BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI - - PHẠM THỊ NHUNG NGHIÊN CỨU BÀI THUỐC CHỮA HUYẾT KHỐI TĨNH MẠCH CHI VỀ THỰC VẬT, HĨA HỌC VÀ THĂM DỊ TÁC DỤNG IN VITRO KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Hà nội - 2013 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI - - PHẠM THỊ NHUNG NGHIÊN CỨU BÀI THUỐC CHỮA HUYẾT KHỐI TĨNH MẠCH CHI VỀ THỰC VẬT, HĨA HỌC VÀ THĂM DỊ TÁC DỤNG IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Nguyễn Hồng Tuấn Nơi thực hiện: Bộ mơn Dược liệu Trường Đại học Dược Hà Nội Hà Nội - 2013 LỜI CẢM ƠN Trong q trình thực khóa luận tốt nghiệp, nhận nhiều hướng dẫn giúp đỡ thầy cơ, gia đình bạn bè Tơi xin trân trọng bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến TS Nguyễn Thu Hằng TS Nguyễn Hồng Tuấn hai thầy tận tình hướng dẫn động viên tơi giúp tơi hồn thành tốt khóa luận Tơi xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo, anh chị kỹ thuật viên môn Dược liệu tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình thực khóa luận Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến thầy cô trường Đại học Dược Hà Nội dạy bảo, dìu dắt tơi suốt năm học vừa qua Lời cảm ơn cuối xin gửi đến gia đình, bạn bè người ln quan tâm, động viên chỗ dựa tinh thần vững cho tơi hồn thành khóa luận Hà Nội, ngày 15 tháng năm 2013 Sinh viên Phạm Thị Nhung Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi MỤC LỤC Danh mục kí hiệu, chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình vẽ ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN Error! Bookmark not defined 1.1 Bài thuốc chữa huyết khối tĩnh mạch chiError! Bookmark not defined 1.2 Cây cau Error! Bookmark not defined 1.3 Cây dừa Error! Bookmark not defined 1.4 Cây chuối Error! Bookmark not defined 1.5 Giới thiệu chung q trình đơng máu bệnh huyết khối tĩnh mạch chi Error! Bookmark not defined Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨUError! Bookmark no 2.1 Nguyên vật liệu thiết bị Error! Bookmark not defined 2.1.1 Nguyên liệu Error! Bookmark not defined 2.1.2 Hóa chất, dụng cụ Error! Bookmark not defined 2.1.3 Thiết bị nghiên cứu Error! Bookmark not defined 2.2 Nội dung nghiên cứu Error! Bookmark not defined 2.2.1 Nghiên cứu thực vật Error! Bookmark not defined 2.2.2 Nghiên cứu thành phần hóa học Error! Bookmark not defined 2.2.3.Thăm dò ảnh hưởng in vitro thuốc trình đơng máu……………………………………………………………………19 2.2.4 Thăm dò ảnh hưởng in vitro thuốc ngưng tập tiểu cầu Error! Bookmark not defined 2.3 Phương pháp nghiên cứu Error! Bookmark not defined 2.3.1 Xác định tên khoa học Error! Bookmark not defined 2.3.2 Nghiên cứu đặc điểm vi học Error! Bookmark not defined 2.3.3 Nghiên cứu hóa học 20 2.3.4 Đánh giá ảnh hưởng in vitro thuốc q trình đơng máu Error! Bookmark not defined 2.3.5 Đánh giá ảnh hưởng in vitro thuốc ngưng tập tiểu cầu 20 Chương THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬNError! Bookmark not defi 3.1 Xác định tên khoa học nghiên cứu đặc điểm vi học mẫu nghiên cứu Error! Bookmark not defined 3.1.1 Cau Error! Bookmark not defined 3.1.2 Dừa 27 3.1.3 Chuối 32 3.2 Nghiên cứu thành phần hóa học 38 3.3 Nghiên cứu ảnh hưởng in vitro thuốc trình đơng máu ngưng tập tiểu cầu 45 3.4 Bàn luận 51 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 54 4.1 Kết luận 54 4.2 Đề xuất 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT APTT Thời gian Cephlin – kaolin dd dung dịch GS Giáo sư IC Nồng độ ức chế tổi thiểu INCIMEDI Nghiên cứu tầm sốt huyết khối tĩnh mạch sâu chi khơng triệu chứng NXB Nhà xuất pp page PT Thời gian Quick tr Trang TT Thời gian thrombin DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1: Một số loài thuộc chi Musa Việt Nam Bảng 2: Các yếu tố đông máu Bảng 3: Kết định tính nhóm chất dược liệu thuốc phản ứng hóa học Bảng 4: Kết định tính nhóm chất thuốc phản ứng hóa học Bảng 5: Thành phần mẫu quy trình thử nghiệm đánh giá ảnh hưởng thuốc q trình đơng máu Bảng 6: Kết đánh giá ảnh hưởng in vitro thuốc thời gian PT, APTT, TT Bảng 7: Thành phần mẫu quy trình thử nghiệm đánh giá ảnh hưởng thuốc ngưng tập tiểu cầu Bảng 8: Kết đánh giá ảnh hưởng in vitro thuốc ngưng tập tiểu cầu Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Hình Sơ đồ q trình đơng máu với đường nội sinh ngoại sinh Hình 1.1 Ảnh chụp cau thực địa Hình 1.2 Ảnh chụp đặc điểm cau Hình 1.3 Ảnh chụp dược liệu rễ cau Hình 1.4 Ảnh chụp vi phẫu rễ cau kính hiển vi Hình 1.5 Ảnh chụp đặc điểm bột rễ cau kính hiển vi Hình 2.1 Ảnh chụp dừa Hình 2.2 Ảnh chụp dược liệu rễ dừa Hình 2.3 Ảnh chụp vi phẫu rễ dừa duới kính hiển vi Hình 2.4 Ảnh chụp đặc điểm bột rễ dừa kính hiển vi Hình 3.1 Ảnh chụp chuối tiêu thực địa Hình 3.2 Ảnh chụp đặc điểm chuối tiêu Hình 3.3 Ảnh chụp dược liệu rễ chuối tiêu Hình 3.4 Ảnh chụp vi phẫu rễ chuối tiêu kính hiển vi Hình 3.5 Ảnh chụp đặc điểm bột rễ chuối tiêu kính hiển vi ĐẶT VẤN ĐỀ Huyết khối tĩnh mạch tắc nghẽn hay nhiều đoạn tĩnh mạch nông sâu cục máu đông cấu tạo fibrin huyết cầu Huyết khối tĩnh mạch gặp nhiều nơi hay gặp chi [6] Huyết khối chi theo máu đến phổi gây tắc động mạch phổi - gọi thuyên tắc phổi, bệnh lý nặng nề, dẫn đến tử vong đột ngột 80% huyết khối tĩnh mạch sâu khơng có triệu chứng xảy biến chứng nghiêm trọng thuyên tắc phổi Nếu bệnh nhân không gặp biến chứng thun tắc phổi có đến 20-50% sau bị hội chứng hậu huyết khối với biểu loét, đau nhức giới hạn vận động chi [15] Theo thông tin đưa '' Hướng dẫn chẩn đoán, điều trị và dự phòng Thuyên tắc - huyết khối tĩnh mạch '' Hội tim mạch Việt Nam năm 2011, Mỹ năm có khoảng 600.000 ca mắc thuyên tắc huyết khối tĩnh mạch dự đốn có khoảng 180.000 trường hợp tử vong biến chứng thuyên tắc phổi bệnh huyết khối tĩnh mạch sâu [19], [35] Nghiên cứu INCIMEDI nghiên cứu tầm sốt huyết khối tĩnh mạch sâu chi khơng triệu chứng Việt Nam bệnh nhân nội khoa nhập viện siêu âm Doppler GS Đặng Vạn Phước, GS Phạm Gia Khải GS Nguyễn Lân Việt cộng thực bệnh viện lớn phía Nam Bắc cho thấy có 22% bệnh nhân phát có huyết khối tĩnh mạch sâu siêu âm Doppler , khơng có triệu chứng Kết chứng minh tỷ lệ huyết khối tĩnh mạch sâu không gặp nước ta [15] Thuốc thường định để điều trị bệnh huyết khối tĩnh mạch chi heparin thuốc chống đông đường uống, nhược điểm thuốc gây tai biến chảy máu [4] Một xu hướng khác điều trị huyết khối tĩnh mạch chi sử dụng thuốc từ dược liệu Trong số Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi thuốc dân gian chữa bệnh huyết khối tĩnh mạch chi thuốc gồm rễ cau, rễ dừa, rễ chuối nhân dân Hưng Yên sử dụng cho hiệu tương đối tốt Ở nước ta, cau, dừa, chuối trồng phổ biến nhiều nơi, sử dụng rộng rãi đời sống y học Với mong muốn kế thừa tiếp tục phát huy thuốc dân gian Hưng Yên, tiến hành đề tài “ Nghiên cứu thuốc chữa huyết khối tĩnh mạch chi thực vật, hóa học thăm dò tác dụng in vitro.” với mục tiêu sau: 1- Nghiên cứu đặc điểm thực vật đặc điểm vi học dược liệu thuốc 2- Định tính thành phần hóa học dược liệu thuốc 3- Thăm dò số tác dụng in vitro thuốc Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 46 3.3.2 Chuẩn bị mẫu máu - Đối tượng lấy máu người bình thường tuổi từ 18 đến 55 tuổi, không mắc bệnh đông máu, khơng sử dụng chất có ảnh hưởng đến q trình đơng máu chức tiểu cầu - Lấy máu tĩnh mạch vào buổi sáng, máu lấy vào ống ngiệm có sẵn chất chống đơng natri citrat 3,8% theo tỉ lệ thể tích máu : thể tích chất chống đơng, trộn 3.3.3 Đánh giá ảnh hưởng in vitro cuả thuốc thời gian Quick (PT), thời gian Cephalin – kaolin (APTT), thời gian thrombin (TT) - Máu ly tâm với tốc độ 3000 vòng/phút máy ly tâm Universad 320 (Đức) thời gian 10 phút thu huyết tương nghèo tiểu cầu (PPP) - Lấy xác 1,00g cắn cho vào bình định mức 100ml, thêm nước đến vạch đủ 100ml, hòa tan cắn, lọc, thu dịch chiết có nồng độ mg/ml (khối lượng cắn/thể tích dung dịch) - Từ dung dịch pha loãng với nước cất thành nồng độ thích hợp để thử tác dụng - Trộn huyết tương với dịch chiết hóa chất thích hợp theo bảng - Đo thời gian PT, APTT,TT máy CA1500 khoa Huyết học bệnh viện Bạch Mai - Mẫu chứng mẫu chứa nước cất thay cho dịch chiết, tiến hành song song điều kiện với mẫu thử - Tiến hành đo mẫu chứng mẫu thử/ 1nồng độ dịch chiết dược liệu 47 Bảng 5: Thành phần mẫu quy trình thử nghiệm đánh giá ảnh hưởng thuốc q trình đơng máu Mẫu Thành phần Xét nghiệm số đông máu PT TT 50µl 50µl Huyết tương 50µl Dịch chiết dược liệu 50µl 50µl 50µl Thromboplastin 50µl 0 Cephalin-kaolin Dd CaCl2 0.025M Thrombin Thử Chứng APTT 50µl 50µl 0 50µl Tương tự mẫu thử,dịch chiết dược liệu thay nước cất - Kết : Kết đánh giá ảnh hưởng in vitro thuốc thời gian PT, APTT, TT trình bày bảng sau đây: Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 48 Bảng 6: Kết đánh giá ảnh hưởng in vitro thuốc thời gian PT, APTT, TT Mẫu Thử Chứng Nồng độ PT (s) APTT (s) 1,0 17,3± 0,36* 102,43 ± 11,75* 0,5 16,40 ± 0,26* 64,10 ± 2,89* 38,33 ± 1,94* 0,25 16,33 ± 0,06* 58,23 ± 2,14* 20,13 ± 0,50* 0,1 16,53 ± 0,15* 55,90 ± 1,77* 16,67 ± 0,12* 0,05 16,43 ± 0,06* 50,43 ± 0,65* 15,80 ± 0,20** 0,025 16,23 ± 0,15* 45,77 ± 0,45* 15,67± 0,31** 0,01 16,40 ± 0,2* 43,73 ±0,45** 15,56± 0,42** 0,005 16,30 ± 0,26* 44,17± 1,29** 15,73± 0,61** 15,67 ± 0,29 41,53 ± 1,37 15,67 ± 0,50 (mg/ml) * : p < 0,05 TT (s) Không đông (>100s) ** : p > 0,05 Nhận xét : Kết thử nghiệm cho thấy dịch chiết nước thuốc có ảnh hưởng đến thơng số thời gian PT, APTT, TT so với mẫu chứng cách phụ thuộc vào nồng độ Ở nồng độ 0,1 mg/ml; 0,25 mg/ml; 0,5 mg/ml; mg/ml dịch chiết thuốc làm kéo dài thời gian PT, APPT, TT so với mẫu chứng, nồng độ 1mg/ml thể tác dụng rõ rệt Thời gian PT mẫu chứng 15,67 ± 0,29(s), mẫu thử 17,3± 0,36(s); thời gian APTT chứng 41,53 ± 1,37(s), ảnh hưởng dịch chiết nồng độ 1mg/ml thời gian tăng lên gần gấp lần so với chứng 102,43 ± 11,75(s); thời gian TT chứng 15,67 ± 0,50(s), thử tăng lần lên tới > 100(s) Như vậy, kết thử nghiệm cho thấy nồng độ dịch chiết có mức độ ảnh hưởng khác lên thông số, dịch chiết ảnh hưởng rõ rệt lên thời gian APTT TT so với thời gian PT 49 Từ nồng độ ≤ 0,05 mg/ml dịch chiết khơng tác dụng thời gian TT so với chứng Ở nồng độ ≤ 0,01 mg/ml kết cho thấy dịch chiết khơng tác dụng kéo dài thời gian APTT so với chứng Trong nồng độ nhỏ khảo sát thử nghiệm 0,005 mg/ml dịch chiết thuốc có tác dụng kéo dài thời gian PT so với mẫu chứng (p < 0,05) 3.3.4 Đánh giá ảnh hưởng in vitro thuốc ngưng tập tiểu cầu - Chuẩn bị huyết tương giàu tiểu cầu: Máu đem ly tâm với tốc độ 500 vòng/ phút thời gian 10 phút,thu huyết tương giàu tiểu cầu (PRP), tiếp tục ly tâm phần máu lại với tốc độ 3000 vòng/ phút thời gian 10 phút, thu huyết tương nghèo tiểu cầu (PPP),thực máy ly tâm Universad 320 (Đức) - Lấy xác 1,00g cắn cho vào bình định mức 50ml, thêm dung dịch NaCl 0,9% đến vạch đủ 50ml, hòa tan cắn, lọc, thu dịch chiết có nồng độ mg/ml (khối lượng cắn/thể tích dung dịch) - Từ dung dịch pha loãng với dung dịch NaCl 0,9% thành nồng độ thích hợp để thử tác dụng - Tiến hành: Lấy xác 450µl PRP, thêm 50µl dịch chiết,vào cuvet máy đo độ ngưng tập tiểu cầu,ủ 10 phút 370C Thêm chất kích tập ADP 10µmol/l với thể tích 5µl Đo độ ngưng tập tiểu cầu máy đo Chronolog (Mỹ) khoa huyết học bệnh viện Bạch Mai Mẫu chứng mẫu có 50µl dung dịch NaCl 0,9% thay cho dịch chiết, tiến hành song song điều kiện với mẫu thử Tiến hành đo mẫu chứng mẫu thử/1nồng độ dịch chiết dược liệu Thành phần mẫu thử nghiệm trình bày bảng Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 50 Bảng Thành phần mẫu quy trình thử nghiệm đánh giá ảnh hưởng thuốc ngưng tập tiểu cầu Mẫu Thử Thành phần Xét nghiệm đo độ ngưng tập tiểu cầu Huyết tương 450µl Dịch chiết dược liệu 50µl Chất gây kích tập 5µl ADP 10µmol/l Chứng Tương tự mẫu thử, dịch chiết dược liệu thay dung dịch NaCl 0,9 % - Kết : Kết đánh giá ảnh hưởng in vitro thuốc ngưng tập tiểu cầu trình bày bảng sau đây: Bảng 8: Kết thử nghiệm đánh giá ảnh hưởng in vitro thuốc ngưng tập tiểu cầu Mẫu Thử Chứng Nồng độ Độ ngưng tập % Ức chế ngưng tập (mg/ml) tiểu cầu (%) tiểu cầu (%) 2,00 11,00±2,65* 84,58 1,00 23,00±7,55* 67,76 0,50 34,33±13,43* 51,87 0,25 65,00±2,65* 8,87 0,00 71,33±2,31 0,00 * : p < 0,05 Nhận xét: Kết cho thấy nồng độ thử nghiệm mg/ml,1 mg/ml, 0,5 mg/ml 0,25 mg/ml, dịch chiết thuốc có tác dụng ức chế kết tập tiểu cầu so với mẫu chứng (p < 0,05) Tác dụng giảm dần từ nống độ 2mg/ml đến 0,25 51 mg/ml, coi mẫu chứng không xảy tượng ức chế ngưng tập tiểu cầu hay % ức chế ngưng tập tiểu cầu 0% dịch chiết thuốc nồng độ mg/ml có % ức chế ngưng tập tiểu cầu 67,76%, mẫu thử nồng độ mg/ml ức chế ngưng tập tiểu cầu tới 84,58% so với mẫu chứng (p < 0,05) 3.4 Bàn luận 3.4.1 Về thực vật Đề tài xác định tên khoa học, mơ tả đặc điểm hình thái đặc điểm vi phẫu đặc điểm bột dược liệu rễ cau, rễ dừa, rễ chuối tiêu thuốc, góp phần vào việc tiêu chuẩn hóa, kiểm nghiệm dược liệu kiểm nghiệm thuốc Theo tổng quan tài liệu, nước ta có 10 lồi chuối khác nên việc thu hái rễ chuối dễ nhầm lẫn Các đặc điểm hình thái đặc điểm vi học chuối tiêu sở để tránh nhầm lẫn loại chuối sử dụng thuốc chữa huyết khối tĩnh mạch chi với loài chuối khác nước ta 3.4.2 Về hóa học Kết định tính sơ nhóm hợp chất phản ứng hóa học thành phần hóa học rễ cau có chứa flavonoid, tanin, saponin, acid hữu cơ, đường khử So với thành phần hóa học rễ cau báo cáo tài liệu [9], [13], [14], có thêm flavonoid, tanin, khơng thấy có alkaloid Rễ dừa có flavonoid, tanin, saponin, acid hữu cơ, đường khử, sterol, tương tự nhóm chất xác định số nghiên cứu báo cáo tài liệu tổng quan Kết thực nghiệm cho thấy thành phần rễ loài chuối sử dụng thuốc có thành phần tương tự lồi chuối Musa paradisiaca L., gồm flavonoid, tanin, saponin, đường khử, sterol Kết định tính dược liệu thuốc phản ứng hóa học làm sở cho việc tiêu chuẩn hóa kiểm nghiệm thuốc sau Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 52 3.4.3 Thăm dò ảnh hưởng in vitro thuốc q trình đơng máu ngưng tập tiểu cầu Hiện tượng tiểu cầu kết dính với tạo thành đám ngưng tập gọi ngưng tập tiểu cầu Hiện tượng tăng ngưng tập tiểu cầu xảy cỏ chế gây huyết khối tổn thương nội mô, tăng tính đơng máu, rối loạn huyết động Các tế bào máu có tiểu cầu ngưng tập giam giữ mạng lưới fibrin hình thành thơng qua q trình đơng máu với đường đơng máu nội sinh đơng máu ngoại sinh Vì thế, ngưng tập tiểu cầu hoạt động yếu tố đơng máu đóng vai trò quan trọng q hình thành huyết khối Chúng tơi tiến hành thăm dò ảnh hưởng in vitro dịch chiết nước thuốc thông số đặc trưng trình đơng máu (APTT, PT, TT) ngưng tập tiểu cầu, thấy dịch chiết nước thuốc có tác dụng kéo dài thời gian APPT, PT, TT làm giảm độ ngưng tập tiểu cầu so với mẫu chứng (p < 0,05) Kết chứng tỏ khả ức chế hệ đông máu nội sinh, ức chế hệ đông máu ngoại sinh, ức chế chuyển fibrinogen thành fibrin tác dụng ức chế ngưng tập tiểu cầu so với mẫu chứng dịch chiết nước thuốc cách có ý nghĩa thống kê Để đánh giá ảnh hưởng in vitro thuốc lên q trình đơng máu ngưng tập tiểu cầu, sử dụng dịch chiết thuốc nồng độ khác pha lỗng từ dịch chiết ban đầu Trong khn khổ đề tài, tiến hành đo mẫu nồng độ Mẫu chứng tiến hành song song với mẫu thử Kết đo máy CA1500 máy đo Chronolog (Mỹ) khoa huyết học bệnh viện Bạch Mai có độ xác cao Ưu điểm mơ hình thử nghiệm đơn giản, phù hợp với phạm vi đề tài khóa luận tốt nghiệp sinh viên Tuy nhiên, để nâng cao độ tin cậy kết thử nghiệm nên tiến hành số lượng mẫu lớn (từ mẫu trở lên nồng độ) Chuẩn bị dịch chiết ban đầu 53 điều kiện khác để xác định độ lặp lại kết Huyết tương thử nghiệm lấy từ nhiều đối tượng lứa tuổi, giới tính khác Có thể thay mẫu chứng dung dịch đệm gần giống với điều kiện in vivo thể Kết thăm dò ảnh hưởng in vitro thuốc q trình đơng máu ngưng tập tiểu cầu bước đầu giải thích tác dụng chữa bệnh huyết khối tĩnh mạch chi theo kinh nghiệm dân gian Kết nghiên cứu đề tài làm tiền đề định hướng cho việc tiêu chuẩn hóa, kiểm nghiệm thuốc tiếp tục nghiên cứu đánh giá ảnh hưởng in vivo thuốc trình đông máu ngưng tập tiểu cầu Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 54 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 4.1 Kết luận Sau thời gian thực hiện, đề tài đạt mục tiêu đề thu số kết sau: 4.1.1.Về thực vật  Đã xác định tên khoa học cau Areca catechu L., dừa Cocos nucifera L., chuối Musa paradisiaca L  Đã mô tả đặc điểm vi phẫu đặc điểm bột rễ cau, rễ dừa, rễ chuối tiêu góp phần tiêu chuẩn hóa kiểm nghiệm thuốc 4.1.2 Về hóa học  Định tính nhóm chất dược liệu thuốc phản ứng hóa học cho thấy: - Rễ cau có chứa flavonoid, tanin, saponin, acid hữu cơ, đường khử - Rễ dừa có flavonoid, tanin, saponin, acid hữu cơ, đường khử, sterol - Rễ chuối tiêu có flavonoid, tanin, saponin, đường khử, sterol - Bài thuốc có flavonoid, tanin, saponin, đường khử 4.1.3 Ảnh hưởng in vitro thuốc q trình đơng máu Kết thăm dò cho thấy thuốc có tác dụng làm kéo dài thời gian PT, APTT, TT so với mẫu chứng cách có ý nghĩa thống kê 4.1.4 Ảnh hưởng in vitro thuốc thuốc ngưng tập tiểu cầu Ở nồng độ thử nghiệm (2 mg/ml, mg/ml, 0,5 mg/ml 0,25 mg/ml), thuốc thể tác dụng ức chế ngưng tập tiểu cầu so với mẫu chứng cách có ý nghĩa thống kê 55 4.2 Đề xuất Với kết nghiên cứu bước đầu thu đây, đề xuất : - Nghiên cứu ảnh hưởng in vivo thuốc q trình đơng máu ngưng tập tiểu cầu - Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm thuốc chữa huyết khối tĩnh mạch chi Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Lê Đình Bích, Trần Văn Ơn (2007), Thực vật học, NXB y học, Hà Nội, tr 346- 347, 356-358 Bộ môn Dược liệu (2010), Thực tập dược liệu, Trường đại học Dược Hà Nội, Hà Nội Bộ môn Giải phẫu bệnh Đại học Y Hà Nội (2005), Giải phẫu bệnh học, NXB Y học, Hà Nội, tr 35-49 Bộ môn Nội Đại học Y Hà Nội (2007), Nội khoa sở, tập I, NXB Y học, Hà Nội, tr.136-137 Bộ mơn Tốn tin (2010), Xác suất thống kê, Trường Đại học Dược Hà Nội, tr.138 -140 Bộ Y tế (2008), Bách khoa thư bệnh học, tập IV, NXB Giáo dục, Hà Nội, tr 137-138 Bộ Y Tế (2009), Kỹ thuật xét nghiệm huyết học – truyền máu, NXB Y học, Hà Nội, tr.77-81, 97-99 Bộ Y tế (2008), Sinh lý học, NXB Giáo dục, Hà Nội,tr.126-129 Bùi Ngọc Phương Châu (2010), “ Nghiên cứu chiết tách, xác định thành phần hợp chất hóa học hạt rễ cau ”, Tuyển tập báo cáo Hội nghị Sinh viên Nghiên cứu Khoa học lần thứ Đại học Đà Nẵng năm 2010, tr 464- 468 10 Võ Văn Chi (1997), Từ điển thuốc Việt Nam, NXB Y học, tr 250251 11 Phạm Hoàng Hộ (2000), Cây cỏ Việt Nam, NXB Trẻ, Hồ Chí Minh, tập , tr 427-431 12 Đỗ Tất Lợi (1999), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, Hà Nội, tr.172-174, 918- 919 13 Lê Thanh Phước, Bành Nguyễn Anh Hào ( 2011), “ Góp phần khảo sát thành phần hóa học rễ cau ( Areca catechu L.)”, Tạp chí Khoa học, Trường Đại học Cần Thơ, 19b, tr 80-84 14 Lê Thanh Phước, Bành Nguyễn Anh Hào ( 2011), “ Nghiên cứu thành phần hóa học cao Ethyl acetat rễ cau ( Areca catechu L.)”, Tạp chí Khoa học, Trường Đại học Cần Thơ, 21a, tr 134-138 15 Sanofi Aventis ( 2010), Thuyên tắc tĩnh mạch huyết khối, Thơng cáo báo chí, 09.04.2010 16 Viện Dược liệu (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Tập 2, NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, tr 350-353, 465-469, 687-689 17 Viện Dược Liệu (2006), Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý thuốc từ thảo dược, NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, tr 119 Tiếng Anh 18 Anderson FA J (1991), ” Population-Based Perspective of the Hospital Incidence and Case-Fatality Rates of Deep Vein Thrombosis and Pulmonary Embolism The Worcester DVT Study”, Arch Intern Med, 151(5), pp 933-938 19 Bethesda (2008),” The Surgeon General’s Call to Action to Prevent Deep Vein Thrombosis and Pulmonary Embolism”, US Dept of Health and Human Services, MD: September 2008 20 Biswas Subrata Kumar, Anusua Chowdhury, Joysree Das, Sheikh Zahir Raihan, Manik Chandra Shill , Utpal Kumar Karmakar (2011), “Investigation of antibacterial activities of ethanol extracts of Musa paradisiaca L.”, Journal of Applied Pharmaceutical Science, 01 (06), pp.133-135 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 21 Chan Edward, Craig R Elvith (2006), “ Cocos nucifera (coconut)”, Species Profiles for Pacific Island Agroforestry, ver.2.1, pp 1-27 22 Dandjesso C, JR Klotoé, TV Dougnon, J Sègbo1, J-M Atègbo, F Gbaguidi, L Fah, B Fanou, F Loko andK Dramane (2012), “Phytochemistry and hemostatic properties of some medicinal plants sold as anti-hemorrhagic in Cotonou markets (Benin)”, Indian Journal of Science and Technology,Vol No 8, pp 3105-3109 23 JhaU, Oswal RJ, Shelke TT, Navegire VN (2011), “ Effect of Musa paradisiaca L extract against hyperammonemia in rats”, International Journal of Research in Pharmaceutical Sciences, 2(4), pp.553-556 24 JhaU, Oswal RJ, Shelke TT, Rajesh KS(2011), “ Diuretic effect of methanolic extract of Musa paradisiaca L root in rats”, Der Pharmacia Lettre, 3(4), pp 404-407 25 Karadi R.V., Arpan Shah, Pranav Parekh, Parvez Azmi (2011), “Antimicrobial Activities of Musa paradisiaca and Cocos nucifera”, International Journal of Research in Pharmaceutical and Biomedical Sciences, Vol (1), pp 264-267 26 Komala M Sivakumar, M Mohammed Moideen, Ruby Varghese, Basheeruddin Sheik, CK Dhanapal (2011), “Preliminary Phytochemical Screening and Anti-Bacterial activity of Cocos nucifera Linn root ”, Research Journal of Pharmaceutical, Biological and Chemical Sciences, Vol 2, pp.468-477 27 Mallick Chhanda, Kazi Monjr Ali, Kausik Chatterjee, Debidas Ghosh (2010), “ Diabetes induced Testicular Disorders Vis-a-vis Germ Cell Apoptosis in Abino Rat: Remedial Effect of Hexane Fraction of Root of Musa paradisiaca L and Leaf of Coccina india”, Journal of Heathy Science, 56(6), pp 641- 654 28 Mallick Chhandan, Rajkumar Maiti, Debidas Ghosh (2006), “ Antidiabetogenic Effects of Separate and Composite Extract of Seed of Jamun (Eugenia jambolsans) and Root of Kadali (Musa paradisiaca) in Streptozotocin-induced Diabetic Male Albino Rat”, International Journal of Pharmacology, 2(5), pp 492-503 29 Manicam Caroline, Janna Ong Abdullah, Eusni Rahayu Mohd Tohit, Zainina Seman, Sieo Chin Chin and Muhajir Hamid (2010), “In vitro anticoagulant activities of Melastoma malabathricum Linn aqueous leaf extract: A preliminary novel finding”, Journal of Medicinal Plants Research, Vol 4(14), pp 1464-1472 30 Marzouk Belsem , Ehsen Haloui, Najoua Akremi, Mahjoub Aouni, Zohra Marzouk and Nadia Fenina2 ( 2012), “Antimicrobial and anticoagulant activities of Citrullus colocynthis Schrad leaves from Tunisia (Medenine)”, African Journal of Pharmacy and Pharmacology, Vol 6(26), pp 1982-1988 31 Milagros Garcia Mesa, Anna Lisa Piccinelli, María Antonia Alfonso Valiente, Aldo Pinto, Alessia Fazio, Luca Rastrelli(2011), “Inhibition of human platelet aggregation in vitro by standardized extract of Wendtia calycina”, Brazilian Journal of Pharmacognosy Brazilian Journal of Pharmacognosy, 21(5), pp 884-888 32 Najim Abbas Jabir Al-Awwadi B.V.Sc M.V.Sc.,DEA.,Ph.D.(2010), “Effects of Achillea santolina extracts andfractions on human platelet aggregation in vitro and on rat arteriovenous shunt thrombosis in vivo”, Thi-Qar Medical Journal, Vol(4) No(3), pp.131-141 33 Pal D, Sarkar A, Gain S, Jana S, Mandal S ( 2011), “CNS depressant activities of roots of Coccos nucifera in mice”, Acta Pol Pharm, 68(2), pp 54 -249 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 34 Pierre Sạlnier, Lynn Crosbie, Asim K Duttaroy, “Inhibitory effect of aqueous extracts of some herbs on human platelet aggregation in vitro”, Platalets, 16(8), pp 469-473 35 Sampath K P Kumar, Debjit Bhowmik, S.Duraivel, M.Umadevi (2012), “Traditional and Medicinal Uses of Banana”, Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry, Vol No 3, pp 57-70 36 Skanderup Susan , Inge Tarnow, Alfonso Guzman,Per Mølgaard, Henrik Toft Simonsen ( 2012), “Mapuche Herbal Medicine Inhibits Blood Platelet Aggregation”, Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, Volume 2012, pp 1-9 37 Staples W George , Robert F Bevacqua (2006), “ Areca catechu ( betel nut palm)”, Species Profiles for Pacific Island Agroforestry, ver.I.3, pp 117 38 Wetwitayaklung P., Chutima Limmatvapariat, Sindhchai Keokitichai (2006), “ The study of antoxidant capacity in various part of Areca catechu L.”, Naresuan University Journal, 14(1), pp 1-14 39 Yakubu MT, Oyeyipo TO, Quadri AL, Akanji MA( 2013),” Effects of aqueous extract of Musa paradisiaca root on testicular function parameters of male rats.”, Journal of Basic and Clinical Physiology and Pharmacology, Volume 24, Issue 2, pp 151–157 Internet 40 www benhviendetmay.vn 41 www Flora of China @ efloras.org ... phi BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI - - PHẠM THỊ NHUNG NGHIÊN CỨU BÀI THUỐC CHỮA HUYẾT KHỐI TĨNH MẠCH CHI VỀ THỰC VẬT, HĨA HỌC VÀ THĂM DỊ TÁC DỤNG IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC... đời sống y học Với mong muốn kế thừa tiếp tục phát huy thuốc dân gian Hưng Yên, tiến hành đề tài “ Nghiên cứu thuốc chữa huyết khối tĩnh mạch chi thực vật, hóa học thăm dò tác dụng in vitro. ” với... chuối thuốc chữa huyết khối tĩnh mạch chi 2.2.2 Nghiên cứu thành phần hóa học Định tính dược liệu thuốc phản ứng hóa học 2.2.3 Thăm dò ảnh hưởng in vitro thuốc trình đơng máu 2.2.4 Thăm dò ảnh