TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY ĐƠ KHOA DƯỢC-ĐIỀU DƯỠNG KHỐ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH DƯỢC MÃ SỐ: 52120401 KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ỨC CHẾ VI KHUẨN GÂY BỆNH TRỨNG CÁ Probionibacterium acnes CỦA CAO CHIẾT TỪ CÂY TRỨNG CÁ (Muntingia calabura L.) CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Ths DƯƠNG THỊ BÍCH SINH VIÊN THỰC HIỆN LÊ PHƯỢNG HIỆP MSSV: 12D720401113 LỚP: ĐH DƯỢC 7B Cần Thơ, năm 2017 LỜI CẢM ƠN Qua q trình thực khố luận tốt nghiệp, em học hỏi nhiều kiến thức, kỹ kinh nghiệm quý báu từ quý Thầy, Cô Bạn bè Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến: Cơ Ths Dương Thị Bích - người hướng dẫn đề tài tận tình giúp đỡ, đóng góp ý kiến cho em q trình thực đề tài Quý Thầy Cô Bộ môn Vi Sinh-Ký Sinh tận tình giảng dạy truyền đạt kiến thức cho em suốt thời gian học tập làm việc trường Xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Thầy Ths Đỗ Văn Mãi, Thầy Nguyễn Văn Hiền, Cô Quách Thị Thu Hằng, Cô Nghị Ngô Lan Vi nhiệt tình giúp đỡ, góp ý truyền đạt kinh nghiệm quý giá để em thực tốt khóa luận Xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Hội đồng chấm khóa luận tốt nghiệp gồm Thầy PGS TS Trần Công Luận, Thầy PGS TS Nguyễn Văn Bá, Thầy Ths Đỗ Văn Mãi nhận xét đưa ý kiến giúp em hồn thiện khóa luận Xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Cha mẹ người thân yêu động viên, tiếp sức em suốt trình học tập Cảm ơn bạn tập thể lớp ĐH Dược 7B tất người giúp đỡ đóng góp ý kiến cho suốt q trình học tập Cuối lời, xin kính chúc q Thầy, Cơ, Cha, Mẹ, Anh, Chị bạn khoẻ mạnh thành công sống Chân ơn! thành cảm Cần Thơ, ngày tháng năm 2017 Lê Phượng Hiệp i LỜI CAM KẾT Em xin cam đoan nghiên cứu thân Các số liệu, kết trình bày khóa luận trung thực chưa công bố khóa luận trước Ngày 14 tháng năm 2017 Sinh viên thực Lê Phượng Hiệp ii TÓM TẮT NỘI DUNG Kháng sinh tổng hợp sử dụng điều trị bệnh trứng cá thường dẫn đến khả đề kháng thuốc Trong năm gần đây, Trứng cá (Muntingia calabura L.) nhà khoa học quan tâm chứa nhiều hợp chất sinh học có khả kháng khuẩn, kháng viêm chống oxy hố cao Vì với mục tiêu đề tài đánh giá so sánh khả ức chế vi khuẩn Propionibacterium acnes từ phận Trứng cá cần thiết Lá, vỏ thân, chín non Trứng cá (Muntingia calabura L.) chiết xuất hệ thống đun hồi lưu với dung môi ethanol 96 % thu bốn loại cao chiết Khả kháng khuẩn cao chiết từ Trứng cá khảo sát phương pháp khuếch tán giếng thạch dòng vi khuẩn P acnes 134N lưu trũ phòng thí nghiệm Vi sinh trường Đại học Tây Đơ Kết thí nghiệm hoạt tính kháng khuẩn cho thấy tất loại cao chiết từ phận Trứng cá có hoạt tính ức chế dòng vi khuẩn Propionibacterium acnes 134N Qua so sánh kích thước khoảng vơ khuẩn, cao chiết từ Trứng cá có khả ức chế dòng vi khuẩn P acnes 134N cao bốn loại cao khảo sát, nồng độ 200 mg/ml; 100 mg/ml 50 mg/ml 23 ± 1,732 mm; 19 ± 0,000 mm; 16,33 ± 2,082 mm Giá trị MIC cao chiết từ Trứng cá dòng vi khuẩn P acnes 134N 10 mg/ml Đồng thời tiến hành định tính hợp chất sinh học cao chiết từ Trứng cá, kết thu cao chiết ethanol từ Trứng cá có chứa hợp chất sinh học flavonoid, saponin, tanin Từ kết đề tài cho thấy, cao chiết ethanol từ lá, vỏ thân, chín non Trứng cá nguồn nguyên liệu tự nhiên, tiềm cho nghiên cứu sâu điều trị bệnh trứng cá, đặc biệt nguyên nguyên liệu từ Trứng cá Từ khóa: Trứng cá, Propionibacterium acnes, tính kháng khuẩn iii MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i LỜI CAM KẾT ii TÓM TẮT NỘI DUNG iii MỤC LỤC iv DANH SÁCH BẢNG vii DANH SÁCH HÌNH viii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT ix CHƯƠNG 1: MỞ ĐẦU CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 TỔNG QUAN VỀ BỆNH TRỨNG CÁ 2.1.1 Phân loại bệnh trứng 2.1.2 Cơ chế gây bệnh 2.1.3 Những phương pháp điều trị bệnh cá trứng trứng cá cá 2.2 VI KHUẨN PROPIONIBACTERIUM ACNES .9 2.2.1 Đặc điểm vi khuẩn Propionibacterium acnes .9 2.2.2 Cơ chế gây bệnh trứng cá vi khuẩn Propionibacterium acnes 10 2.3 TỔNG QUAN VỀ CÂY TRỨNG CÁ 12 2.3.1 Nguồn gốc Trứng cá 12 2.3.2 Phân loại 13 trứng cá 2.3.3 Thành phần hoá học hợp chất tiêu biểu Trứng cá .13 2.3.4 Tác dụng dược lý Trứng cá 15 2.4 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU VÀ ỨNG DỤNG CAO CHIẾT TỪ CÂY TRỨNG CÁ TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC 18 iv 2.4.1 Tình hình nghiên cúu ứng dụng cao chiết từ Trứng cá giới 18 2.4.2 Tình hình nghiên cúu ứng dụng cao chiết từ Trứng cá Việt Nam 19 CHƯƠNG PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 3.1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM 20 v 3.2 PHƯƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU 20 3.2.1 Nguyên vật liệu 20 3.2.2 Dụng cụ thiết bị thí nghiệm 20 3.2.3 Hóa chất mơi trường .20 3.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 3.3.1 Thiết kế nghiên cứu .21 3.3.2 Cỡ mẫu .21 3.3.3 Phương pháp chọn mẫu .21 3.3.4 Nội dung nghiên cứu 22 3.4 PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ SỐ LIỆU 31 3.5 SƠ ĐỒ NGHIÊN CỨU 31 3.6 VẤN ĐỀ Y ĐỨC Error! Bookmark not defined 3.7 BIỆN PHÁP KHẮC PHỤC SAI SỐ 31 CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 32 4.1 KẾT QUẢ .32 4.1.1 Chiết cao 32 4.1.2 Nuôi cấy định danh vi khuẩn Propionibacterium acnes 32 4.1.3 Khảo sát khả ức chế vi khuẩn Propionibacterium acnes cao chiết Trứng cá .36 4.1.4 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu cao Trứng cá vi khuẩn Propionibacterium acnes .38 4.1.5 Định tính số hợp chất thiên nhiên cao chiết từ Trứng cá 40 4.2 THẢO LUẬN 41 4.2.1 Chiết cao 41 4.2.2 Phân lập định danh vi khuẩn 41 v 4.2.3 Khảo sát khả ức chế vi khuẩn Propionibacterium acnes cao chiết trứng cá 42 4.2.4 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu cao trứng cá vi khuẩn Propionibacterium acnes .43 4.2.5 44 Định tính số hợp chất thiên nhiên cao chiết ethanol Trứng cá vi CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 46 5.1 KẾT LUẬN 46 5.2 ĐỀ NGHỊ 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO .47 PHỤ LỤC 56 Phụ lục 1: Tổng hợp số liệu thí nghiệm .56 Phụ lục 2: Kết phân tích thống kê 57 vi i DANH SÁCH BẢNG Trang Bảng 2.1 Tác dụng chất sử dụng điều trị mụn trứng cá Bảng 2.2 Sản phẩm ngoại bào P acnes 11 Bảng 2.3 Khảo sát sơ thành phần hợp chất có chứa Trứng cá 14 Bảng 3.1: Công thức môi trường TYEG agar .21 Bảng 3.2 Định tính số hợp chất dịch chiết ethanol cao chiết trứng cá 30 Bảng 4.1 Kết độ ẩm cao Trứng cá 32 Bảng 4.2 Kết hiệu suất chiết cao từ Trứng cá 32 Bảng 4.3 Khả ức chế vi khuẩn P acnes loại cao ethanol trứng cá phương pháp khuếch tán giếng thạch .36 Bảng 4.4 Kết nồng độ ức chế vi khuẩn tối thiểu (MIC) cao chiết Trứng cá vi khuẩn P acnes 39 Bảng 4.5 Kết định tính số hợp chất dịch chiết ethanol Trứng cá .4 vii Cao Đường kính vòng vơ khuẩn (mm) Nồng độ (mg/ml) Dòng vi khuẩn Trung bình 50 14 18 17 16,33 100 19 19 19 19 200 22 25 22 23 Levofloxacin 9 8,67 Nồng độ ức chế tối thiểu cao trứng cá tên vi khuẩn P acnes Đường kính vòng vơ khuẩn (mm) Nồng độ Dòng vi khuẩn 134N Trung bình (mg/ml) 0 0 10 6 6 20 10 9 40 11 12 10 11 Phụ lục 2: Kết phân tích thống kê Khảo sát khả ức chế vi khuẩn P acnes cao chiết trứng cá Nồng độ 50 mg/ml One way Descriptives DKVVK 95% cofnidence N Mean Std Deviation Std Error Interval for Mean Lover Upper Bound Minimum Maximum Bound 501 10.33 577 333 8.90 11.77 10 11 502 11.00 000 000 11.00 11.00 11 11 503 11.67 577 333 10.23 13.10 11 12 504 Total 12 16,33 2,082 11.17 718 333 207 10.23 10.71 65 13.10 11.62 11 10 12 12 Test of Homogeneity of Variances DKVVK Levene Statistic df1 df2 Sig 5.333 0.026 ANOVA DKVVK Sum of df Mean Square F Sig Squares Between 3.667 1.222 Within Groups 2.000 250 Total 5.667 11 4.889 032 Groups Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable: DKVVK (l) Nongdo Dunnett T3 501 502 503 504 (J) Nongdo Mean Difference (l- Std J) Eror Sig 95% cofnidence Interval Lower Upper Bound Bound 502 -.667 333 482 -3.22 1.88 503 -1.333 471 183 -3.39 72 504 -1.333 471 183 -3.39 72 501 667 333 482 -1.88 3.22 503 -.667 333 482 -3.22 1.88 504 -.667 333 482 -3.22 1.88 501 1.333 471 183 -.72 3.39 502 667 333 482 -1.88 3.22 504 000 471 1.000 -2.06 2.06 501 1.333 471 183 -.72 3.39 502 667 333 482 -1.88 3.22 503 000 471 1.000 -2.06 2.06 Homogeneous Subsets DKVVK loaicao N Subset for anpha =0.05 Duncana 501 10.33 502 11.00 503 504 3 11.67 16,33 141 Sig .156 Nồng độ 100 mg/ml One way Descriptives DKVVK 95% cofnidence N Mean Std Std Deviation Error Interval for Mean Lover Upper Bound Minimum Maximum Bound 501 11.67 1.155 667 8.80 14.54 11 13 502 13.33 1.528 882 9.54 17.13 12 15 503 18.00 1.000 0.577 15.52 20.48 17 19 504 19.00 000 Total 12 15.50 3.344 000 965 19.00 13.38 19.00 17.62 19 11 19 19 Test of Homogeneity of Variances DKVVK Levene Statistic df1 df2 Sig 2.872 104 ANOVA DKVVK Sum of df Mean Square F Sig Squares Between Groups 113.667 37.889 Within Groups 9.333 1.167 Total 123.000 11 32.476 000 Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable: DKVVK (l) loaicao Mean Difference Std (l-J) Eror (J) Sig Interval loaicao Dunnett T3 501 502 503 504 95% cofnidence Lower Upper Bound Bound 502 -1.667 1.106 625 -6.69 -3.36 503 -6.333 882 009 -10.23 -2.44 504 -7.333 667 025 -12.43 -2.24 501 1.667 1.106 625 -3.36 6.69 503 -4.667 1.054 062 -9.68 35 504 -5.667 882 070 -12.41 1.08 501 6.333 882 009 2.24 10.23 502 4.667 1.054 062 -.35 9.68 504 -1.000 577 569 -5.41 3.41 501 7.333 667 025 2.24 12.43 502 5.667 882 070 -1.08 12.41 503 1.000 577 569 -3.41 5.41 Homogeneous Subsets DKVVK loaicao N Subset for anpha =0.05 Duncana 501 11.67 502 13.33 503 18.00 504 19.00 Sig .095 290 Nồng độ 200 mg/ml One way Descriptives DKVVK 95% cofnidence N Mean Std Std Deviation Error Interval for Mean Lover Upper Bound Minimum Maximum Bound 501 16.67 2.309 1.333 10.93 22.4 14 18 502 20.00 1.000 577 17.52 22.48 19 21 503 20.67 1.155 667 17.80 23.54 20 22 504 Total 12 23.00 1.732 1.000 18.70 20.08 2.746 793 18.34 27.30 21.83 22 14 25 25 Test of Homogeneity of Variances DKVVK Levene Statistic df1 df2 Sig 2.070 183 ANOVA DKVVK Sum of df Mean Square F Sig Squares Between Groups 61.583 20.528 Within Groups 21.333 2.667 Total 82.917 11 7.698 010 Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable: DKVVK Mean Difference (l-J) (l) loai cao Dunnett (J) Nongdo 501 T3 502 503 504 Std Sig Eror Interval Bound Bound 1.453 356 -11.53 4.86 503 -4.000 1.491 255 -11.92 3.92 504 -6.333 1.667 087 -13.92 1.26 501 -3.333 1.453 356 -4.86 -11.53 503 -.667 882 954 -4.56 3.23 504 -3.000 1.155 259 -8.77 2.77 501 4.000 1.491 255 -3.92 11.92 502 667 882 954 -3.23 4.56 504 -2.333 1.202 438 -8.02 3.35 501 6.333 1.667 087 -1.26 13.92 502 3.000 1.155 259 -2.77 8.77 503 2.333 1.202 438 -3.35 8.02 Loaicao N Subset for anpha =0.05 501 502 20.00 503 20.67 504 23.00 Sig Kháng sinh Upper -3.333 DKVVK Duncan Lower 502 Homogeneous Subsets a 95% cofnidence 16.67 1.000 063 One way Descriptives DKVVK 95% cofnidence N Mean Std Std Deviation Error Interval for Mean Lover Upper Bound Bound Minimum Maximum 00 000 000 00 00 0 00 000 000 00 00 0 3 8.67 577 333 7.23 10.10 8.67 577 333 7.23 10.10 Total 12 4.33 4.539 1.310 1.45 21.91 14 25 Test of Homogeneity of Variances DKVVK Levene Statistic df1 df2 Sig 10.667 004 ANOVA DKVVK Sum of df Mean Square F Sig 450.667 000 Squares Between Groups 225.333 75.111 Within Groups 1.333 167 Total 226.667 11 Homogeneous Subsets DKVVK N Subset for anpha =0.05 Duncana 00 00 3 8.67 8.67 082 Sig 1.000 Nồng độ ức chế tối thiểu cao trứng cá tên vi khuẩn P acnes One way Descriptives DKVVK N Mean Std Std 95% cofnidence Deviation Error Interval for Mean Lover Upper Bound Bound Minimum Maximum 00 000 000 00 00 0 10 6.00 000 000 6.00 6.00 6 20 9.00 1.000 577 6.52 11.48 10 40 11.00 1.000 577 8.52 13.48 10 12 Total 12 6.50 4.380 1.264 3.72 9.28 12 Test of Homogeneity of Variances DKVVK Levene Statistic df1 df2 Sig 2.667 119 ANOVA Sum of df Mean Square F Sig 138.000 000 Squares Between Groups 207.000 69.000 Within Groups 4.000 500 Total 211.000 11 DKVVK Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable: DKVVK (m) Nongdo (J) Mean Std Difference (l-J) Eror Sig Interval Nongdo Dunnett T3 (l) Nongdo Dunnett T3 95% cofnidence Lower Upper Bound Bound -3.01 50 200 -6.667 1.277 004 -10.32 100 200 -4.000 1.277 035 -7.65 Sig 95% cofnidence Mean Difference (l- Std J) Eror (J) Nongdo 40 10 40 20 40 -11.000 -5.000 -.35 Interval Lower Upper Bound Bound 577 000 -12.66 -9.34 577 000 -6.66 -3.44 577 021 -3.66 -.34 -2.000 Homogeneous Subsets DKVVK Nongdo N Subset for anpha =0.05 Ducan a 10 20 40 Sig 00 6.00 9.00 11.00 1.000 1.000 1.000 1.000 66 ... Với l đề tài Khảo sát khả ức chế vi khuẩn gây bệnh mụn trứng cá Propionibacterium acnes cao chiết từ Trứng cá (Muntngia calabura L. ) thực với mục đích cụ thể sau: 1) Xác định so sánh khả ức chế. .. dịch chiết ethanol cao chiết trứng cá 30 Bảng 4.1 Kết độ ẩm cao Trứng cá 32 Bảng 4.2 Kết hiệu suất chiết cao từ Trứng cá 32 Bảng 4.3 Khả ức chế vi khuẩn P acnes loại cao ethanol trứng. .. Phân l p định danh vi khuẩn 41 v 4.2.3 Khảo sát khả ức chế vi khuẩn Propionibacterium acnes cao chiết trứng cá 42 4.2.4 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu cao trứng cá vi khuẩn