BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC KỸ THUẬT CƠNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH KHOA MƠI TRƯỜNG VÀ CÔNG NGHỆ SINH HỌC o0o - ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA BA KẾT HỢP VỚI NAA VÀ 2,4-D LÊN MẪU CẤY LÁ KIM NGÂN (Lonicera japonica Thunb) Chuyên ngành: Công Nghệ Sinh Học Mã ngành : 111 GVHD: CN BÙI VĂN THẾ VINH SVTH : NGUYỄN THÁI QUỲNH QUYÊN MSSV : 105111053 Tp Hồ Chí Minh, tháng 07 năm 2009 Lời cảm ơn Em xin chân thành cảm ơn:  Ban Giám hiệu Trường Đại học Kỹ Thuật Công Nghệ Thành phố Hồ Chí Minh, Ban chủ nhiệm Bộ Môn Công Nghệ Sinh Học, tất quý thầy cô truyền đạt kiến thức cho em suốt trình học tập trường  Thầy Bùi Văn Thế Vinh tận tình hướng dẫn, truyền đạt kinh nghiệm giúp đỡ em suốt thời gian thực đề tài  Thầy Phạm Minh Nhựt thầy cô, anh chò nhân viên Phòng Thí Nghiệm khoa Môi Trường Công Nghệ Sinh Học thuộc Trường Đại học Kỹ Thuật Công Nghệ Thành phố Hồ Chí Minh tận tình hướng dẫn giúp đỡ em hoàn thành khoá luận  Cha mẹ suốt đời tận tụy để có ngày hôm  Xin gửi lời cảm ơn đến tập thể lớp 05DSH gắn bó, giúp đỡ suốt năm qua Sinh viên thực Nguyễn Thái Quỳnh Quyên Mục lục Lời cảm ơn Mục lục Danh mục chữ viết tắt i Danh mục bảng .ii Danh muïc hình iii MỞ ĐẦU .1 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích nội dung nghiên cứu 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Nội dung nghiên cứu TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Khái quát nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.1.1 Khái niệm 2.1.2 Tầm quan trọng phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.1.2.1 Về mặt lý luận sinh học 2.1.2.2 Về mặt thực tiễn sản xuất 2.1.3 Những thuận lợi khó khăn phương pháp nhân giống in vitro 2.1.4 Ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô 2.1.5 Các quan thực vật dùng nuôi cấy mô 10 2.1.6 Các bước nhân giống in vitro 10 2.1.6.1 Chọn lựa khử trùng mẫu cấy 10 2.1.6.2 .Tạo thể nhân giống in vitro 12 2.1.6.3 Nhân giống in vitro 13 2.1.6.4 .Tái sinh hoàn chỉnh in vitro 13 2.1.6.5 Chuyển in vitro vườn ươm 13 2.1.7 Quá trình tái sinh quan nhân giống in vitro14 2.1.7.1 Sự hình thành chồi bất đònh 15 2.1.7.2 Sự hình thành rễ bất đònh 17 2.1.8 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình phát sinh hình thái nuôi cấy in vitro .18 2.1.8.1 .Ảnh hưởng mẫu cấy 18 2.1.8.2 .Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy 21 2.1.9 Các chất khử trùng hóa học sử dụng nuôi cấy mô 26 2.2 Giới thiệu chung Kim Ngân Hoa 27 2.2.1 Vò trí phân loại 27 2.2.2 Đặc điểm quan trọng Kim Ngân Hoa 28 2.2.3 Tác dụng dược lý 31 2.2.4 Điều kiện trồng trọt .33 2.2.5 Những nghiên cứu Kim Ngân Hoa 36 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 37 3.1 Thời gian đòa điểm thí nghiệm 38 3.2 Vật liệu .38 3.2.1 Đối tượng nghiên cứu 38 3.2.2 Trang thiết bò dụng cụ 38 3.2.3 Các loại môi trường .39 3.2.4 Điều kiện nuôi cấy phòng nuôi cấy in vitro40 3.3 Phương pháp bố trí thí nghiệm 40 3.3.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát thời gian khử trùng mẫu cấy dung 3.3.2 dòch Javel 7% 40 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng cách đặt mẫu lên môi trường nuôi cấy đến khả phát sinh hình thái mẫu 41 3.3.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng chất kích thích tăng trưởng BA kết hợp với 2,4 D NAA lên phát sinh hình thái mẫu Kim Ngân Hoa 42 3.4 Phân tích thống kê 42 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .43 4.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát thời gian khử trùng mẫu cấy dung dòch Javel 7% 44 4.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng cách đặt mẫu lên khả phát sinh hình thái mẫu cấy 47 4.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng chất kích thích tăng trưởng BA kết hợp với 2,4 D NAA lên phát sinh hình thái mẫu Kim Ngaân Hoa 50 4.3.1 Thí nghiệm 3.1: Khảo sát ảnh hưởng chất kích thích tăng trưởng BA kết hợp với 2,4 D lên phát sinh hình thái mẫu Kim Ngaân Hoa 50 4.3.2 Thí nghiệm 3.2 : Khảo sát ảnh hưởng chất kích thích tăng trưởng BA kết hợp với NAA lên phát sinh hình thái mẫu Kim Ngân Hoa 58 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 68 5.1 Kết luận 69 5.2 Đề nghò .70 TÀI LIỆU THAM KHẢO 6.1 Tài liệu tham khảo nước 6.2 Tài liệu tham khảo nước PHỤ LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT  2,4-D : 2,4-dichlorophenolxyacetic acid  BA : 6-benzyladenine  MS : Môi trường MS (Murashige vaø Skoog,1962)  NAA : α – Naphthalene acetic acid DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Các quan thực vật dùng nuôi cấy mô Bảng 3.1 Môi trường MS bổ sung 2,4-D BA ảnh hưởng lên phát sinh hình thái mẫu Kim Ngân Hoa Bảng 3.2 Môi trường MS bổ sung NAA BA ảnh hưởng lên phát sinh hình thái mẫu Kim Ngân Hoa Bảng 4.1 Kết khảo sát thời gian khử trùng mẫu cấy Kim Ngân Hoa Bảng 4.2 Ảnh hưởng cách đặt mẫu cấy lên phát sinh hình thái sau tháng nuôi cấy Bảng 4.3 nh hưởng chất kích thích tăng trưởng BA kết hợp 2,4-D lên phát sinh hình thái mẫu Kim Ngân Hoa ghi nhận sau tháng nuôi cấy Bảng 4.4 nh hưởng chất kích thích tăng trưởng BA kết hợp NAA lên phát sinh hình thái mẫu Kim Ngân Hoa ghi nhận sau tháng nuôi cấy DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Cây Kim Ngân Hoa (Lonicera japonica Thunb) Hình 2.2 Một số hình ảnh Kim Ngân Hoa Hình 2.2 Hoa Kim Ngân phơi khô Hình 4.1 Cách đặt mẫu Hình 4.2 Mô sẹo phát sinh từ mẫu đặt theo cách khác Hình 4.3 Ảnh hưởng BA kết hợp với 2,4-D lên phát sinh mô sẹo mẫu Kim Ngân Hoa Hình 4.4 Ảnh hưởng BA kết hợp với NAA lên phát sinh mô sẹo mẫu Kim Ngân Hoa 1.1 Đặt vấn đề Kim Ngân hoa (Lonicera japonica Thunb) thuộc Họ Kim Ngân (Caprifolianceae) dược liệu chứa tanin saponin Hoa chứa flavonoid scolymosid lonicerin số carotenoid (ε caroten, cryptoxanthin, auroxanthin) Quả mọng giàu carotenoid mà phần lớn cryptoxanthin Lá chứa glucosid gọi loganin khoảng 8% tanin Theo Y học cổ truyền: Kim Ngân Hoa có tác dụng nhiệt giải độc Theo kết nghiên cứu dược lý đại chứng minh thuốc Kim Ngân Hoa có tác dụng: kháng khuẩn, chống viêm, làm giảm chất xuất tiết, giải nhiệt làm tăng tác dụng thực bào bạch cầu, tác dụng hưng phấn trung khu thần kinh cường độ 1/6 cà phê, làm hạ cholesterol máu, tăng tiết dòch vò mật Khi nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn in vitro phương pháp khuyếch tán hệ nồng độ, người ta thấy nước sắc cô đặc 100% hoa Kim Ngân có tác dụng kháng khuẩn mạnh trực khuẩn lỵ, dòch hạch, thương hàn, cận thương hàn, liên cầu khuẩn tan máu, phẩy khuẩn tả Tác dụng yếu trực khuẩn bạch hầu, E.Coli, phế cầu, tụ cầu khuẩn vàng Nước sắc Kim Ngân với nồng độ 201,2% ức chế trực khuẩn Shiga, với nồng độ 2050% ức chế trực khuẩn cận thương hàn, nồng độ 100% có tác dụng tiêu cầu khuẩn (Tài Nguyên Cây Thuốc Việt Nam) Mặc khác, Kim Ngân dược liệu quý dùng điều trò ung thư Đông Tây y ung thư tuyến vú, gan, vòm họng, cổ tử cung, u bướu giáp trạng, trực tràng, Ngoài tác dụng hoa làm thuốc, ứng dụng mỹ phẩm, cho cảnh đẹp, hoa thơm, mành che nắng mái che nắng, Kim Ngân có tác dụng hấp thu nhiệt ánh nắng mặt trời (cho quang hợp phát triển) nên mát mành tre, mành nhựa mái tôn chống nóng Ngoài ra, hút thán khí (CO2), nhả dưỡng khí (O2) làm môi trường, tạo bầu không khí lành Việt Nam xem nước có nguồn dược liệu phong phú đa dạng với số lượng 3.800 loài làm thuốc tổng số 10.600 loài thực vật thò trường đầy hứa hẹn nhu cầu sử dụng lớn không thuốc mà xu mỹ phẩm dùng nguyên liệu từ thiên nhiên thay nguyên liệu tổng hợp chiếm 90% tổng số mỹ phẩm sản xuất Tuy nhiên, vấn đề sản xuất, kinh doanh lưu thông, phân phối dược liệu, nguồn dược liệu chưa tương xứng với tiềm có nhiều bất cập Hơn 90% nguyên liệu sản xuất thuốc nước phải nhập khẩu, chủ yếu sản xuất loại thuốc thông thường, mặt hàng thuộc mạnh Việt Nam loại thuốc y học cổ truyền Stadtherr, R.J (1982) Ground covers for highway use Combined Proc International Plant Propagators Society 28:598-604 Stransky, J.J (1984) Forage yield of Japanese honeysuckle after repeated burning or mowing [Lonicera japonica] Journal of Range Management 37:237-238 Stransky, J.J J.N Hale, and L.K Halls (1976) Nutrient content and yield of burned or mowed Japanese honeysuckle [Lonicera japonica, leaf-browse] 29th Proceedings Annual Conference Southeastern Association Game & Fish Commissioners 1975 p 403406 Subbaiah MM, Minocha SC (1990) Plant Cell Rep : 370-373 Suk Weon Kim, Seung Cheol Oh, Dong Su In vaø Jang Ryol Liu (2003) High frequency somatic embryogenesis and plant regeneration in zygotic embryo cultures of Japanese honeysuckle Plant Cell, Tissue and Organ Culture 72: 277–280, 2003 Suzuki T, Inagawa Y, Harada T, Yalcawa T (1986) Mere Fac Agrie, Hokkaido Univ, Japan 15, : 104-110 Swink, F and G Wilhelm (1994) Plants of the Chicago region 4th ed Indiana Academy of Science Indianapolis, IN 921 p Tanahashi, T., Nagakura, N., Inouye, H., & Zenk, M H (1984) Radioimmunoassay for the determination of loganin and the bio- transformation of loganin to secologanin by plant cell cultures Phytochemistry, 23(9), 1917-1922 Thomas, L.K (1980) The impact of three exotic plant species on a Potomac island US National Park Service Science Monograph Series, No 13 179 p Thrower, S.L (1976) Hong Kong herbs and vines Government Printer Hong Kong 114 p Tian, M.K., X.H Meng, Z.J Li, H.Z Cheng, M.J Lu, and Q.Z Lin 1986 Studies on the use of scleroderma spp Chinese Journal of Biological Control 2:4,184 USDA (1971) Common weeds of the United States Dover Publications NY 463 p Wagner, W.H., Jr (1986) Japanese honeysuckle invasion Michigan Botanist 25:124 Wagner, W.L., D.R Herbst, and S.H Sohmer (1989) Contributions to the flora of hawaii (USA): II Begoniaeae-Violaceae and the monocotyledons Bishop Museum Occasional Papers 29:88130 Wagner, W.L., D.R Herbst, and S.H Sohmer (1990) Manual of the flowering plants of Hawai'i University of Hawaii Press/Bishop Museum Press, Honolulu Warrag E, Lesney MS, Rockwood DJ (1991) Plant Cell Rep : 586-589 Wendor., H., & Matern, U (1986) Differential response of cultured parsley cells to elicitors from two non-pathogenic strains of fungi European Journal of Biochemistry, 161(2), 391-398 Whigham, D (1984) The influence of vines on the growth of Liquidambar styraciflua L (sweetgum) Canadian Journal of Forest Research 14:37-39 Williams, C.E (1994) Invasive alien plant species of Virginia Dept Conservation and Recreation Wood, A and O.R Willis 1889 The new American botanist and florist American Book Co New York 449 p Wright D (1983) Plantsman : 236-252 Yamamoto H, Katano N, Ooi A, Inoue K (2000) Secologaninsynthase which catalyzes the oxidative cleavage of loganin into secologanin is a cytochrome P450 Phytochemistry 53: 7-12 Yamamoto, H., Katano, N., Ooi, A., & Inoue, K (1999) Transformation of loganin and 7-deoxyloganin into secologanin by Lonicera japonica cell suspension cultures Phytochemistry, 50(2), 417-422 Younce, M.H and W.A Skroch 1989 Control of selected perennial weeds with glyphosate Weed Science 37:360-364 Zenk MH (1980) Enzymatic synthesis of ajmalicine and related indole alkaloids J Nat Prod 43: 438-451 6.3 Tài liệu tham khảo internet http://www.nimm.org.vn/VienDuocLieu/chitiet.asp?id=149 http://vi.wikipedia.org/wiki/Caprifoliaceae http://plants.usda.gov/java/profile?symbol=LOJA http://pick5.pick.uga.edu/mp/20q?search=Lonicera+japonica http://www.forestencyclopedia.net/p/p1396 PHỤ LỤC Phụ lục Thành phần mơi trường khống MS (Murashige and Skoog, 1962) Khoáng đa lượng Khoáng vi lượng Sắt EDTA Vitamin Thành phần NH4NO3 KNO3 CaCl2.2H2O MgSO4.7H2O KH2PO4 MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O H3BO3 KI Na2MoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCl2.6H2O Na2.EDTA FeSO4.7H2O Myo-inositol Thiamin (B1) Nicotinic acid Pyridoxine HCl Glycine Nồng độ (mg/l) 1650 1900 440 370 170 23,3 8,6 6,2 0,83 0,25 0,025 0,025 37,3 27,8 100 0,1 0,5 0,5 Thí nghiệm1 Khảo sát thời gian khử trùng mẫu cấy dung dòch Javel (NaOCl) 7% ANOVA Table for ti le song by thoi gian Source Between groups Within groups Total (Corr.) Sum of Squares 1186.67 3360.0 4546.67 Df 24 29 Mean Square 237.333 140.0 F-Ratio 1.70 P-Value 0.1741 Summary Statistics for ti le song thoi gian Total Count 5 5 5 30 Average 80.0 92.0 100.0 96.0 92.0 88.0 91.3333 thoi gian Total Stnd kurtosis -1.36931 -1.52145 Standard deviation 20.0 10.9545 0.0 8.94427 10.9545 10.9545 12.5212 Coeff of variation 25.0% 11.907% 0.0% 9.31695% 11.907% 12.4482% 13.7094% 2.28218 -1.52145 -1.52145 0.481585 Table of Means for ti le song by thoi gian with 95.0 percent LSD intervals thoi gian Total Count 5 5 5 30 Mean 80.0 92.0 100.0 96.0 92.0 88.0 91.3333 Stnd error (pooled s) 5.2915 5.2915 5.2915 5.2915 5.2915 5.2915 Lower limit 72.2776 84.2776 92.2776 88.2776 84.2776 80.2776 Multiple Range Tests for ti le song by thoi gian Method: 95.0 percent LSD thoi gian Count Mean 80.0 88.0 92.0 92.0 96.0 5 100.0 Contrast 3-4 3-5 3-6 3-7 3-8 4-5 4-6 4-7 4-8 5-6 5-7 Sig * * Difference -12.0 -20.0 -16.0 -12.0 -8.0 -8.0 -4.0 0.0 4.0 4.0 8.0 Homogeneous Groups X XX XX XX X X +/- Limits 15.4448 15.4448 15.4448 15.4448 15.4448 15.4448 15.4448 15.4448 15.4448 15.4448 15.4448 Upper limit 87.7224 99.7224 107.722 103.722 99.7224 95.7224 Minimum 60.0 80.0 100.0 80.0 80.0 80.0 60.0 Maximum 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 Range 40.0 20.0 0.0 20.0 20.0 20.0 40.0 Stnd skewness 0.0 -0.555556 -2.04124 -0.555556 0.555556 -2.62 5-8 12.0 15.4448 6-7 4.0 15.4448 6-8 8.0 15.4448 7-8 4.0 15.4448 * denotes a statistically significant difference ANOVA Table for ti le nhiem by thoi gian Source Between groups Within groups Total (Corr.) Sum of Squares 1666.67 2080.0 3746.67 Df 24 29 Mean Square 333.333 86.6667 F-Ratio 3.85 P-Value 0.0106 Summary Statistics for ti le nhiem thoi gian Total Count 5 5 5 30 Average 20.0 8.0 0.0 0.0 0.0 0.0 4.66667 thoi gian Total Stnd kurtosis -1.36931 -1.52145 Standard deviation 20.0 10.9545 0.0 0.0 0.0 0.0 11.3664 Coeff of variation 100.0% 136.931% % % % % 243.566% 5.63078 Table of Means for ti le nhiem by thoi gian with 95.0 percent LSD intervals thoi gian Total Count 5 5 5 30 Mean 20.0 8.0 0.0 0.0 0.0 0.0 4.66667 Stnd error (pooled s) 4.16333 4.16333 4.16333 4.16333 4.16333 4.16333 Lower limit 13.924 1.92403 -6.07597 -6.07597 -6.07597 -6.07597 Multiple Range Tests for ti le nhiem by thoi gian Method: 95.0 percent LSD thoi gian Count Mean 0.0 5 0.0 0.0 0.0 8.0 20.0 Contrast 3-4 3-5 3-6 3-7 Sig * * * Difference 12.0 20.0 20.0 20.0 Homogeneous Groups X X X X XX X +/- Limits 12.1519 12.1519 12.1519 12.1519 Upper limit 26.076 14.076 6.07597 6.07597 6.07597 6.07597 Minimum 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 Maximum 40.0 20.0 0.0 0.0 0.0 0.0 40.0 Range 40.0 20.0 0.0 0.0 0.0 0.0 40.0 Stnd skewness 0.0 0.555556 5.42871 3-8 * 20.0 12.1519 4-5 8.0 12.1519 4-6 8.0 12.1519 4-7 8.0 12.1519 4-8 8.0 12.1519 5-6 0.0 12.1519 5-7 0.0 12.1519 5-8 0.0 12.1519 6-7 0.0 12.1519 6-8 0.0 12.1519 7-8 0.0 12.1519 * denotes a statistically significant difference ANOVA Table for ti le chet by thoi gian Source Between groups Within groups Total (Corr.) Sum of Squares 640.0 1280.0 1920.0 Df 24 29 Mean Square 128.0 53.3333 F-Ratio 2.40 P-Value 0.0670 Summary Statistics for ti le chet thoi gian Total Count 5 5 5 30 Average 0.0 0.0 0.0 4.0 8.0 12.0 4.0 thoi gian Total Stnd kurtosis Standard deviation 0.0 0.0 0.0 8.94427 10.9545 10.9545 8.13676 Coeff of variation % % % 223.607% 136.931% 91.2871% 203.419% 2.28218 -1.52145 -1.52145 0.589704 Table of Means for ti le chet by thoi gian with 95.0 percent LSD intervals Stnd error thoi gian Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit 0.0 3.26599 -4.76638 4.76638 0.0 3.26599 -4.76638 4.76638 5 0.0 3.26599 -4.76638 4.76638 4.0 3.26599 -0.766379 8.76638 8.0 3.26599 3.23362 12.7664 12.0 3.26599 7.23362 16.7664 Total 30 4.0 Multiple Range Tests for ti le chet by thoi gian Method: 95.0 percent LSD thoi gian Count Mean 0.0 0.0 5 0.0 4.0 8.0 12.0 Homogeneous Groups X X X XX XX X Minimum 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 Maximum 0.0 0.0 0.0 20.0 20.0 20.0 20.0 Range 0.0 0.0 0.0 20.0 20.0 20.0 20.0 Stnd skewness 2.04124 0.555556 -0.555556 3.53328 Contrast Sig Difference +/- Limits 3-4 0.0 9.53276 3-5 0.0 9.53276 3-6 -4.0 9.53276 3-7 -8.0 9.53276 3-8 * -12.0 9.53276 4-5 0.0 9.53276 4-6 -4.0 9.53276 4-7 -8.0 9.53276 4-8 * -12.0 9.53276 5-6 -4.0 9.53276 5-7 -8.0 9.53276 5-8 * -12.0 9.53276 6-7 -4.0 9.53276 6-8 -8.0 9.53276 7-8 -4.0 9.53276 * denotes a statistically significant difference Thí nghiệm Khảo sát ảnh hưởng cách đặt mẫu lên khả phát sinh hình thái mẫu cấy ANOVA Table Source Between groups Within groups Total (Corr.) Sum of Squares 0.0717826 0.0861245 0.157907 Df 16 17 Mean Square 0.0717826 0.00538278 F-Ratio 13.34 P-Value 0.0022 Coeff of variation 37.7547% 41.9471% 58.0006% Minimum 0.0459389 0.114339 0.0459389 Summary Statistics dat up dat ngua Total Count 9 18 Average 0.103017 0.229317 0.166167 dat up dat ngua Total Stnd kurtosis -0.907791 -0.673463 0.309665 Standard deviation 0.0388936 0.0961918 0.0963777 Table of Means with 95.0 percent LSD intervals dat up dat ngua Total Count 9 18 Mean 0.103017 0.229317 0.166167 Stnd error (pooled s) 0.0244558 0.0244558 Lower limit 0.0663573 0.192657 Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Count Mean dat up 0.103017 dat ngua 0.229317 Contrast dat up - dat ngua Sig * Homogeneous Groups X X Difference -0.1263 +/- Limits 0.0733187 Upper limit 0.139676 0.265976 Maximum 0.149039 0.368039 0.368039 Range 0.1031 0.2537 0.3221 Stnd skewness -0.32323 0.506837 1.78306 * denotes a statistically significant difference Thí nghiệm 3.1 Khảo sát ảnh hưởng chất kích thích tăng trưởng BA kết hợp với 2,4-D lên phát sinh hình thái mẫu Kim Ngân Hoa ANOVA Table Source Between groups Within groups Total (Corr.) Sum of Squares 4.45192 0.67626 5.12818 Df 14 60 74 Mean Square 0.317994 0.011271 F-Ratio 28.21 P-Value 0.0000 Summary Statistics A1 A2 A3 A4 A5 A6 A7 A8 A9 A10 A11 A12 A13 A14 A15 Total Count 5 5 5 5 5 5 5 75 Average 0.5335 0.78006 0.68716 0.53418 1.28192 0.77308 0.6321 1.21554 0.77334 0.53132 0.49182 0.7692 0.35552 0.68274 0.85406 0.726369 A1 A2 A3 A4 A5 A6 A7 A8 A9 A10 A11 A12 A13 A14 A15 Total Stnd kurtosis -1.02472 -1.19005 0.299232 -1.25639 -1.27802 0.520976 1.01874 -0.869758 -0.136567 -1.50253 -0.597578 1.51166 -0.815359 1.008 0.104529 3.8909 Standard deviation 0.0599594 0.0919018 0.105196 0.0731384 0.340059 0.082733 0.0659088 0.0301078 0.0302595 0.0528386 0.0440219 0.0435183 0.018963 0.0672788 0.0211653 0.263248 Coeff of variation 11.2389% 11.7814% 15.3088% 13.6917% 26.5273% 10.7017% 10.427% 2.47691% 3.91283% 9.94478% 8.95081% 5.65761% 5.33389% 9.85424% 2.47819% 36.2417% Table of Means with 95.0 percent LSD intervals A1 A2 A3 A4 Count 5 5 Mean 0.5335 0.78006 0.68716 0.53418 Stnd error (pooled s) 0.0474784 0.0474784 0.0474784 0.0474784 Lower limit 0.466345 0.712905 0.620005 0.467025 Upper limit 0.600655 0.847215 0.754315 0.601335 Minimum 0.4556 0.6719 0.5211 0.4501 0.873 0.6489 0.5521 1.1742 0.738 0.4734 0.4403 0.6954 0.3308 0.5716 0.8214 0.3308 Maximum 0.595 0.8737 0.7687 0.6075 1.6199 0.8738 0.7353 1.241 0.8163 0.5736 0.5506 0.8094 0.3754 0.7383 0.8734 1.6199 Range 0.1394 0.2018 0.2476 0.1574 0.7469 0.2249 0.1832 0.0668 0.0783 0.1002 0.1103 0.114 0.0446 0.1667 0.052 1.2891 Stnd skewness -0.478451 -0.0117079 -1.15631 -0.0447901 -0.377278 -0.573772 0.773622 -0.642761 0.387651 -0.526086 0.361832 -1.51223 -0.146295 -1.3603 -1.01976 4.62396 A5 A6 A7 A8 A9 A10 A11 A12 A13 A14 A15 Total 5 5 5 5 5 75 1.28192 0.77308 0.6321 1.21554 0.77334 0.53132 0.49182 0.7692 0.35552 0.68274 0.85406 0.726369 0.0474784 0.0474784 0.0474784 0.0474784 0.0474784 0.0474784 0.0474784 0.0474784 0.0474784 0.0474784 0.0474784 1.21477 0.705925 0.564945 1.14839 0.706185 0.464165 0.424665 0.702045 0.288365 0.615585 0.786905 Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Count Mean A13 0.35552 A11 0.49182 A10 0.53132 A1 0.5335 A4 0.53418 A7 0.6321 A14 0.68274 A3 0.68716 A12 0.7692 A6 0.77308 A9 0.77334 A2 0.78006 A15 0.85406 A8 1.21554 A5 1.28192 Contrast A1 - A2 A1 - A3 A1 - A4 A1 - A5 A1 - A6 A1 - A7 A1 - A8 A1 - A9 A1 - A10 A1 - A11 A1 - A12 A1 - A13 A1 - A14 A1 - A15 A2 - A3 A2 - A4 A2 - A5 A2 - A6 A2 - A7 A2 - A8 A2 - A9 A2 - A10 A2 - A11 A2 - A12 A2 - A13 A2 - A14 A2 - A15 A3 - A4 Sig * * * * * * * * * * * * * * * * * * Homogeneous Groups X X XX XX XX XX XX XX XX XX XX XX X X X Difference -0.24656 -0.15366 -0.00068 -0.74842 -0.23958 -0.0986 -0.68204 -0.23984 0.00218 0.04168 -0.2357 0.17798 -0.14924 -0.32056 0.0929 0.24588 -0.50186 0.00698 0.14796 -0.43548 0.00672 0.24874 0.28824 0.01086 0.42454 0.09732 -0.074 0.15298 +/- Limits 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 1.34907 0.840235 0.699255 1.28269 0.840495 0.598475 0.558975 0.836355 0.422675 0.749895 0.921215 A3 - A5 A3 - A6 A3 - A7 A3 - A8 A3 - A9 A3 - A10 A3 - A11 A3 - A12 A3 - A13 A3 - A14 A3 - A15 A4 - A5 A4 - A6 A4 - A7 A4 - A8 A4 - A9 A4 - A10 A4 - A11 A4 - A12 A4 - A13 A4 - A14 A4 - A15 A5 - A6 A5 - A7 A5 - A8 A5 - A9 A5 - A10 A5 - A11 A5 - A12 A5 - A13 A5 - A14 A5 - A15 A6 - A7 A6 - A8 A6 - A9 A6 - A10 A6 - A11 A6 - A12 A6 - A13 A6 - A14 A6 - A15 A7 - A8 A7 - A9 A7 - A10 A7 - A11 A7 - A12 A7 - A13 A7 - A14 A7 - A15 A8 - A9 A8 - A10 A8 - A11 A8 - A12 A8 - A13 A8 - A14 A8 - A15 A9 - A10 A9 - A11 A9 - A12 A9 - A13 A9 - A14 A9 - A15 A10 - A11 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * -0.59476 -0.08592 0.05506 -0.52838 -0.08618 0.15584 0.19534 -0.08204 0.33164 0.00442 -0.1669 -0.74774 -0.2389 -0.09792 -0.68136 -0.23916 0.00286 0.04236 -0.23502 0.17866 -0.14856 -0.31988 0.50884 0.64982 0.06638 0.50858 0.7506 0.7901 0.51272 0.9264 0.59918 0.42786 0.14098 -0.44246 -0.00026 0.24176 0.28126 0.00388 0.41756 0.09034 -0.08098 -0.58344 -0.14124 0.10078 0.14028 -0.1371 0.27658 -0.05064 -0.22196 0.4422 0.68422 0.72372 0.44634 0.86002 0.5328 0.36148 0.24202 0.28152 0.00414 0.41782 0.0906 -0.08072 0.0395 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 0.134309 A10 - A12 * -0.23788 0.134309 A10 - A13 * 0.1758 0.134309 A10 - A14 * -0.15142 0.134309 A10 - A15 * -0.32274 0.134309 A11 - A12 * -0.27738 0.134309 A11 - A13 * 0.1363 0.134309 A11 - A14 * -0.19092 0.134309 A11 - A15 * -0.36224 0.134309 A12 - A13 * 0.41368 0.134309 A12 - A14 0.08646 0.134309 A12 - A15 -0.08486 0.134309 A13 - A14 * -0.32722 0.134309 A13 - A15 * -0.49854 0.134309 A14 - A15 * -0.17132 0.134309 * denotes a statistically significant difference Thí nghiệm 3.2 Khảo sát ảnh hưởng chất kích thích tăng trưởng BA kết hợp với NAA lên phát sinh hình thái mẫu Kim Ngân Hoa ANOVA Table Source Between groups Within groups Total (Corr.) Sum of Squares 5.65815 0.912097 6.57025 Df 14 60 74 Mean Square 0.404154 0.0152016 F-Ratio 26.59 P-Value 0.0000 Summary Statistics B1 B2 B3 B4 B5 B6 B7 B8 B9 B10 B11 B12 B13 B14 B15 Total Count 5 5 5 5 5 5 5 75 Average 0.192228 0.94526 1.0575 0.5967 0.84984 0.98806 0.817 0.8757 1.5339 0.73264 0.8935 0.97728 0.62436 0.754506 0.89754 0.849068 B1 B2 B3 B4 B5 B6 Stnd kurtosis 2.27349 -0.56445 1.16157 0.0161299 0.243147 0.755066 Standard deviation 0.269392 0.0761184 0.100663 0.0929479 0.073819 0.119943 0.0647041 0.0871894 0.261761 0.101695 0.0437754 0.0710133 0.0769583 0.0603876 0.0622287 0.297972 Coeff of variation 140.142% 8.05264% 9.51899% 15.577% 8.68622% 12.1392% 7.91972% 9.95654% 17.0651% 13.8806% 4.89932% 7.26642% 12.326% 8.00359% 6.93325% 35.094% Minimum 0.0587 0.8679 0.9617 0.5115 0.7722 0.8163 0.7383 0.7568 1.0699 0.5832 0.864 0.8726 0.5731 0.6875 0.8121 0.0587 Maximum 0.6739 1.0496 1.2243 0.7363 0.9623 1.1523 0.88 0.9703 1.6799 0.8635 0.9703 1.0453 0.7582 0.84933 0.983 1.6799 Range 0.6152 0.1817 0.2626 0.2248 0.1901 0.336 0.1417 0.2135 0.61 0.2803 0.1063 0.1727 0.1851 0.16183 0.1709 1.6212 Stnd skewness 2.03632 0.294422 1.34269 0.74451 0.798979 -0.140523 -0.441687 -0.285057 -1.95328 -0.385164 1.84874 -0.670208 1.78454 0.925602 0.000313839 0.244046 B7 B8 B9 B10 B11 B12 B13 B14 B15 Total -1.2896 -0.557157 2.10994 0.583837 1.94373 -0.152009 1.76024 0.701224 0.420452 5.0751 Table of Means with 95.0 percent LSD intervals B1 B2 B3 B4 B5 B6 B7 B8 B9 B10 B11 B12 B13 B14 B15 Total Count 5 5 5 5 5 5 5 75 Stnd error (pooled s) 0.0551391 0.0551391 0.0551391 0.0551391 0.0551391 0.0551391 0.0551391 0.0551391 0.0551391 0.0551391 0.0551391 0.0551391 0.0551391 0.0551391 0.0551391 Mean 0.192228 0.94526 1.0575 0.5967 0.84984 0.98806 0.817 0.8757 1.5339 0.73264 0.8935 0.97728 0.62436 0.754506 0.89754 0.849068 Lower limit 0.114238 0.86727 0.97951 0.51871 0.77185 0.91007 0.73901 0.79771 1.45591 0.65465 0.81551 0.89929 0.54637 0.676516 0.81955 Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Count Mean B1 0.192228 B4 0.5967 B13 0.62436 B10 0.73264 B14 0.754506 B7 0.817 B5 0.84984 B8 0.8757 B11 0.8935 B15 0.89754 B2 0.94526 B12 0.97728 B6 0.98806 B3 1.0575 B9 1.5339 Contrast B1 - B2 B1 - B3 B1 - B4 B1 - B5 B1 - B6 B1 - B7 B1 - B8 B1 - B9 B1 - B10 Sig * * * * * * * * * Homogeneous Groups X X XX XXX XXX XXX XXXX XXXX XXX XXX XXX XX XX X X Difference -0.753032 -0.865272 -0.404472 -0.657612 -0.795832 -0.624772 -0.683472 -1.34167 -0.540412 +/- Limits 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 Upper limit 0.270218 1.02325 1.13549 0.67469 0.92783 1.06605 0.89499 0.95369 1.61189 0.81063 0.97149 1.05527 0.70235 0.832496 0.97553 B1 - B11 B1 - B12 B1 - B13 B1 - B14 B1 - B15 B2 - B3 B2 - B4 B2 - B5 B2 - B6 B2 - B7 B2 - B8 B2 - B9 B2 - B10 B2 - B11 B2 - B12 B2 - B13 B2 - B14 B2 - B15 B3 - B4 B3 - B5 B3 - B6 B3 - B7 B3 - B8 B3 - B9 B3 - B10 B3 - B11 B3 - B12 B3 - B13 B3 - B14 B3 - B15 B4 - B5 B4 - B6 B4 - B7 B4 - B8 B4 - B9 B4 - B10 B4 - B11 B4 - B12 B4 - B13 B4 - B14 B4 - B15 B5 - B6 B5 - B7 B5 - B8 B5 - B9 B5 - B10 B5 - B11 B5 - B12 B5 - B13 B5 - B14 B5 - B15 B6 - B7 B6 - B8 B6 - B9 B6 - B10 B6 - B11 B6 - B12 B6 - B13 B6 - B14 B6 - B15 B7 - B8 B7 - B9 B7 - B10 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * -0.701272 -0.785052 -0.432132 -0.562278 -0.705312 -0.11224 0.34856 0.09542 -0.0428 0.12826 0.06956 -0.58864 0.21262 0.05176 -0.03202 0.3209 0.190754 0.04772 0.4608 0.20766 0.06944 0.2405 0.1818 -0.4764 0.32486 0.164 0.08022 0.43314 0.302994 0.15996 -0.25314 -0.39136 -0.2203 -0.279 -0.9372 -0.13594 -0.2968 -0.38058 -0.02766 -0.157806 -0.30084 -0.13822 0.03284 -0.02586 -0.68406 0.1172 -0.04366 -0.12744 0.22548 0.095334 -0.0477 0.17106 0.11236 -0.54584 0.25542 0.09456 0.01078 0.3637 0.233554 0.09052 -0.0587 -0.7169 0.08436 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 0.15598 B7 - B11 -0.0765 0.15598 B7 - B12 * -0.16028 0.15598 B7 - B13 * 0.19264 0.15598 B7 - B14 0.062494 0.15598 B7 - B15 -0.08054 0.15598 B8 - B9 * -0.6582 0.15598 B8 - B10 0.14306 0.15598 B8 - B11 -0.0178 0.15598 B8 - B12 -0.10158 0.15598 B8 - B13 * 0.25134 0.15598 B8 - B14 0.121194 0.15598 B8 - B15 -0.02184 0.15598 B9 - B10 * 0.80126 0.15598 B9 - B11 * 0.6404 0.15598 B9 - B12 * 0.55662 0.15598 B9 - B13 * 0.90954 0.15598 B9 - B14 * 0.779394 0.15598 B9 - B15 * 0.63636 0.15598 B10 - B11 * -0.16086 0.15598 B10 - B12 * -0.24464 0.15598 B10 - B13 0.10828 0.15598 B10 - B14 -0.021866 0.15598 B10 - B15 * -0.1649 0.15598 B11 - B12 -0.08378 0.15598 B11 - B13 * 0.26914 0.15598 B11 - B14 0.138994 0.15598 B11 - B15 -0.00404 0.15598 B12 - B13 * 0.35292 0.15598 B12 - B14 * 0.222774 0.15598 B12 - B15 0.07974 0.15598 B13 - B14 -0.130146 0.15598 B13 - B15 * -0.27318 0.15598 B14 - B15 -0.143034 0.15598 * denotes a statistically significant difference ... mẫu Kim Ngân Hoa Hình 4.4 Ảnh hưởng BA kết hợp với NAA lên phát sinh mô sẹo mẫu Kim Ngân Hoa 1.1 Đặt vấn đề Kim Ngân hoa (Lonicera japonica Thunb) thuộc Họ Kim Ngân (Caprifolianceae) d ợc liệu... kết hợp với 2,4 D NAA lên phát sinh hình thái mẫu Kim Ngân Hoa 50 4.3.1 Thí nghiệm 3.1: Khảo sát ảnh hưởng chất kích thích tăng trưởng BA kết hợp với 2,4 D lên phát sinh hình thái mẫu Kim. .. 4.4 nh hưởng chất kích thích tăng trưởng BA kết hợp NAA lên phát sinh hình thái mẫu Kim Ngân Hoa ghi nhận sau tháng nuôi cấy DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Cây Kim Ngân Hoa (Lonicera japonica Thunb) Hình