3.1.1 Đặc điểm hình thái mẫu Bảy hoa 19 3.1.2 Đặc điểm giải phẫu mẫu Bảy hoa 20 3.2 Kết nghiên. .. điểm hình thái, giải phẫu phân loại mẫu Bảy hoa (Paris) thu thập Lai Châu Mục tiêu đề tài Xây dựng liệu đặc điểm hình thái, giải phẫu đặc điểm đoạn gen matK, vùng gen ITS dùng phân loại thực vật