ĐẠI HỌC HUẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM  BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG NĂM 2018 Tên đề tài: NGHIÊN CỨU MỐI QUAN HỆ DI TRUYỀN CỦA SÒ HUYẾT GRANOSA) Ở MIỀN TRUNG Demo (ANADARA Version - Select.Pdf SDK VIỆT NAM Mã số : T.18 – TN - 25 Chủ nhiệm đề tài : Thái Vũ Uyên Châu Thời gian thực : 1/2018 – 11/2018 Thừa Thiên Huế, 11/2018 ĐẠI HỌC HUẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM  BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC CÔNG VÀ NGHỆ CẤP TRƯỜNG NĂM 2018 Tên đề tài: NGHIÊN CỨU MỐI QUAN HỆ DI TRUYỀN CỦA SÒ HUYẾT (ANADARA GRANOSA) Ở MIỀN TRUNG VIỆT NAM Demo Version - Select.Pdf SDK Mã số: T.18 – TN - 25 Chủ nhiệm đề tài: Thái Vũ Uyên Châu Cố vấn khoa học: PGS TS Trần Quốc Dung PHỐI HỢP NGHIÊN CỨU: Trần Văn Hiếu Nguyễn Thị Ngọc Thanh Thừa Thiên Huế, 11/2018 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành đề tài nghiên cứu này, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến thầy giáo cố vấn PGS TS Trần Quốc Dung tận tình giúp đỡ, hướng dẫn chúng tơi suốt q trình nghiên cứu, triển khai đề tài Chúng tơi xin gửi lời cảm ơn đến thầy, cô giáo khoa Sinh học quan tâm, động viên q trình nghiên cứu Chúng tơi xin gửi lời cảm ơn đến Viện Công nghệ sinh học tận tình giúp đỡ chúng tơi q trình thực đề tài Cuối cùng, xin chân thành cảm ơn nguồn kinh phí từ đề tài cấp Trường, mã số T.18 – TN – 25 Vì thời gian có hạn hạn chế kinh nghiệm nghiên cứu nên khơng tránh khỏi thiếu sót, chúng tơi mong nhận ý kiến đóng góp từ quý thầy cô bạn để đề tài nghiên cứu hoàn thiện Xin chân thành cảm ơn! Huế, ngày 25 tháng 11 năm 2018 Demo Version - Select.Pdf SDK Chủ nhiệm đề tài Thái Vũ Uyên Châu LỜI CAM ĐOAN Chúng gồm Thái Vũ Uyên Châu, Trần Văn Hiếu, Nguyễn Thị Ngọc Thanh sinh viên khoa Sinh học, trường Đại học Sư phạm Huế Chúng xin cam đoan: - Đây cơng trình nghiên cứu thân trực tiếp thực hướng dẫn PGS TS Trần Quốc Dung - Công trình khơng bị trùng lặp với cơng trình nghiên cứu khác cơng bố - Các số liệu, thơng tin, hình ảnh nghiên cứu xác, trung thực khách quan Chúng tơi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm cam kết Huế, ngày 25 tháng 11 năm 2018 Demo Version - Select.Pdf SDK Chủ nhiệm đề tài Thái Vũ Uyên Châu ĐẠI HỌC HUẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI Thông tin chung: - Tên đề tài: Nghiên cứu mối quan hệ di truyền sò huyết (Anadara granosa) miền Trung Việt Nam - Sinh viên thực hiện: Thái Vũ Uyên Châu - Lớp: 4A Khoa: Sinh học Năm thứ: Số năm đào tạo: năm - Người hướng dẫn: PGS TS Trần Quốc Dung Mục tiêu đề tài: Đánh giá mối quan hệ di truyền quần thể sò huyết (Anadara granosa) miền Trung Việt Nam Tính sáng tạo: Nghiên cứu đa dạng di truyền quần thể sò huyết A granosa chưa thấy công bố Việc nghiên cứu đa dạng di truyền quần thể sò huyết A granosa giúp đánh giá chi tiết nguồn gen quần thể đặc biệt đánh giá đa dạng mặt di truyền cá thể quần thể, mô tả mối quan hệ cá thể quần thể loài nhận biết, chọn lọc, bảo tồn nguồn gen nhằm trì đa dạng sinh học Kết nghiên cứu: 4.1 Đặc điểm hình thái sò huyết A granosa 4.2 Tách chiết DNA tổng số 4.3 Kết phân tích RAPD 4.4 Mối quan hệ di truyền cá thể sò huyết A granosa dựa vào thị RAPD Đóng góp vềDemo mặt kinh tế - xã hội, giáo dục đào tạo, an ninh, quốc phòng khả Version - Select.Pdf SDK áp dụng đề tài: Tài liệu tham khảo cho sinh viên ngành Sinh học nói chung Sư phạm Sinh học nói riêng Cơng bố khoa học sinh viên từ kết nghiên cứu đề tài (ghi rõ tên tạp chí có) nhận xét, đánh giá sở áp dụng kết nghiên cứu (nếu có): Thái Vũ Uyên Châu, Trần Văn Hiếu, Nguyễn Thị Ngọc Thanh (2018), Một số đặc điểm hình thái sò huyết Anadara granosa miền Trung Việt Nam, Kỷ yếu Hội nghị Khoa học Sinh viên năm học 2018-2019, Trường Đại học Sư phạm, Đại học Huế Ngày 25 tháng 11 năm 2018 Sinh viên chịu trách nhiệm thực đề tài Thái Vũ Uyên Châu Nhận xét người hướng dẫn đóng góp khoa học sinh viên thực đề tài (phần người hướng dẫn ghi): Xác nhận đơn vị Ngày tháng năm Người hướng dẫn ĐẠI HỌC HUẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÔNG TIN VỀ SINH VIÊN CHỊU TRÁCH NHIỆM CHÍNH THỰC HIỆN ĐỀ TÀI I SƠ LƯỢC VỀ SINH VIÊN: Họ tên: Thái Vũ Uyên Châu Sinh ngày: 29 tháng 10 năm 1996 Nơi sinh: Đà Nẵng Lớp: 4A Khóa: 2015 - 2019 Khoa: Sinh học Địa liên hệ: 1/1 Lê Hồng Phong, phường Phú Nhuận, thành phố Huế Điện thoại: 0971473994 Email: nithai381@gmail.com II Q TRÌNH HỌC TẬP (kê khai thành tích sinh viên từ năm thứ đến năm học): * Năm thứ 1: Ngành học: Sư phạm Khoa: Sinh học Kết xếp loại học tập: Trung bình * Năm thứ 2: Demo Version - Select.Pdf SDK Ngành học: Sư phạm Khoa: Sinh học Kết xếp loại học tập: Khá * Năm thứ 3: Ngành học: Sư phạm Khoa: Sinh học Kết xếp loại học tập: Khá Ngày 25 tháng 11 năm 2018 [ Xác nhận đơn vị Sinh viên chịu trách nhiệm thực đề tài Thái Vũ Uyên Châu DANH MỤC CÁC BẢNG Số hiệu bảng Tên bảng Trang Bảng 2.1 Các mẫu sò huyết A granosa sử dụng nghiên cứu 15 Bảng 2.2 Trình tự primer ngẫu nhiên sử dụng 16 nghiên cứu Bảng 2.3 Các hóa chất sử dụng nghiên cứu 16 Bảng 2.4 Những thiết bị sử dụng nghiên cứu 17 Bảng 2.5 Thành phần phản ứng PCR-RAPD 20 Bảng 3.1 Kích thước vỏ sò huyết A granosa (mm) 22 Bảng 3.2 Thể tích vỏ thể tích khoang vỏ sò huyết A 23 granosa (ml) Bảng 3.3 Trọng lượng vỏ khô (g) tỷ trọng vỏ (DSWT/SV) 24 Bảng 3.4 Chiều dài dây chằng giá trị đối xứng vỏ sò huyết 25 A granosa (mm) Demo Version - Select.Pdf SDK Bảng 3.5 Khối lượng thể (g) số tia phóng xạ sò huyết 26 A granosa (mm) Bảng 3.6 Số cá thể khuếch đại số bang khuếch đại primer 34 DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Số hiệu hình ảnh Tên hình ảnh Trang Hình 1.1 Đặc điểm hình thái vỏ sò huyết A granosa Hình 2.1 Các địa điểm thu mẫu sò huyết A granosa sử 15 dụng nghiên cứu Hình 2.2 Sơ đồ mơ tả phương pháp đo đặc điểm hình 18 thái Hình 3.1 Hình ảnh điện di DNA tổng số số cá 27 thể sò huyết A granosa Hình 3.2 Hình ảnh điện di PCR-RAPD với primer 28 OPA02 Hình 3.3 Hình ảnh điện di PCR-RAPD với primer 29 OPA09 Hình 3.4 Hình ảnh điện di PCR-RAPD với primer 30 Demo Version - Select.Pdf SDK OPA17 Hình 3.5 Hình ảnh điện di PCR-RAPD với primer 31 OPA18 Hình 3.6 Hình ảnh điện di PCR-RAPD với primer 32 OPB10 Hình 3.7 Hình ảnh điện di PCR-RAPD với primer 33 OPB17 Hình 3.8 Giản đồ phả hệ DNA cá thể sò huyết A granosa 35 MỤC LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu đề tài NỘI DUNG CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan sò huyết Anadara granosa 1.1.1 Danh pháp phân loại 1.1.1.1 Danh pháp 1.1.1.2 Phân loại 1.1.2 Đặc điểm phân bố Demo Version - Select.Pdf SDK 1.1.3 Đặc điểm hình thái sò huyết A granosa 1.1.3.1 Hình dạng vỏ 1.1.3.2 Màu sắc vỏ 1.1.4 Đặc điểm sinh học 1.1.4.1 Đặc điểm sinh trưởng 1.1.4.2 Thức ăn 1.1.4.3 Mùa vụ sinh sản 1.1.4.4 Tập tính sinh sản 1.1.4.5 Tuổi kích thước thành thục lần đầu 1.2 Tình hình nghiên cứu sò huyết A granosa 1.2.1 Trong nước 1.2.2 Trên giới 1.3 Ứng dụng thị phân tử nghiên cứu đa dạng di truyền 1.3.1 Kỹ thuật đa hình đoạn khuếch đại ngẫu nhiên (RAPD) 1.3.2 Một số kỹ thuật khác 10 1.3.2.1 Kỹ thuật đa hình chiều dài đoạn giới hạn (RFLP) 10 1.3.2.2 Kỹ thuật đa hình độ dài đoạn khuếch đại (AFLP) 11 1.3.2.3 Vi vệ tinh 11 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.1 Đối tượng, nguyên vật liệu thiết bị nghiên cứu 13 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 13 2.1.2 Nguyên vật liệu nghiên cứu 13 2.1.3 Hóa chất thiết bị sử dụng nghiên cứu 15 2.1.4 Thời gian nghiên cứu 16 2.1.5 Địa điểm nghiên cứu 16 Demo Version - Select.Pdf SDK 2.2 Phương pháp nghiên cứu 16 2.2.1 Phương pháp nghiên cứu đặc điểm hình thái 16 2.2.2 Phương pháp tách chiết DNA tổng số 17 2.2.3 Phương pháp điện di DNA 18 2.2.4 Phương pháp PCR-RAPD 19 2.2.5 Phương pháp xử lí số liệu 19 2.2.6 Xây dựng giản đồ phả hệ 20 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 21 3.1 Đặc điểm hình thái sò huyết A granosa 21 3.1.1 Kích thước vỏ 21 3.1.2 Thể tích vỏ thể tích khoang vỏ 22 3.1.3 Trọng lượng vỏ khô tỷ trọng vỏ 23 3.1.4 Chiều dài dây chằng giá trị đối xứng vỏ 24 3.1.5 Khối lượng thể số tia phóng xạ 25 3.2 Tách chiết DNA tổng số 25 3.3 Kết phân tích RAPD 26 3.3.1 Kết RAPD với primer OPA02 26 3.3.2 Kết RAPD với primer OPA09 27 3.3.3 Kết RAPD với primer OPA17 29 3.3.4 Kết RAPD với primer OPA18 29 3.3.5 Kết RAPD với primer OPB10 31 3.3.6 Kết RAPD với primer OPB17 32 3.4 Mối quan hệ di truyền cá thể Sò huyết A granosa dựa vào thị RAPD 33 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 35 Demo Version - Select.Pdf SDK Kết luận 35 Kiến nghị 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO 36 PHỤ LỤC MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Sò huyết (tên khoa học Anadara granosa) loại nhuyễn thể hai mảnh vỏ sống vùng ven biển, Việt Nam người dân quen gọi sò trứng hay sò tròn Hiện sò huyết ăn ưa thích Việt Nam số nước Sò huyết loại hải sản tốt cho sức khỏe Các thành phần dinh dưỡng sò huyết protein, lipid, đường tổng số… có tác dụng tăng cường dẻo dai, cung cấp lượng cho thể Trong sò huyết ngồi nguồn chất đạm phong phú, chứa nhiều khống chất có giá trị dinh dưỡng cao magiê, kẽm, selen đặc biệt sắt (sò huyết có hàm lượng Fe nhiều gấp lần so với đối tượng nhuyễn thể khác) Sò huyết khơng chứa axit amin (các kết nghiên cứu cho thấy sò huyết chứa loại axit amin không thay như: methionine, threonine, lysine, isoleucine, leucine, valine, arginine, histidine phenylalanine), mà có hàm lượng cao Omega-3, axit béo quan trọng giúp bảo vệ sức khỏe tim mạch, nguồn protein đặc biệt tốt Ngồi việc làm thực phẩm, thịt vỏ sò huyết y học cổ truyền dùng làm thuốc Theo Đơng y, thịt sò huyết có vị ngọt, mặn,Demo tính ấm, khơng độc, tác dụng bổSDK huyết, kiện vị, chứng huyết hư, thiếu Version - Select.Pdf máu, kiết lỵ máu mũi, viêm loét dày tá tràng, tiêu hóa kém…Sò huyết có vai trò quan trọng hệ sinh thái chúng lọc tạp chất từ nước Tuy nhiên ngày nay, với thị hóa, mở rộng khu dân cư khai thác mức làm cho số lượng sò huyết ngày suy giảm Ở Việt Nam sò huyết có nhiều đề tài nghiên cứu, nhiên nghiên cứu tập trung chủ yếu đặc điểm sinh sản (Hồng Thị Bích Đào, 2005); thành phần sinh hóa (Chế Thị Cẩm Hà, 2012); thành phần thức ăn (Nguyễn Ngọc Lâm, 1996); nuôi trồng (Tạ Văn Phương, 2006)…Riêng nghiên cứu đa dạng di truyền quần thể sò huyết A granosa chưa thấy công bố Việc nghiên cứu đa dạng di truyền quần thể sò huyết A granosa giúp đánh giá chi tiết nguồn gen quần thể đặc biệt đánh giá đa dạng mặt di truyền cá thể quần thể, mô tả mối quan hệ cá thể quần thể loài nhận biết, chọn lọc, bảo tồn nguồn gen nhằm trì đa dạng sinh học Xuất phát từ thực tiễn trên, chọn đề tài: “Nghiên cứu mối quan hệ di truyền sò huyết (Anadara granosa) miền Trung Việt Nam” Mục tiêu đề tài Đánh giá mối quan hệ di truyền quần thể sò huyết (Anadara granosa) miền Trung Việt Nam Demo Version - Select.Pdf SDK NỘI DUNG CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan sò huyết Anadara granosa 1.1.1 Danh pháp phân loại 1.1.1.1 Danh pháp Tên khoa học : Anadara granosa Tên thường gọi : Sò huyết, sò tròn 1.1.1.2 Phân loại Giới (Kingdom) : Animalia Ngành (Phylum) : Mollusca Lớp (Class) : Bivalvia Bộ (Order) : Arcoida Họ (Family) : Arcidae Demo Version - Select.Pdf SDK Giống (Genus) : Anadara Loài (Species) : Anadara granosa 1.1.2 Đặc điểm phân bố Sò huyết A granosa phân bố rộng khắp dải ven biển Việt Nam tập trung Quảng Ninh, Hải Phòng, Trà Vinh, Sóc Trăng, Cà Mau, Kiên Giang Chúng thường sống vùng bãi triều đến độ sâu 4m, cửa sông đầm phá Nền đáy bùn cát bùn, vùi sâu đáy 2-3 cm Nồng độ muối 20-30‰, mùa mưa xuống 5-15‰ khoảng thời gian 6-8 triều rút (Nguyễn Hữu Phụng, 1996) Sò huyết sống nhiệt độ 0-35oC, nhiệt độ thích hợp cho phát triển sò huyết 15-30oC (Tạ Văn Phương, 2006) Trên giới, sò huyết sống vùng biển thuộc Malaysia, Ấn Độ, Mianmar, Thái Lan, Nam Trung Quốc… ... Nghiên cứu mối quan hệ di truyền sò huyết (Anadara granosa) miền Trung Việt Nam Mục tiêu đề tài Đánh giá mối quan hệ di truyền quần thể sò huyết (Anadara granosa) miền Trung Việt Nam Demo Version... Đánh giá mối quan hệ di truyền quần thể sò huyết (Anadara granosa) miền Trung Việt Nam Tính sáng tạo: Nghiên cứu đa dạng di truyền quần thể sò huyết A granosa chưa thấy công bố Việc nghiên cứu đa... CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC CÔNG VÀ NGHỆ CẤP TRƯỜNG NĂM 2018 Tên đề tài: NGHIÊN CỨU MỐI QUAN HỆ DI TRUYỀN CỦA SÒ HUYẾT (ANADARA GRANOSA) Ở MIỀN TRUNG VIỆT NAM Demo Version - Select.Pdf SDK Mã