Đang tải... (xem toàn văn)
Tổng quan về cây lá đắng, quy trình chiết xuất tối ưu các loại cao chiết. Đánh giá và so sánh các hoạt tính sinh học trong các cao chiết của lá cây Lá đắng. Ứng dụng quy trình để sử dụng cho các nghiên cứu tiếp theo và nâng cao giá trị sử dụng trong lĩnh vực thực thẩm chức năng và định hướng trong dược phẩm.
NTTU-NCKH-05 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc Đơn vị chủ trì: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NCKH DÀNH CHO CÁN BỘ - GIẢNG VIÊN 2016 - 2017 Tên đề tài: NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT CÁC CHẤT CĨ HOẠT TÍNH SINH HỌC TỪ CÂY LÁ ĐẮNG (VERNONIA AMYGGDALINA DEL.) VÀ THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG α-GLUCOSIDASE IN VITRO Số hợp đồng: 2017.01.26/HĐ-KHCN Chủ nhiệm đề tài: Nguyễn Thị Chi Đơn vị công tác: Khoa Dược Thời gian thực hiện: 09 tháng TP Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 201 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc - Đơn vị chủ trì: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NCKH DÀNH CHO CÁN BỘ - GIẢNG VIÊN 201 -201 Tên đề tài: NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT CÁC CHẤT CĨ HOẠT TÍNH SINH HỌC TỪ CÂY LÁ ĐẮNG (VERNONIA AMYGGDALINA DEL.) VÀ THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG α-GLUCOSIDASE IN VITRO Số hợp đồng : 2017.01.26/HĐ-KHCN Chủ nhiệm đề tài: Nguyễn Thị Chi Đơn vị công tác: Khoa Dược Thời gian thực hiện: 09 tháng Các thành viên phối hợp cộng tác: STT Họ tên Chuyên ngành Cơ quan công tác Ký tên MỤC LỤC MỤC LỤC i, ii DANH MỤC HÌNH iii DANH MỤC BẢNG iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT .v DANH MỤC PHỤ LỤC vi TÓM TẮT KẾT QUẢ…………………………………………………………… …vii LỜI MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN 1.1 Tìm hiểu Lá đắng 1.2 Thành phần hóa học 1.3 Hoạt tính sinh học 13 1.3.1 Kháng khuẩn 13 1.3.2 Tiểu đường 15 1.3.3 Kháng oxy hóa 15 1.3.4 Chống ung thư 16 Chương NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 Mục tiêu nghiên cứu đối tượng nghiên cứu 18 2.2 Nội dung nghiên cứu 18 2.3 Phương pháp nghiên cứu 19 2.3.1 Xử lý nguyên liệu 19 2.3.2 Phương pháp đo độ ẩm 19 2.3.3 Chiết cao tổng cao phân đoạn 20 2.3.4 Khảo sát sơ thực vật .22 i 2.3.5 Phương pháp thử nghiệm hoạt tính sinh học 23 2.3.6 Khảo sát điều kiện chiết 27 Chương KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN .29 3.1 Đánh giá nguyên liệu .29 3.2 Chiết cao 29 3.2.1 Chiết cao tổng ethanol .29 3.2.2 Chiết cao tổng nước 29 3.2.3 Chiết cao phân đoạn 30 3.3 Khảo sát sơ thực vật 30 3.4 Khảo sát hoạt tính sinh học 31 3.4.1 Khả kháng oxy hóa DPPH 31 3.4.2 Khả ức chế enzyme α-glucosidase 32 3.4.3 Khả kháng viêm 33 3.5 Khảo sát điều kiện chiết 34 3.5.1 Khảo sát yếu tố dung môi 34 3.5.2 Khảo sát yếu tố nhiệt độ 35 3.5.3 Khảo sát yếu tố tỉ lệ lỏng rắn 36 3.5.4 Khảo sát yếu tố thời gian 37 3.5.5 Khảo sát yếu tố số lần chiết .38 3.5.6 Khảo sát hoạt tính sinh học cao tối ưu 39 3.6 Khảo sát khả ức chế enzyme α-glucosidase cao dichloromethane 42 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO 45 PHỤ LỤC 47 ii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Lá, hoa Lá đắng Hình 1.2: Luteolin luteolin 7-O-β-glucoside Hình 1.3: Sesquiterpene lactones phân lập từ V amygdalina .10 Hình 1.4: Các vernonioside phân lập từ Lá đắng 12 Hình 2.1: Tóm tắt nội dung nghiên cứu .19 Hình 2.2: Quy trình chiết phân đoạn 21 Hình 2.3: Phản ứng gốc tự DPPH chất chống oxy hóa 23 Hình 2.4: Quy trình đánh giá khả kháng oxy hóa DPPH 24 Hình 2.5: Quy trình thử hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase 26 Hình 3.1: Bột Lá đắng 29 Hình 3.2: So sánh IC50 mẫu cao vitamin C 31 Hình 3.3 : So sánh I% ức chế enzyme α-glucosidase mẫu cao .33 Hình 3.4: So sánh IC20 mẫu cao 34 Hình 3.5: So sánh I% ức chế enzyme α-glucosidase mẫu cao theo dung mơi 35 Hình 3.6: So sánh I% ức chế enzyme α-glucosidase mẫu cao theo nhiệt độ 36 Hình 3.7: So sánh I% ức chế enzyme α-glucosidase mẫu cao theo tỉ lệ rắn – lỏng 37 Hình 3.8: So sánh I% ức chế enzyme α-glucosidase mẫu cao theo thời gian 38 Hình 3.9: So sánh I% ức chế enzyme α-glucosidase mẫu cao theo số lần chiết .39 Hình 3.10: Khả ức chế enzyme α-glucosidase cao tối ưu 40 Hình 3.11: Khả kháng oxy hóa DPPH cao tối ưu 40 Hình 3.12: Khả kháng viêm cao tối ưu 41 Hình 3.13: Khả ức chế enzyme α-glucosidase phân đoạn .43 iii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Flavonoid có Bảng 1.2: Diterpenoid lactone Bảng 1.3: Các vernonioside phân lập HPLC 11 Bảng 1.4: Các hợp chất có Lá đắng 12 Bảng 3.1: Kết lượng cao tổng ethanol thu .29 Bảng 3.2: Kết chiết cao phân đoạn 30 Bảng 3.3: Kết khảo sát thực vật sơ 30 Bảng 3.4: Sơ thực vật cao phân đoạn 32 Bảng 3.5: Giá trị IC50, IC20 cao tối ưu cao tổng EtOH, nước 41 Bảng 3.6: Các phân đoạn cao dichloromethane sau chạy cột 42 iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT BuOH n- butanol DCM Dichloromethane DMSO Dimethylsulfoxide DPPH 1,1-diphenyl - - picrylhydrazyl EtOAc Ethyl acetate EtOH Ethanol GC-MS Gas chromatography-Mass spectrometry HPLC High Performance Liquid Chromatography IR Infrared Spectroscopy NMR Nuclear Magnetic Resonance MeOH Methanol p-NPG para-nitrophenyl α-D-glucopyranoside p-NP para-nitrophenol v DANH MỤC PHỤ LỤC Phụ lục 1: Hoạt tính kháng DPPH cao EtOH tổng 47 Phụ lục 2: Hoạt tính kháng DPPH cao Hexane 47 Phụ lục 3: Hoạt tính kháng DPPH cao DCM 47 Phụ lục 4: Hoạt tính kháng oxy hóa DPPH cao EtOAc 48 Phụ lục 5: Hoạt tính kháng oxy hóa DPPH cao n-Butanol .48 Phụ lục 6: Hoạt tính kháng oxy hóa DPPH cao phân đoạn nước 48 Phụ lục 7: Hoạt tính kháng oxy hóa cao tổng nước 49 Phụ lục 8: Hoạt tính kháng oxy hóa vitamin C .49 Phụ lục 9: Khả ức chế enzyme α-glucosidase cao 50 Phụ lục 10: Khả kháng viêm cao tổng EtOH 50 Phụ lục 11: Khả kháng viêm cao DCM 50 Phụ lục 12: Khả kháng viêm cao EtOAc .51 Phụ lục 13: Khả kháng viêm cao BuOH 51 Phụ lục 14: Khả kháng viêm cao phân đoạn nước 51 Phụ lục 15: Khả kháng viêm cao tổng nước 52 Phụ lục 16: Khảo sát yếu tố dung môi (1) .52 Phụ lục 17: Khảo sát yếu tố dung môi (2) .52 Phụ lục 18: Khảo sát yếu tố nhiệt độ .53 Phụ lục 19: Khảo sát yếu tố tỉ lệ rắn – lỏng 53 Phụ lục 20: Khảo sát yếu tố thời gian 54 Phụ lục 21: Khảo sát yếu tố số lần chiết 54 Phụ lục 22: Khả ức chế enzyme α-glucosidase cao tối ưu 55 Phụ lục 23: Khả kháng oxy hóa DPPH cao tối ưu 55 Phụ lục 24: Khả kháng viêm cao tối ưu 56 Phụ lục 25: Khả ức chế enzyme α-glucosidase phân đoạn 56 vi TÓM TẮT KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Sản phẩm thực đạt STT Sản phẩm đăng kí thuyết minh Lá dược liệu khô đạt độ ẩm: 9,2% Lá dược liệu khô độ ẩm: < 12% Cao tổng ethanol: 43,6 g Cao tổng ethanol 20 g Cao hexane, dichloromethane, etylacetat, butanol, Cao hexane, dichloromethane, etylacetat, butanol, nước: g nước: 19,8 g Hoạt tính kháng oxy hóa theo phương pháp DPPH: Cao dichloromethane hoạt tính cao IC50: 176,7 µg/mL Hoạt tính ức chế enym α-glucosidase: Cao phân Giá trị IC50 cao tổng cao thành đoạn dichloromethane có khả ức chế cao nhất: phần I% = 94,3% Hoạt tính kháng viêm: Cao phân đoạn dichloromethane có hoạt tính cao nhât IC20 = 74 µg/mL Phân lập phân đoạn từ cao dichloromethane thử hoạt tính ức chế enym α-glucosidase, phân đoạn F2 có khả ức chế cao ( nồng độ 500 µg/mL với I% = 57%) Khảo sát điều kiện chiết thích hợp: + Độ cồn: 40o + Tỉ lệ lỏng-rắn: 5/1 (ml/g) + Số lần chiết: lần + Thời gian chiết: 40 phút Cao tối ưu: + Hoạt tính kháng oxy hóa: IC50 = 51,9 µg/mL + Hoạt tính kháng viêm: IC20 = 164 µg/mL + Hoạt tính ức chế enym α-glucosidase: IC50 = 480 µg/mL Thời gian đăng kí: Từ tháng 4/2017 đến tháng 1/2018 Ngày nộp báo cáo: 18/01/2018 vii Chương 3: Kết bàn luận 3.6 Khảo sát khả ức chế enzyme α-glucosidase cao dichloromethane Qua trình khảo sát hoạt tính sinh học, nhận thấy cao phân đoạn dichloromethane có hoạt tính cao, đó, thực phân đoạn cao sắc kí cột silica gel để khảo sát khả ức chế enzyme α-glucosidase phân đoạn sau khảo sát Phân đoạn dichloromethane phân lập sắc kí cột sau: Pha tĩnh: silica gel 230-400 Mesh Pha động: dung môi từ không phân cực đến phân cực: hexane→ethyl acetate→ethanol Thực nhồi cột: cột nhồi 50 g Silica gel, dung môi sử dụng nhồi cột hexane Mẫu nhồi theo phương pháp gián tiếp: hòa tan g cao dung mơi ethyl acetate sau cho hấp phụ vào g silica gel, thực quay đuổi dung mơi sau nhồi vào cột Trong trình chạy cột, liên tục chấm sắc kí mỏng để kiểm tra chất phân lập Sau chạy cột, thu phân đoạn sau: Bảng 3.6:Các phân đoạn cao dichloromethane sau chạy cột Phân đoạn Đặc điểm Khối lượng (g) F1 Có màu vàng 0.16 F2 Có màu xanh đen 0.08 F3 Có màu xanh 0.04 F4 Có màu vàng cam 0.33 F5 Có màu xanh đen 0.21 F6 Có màu xanh nhạt 0.14 F7 Có màu nâu nhạt 0.23 Sau chạy cột, phân đoạn khảo sát khả ức chế enzyme αglucosidase nồng độ 500 μg/mL, kết trình bày hình sau: 42 Chương 3: Kết bàn luận 70 57.0 60 50.2 50 40 I% 30 20 17.8 17.4 10 9.1 10.3 F3 F4 12.8 8.0 F1 F2 F5 F6 F7 DCM Phân đoạn Hình 3.13: Khả ức chế enzyme α-glucosidase phân đoạn Dựa vào đồ thị, nhận thấy phân đoạn F2 có khả ức chế enzyme αglucosidase cao phân đoạn, sau tới phân đoạn F1, F3, F4, F5, F6, F7 tương đối thấp So với cao phân đoạn dichloromethane, phân đoạn F2 có khả ức chế enzyme cao khơng đáng kể, chứng tỏ phân đoạn F2 chứa nhiều hợp chất có hoạt tính cao Trong tương lai cần phân lập tiếp phân đoạn F2 để tìm hợp chất có khả ức chế enzyme cao cao 43 Chương : Kết luận CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN Kết luận Đề tài: “Nghiên cứu quy trình chiết xuất chất có hoạt tính sinh học từ Lá đắng (Vernonia Amygdalina Del.) thử hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase in vitr” trồng Đăk Lăk” thực nội dung đưa sau: - Đã chuẩn bị xử lý nguyên liệu đánh giá tính chất - Đã tiến hành chiết cao tổng cao phân đoạn, khảo sát hoạt tính sinh học khả kháng oxy hóa DPPH, ức chế enzyme α-glucosidase, kháng viêm Kết cho thấy cao phân đoạn dichloromethane ln cho hoạt tính cao tất cao - Phân đoạn cao DCM sắc kí cột silicagel để chia thành phân đoạn nhỏ để thử khả ức chế enzyme α-glucosidase Kết cho thấy phân đoạn F2 có khả ức chế enzyme cao - Khảo sát trình chiết để thu cao có khả ức chế enzyme αglucosidase cao Kết khảo sát sau: độ cồn 40o, nhiệt độ 50oC, tỉ lệ rắn – lỏng : 1-5, thời gian 40 phút, số lần chiết lần Cao tối ưu có hoạt tính kháng viêm, kháng oxy hóa, ức chế enzyme α-glucosidase ưu việt so với cao tổng nước cao tổng ethanol Kiến nghị Trong tương lai, đề tài phát triển theo hương sau: - Phân lập xác định cấu trúc hóa học hoạt chất cao phân đoạn dichloromethane để tìm hoạt chất tốt có khả ức chế enzyme αglucosidase cao - Nghiên cứu độc tính, ứng dụng Lá đắng vào dược phẩm, thực phẩm chức Chủ nhiệm đề tài ( ký ghi rõ họ tên) 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO 10 11 12 13 14 15 Yeap, S.K., et al., Vernonia amygdalina, an ethnoveterinary and ethnomedical used green vegetable with multiple bio-activities J Med Plants Res, 2010 4: p 2787-2812 Eyong, U., et al., Phytochemicals and micronutrients composition of root and stem bark extracts of Vernonia amygdalina Del Journal of Medicine and Medical Science, 2011 2(6): p 900-903 Clement, E., et al., Significance of Bitter Leaf (Vernonia Amagdalina) In Tropical Diseases and Beyond: A Review Malar Chemoth Cont, 2014 3(120): p Igile, G.O., et al., Flavonoids from Vernonia amygdalina and their antioxidant activities Journal of Agricultural and Food Chemistry, 1994 42(11): p 24452448 Tona, L., et al., In vitro antiplasmodial activity of extracts and fractions from seven medicinal plants used in the Democratic Republic of Congo Journal of Ethnopharmacology, 2004 93(1): p 27-32 Luo, X., et al., Isolation and structure determination of a sesquiterpene lactone (vernodalinol) from Vernonia amygdalina extracts Pharmaceutical biology, 2011 49(5): p 464-470 Kupchan, S.M., et al., Tumor inhibitors XLVII Vernodalin and vernomygdin, two new cytotoxic sesquiterpene lactones from Vernonia amygdalina Del The Journal of organic chemistry, 1969 34(12): p 3908-3911 Jisaka, M., et al., Bitter steroid glucosides, vernoniosides A 1, A 2, and A 3, and related B from a possible medicinal plant, Vernonia amygdalina, used by wild chimpanzees Tetrahedron, 1992 48(4): p 625-632 Ilondu, E., Phytochemical composition and efficacy of ethanolic leaf extracts of some Vernonia species against two phytopathogenic fungi Journal of Biopesticides, 2013 6(2): p 165 Alo, M., et al., Antibacterial activity of water, ethanol and methanol extracts of Ocimum gratissimum, Vernonia amygdalina and Aframomum melegueta Adv Appl Sci Res, 2012 3(2): p 844-848 Audu, S., et al., A study review of documented phytochemistry of Vernonia amygdalina (Family Asteraceae) as the basis for pharmacologic activity of plant extract Journal of Natural Sciences Research, 2012 2(7): p 1-8 Yar’adua, A.I., L Shuaibu, and A Nasir, Phytochemical and Antibacterial Investigation of Leaf Extracts of Vernonia amygdalina British Microbiology Research Journal, 2015 10(1) Atangwho, I.J., et al., Antioxidant versus anti-diabetic properties of leaves from Vernonia amygdalina Del growing in Malaysia Food chemistry, 2013 141(4): p 3428-3434 Saliu, J., et al., In vitro antidiabetes and antihypertension properties of phenolic extracts from bitter leaf (Vernonia amygdalina Del.) Journal of Food Biochemistry, 2012 36(5): p 569-576 Akah, P and C Okafor, Blood sugar lowering effect of Vernonia amygdalina Del, in an experimental rabbit model Phytotherapy Research, 1992 6(3): p 171-173 45 16 17 18 19 20 21 Owolabi Mbang, A., et al., Evaluation of the Antioxidant Activity and Lipid Peroxidation of the Leaves of Vernonia amygdalina, in Journal of Complementary and Integrative Medicine 2008 Imaga, N and D Bamigbetan, In vivo biochemical assessment of aqueous extracts of Vernonia amygdalina (Bitter leaf) International Journal of Nutrition and Metabolism, 2013 5(2): p 22-27 Adewole, E., et al., Antioxidant Activities and Nutritional Compositions of Vernonia Amygdalina International Journal of Basic and Applied Science, 2015 4(01): p 9-16 Izevbigie, E.B., J.L Bryant, and A Walker, A novel natural inhibitor of extracellular signal-regulated kinases and human breast cancer cell growth Experimental Biology and Medicine, 2004 229(2): p 163-169 Wong, F.C., et al., The anti-cancer activities of Vernonia amygdalina extract in human breast cancer cell lines are mediated through caspase-dependent and p53-independent pathways PloS one, 2013 8(10): p e78021 Văn Đức Thịnh, L.T.H.Q., Trần Công Luận Bước đầu khảo sát tác dụng sinh học dược liệu tứ bạch long (Blepharis maderspatensis (L.) Roth Tạp chí Y học Thành phố Hồ Chí Minh, 2012 tập 16 46 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Hoạt tính kháng DPPH cao EtOH tổng Nồng độ (μg/mL) A1 A2 A3 Acolor Ablank I1 I2 I3 I% SD 0,440 0,445 0,434 0,105 0,367 8,7 7,4 10,4 8,8 1,50 10 0,506 0,504 0,510 0,114 0,516 24,0 24,4 23,3 23,9 0,59 50 0,497 0,490 0,486 0,128 0,544 32,2 33,5 34,2 33,3 1,02 100 0,485 0,485 0,495 0,117 0,566 35,0 35,0 33,2 34,4 1,02 250 0,422 0,420 0,426 0,130 0,516 43,4 43,8 42,6 43,3 0,59 300 0,332 0,324 0,330 0,147 0,367 49,6 51,8 50,1 50,5 1,13 500 0,297 0,313 0,306 0,161 0,544 75,0 72,1 73,3 73,5 1,47 1000 0,359 0,353 0,368 0,346 0,346 96,2 98,0 93,6 96,0 2,18 Phụ lục 2: Hoạt tính kháng DPPH cao Hexane Nồng độ (μg/mL) A1 A2 A3 Acolor Ablank I1 I2 I3 I% SD 10 100 300 500 750 1000 0,464 0,470 0,475 0,062 0,483 16,8 15,5 14,5 15,6 1,14 0,466 0,469 0,470 0,094 0,48 22,5 21,9 21,7 22,0 0,43 0,456 0,454 0,453 0,126 0,48 31,3 31,7 31,9 31,6 0,32 0,444 0,434 0,434 0,158 0,483 40,8 42,9 42,9 42,2 1,20 0,429 0,431 0,430 0,175 0,604 57,9 57,6 57,8 57,8 0,17 0,334 0,306 0,321 0,225 0,48 77,3 83,1 80,0 80,1 2,92 0,245 0,254 0,243 0,224 0,516 95,9 94,2 96,3 95,5 1,14 Phụ lục 3: Hoạt tính kháng DPPH cao DCM Nồng độ (μg/mL) A1 A2 A3 Acolor Ablank I1 I2 I3 I% SD 10 100 200 300 500 1000 0,467 0,450 0,456 0,059 0,483 15,5 19,0 17,8 17,5 1,79 0,413 0,420 0,429 0,064 0,48 27,3 25,8 24,0 25,7 1,67 0,404 0,402 0,403 0,111 0,48 39,0 39,4 39,2 39,2 0,21 0,378 0,375 0,371 0,149 0,483 52,6 53,2 54,0 53,3 0,73 0,345 0,340 0,350 0,181 0,483 66,0 67,1 65,0 66,0 1,04 0,315 0,318 0,312 0,188 0,604 79,0 78,5 79,5 79,0 0,50 0,322 0,322 0,330 0,317 0,604 99,2 99,2 97,8 98,7 0,76 47 Phụ lục 4: Hoạt tính kháng oxy hóa DPPH cao EtOAc Nồng độ (μg/mL) A1 A2 A3 Acolor Ablank I1 I2 I3 I% SD 10 50 100 250 300 500 1000 0,422 0,422 0,432 0,101 0,367 12,5 12,5 9,8 11,6 1,57 0,514 0,509 0,513 0,098 0,516 19,4 20,3 19,6 19,8 0,51 0,480 0,482 0,480 0,103 0,544 30,7 30,3 30,7 30,6 0,21 0,470 0,460 0,459 0,102 0,566 35,0 36,7 36,9 36,2 1,07 0,383 0,389 0,397 0,113 0,516 47,7 46,5 45,0 46,4 1,36 0,301 0,309 0,305 0,136 0,367 55,0 52,9 54,0 54,0 1,09 0,289 0,295 0,290 0,132 0,544 71,1 70,0 71,0 70,7 0,59 0,248 0,251 0,262 0,234 0,478 97,1 96,4 94,1 95,9 1,54 Phụ lục 5: Hoạt tính kháng oxy hóa DPPH cao n-Butanol Nồng độ (μg/mL) A1 A2 A3 Acolor Ablank I1 I2 I3 I% SD 50 100 250 300 500 750 1000 0,523 0,524 0,518 0,064 0,544 15,6 15,4 16,5 15,9 0,59 0,510 0,518 0,519 0,101 0,566 27,7 26,3 26,1 26,7 0,87 0,426 0,429 0,423 0,100 0,516 36,8 36,2 37,4 36,8 0,58 0,426 0,423 0,423 0,112 0,516 39,1 39,7 39,7 39,5 0,34 0,337 0,330 0,331 0,105 0,544 57,4 58,6 58,5 58,1 0,70 0,219 0,224 0,222 0,134 0,516 83,5 82,6 82,9 83,0 0,49 0,207 0,211 0,218 0,145 0,478 87,0 86,2 84,7 86,0 1,16 Phụ lục 6: Hoạt tính kháng oxy hóa DPPH cao phân đoạn nước Nồng độ (μg/mL) A1 A2 A3 Acolor Ablank I1 I2 I3 I% SD 50 100 500 1000 2000 3000 5000 0,514 0,490 0,498 0,058 0,544 16,2 20,6 19,1 18,6 2,25 0,526 0,522 0,523 0,096 0,566 24,0 24,7 24,6 24,4 0,37 0,443 0,435 0,439 0,074 0,544 32,2 33,6 32,9 32,9 0,74 0,370 0,366 0,367 0,120 0,478 47,7 48,5 48,3 48,2 0,44 0,271 0,272 0,276 0,119 0,367 58,6 58,3 57,2 58,0 0,72 0,223 0,219 0,220 0,121 0,483 78,9 79,7 79,5 79,4 0,43 0,131 0,132 0,133 0,123 0,366 97,8 97,5 97,3 97,5 0,27 48 Phụ lục 7: Hoạt tính kháng oxy hóa cao tổng nước Nồng độ (μg/mL) A1 A2 A3 Acolor Ablank I1 I2 I3 I% SD 10 50 100 250 500 600 0,512 0,509 0,503 0,065 0,483 7,5 8,1 9,3 8,3 0,95 0,488 0,486 0,490 0,095 0,516 23,8 24,2 23,4 23,8 0,39 0,389 0,393 0,399 0,097 0,483 39,5 38,7 37,5 38,6 1,04 0,378 0,380 0,363 0,103 0,487 43,5 43,1 46,6 44,4 1,91 0,298 0,294 0,310 0,123 0,516 66,1 66,9 63,8 65,6 1,61 0,236 0,231 0,229 0,132 0,544 80,9 81,8 82,2 81,6 0,66 0,200 0,197 0,194 0,155 0,478 90,6 91,2 91,8 91,2 0,63 Phụ lục 8: Hoạt tính kháng oxy hóa vitamin C Nồng độ (μg/mL) A1 A2 A3 Acolor Ablank I1 I2 I3 I% SD 0,5 0,352 0,344 0,346 0,354 0,030 9,0 11,2 10,7 10,3 1,2 0,314 0,310 0,310 0,354 0,031 20,0 21,1 21,1 20,7 0,7 0,254 0,261 0,254 0,360 0,030 37,8 35,8 37,8 37,1 1,1 0,200 0,198 0,210 0,360 0,038 55,0 55,6 52,2 54,3 1,8 0,250 0,237 0,229 0,433 0,084 61,6 64,6 66,5 64,3 2,4 0,192 0,180 0,174 0,433 0,085 75,3 78,0 79,4 77,6 2,1 0,121 0,129 0,125 0,433 0,084 91,4 89,6 90,5 90,5 0,9 49 Phụ lục 9: Khả ức chế enzyme α-glucosidase cao Cao Nồng độ (μg/mL) A1 A2 A3 Acolor Ablank I1 I2 I3 I% SD EtOH (tổng) Hexane DCM EtOAc BuOH Nước Nước (tổng) 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 2,386 2,342 2,351 1,482 1,785 49,3 51,8 51,3 50,8 1,3 2,31 2,33 2,41 2,0175 1,785 83,6 82,5 78,0 81,4 3,0 2,102 2,284 2,063 2,0445 1,785 96,8 86,6 99,0 94,1 6,6 2,231 2,215 2,226 1,2515 1,785 45,1 46,0 45,4 45,5 0,5 1,901 1,948 1,912 0,4285 1,785 17,5 14,9 16,9 16,4 1,4 1,706 1,742 1,735 0,114 1,785 10,8 8,8 9,2 9,6 1,1 1,96 1,909 1,98 1,148 1,785 54,5 57,4 53,4 55,1 2,1 Phụ lục 10: Khả kháng viêm cao tổng EtOH Nồng độ (μg/mL) A1 A2 A3 Acolor Ablank I1 I2 I3 I% SD 500 1000 2,043 2,04 2,039 0,621 1,703 16,5 16,7 16,7 16,6 0,1 2,501 2,497 2,504 1,156 1,703 21,0 21,3 20,8 21,0 0,2 Phụ lục 11: Khả kháng viêm cao DCM Nồng độ (μg/mL) A1 A2 A3 Acolor Ablank I1 I2 I3 I% SD 50 100 1,55 1,539 1,52 0,093 1,779 18,1 18,7 19,8 18,9 0,9 1,589 1,583 1,585 0,197 1,763 21,0 21,4 21,3 21,2 0,2 50 Phụ lục 12: Khả kháng viêm cao EtOAc Nồng độ (μg/mL) A1 A2 A3 Acolor Ablank I1 I2 I3 I% SD 250 500 1,624 1,63 1,62 0,146 1,763 16,2 15,8 16,4 16,1 0,3 1,519 1,551 1,545 0,239 1,694 24,4 22,6 22,9 23,3 1,0 Phụ lục 13: Khả kháng viêm cao BuOH Nồng độ (μg/mL) A1 A2 A3 Acolor Ablank I1 I2 I3 I% SD 1000 1500 1,532 1,543 1,539 0,18 1,703 20,6 20,0 20,2 20,3 0,3 1,502 1,537 1,52 0,282 1,703 28,4 26,3 27,3 27,3 1,0 Phụ lục 14: Khả kháng viêm cao phân đoạn nước Nồng độ (μg/mL) A1 A2 A3 Acolor Ablank I1 I2 I3 I% SD 2000 1,575 1,567 1,55 0,058 1,883 19,4 19,9 20,8 20,0 0,7 51 Phụ lục 15: Khả kháng viêm cao tổng nước Nồng độ (μg/mL) A1 A2 A3 Acolor Ablank I1 I2 I3 I% SD 100 250 1,52 1,538 1,517 0,055 1,843 20,5 19,5 20,7 20,2 0,6 1,383 1,327 1,353 0,056 1,806 26,5 29,6 28,2 28,1 1,6 Phụ lục 16: Khảo sát yếu tố dung môi (1) Độ cồn (o) Nồng độ (μg/mL) A1 A2 A3 Acolor Ablank I1 I2 I3 I% I%tb SD (I%) Hiệu suất (%) SD (hiệu suất) Tuyệt đối L1 Tuyệt đối L2 80 L1 80 L2 60 L1 60 L2 500 500 500 500 500 500 1,999 2,081 2,107 1,1745 1,37 39,8 33,8 31,9 35,2 2,055 2,036 2,012 1,185 1,37 36,5 37,9 39,6 38,0 1,819 1,854 1,792 0,703 1,37 18,5 16,0 20,5 18,3 1,814 1,823 1,802 0,7005 1,37 18,7 18,1 19,6 18,8 1,652 1,636 1,632 0,703 1,37 30,7 31,9 32,2 31,6 1,662 1,664 1,614 0,6935 1,37 29,3 29,2 32,8 30,4 36,6 2,0 7,54 18,6 0,3 8,10 25,18 0,4 31,0 0,8 24,55 27,12 0,4 28,21 0,8 Phụ lục 17: Khảo sát yếu tố dung môi (2) Độ cồn (o) Nồng độ (μg/mL) A1 A2 40 L1 40 L2 20 L1 20 L2 L1 L2 500 500 500 500 500 500 1,131 1,131 1,107 1,143 1,48 1,497 1,49 1,502 1,396 1,375 1,389 1,378 52 A3 Acolor Ablank I1 I2 I3 I% I%tb SD (I%) Hiệu suất (%) SD (hiệu suất) 1,147 0,619 1,37 62,6 62,6 61,5 62,2 1,132 0,65 1,37 66,6 64,0 64,8 65,2 1,5 0,4345 1,37 23,7 22,4 22,2 22,8 63,7 2,1 1,489 0,454 1,37 24,4 23,5 24,5 24,1 1,393 0,3325 1,37 22,4 23,9 22,6 23,0 23,4 0,9 28,7 28,5 22,9 0,0 17,6 0,1 1,391 0,33 1,37 22,7 23,5 22,6 22,9 18,7 13,9 0,7 12,0 1,4 Phụ lục 18: Khảo sát yếu tố nhiệt độ Nhiệt độ (oC) Nồng độ (μg/mL) A1 A2 A3 Acolor Ablank I1 I2 I3 I% I%tb SD (I%) Hiệu suất (%) Hiệu suất TB (%) SD (hiệu suất) 50 L1 50 L2 60 L1 60 L2 70 L1 70 L2 80 L1 80 L2 90 L1 90 L2 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 1,131 1,107 1,131 1,143 1,147 1,132 0,619 0,65 1,334 1,334 61,6 65,7 61,6 63,0 60,4 63,9 61,2 64,2 62,7 2,1 1,334 1,34 1,366 0,607 1,334 45,5 45,1 43,1 44,6 1,389 1,445 1,412 0,655 1,334 44,9 40,7 43,2 43,0 43,8 1,1 28,65 31,13 30,56 28,48 1,381 1,489 1,383 1,482 1,38 1,453 0,589 0,666 1,334 1,334 40,6 38,3 40,5 38,8 40,7 41,0 40,6 39,4 40,0 0,9 1,412 1,416 1,445 1,416 1,464 1,437 0,537 0,531 1,334 1,334 34,4 33,6 31,9 33,6 30,5 32,0 32,3 33,1 32,7 0,6 1,508 1,501 1,505 1,511 1,485 1,536 0,6005 0,605 1,334 1,334 32,0 32,8 32,2 32,1 33,7 30,2 32,6 31,7 32,2 0,6 28,35 28,93 26,55 28,20 28,07 26,66 28,57 30,84 28,27 28,50 26,61 0,1 0,4 0,1 0,6 0,1 Phụ lục 19: Khảo sát yếu tố tỉ lệ rắn – lỏng Tỉ lệ rắn lỏng Nồng độ (μg/mL) 1-4 L1 1-4 L2 1-5 L1 1-5 L2 1-6 L1 1-6 L2 1-7 L1 1-7 L2 500 500 500 500 500 500 500 500 53 A1 A2 A3 Acolor Ablank I1 I2 I3 I% I%tb SD (I%) Hiệu suất (%) Hiệu suất TB (%) SD (hiệu suất) 1,520 1,506 1,525 0,599 1,588 42,0 42,9 41,7 42,2 1,512 1,489 1,53 0,579 1,588 41,2 42,7 40,1 41,3 1,403 1,421 1,397 0,590 1,588 48,8 47,7 49,2 48,6 41,8 0,6 1,423 1,489 1,501 0,690 1,588 53,8 49,7 48,9 50,8 49,7 1,6 26,5 24,5 28,7 1,389 1,401 1,392 0,551 1,588 47,2 46,5 47,0 46,9 47,9 1,4 1,478 1,467 1,441 0,651 1,588 47,9 48,6 50,3 49,0 29,6 30,1 28,5 1,521 1,531 1,559 0,705 1,588 48,6 48,0 46,2 47,6 1,493 1,487 1,501 0,640 1,588 46,3 46,6 45,8 46,2 46,9 1,0 30,6 31,0 25,50 28,57 29,86 30,78 1,4 0,1 0,4 0,3 Phụ lục 20: Khảo sát yếu tố thời gian Thời gian Nồng độ (μg/mL) A1 A2 A3 Acolor Ablank I1 I2 I3 I% I%tb SD (I%) Hiệu suất (%) Hiệu suất TB (%) SD (hiệu suất) 30 L1 30 L2 40 L1 40 L2 50 L1 50 L2 60 L1 60 L2 500 500 500 500 500 500 500 500 1,493 1,487 1,465 0,750 1,422 47,8 48,2 49,7 48,6 1,313 1,309 1,314 0,576 1,422 48,2 48,5 48,1 48,2 1,341 1,335 1,335 0,610 1,422 48,6 49,0 49,0 48,9 48,6 0,5 26,5 24,5 1,262 1,345 1,277 1,276 1,268 1,312 0,548 0,597 1,422 1,422 49,8 47,4 48,8 52,3 49,4 49,7 49,3 49,8 49,6 0,3 1,311 1,268 1,289 1,267 1,278 1,301 0,589 0,595 1,422 1,422 49,2 52,7 50,8 52,7 51,6 50,4 50,5 51,9 51,2 1,0 1,485 1,465 1,493 0,766 1,422 49,5 50,9 48,9 49,7 27,2 29,7 30,5 29,7 29,0 49,2 0,8 30,7 25,50 28,48 29,35 30,62 1,4 1,8 0,5 0,2 Phụ lục 21: Khảo sát yếu tố số lần chiết Số lần chiết Nồng độ (μg/mL) Lần (1) 500 Lần (2) 500 Lần (1) 500 Lần (2) 500 Lần (1) 500 Lần (2) 500 54 1,443 1,492 1,495 0,607 1,498 44,2 40,9 40,7 41,9 A1 A2 A3 Acolor Ablank I1 I2 I3 I% I%tb SD (I%) Hiệu suất (%) Hiệu suất TB (%) SD (hiệu suất) 1,482 1,481 1,476 0,612 1,498 41,9 42,0 42,3 42,1 1,443 1,429 1,467 0,611 1,498 44,5 45,4 42,9 44,2 42,0 0,1 18,5 1,432 1,435 1,44 0,609 1,498 45,1 44,9 44,5 44,8 44,5 0,4 17,7 28,7 18,1 0,6 28,3 28,5 0,3 1,389 1,405 1,402 1,407 1,413 1,403 0,627 0,62 1,498 1,498 49,1 47,6 48,3 47,5 47,5 47,7 48,3 47,6 48,0 0,5 33 32,7 32,9 0,2 Phụ lục 22: Khả ức chế enzyme α-glucosidase cao tối ưu Nồng độ (μg/mL) A1 A2 A3 Acolor Ablank I1 I2 I3 I% SD 100 250 500 750 1000 1,111 1,115 1,067 0,162 0,985 3,7 3,2 8,1 5,0 2,7 1,058 1,063 1,058 0,359 0,985 29,0 28,5 29,0 28,8 0,3 1,106 1,115 1,11 0,654 0,985 54,1 53,2 53,7 53,7 0,5 1,315 1,312 1,311 0,926 0,985 60,5 60,8 60,9 60,7 0,2 1,528 1,459 1,498 1,226 0,985 69,3 76,3 72,4 72,7 3,5 Phụ lục 23: Khả kháng oxy hóa DPPH cao tối ưu Nồng độ (μg/mL) A1 10 50 100 150 200 500 0,452 0,45 0,421 0,321 0,22 0,17 0,116 0,111 A2 0,47 0,449 0,392 0,318 0,241 0,182 0,147 0,113 A3 0,444 0,438 0,381 0,361 0,241 0,187 0,118 0,11 Acolor 0,091 0,093 0,095 0,087 0,091 0,131 0,122 0,124 Ablank 0,49 0,49 0,512 0,512 0,512 0,512 0,49 0,551 I1 26,3 27,1 36,3 54,3 74,8 92,4 101,2 102,4 I2 22,7 27,3 42,0 54,9 70,7 90,0 94,9 102,0 55 I3 28,0 29,6 44,1 46,5 70,7 89,1 100,8 102,5 I% SD 25,6 2,7 28,0 1,4 40,8 4,0 51,9 4,7 72,1 2,4 90,5 1,7 99,0 3,5 102,3 0,3 Phụ lục 24: Khả kháng viêm cao tối ưu Nồng độ (μg/mL) A1 100 150 200 500 750 1000 1500 4000 1,706 1,627 1,696 1,358 1,645 1,721 1,758 1,856 A2 1,678 1,635 1,699 1,382 1,663 1,734 1,7 1,867 A3 1,727 1,621 1,665 1,373 1,64 1,715 1,745 1,89 Acolor 0,058 0,062 0,064 0,081 0,083 0,081 0,074 0,078 Ablank 1,81 1,93 2,104 2,104 1,93 1,87 1,81 1,87 I1 9,0 18,9 22,4 39,3 19,1 12,3 7,0 4,9 I2 10,5 18,5 22,3 38,2 18,1 11,6 10,2 4,3 I3 7,8 19,2 23,9 38,6 19,3 12,6 7,7 3,1 I% SD 9,1 1,4 18,9 0,4 22,9 0,9 38,7 0,6 18,8 0,6 12,2 0,5 8,3 1,7 4,1 0,9 Phụ lục 25: Khả ức chế enzyme α-glucosidase phân đoạn Cao Nồng độ (μg/mL) A1 A2 A3 Acolor Ablank I1 I2 I3 I% SD F1 F2 F3 F4 F5 F6 F7 DCM 500 500 500 500 500 500 500 500 0,588 0,585 0,591 0,209 0,461 17,8 18,4 17,1 17,8 0,7 0,665 0,669 0,661 0,467 0,461 57,0 56,2 57,9 57,0 0,9 0,737 0,743 0,731 0,318 0,461 9,1 7,8 10,4 9,1 1,3 0,691 0,682 0,699 0,277 0,461 10,2 12,1 8,5 10,3 1,8 0,877 0,861 0,893 0,453 0,461 8,0 11,5 4,6 8,0 3,5 0,83 0,833 0,827 0,428 0,461 12,8 12,1 13,4 12,8 0,7 0,557 0,548 0,566 0,176 0,461 17,4 19,3 15,4 17,4 2,0 0,731 0,727 0,734 0,501 0,461 50,1 51,0 49,5 50,2 0,8 56 ... chỉnh hoạt tính sinh học Lá đắng Vì thế, điều đáng tiếc bỏ qua nguồn dược liệu thiên nhiên sẵn có nhiều tiềm Đó lý tơi chọn đề tài Nghiên cứu quy trình chiết xuất chất có hoạt tính sinh học từ Lá. .. NGHIÊN CỨU 2.1 Mục tiêu nghiên cứu đối tượng nghiên cứu Đề tài khảo sát hoạt tính sinh học Lá đắng cao tổng cao thành phần, đồng thời tối ưu quy trình chiết để thu cao có hoạt tính ức chế enzyme... đắng (Vernonia Amygdalina Del.) thử hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase in vitro trồng Đăk Lăk” với mục tiêu: - Xây dựng quy trình chiết xuất tối ưu loại cao chiết - Đánh giá so sánh hoạt tính