BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI -  - NGUYỄN THANH XUÂN XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƢỢNG NGUYÊN LIỆU TẠP CHẤT A CỦA TERAZOSIN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI - 2018 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI -  - NGUYỄN THANH XUÂN Mã sinh viên: 1301484 XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƢỢNG NGUYÊN LIỆU TẠP CHẤT A CỦA TERAZOSIN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Người hướng dẫn: NCS Th.S Đỗ Thị Thanh Thủy Nơi thực hiện: Bộ mơn Hóa Dƣợc Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ƣơng HÀ NỘI - 2018 LỜI CẢM ƠN Trƣớc trình bày nội dung đề tài mình, tơi xin chân thành gửi lời cảm ơn đến ngƣời thời gian qua bên cạnh hỗ trợ, động viên để tơi hồn thành tốt khóa luận tốt nghiệp Đầu tiên, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc tới NCS ThS Đỗ Thị Thanh Thủy - giảng viên Bộ mơn Hóa Dƣợc, trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội, ngƣời thầy trực tiếp hƣớng dẫn bảo từ ngày đầu làm nghiên cứu khoa học hoàn thành khóa luận Những điều học đƣợc từ kinh nghiệm quý báu giúp bƣớc tiếp chặng đƣờng khó khăn phía trƣớc Tơi xin cảm ơn Ban giám hiệu nhà trƣờng, phòng Đào tạo thầy cô giảng viên, kỹ thuật viên Bộ mơn Hóa Dƣợc cán Khoa Thiết lập chất chuẩn & chất đối chiếu Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ƣơng hết lòng tạo điều kiện cho thực đề tài Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình, ngƣời thân, bạn bè anh, chị, em nhóm nghiên cứu Kiểm nghiệm Bộ mơn Hóa Dƣợc ln giúp đỡ, chia sẻ khó khăn khích lệ tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Tơi khơng thể hồn thành khóa luận tốt nghiệp khơng có giúp đỡ tất ngƣời Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 12 tháng năm 2018 Sinh viên Nguyễn Thanh Xuân MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ, CÁC KÝ HIỆU VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Terazosin 1.1.1 Một số thông tin chung terazosin 1.1.2 Tác dụng định terazosin 1.1.3 Một số chế phẩm chứa terazosin thị trƣờng 1.2 Tạp chất A terazosin 1.2.1 Một số thông tin chung tạp A terazosin 1.2.2 Nguyên nhân gây tạp chất A 1.2.3 Phƣơng pháp xác định IAT TLC 1.2.4 Phƣơng pháp xác định IAT HPLC 1.3 Tổng quan phƣơng pháp hóa lý sử dụng nghiên cứu đề tài 1.3.1 Phƣơng pháp TLC 1.3.2 Phƣơng pháp HPLC 10 1.4 Thẩm định phƣơng pháp phân tích ngun liệu hóa dƣợc 11 1.4.1 Tính thích hợp hệ thống sắc ký 11 1.4.2 Độ đặc hiệu 12 1.4.3 Độ tuyến tính khoảng xác định 12 1.4.4 Độ xác 12 1.4.5 Độ 13 1.4.6 Độ ổn định dung dịch phân tích 13 1.5 Tình hình thiết lập tạp chuẩn A nƣớc giới 13 1.5.1 Tình hình nghiên cứu giới 13 1.5.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 14 CHƢƠNG NGUYÊN VẬT LIỆU, THIẾT BỊ, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 15 2.1.1 Hóa chất, chất chuẩn 15 2.1.2 Thiết bị 16 2.2 Nội dung nghiên cứu 16 2.2.1 Xây dựng phƣơng pháp định tính IAT TLC 16 2.2.2 Xây dựng phƣơng pháp định tính, định lƣợng IAT HPLC 17 2.2.3 Ứng dụng hai phƣơng pháp xây dựng để định tính, định lƣợng nguyên liệu IAT 17 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 17 2.3.1 Phƣơng pháp TLC 17 2.3.2 Phƣơng pháp HPLC 17 2.3.3 Thẩm định phƣơng pháp phân tích 17 2.3.4 Một số phƣơng pháp thống kê sử dụng nghiên cứu đề tài 18 CHƢƠNG THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 20 3.1 Thực nghiệm kết 20 3.1.1 Xây dựng phƣơng pháp định tính IAT TLC 20 3.2.2 Xây dựng phƣơng pháp định tính, định lƣợng IAT HPLC 23 3.2.3 Ứng dụng hai phƣơng pháp xây dựng để định tính, định lƣợng nguyên liệu IAT 36 3.2 Bàn luận 38 3.2.1 Phƣơng pháp định tính nguyên liệu IAT TLC 38 3.2.2 Phƣơng pháp định tính, định lƣợng nguyên liệu IAT HPLC 39 3.2.3 Bàn luận chung 41 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ, CÁC KÝ HIỆU VIẾT TẮT ACDQ : 4-Amino-2-cloro-6,7dimethoxyquinazolin ACN : Acetonitril BP (British Pharmacopoeia) : Dƣợc điển Anh DOX : Doxazosin EP (European Pharmacopoeia) : Dƣợc điển Châu Âu HL : Hàm lƣợng HPLC (High performance liquid chromatography) : Sắc ký lỏng hiệu cao IAT (Impurity A of terazosin) : Tạp chất A terazosin IR (Infrared) : Tia hồng ngoại KP (Korean Pharmacopoeia) : Dƣợc điển Hàn Quốc PA (Pure Analysis) : Tinh khiết phân tích MeOH : Methanol RSD (Relative standard deviation) : Độ lệch chuẩn tƣơng đối SKĐ : Sắc ký đồ TB : Trung bình TEZ : Terazosin TLC (Thin layer chromatography) : Sắc ký lớp mỏng TLTK : Tài liệu tham khảo USP (United State Pharmacopoeia) : Dƣợc điển Mỹ USPRS (United State Pharmacopoeia Reference : Chất đối chiếu Hội Standard) đồng Dƣợc điển Mỹ UV (Ultraviolet) : Tia tử ngoại VIS (Visible) : Ánh sáng nhìn thấy WHO (World Health Organization) : Tổ chức Y tế Thế giới DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Một số chế phẩm chứa terazosin thị trƣờng Bảng 1.2 Phƣơng pháp TLC xác định tạp chất A terazosin Bảng 2.1 Các hệ dung mơi khảo sát phƣơng pháp định tính IAT TLC 17 Bảng 3.1 Kết khảo sát hệ pha động phƣơng pháp TLC 21 Bảng 3.2 Kết khảo sát tính thích hợp hệ thống sắc ký 26 Bảng 3.3 Các thông số dung dịch phân giải 30 Bảng 3.4 Cách pha dung dịch thẩm định độ tuyến tính 31 Bảng 3.5 Kết khảo sát độ tuyến tính phƣơng pháp HPLC 31 Bảng 3.6 Kết thẩm định độ lặp lại phƣơng pháp HPLC 32 Bảng 3.7 Kết thẩm định độ lặp lại phƣơng pháp HPLC thiết bị khác Bảng 3.8 Kết thẩm định độ xác trung gian phƣơng pháp HPLC 33 33 Bảng 3.9 Kết thẩm định độ phƣơng pháp HPLC 34 Bảng 3.10 Kết khảo sát độ ổn định dung dịch chuẩn 35 Bảng 3.11 Kết khảo sát độ ổn định dung dịch thử 35 Bảng 3.12 Hàm lƣợng IAT nguyên liệu tổng hợp đƣợc 38 DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo terazosin Hình 1.2 Một số chế phẩm terazosin thị trƣờng Hình 1.3 Cơng thức cấu tạo tạp chất A terazosin theo USP 38 Hình 1.4 Sơ đồ phát sinh tạp chất A terazosin Hình 2.1 Tạp chuẩn A terazosin Hội đồng Dƣợc điển Mỹ 15 Hình 2.2 Chất chuẩn terazosin Hội đồng Dƣợc điển Mỹ 15 Hình 2.3 Cân phân tích METTLER TOLEDO XPE 26 d = 0,001 mg 16 Hình 3.1 Sắc ký đồ khảo sát pha động phƣơng pháp TLC 20 Hình 3.2 Sắc ký đồ xác định độ đặc hiệu phƣơng pháp định tính TLC 23 Hình 3.3 Phổ UV dung dịch IAT pha động 24 Hình 3.4 Sắc kí đồ thẩm định độ đặc hiệu phƣơng pháp HPLC 28 Hình 3.5 Kết xác định độ tinh khiết pic tạp A thử 29 Hình 3.6 Kết xác định độ tinh khiết pic tạp A chuẩn 29 Hình 3.7 Kết chồng phổ UV pic tạp A chuẩn pic tạp A thử 30 Hình 3.8 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc nồng độ diện tích pic IAT Hình 3.9 Sắc ký đồ định tính ngun liệu IAT TLC Hình 3.10 Sắc ký đồ mẫu chuẩn mẫu thử định tính nguyên liệu IAT HPLC 31 36 37 ĐẶT VẤN ĐỀ Theo “Báo cáo chung tổng quan ngành y tế năm 2016”, gánh nặng bệnh tật ngƣời cao tuổi chủ yếu gây bệnh không lây nhiễm, chiếm đến 86-88% số trƣờng hợp tử vong [1] Trong bệnh khơng lây nhiễm, có hai bệnh phổ biến nam giới tăng huyết áp phì đại lành tính tuyến tiền liệt Terazosin thuốc thuộc nhóm chẹn thụ thể α1-adrenergic đƣợc định điều trị nội khoa hai bệnh [24], [28], [39] Khi kiểm tra chất lƣợng nguyên liệu thành phẩm chứa terazosin, số Dƣợc điển yêu cầu thử giới hạn tạp chất, có tạp chất A (1-(4-amino6,7-dimethoxy-2-quinazolinyl)piperazin, dihydroclorid) [30], [40], [41], [42] Phƣơng pháp thử giới hạn tạp chất đòi hỏi cần có tạp chuẩn A, nhiên tạp chuẩn khơng có sẵn mà phải mua nƣớc với giá thành cao, gây khó khăn cho cơng tác kiểm nghiệm [16] Từ nhu cầu thực tế, nhóm nghiên cứu tổng hợp tinh chế thành công nguyên liệu tạp chất A mơn Hóa Dƣợc trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội [20] Tuy nhiên, để sử dụng nguyên liệu thiết lập tạp chuẩn, cần có phƣơng pháp định tính định lƣợng xác nguyên liệu IAT Vì vậy, đề tài “Xây dựng phương pháp định tính, định lượng nguyên liệu tạp chất A terazosin” đƣợc thực với ba mục tiêu sau: 1- Xây dựng phƣơng pháp định tính nguyên liệu IAT TLC 2- Xây dựng phƣơng pháp định tính, định lƣợng nguyên liệu IAT HPLC 3- Áp dụng phƣơng pháp xây dựng để định tính, định lƣợng IAT nguyên liệu tổng hợp đƣợc ... với ba mục tiêu sau: 1- Xây dựng phƣơng pháp định tính nguyên liệu IAT TLC 2- Xây dựng phƣơng pháp định tính, định lƣợng nguyên liệu IAT HPLC 3- Áp dụng phƣơng pháp xây dựng để định tính, định. .. Merck (Đức) Acid acetic băng PA + Ethyl acetat PA + Acid citric khan PA + Methanol PA & HPLC + Aceton PA + Natri citrat PA + Acetonitril PA & HPLC + n-propanol PA + n-butanol PA + n-hexan PA + Cloroform... sử dụng nguyên liệu thiết lập tạp chuẩn, cần có phƣơng pháp định tính định lƣợng xác ngun liệu IAT Vì vậy, đề tài Xây dựng phương pháp định tính, định lượng nguyên liệu tạp chất A terazosin