ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Dƣơng Nghĩa Bình NGHIÊN CỨU ĐIỀU KIỆN NI TRỒNG VÀ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA NẤM Cordyceps cicadaePHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC Hà Nội - 2017 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Dƣơng Nghĩa Bình NGHIÊN CỨU ĐIỀU KIỆN NI TRỒNG VÀ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA NẤM Cordyceps cicadaePHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60420114 LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: TS Lê Hồng Điệp Hà Nội, 2017 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn thạc sĩ mình, em xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới TS Lê Hồng Điệp, Trƣởng môn Sinh lý thực vật Hoá sinh, Khoa Sinh học, Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên - ngƣời tận tình hƣớng dẫn, dạy cho em suốt trình học tập nghiên cứu Em xin chân thành cảm ơn toàn thể thầy cô giáo môn Sinh lý thực vật Hoá sinh, Khoa Sinh học - Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên nhiệt tình bảo, truyền đạt kiến thức, giúp đỡ nhƣ tạo điền kiện thuận lợi cho em suốt trình học tập Em xin gửi lời cảm ơn tới Thầy thuốc nhân dân TS.BS Nguyễn Đình Dũng - Giám đốc Bệnh viện Dệt May, tập thể cán Khoa Sinh hóa Bệnh viện Dệt May, NCS Vũ Xuân Tạo - Trung tâm Nghiên cứu Chuyển giao Công nghệ Sinh học (CBRTT) Phòng Genomic, Phòng thí nghiệm Trọng điểm Công nghệ Enzym Protein hỗ trợ em trình thực nghiên cứu Cuối em xin chân thành cảm ơn gia đình bạn bè động viên, khuyến khích em suốt q trình học tập thực luận văn Hà Nội, ngày 10 tháng 10 năm 2017 Dƣơng Nghĩa Bình MỤC LỤC MỞ ĐẦU .2 Chƣơng TỔNG QUAN 13 1.1 Tổng quan chi nấm ký sinh côn trùng Cordyceps 13 1.1.1 Lịch sử phát nấm Cordyceps .13 1.1.2 Phân bố nấm Cordyceps .14 1.1.3 Đặc điểm xâm nhiễm nấm ký sinh trùng 14 1.1.4 Hoạt tính sinh học nấm Cordyceps .16 1.2 Giới thiệu chung nấm C cicadae 18 1.2.1 Đặc điểm sinh học phân bố nấm C cicadae 18 1.2.2 Thành phần hoạt chất nấm C cicadae .20 1.2.3 Hoạt tính sinh học nấm C cicadae .23 1.3 Sơ lƣợc tình hình nghiên cứu ni trồng nấm Cordyceps 25 1.3.1 Tình hình nghiên cứu ni trồng nấm Cordyceps giới 25 1.3.2 Tình hình nghiên cứu ni trồng nấm Cordyceps Việt Nam 27 Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 31 2.1 Vật liệu nghiên cứu 31 2.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu 31 2.1.2 Hóa chất thiết bị .31 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 34 2.2.1 Phân lập nấm C.cicadae 34 2.2.2 Phƣơng pháp định danh nấm .34 2.2.2.1 Chuẩn bị dịch bào tử nấm 34 2.2.2.2 Xác định hình thái nấm dƣới kính hiển vi 34 2.2.2.3 Định danh nấm giải trình tự vùng ITS 35 2.2.3 Xác định ảnh hƣởng số yếu tố q trình ni trồng thể nấm C.cicadae .37 2.2.3.1 Ảnh hƣởng số yếu tố giai đoạn nhân giống 37 2.2.3.2 Ảnh hƣởng số yếu tố giai đoạn ƣơm sợi .38 2.2.3.3 Ảnh hƣởng số yếu tố tới hình thành sinh trƣởng thể nấm C.cicadae .39 2.2.4 Xác định số hoạt chất quan trọng thể nấm C.cicadae 40 2.2.5 Nghiên cứu tác động dịch chiết thể nấm lên chuột thí nghiệm .40 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 42 3.1 Phân lập định danh nấm C.cicadae .42 3.1.1 Phân lập chủng nấm C.cicadae 42 3.1.2 Định danh chủng Cordycepssp.bằng giải trình tự vùng ITS .43 3.2 Ảnh hƣởng số yếu tố nuôi trồng thể nấm C.cicadae BG01 45 3.2.1 Ảnh hƣởng số yếu tố giai đoạn nhân giống 45 3.2.1.1 Ảnh hƣởng nhiệt độ lên sinh trƣởng hệ sợi nấm 45 3.2.1.2 Ảnh hƣởng chế độ lắc tạo giống dịch thể 46 3.2.2 Ảnh hƣởng số yếu tố giai đoạn ƣơm sợi 47 3.2.2.1 Ảnh hƣởng thành phần dinh dƣỡng lên sinh trƣởng hệ sợi nấm 47 3.2.2.2 Ảnh hƣởng nồng độ bào tử dịch giống lên sinh trƣởng hệ sợi nấm 48 3.2.2.3 Ảnh hƣởng lƣợng giống cấy lên sinh trƣởng hệ sợi nấm 49 3.2.3 Ảnh hƣởng số yếu tố tới hình thành sinh trƣởng thể nấm 51 3.2.3.1 Ảnh hƣởng thành phần dinh dƣỡng môi trƣờng tới hình thành sinh trƣởng thể nấm 51 3.2.3.2 Ảnh hƣởng nhiệt độ tới hình thành sinh trƣởng thể nấm 52 3.2.3.3 Ảnh hƣởng độ ẩm tới hình thành sinh trƣởng thể nấm 54 3.2.3.4 Ảnh hƣởng cƣờng độ chiếu sáng tới hình thành sinh trƣởng thể nấm 55 3.3 Hàm lƣợng số hoạt chất quan trọng thể nấm 57 3.4 Ảnh hƣởng dịch chiết thể nấm lên chuột nhắt trắng Swiss 59 3.4.1 Ảnh hƣởng dịch chiết thể nấm lên sức sống tăng trọng chuột 59 3.4.2 Ảnh hƣởng dịch chiết thể nấm lên thể lực chuột 61 3.4.4 Kết giải phẫu chuột nhắt trắng Swiss sau tuần thí nghiệm .62 3.4.5 Ảnh hƣởng dịch chiết thể nấm lên số sinh hóa máu chuột 63 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 66 TÀI LIỆU THAM KHẢO 67 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN 69 DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT C cicadae : Cordyceps cicadae C jiangxiensis : Cordyceps jiangxiensis C militaris : Cordyceps militaris C nutans : Cordycepsnutans C sinensis : Cordyceps sinensis C oxycephala : Cordyceps oxycephala C takaomontana : Cordyceps takaomontana GOT : Enzyme glutamic oxaloacetic transaminase GPT : Enzyme glutamate-pyruvate transaminase ITS : Internal transcribed spacer ISP-1 : Myriocin HEA : N6- (2-hydroxyethyl) adenosine HCT : Hematocrit HGB : Hemoglobin HPLC : High performance liquid chromatography (sắc ký lỏng hiệu cao) PDA : Potato dextrose agar PDB : Potato dextrose broth PLT : Tiểu cầu RBC : Hồng cầu WBC : Bạch cầu DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1.Các hóa chất dùng cho nghiên cứu 21 Bảng 2.2 Các thiết bị sử dụng nghiên cứu 23 Bảng 3.1 Một số số sinh hóa máu chuột thí nghiệm 54 Bảng 3.2 Một số số sinh hóa gan thận chuột thí nghiệm 54 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Nấm C sinensis tự nhiên Tây Tạng - Trung Quốc Hình 1.2 Nấm C cicadae Hình 1.3 Nấm C militaris ni trồng nhân tạo Trung Quốc 17 Hình 1.4 Nấm C militaris hình thành phát triển thể ni trồng 18 nhân tạo Việt Nam Hình 1.5 Nấm C nutans Isaria tenuipes nuôi cấy Viện Khoa học Lâm 20 nghiệp Việt Nam Hình 3.1 Hình thái chủng nấm nghiên cứu 32 Hình 3.2 Phân loại chủng nấm C.cicadae BG01 34 Hình 3.3 Sinh trƣởng hệ sợi nấm C cicadaeBG01 điều kiện nhiệt 36 độ Hình 3.4 Nồng độ bào tử nấm C cicadaeBG01 ở chế độ lắc 37 Hình 3.5 Thời gian hệ sợi nấm C cicadaeBG01 lan kín mơi trƣờng 38 Hình 3.6 Thời gian hệ sợi nấm C cicadaeBG01 lan kín mơi trƣờng với 39 lƣợng giống cấy khác Hình 3.7 Thời gian hệ sợi nấm C cicadaeBG01 lan kín mơi trƣờng với 40 nồng độ bào tử dịch giống cấy khác Hình 3.8 Sự ảnh hƣởng thành phần dinh dƣỡng mơi trƣờng lên hình 42 thành phát triển thể nấm C cicadae BG01 Hình 3.9 Sự ảnh hƣởng nhiệt độ lên hình thành phát triển thể nấm 43 C cicadaeBG01 Hình 3.10 Sự ảnh hƣởng độ ẩm lên hình thành phát triển thể nấm 45 C cicadaeBG01 Hình 3.11 Sự ảnh hƣởng cƣờng độ chiếu sáng lên hình thành phát triển 46 thể nấm C cicadaeBG01 Hình 3.12 Quả thể nấm C cicadaeBG01 hình thành phát triển điều kiện 47 thích hợp Hình 3.13 Hàm lƣợng adenosine cordycepin thể nấm C cicadae 48 BG01và chất sau 50 ngày ni trồng Hình 3.14 Ảnh hƣởng thời gian thu hoạch tới hàm lƣợng adenosine 48 cordycepin thể nấm C cicadaeBG01 Hình 3.15 Sức sống chuột sau tuần thí nghiệm 50 Hình 3.16 Chuột lơ thí nghiệm 50 Hình 3.17 Sự tăng trọng chuột sau tuần thí nghiệm 51 Hình 3.18 Thời gian bơi chuột sau tuần thínghiệm 52 Hình 3.19 Hình ảnh giải phẫu chuột nhóm thí nghiệm 53 10 thƣơng chức gan thận cho chuột với liều uống 250 µl/chuột/ngày tƣơng đƣơng khoảng 780 mg nấm C cicadae/kg thể trọng tuần liên tiếp 65 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Đã phân lập định danh đƣợc chủng nấmC.cicadaeBG01 từ mẫu nấm thu thập tự nhiên dựa đặc điểm hình thái trình tự vùng ITS rDNA Đã tối ƣu đƣợc điều kiện cho q trình ni trồng thể nấm C.cicadae: Giai đoạn nhân giống: nhân giống môi trƣờng rắn PDA nhiệt độ 20˚C nhân giống môi trƣờng lỏng PDB với chế độ lắc 200 vòng/phút Giai đoạn ƣơm sợi: mơi trƣờng MT2 với lƣợng giống cấy 1ml nồng độ 106bào tử/ml Giai đoạn hình thành sinh trƣởng thể nấm C.cicadae: môi trƣờng MT2, nhiệt độ 20˚C, độ ẩm 90%với cƣờng độ chiếu sáng 500 lux (chiếu sáng 12h/ngày) Hàm lƣợng adenosine cordycepin thể nấm C.cicadaeBG01 nuôi điều kiện tối ƣu sau 50 ngày tƣơng ứng 3,23 mg/g 2,72 mg/g Dich chiết nấm C cicadaean toàn chuột chuột nhắt trắng Swiss liều uống dịch nấm 250 µl/chuột/ngày (tƣơng đƣơng khoảng 780mg nấm khô/kg thể trọng) sử dụng tuần liên tiếp Dịch chiết thể nấm có tác dụng tăng cƣờng thể lực cho chuột Khơng ghi nhận gây tổn thƣơng cho chuột uống dịch chiết nấm thơng qua tiêu sinh hóa máu, sinh hóa gan, thận giải phẫu học KIẾN NGHỊ Tiến hành tối ƣu điều kiện sinh tổng hợp hợp chấtadenosine, cordycepin thể nấm Tiến hành đánh giá tác động nấm lên mơ hình chuột bệnh góp phần mở rộng phạm vi ứng dụng nguồn nấm quý đời sống 66 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Đái Duy Ban, Lƣu Tham Mƣu (2009), Đông trùng hạ thảo, Nxb Y học Vũ Văn Hạnh, Nguyễn Thị Nguyệt, Nguyễn Minh Hƣờng, Hồng Ngọc Thanh, Ngơ Thanh Hằng, Ngô Kim Chi, Nguyễn Văn Hoan (2015), "Thử nghiệm độc tính cấp bán trƣờng diễn xanthan gum chuột nhắt trắng giống swiss", Tạp chí Sinh học, 36(3),tr 373-377 Nguyễn Thị Khuyến, Võ Thị Hạnh, Phạm Thị Hiển, Mai Thị Đàm Linh, Trần Đức Long, Trần Thị Thùy Anh, Trịnh Tất Cƣờng, Trần Văn Tuấn (2015), "Cải tiến phƣơng pháp tách chiết ADN từ nấm sợi phục vụ chuẩn đoán phân tử phân biệt Aspergillus oryzae với Aspergillus flavus", Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Công nghệ, 31(4), tr 167-176 Phạm Thị Lan, Đỗ Hải Lan, Nguyễn Thị Hồng Hạnh, Bác Thị Thu, Phạm Văn Nhã (2016), "Nghiên cứu ảnh hƣởng nhiệt độ ánh sáng tới sinh trƣởng, phát triển hàm lƣợng hoạt chất cordycepin nấm Cordyceps militaris NBRC 100741 nhộng tằm", Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Y dược, 32(2), tr 63-72 Nguyễn Thi ̣Mi , Đỗ Thị Tuyến, Vũ Văn Phƣớc , Vũ Xuân Tạo (2015), "Ảnh hƣởng số yếu tố lên sinh trƣởng hệ sợi nấm đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris", Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, Đại học Thái Nguyên, 08(138), tr 43-48 Nguyễn Thị Ngọc Thảo , Vũ Duy Tuân , Đỗ Thị Tuyến , Đỗ Bích Duệ, Vũ Xuân Tạo (2016), "Nghiên cứu ảnh hƣởng số yếu tố tới hình thành phát triển thể nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris bƣớc đầu đánh giá chất lƣợng thể nấm", Kỷ yếu Hội nghị Khoa học trẻ Đại học Khoa học Thái Nguyên (ISBN 978-604-915-321-1), Nxb Đại học Thái Nguyên, tr 60-65 Phạm Quang Thu, Lê Thị Xuân, Nguyễn Mạnh Hà (2011), "Nghiên cứu đặc điểm sinh học hệ sợi nuôi cấy khiết chủng nấm Đông trùng 67 hạ thảo Cordyceps militaris (L.:Fr) Link.", Kết nghiên cứu Khoa học công nghệ lâm nghiệp giai đoạn 2006-2010, Nxb Nông nghiê ̣p, tr 400-408 Phạm Quang Thu, Nguyễn Mạnh Hà (2009), "Phát nấm nhộng trùng hạ thảo Cordyceps militaris LINK vƣờn quốc gia Hồng Liên tỉnh Lào Cai", Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển Nông thôn, 9, tr 97-102 Phạm Quang Thu (2009), "Phát nấm nhộng trùng hạ thảo Cordyceps gunni Berk Tại vƣờn quốc gia Tam Đảo tỉnh Vĩnh Phúc",Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển Nơng thơn, 6, tr 96-99 10 Phạm Quang Thu (2013), "Đông trùng hạ thảo nghiên cứu nuôi trồng thể Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam, Kỷ yếu Hội thảo quốc tế Khoa học Công nghê phục vụ phát triển sản xuất nông nghiệp công nghệ cao tỉnh Lâm Đồng, tr 45-50 11 Phạm Quang Thu (2009), "Điều tra phát nấm nhộng trùng hạ thảo Cordyceps nutans pat phân bố khu bảo tồn thiên nhiên Tây Yên Tử - Sơn Động - Bắc Giang", Tạp chí Nông nghiệp Phát triển Nông thôn, 4, tr 9194 12 Nguyễn Thị Liên Thƣơng , Trịnh Diệp Phƣơng Danh , Nguyễn Văn Hiệp (2016), "Nấ m đông trùng ̣ thảo Cordyceps militaris: Đặc điểm sin h ho ̣c , giá trị dƣợc liệu yếu tố ảnh hƣởng đến q trình ni trồng nấm ", Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, 44, tr 9-22 13 Phạm Thị Thùy (2010), "Nghiên cứu phát triển nguồn nấm Beauveria Metarhizium để ứng dụng phòng trừ sâu hại trồng, rừng phát nguồn nấm Cordyceps sp làm thực phẩm chức cho ngƣời", Hội thảo Quốc gia Bệnh hại Thực vật Việt Nam, tr 224-231 14 Nguyễn Mậu Tuấn, Nguyễn Thái Huy, Trƣơng Phi Hùng, Lê Thị Thơ, Nguyễn Kim Chi (2013), "Một số kết nghiên cứu nấm Đông trùng hạ thảo Lâm Đồng", Kỷ yếuHội thảo quốc tế Khoa học Công nghệ phục vụ phát triển sản xuất nông nghiệp công nghệ cao tỉnh Lâm Đồng, tr 51-55 Tài liệu tiếng Anh 68 15 Barnett H L., Hunter B B (1972), Illustrated genera of imperfect fungi, Illustrated genera of imperfect fungi (3rd ed) 16 Cai J F., Jiang Z M., Lu H Y, Lu B Z (2010),"Research of anti-tumor effects of different purified components of Cordyceps cicadae in Vitro",Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine, 4, p 760-763 17 Chen A H., Li J W., Jiang Z Z, Chen H W (2015),"Study on antitumor activity in the fruiting body of artificial culture Cordyceps cicadae",JFS, 36, p 194-197 18 Chen Z (1991), "Study on entomogenous fungus, Paecilomyces cicadae", Acta Mycologica Sinica,10, p 280-287 19 Chen Z., Liu G., Hu S (1993), "Studies on cultivation of Paecilomyces cicadae and its pharmacological function",Acta Mycologica Sinica, 12(2), p 138-144 20 Cheng D., Ding Z., Lin M., Pan P., Chen Y (2006), "Isolation and fermentation culture of fungi from Cordyceps soofifera",Journal of Chinese medicinal materials, 29(2), p 99-101 21 Cherry A., Abalo P., Hell K (2005), "A laboratory assessment of the potential of different strains of the entomopathogenic fungi Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin and Metarhizium anisopliae (Metschnikoff) to control Callosobruchus maculatus (F.)(Coleoptera: Bruchidae) in stored cowpea", Journal of Stored Products Research, 41(3), p 295-309 22 Chi C B., Yang X H (1996), "Studies on the extraction of Cordyceps ciacadae polysaccharides and its immune pharmacological action",Medical and Pharmaceutical Journal of Army, 6, p 44-46 23 Cho D., ChoY., LeeJ (2003), "Fruitbody formation of Cordyceps militaris in Allomyrina dichotoma Linnaeus",Korean J Plant Res, 16, p 1-7 69 24 Curran J., DriverF., BallardJ., MilnerR (1994), "Phylogeny of Metarhizium: analysis of ribosomal DNA sequence data",Mycological Research, 98(5), p 547-552 25 Deacon J (2006), Fungal parasites of insects and nematode, Fungal Biology, 4th Edition, p 309-321 26 Duarte N., FerreiraM J U., MartinsM., ViveirosM., AmaralL (2007), "Antibacterial activity of ergosterol peroxide against Mycobacterium tuberculosis: dependence upon system and medium employed",Phytotherapy Research, 21(7), p 601-604 27 Fujita T., InoueK., Yamamoto S., IkumotoT., SasakiS., ToyamaR., ChibaK., HoshinoY., OkumotoT (1994), "Fungal metabolites Part 11 A potent immunosuppressive activity found in Isaria sinclairii metabolite",The Journal of antibiotics, 47(2), p 208-215 28 Furuya T., HirotaniM., MatsuzawaM (1983), "N6-(2-hydroxyethyl) adenosine, a biologically active compound from cultured mycelia of Cordyceps and Isaria species", Phytochemistry, 22(11), p 2509-2512 29 Gu Y X., Wang Z S., LiS X., YuanQ S (2007), "Effect of multiple factors on accumulation of nucleosides and bases in Cordyceps militaris", Food chemistry, 102(4), p 1304-1309 30 Hojjati M R., LiZ., ZhouH., TangS., HuanC., OoiE., LuS., Jiang X C (2005), "Effect of myriocin on plasma sphingolipid metabolism and atherosclerosis in apoE-deficient mice",Journal of Biological Chemistry, 280(11), p 10284-10289 31 Holliday J., CleaverP., PowersM L., PatelD (2004), "Analysis of quality and techniques for hybridization of medicinal fungus Cordyceps sinensis",International Journal of Medicinal Mushrooms, 6, p 147-160 32 Hong I P., KangP.D., KimK.Y., NamS.H., LeeM.Y., ChoiY.S., KimN.S., KimH.K., LeeK.G., HumberR A (2010), "Fruit body formation on silkworm by Cordyceps militaris", Mycobiology, 38(2), p 128-132 70 33 Hsu J.H., JhouB.Y., YehS.H., ChenY.L., ChenC.C (2015), "Healthcare Functions of Cordyceps cicadae",Nutrition & Food Sciences, p 1-7 34 Huang L., LiQ., ChenY., WangX., ZhouX (2009), "Determination and analysis of cordycepin and adenosine in the products of Cordyceps spp",African Journal of Microbiology Research, 3(12), p 957-961 35 Hung L., KeawsompongS., HanhV., SivichaiS., JonesN H (2009), "Effect of temperature on cordycepin production in Cordyceps militaris", Thai J Agric Sci, 42(2), p 219-225 36 Isaka M., TanticharoenM., ThebtaranonthY (2000), "Cordyanhydrides A and B Two unique anhydrides from the insect pathogenic fungus Cordyceps pseudomilitaris BCC 1620", Tetrahedron Letters, 41(10), p 1657-1660 37 Jiang Y., WongJ., FuM., LiuZ., WangC., LiN., QiaoW., WenT., LiuF (2011), "Isolation of adenosine, iso-sinensetin and dimethylguanosine with antioxidant and HIV-1 protease inhibiting activities from fruiting bodies of Cordyceps militaris",Phytomedicine, 18(2), p 189-193 38 Jin L., LuJ., YuanQ., JinJ., ChenX (2001), "Effects of Paecilomyces cicadida on immunity and blood biochemistry index of rats",Journal of Wenzhou Medical College, 31(6), p 344-346 39 Jin Z., ChenY (2006), "Clinical observation on Cordyceps cicadae Shing Tang in preventing the progression of chronic renal failure",Chin Arch Tradit Chin Med, 24(8), p 1457-1459 40 Jung K., KimI.H., HanD (2004), "Effect of medicinal plant extracts on forced swimming capacity in mice",Journal of ethnopharmacology, 93(1), p 75-81 41 Kagamizono T., NishinoE., MatsumotoK., KawashimaA., KishimotoM., SakaiN., HeB.M., ChenZ.X., AdachiT., MorimotoS (1995), "Bassiatin, a new platelet aggregation inhibitor produced by Beauveria bassiana K-717", The Journal of antibiotics, 48(12), p 1407-1413 71 42 Kiho T., NagaiK., MiyamotoI., WatanabeT., UkaiS (1990), "Polysaccharides in fungi XXV Biological activities of two galactomannans from the insect-body portion of Chan hua (fungus: Cordyceps cicadae)", Journal of the Pharmaceutical Society of Japan, 110(4), p 286-288 43 Kim H S., KimJ Y., RyuH S., ShinB R., KangJ S., KimH M., KimY O., HongJ T., KimY., HanS B (2011), "Phenotypic and functional maturation of dendritic cells induced by polysaccharide isolated from Paecilomyces cicadae",Journal of medicinal food, 14(7-8), p 847-856 44 Kim J.S., SapkotaK., ParkS.E., ChoiB.S., KimS., HiepN T., KimC.S., ChoiH.S., KimM.K., ChunH.S (2006), "A fibrinolytic enzyme from the medicinal mushroom Cordyceps militaris",The Journal of Microbiology, 44(6), p 622-631 45 Kuo Y.C., LinL.C., DonM.J., LiaoH.F., TsaiY P., LeeG.H., ChouC.J (2002), "Cyclodesipeptide and dioxomorpholine derivatives isolated from the insect-body portion of the fungus Cordyceps cicadae",J Chin Med, 13(4), p 209-219 46 Kuo Y., WengS., ChouC., ChangT., TsaiW (2003), "Activation and proliferation signals in primary human T lymphocytes inhibited by ergosterol peroxide isolated from Cordyceps cicadae",British journal of pharmacology, 140(5), p 895-906 47 Lee H., KimY J., KimH W., LeeD H., SungM.K., ParkT., "Induction of apoptosis by Cordyceps militaris through activation of caspase-3 in leukemia HL-60 cells", Biological and Pharmaceutical Bulletin, 29(4), p 670-674 48 Li R., HuF., ChenA., FanM (2007), "Studies on liquid culture technology of cordycepin in Paecilomyces cicadae",Journal of Xuzhou Institute of Technology, 22(10), p 23-30 49 Lin H.I., LeeY.J., ChenB.F., TsaiM.C., LuJ.L., ChouC.J., JowG.M (2005), "Involvement of Bcl-2 family, cytochrome c and caspase in induction of 72 apoptosis by beauvericin in human non-small cell lung cancer cells",Cancer letters,230(2), p 248-259 50 Liu S., LiangY.Z., LiuH T (2016), "Chemometrics applied to quality control and metabolomics for traditional Chinese medicines",Journal of Chromatography B, 1015, p 82-91 51 Liu Y., JesusA A., MarreroB., YangD., RamseyS E., Montealegre SanchezG A., TenbrockK., WittkowskiH., JonesO Y., KuehnH S (2014), "Activated STING in a vascular and pulmonary syndrome",New England Journal of Medicine, 371(6), p 507-518 52 Liu Z., LiP., ZhaoD., TangH., GuoJ (2010), "Protective effect of extract of Cordyceps sinensis in middle cerebral artery occlusion-induced focal cerebral ischemia in rats", Behavioral and Brain Functions, 6(1): p 61-67 53 Lu M.Y., ChenC.C., LeeL.Y., LinT.W., KuoC.F (2015), "N 6-(2Hydroxyethyl) adenosine in the medicinal mushroom Cordyceps cicadaeattenuates lipopolysaccharide-stimulated pro-inflammatory responses by suppressing TLR4-Mediated NF-κB signaling pathways", Journal of natural products, 78(10), p 2452-2460 54 Lu Y., Luo F., CenK., XiaoG., YinY., LiC., LiZ., ZhanS., ZhangH., WangC (2017), "Omics data reveal the unusual asexual-fruiting nature and secondary metabolic potentials of the medicinal fungus Cordyceps cicadae", BMC genomics, 18(1), p 668-683 55 Luangsa-ard J J., TasanathaiK., MongkolsamritS., Hywel-JonesN (2008), Atlas of invertebrate-pathogenic fungi of Thailand Vol 2, National Center for Genetic Engineering and Biotechnology, National Science and Technology Development Agency 56 Miyake Y., KozutsumiY., NakamuraS., FujitaT., KawasakiT (1995), "Serine palmitoyltransferase is the primary target of a sphingosine-like immunosuppressant, ISP-1/myriocin",Biochemical and biophysical research communications, 211(2), p 396-403 73 57 Nan J.X., ParkE.J., YangB.K., SongC.H., SohnD H (2001), "Antifibrotic effect of extracellular biopolymer from submerged mycelial cultures ofCordyceps militaris on liver Fibrosis induced by Bile duct ligation and scission in rats", Archives of pharmacal research, 24(4), p 327-332 58 Peng X., ChaiY., ZhuB., JinY., LiX., YuL (2015), "The protective effects of N6-(2-hydroxyethyl)-adenosine extracted from Ophiocordyceps sobolifera on renal ischemia reperfusion injury (IRI) in mice", Jun Wu Xue Bao, 34(2), p 311-320 59 Prayook S., SiripukS., PanidaL (2013), "First Report of Cordyceps sp Isolated from Cicada in Northeastern Thailand and Their Characterizations",J Biol Sci, 13, p 587-595 60 Sato H., ShimazuM (2002), "Stromata production for Cordyceps militaris (Clavicipitales: Clavicipitaceae) by injection of hyphal bodies to alternative host insects", Applied entomology and zoology, 37(1), p 85-92 61 Sawynok J., SweeneyM (1989), "The role of purines in nociceptio", Neuroscience, 32(3), p 557-569 62 Shonkor K D (2009), "Production of anti-cancer agent cordycepin from the medicinal mushroom Cordyceps militaris", PhD Thesis, University of Fukui, 3-9-1 Bunkyo, Fukui 910-8507, Japan 63 Shrestha B., HanS.K., SungJ.M., SungG.H (2012), "Fruiting body formation of Cordyceps militaris from multi-ascospore isolates and their single ascospore progeny strains", Mycobiology, 40(2), p 100-106 64 Shrestha B., ZhangW., ZhangY., LiuX (2010), "What is the Chinese caterpillar fungus Ophiocordyceps sinensis (Ophiocordycipitaceae)?", Mycology, 1(4), p 228-236 65 Song J M., XinJ C., ZhuY (2007), "Effect of Cordyceps cicadae on blood sugar of mice and its hematopoietic function",Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine, 6, p 21-26 74 66 Sung J (1996), The insects-born fungus of Korea in color, Seoul: Kyohak Publishing Co Ltd 67 Takano F., YahagiN., YahagiR., TakadaS., YamaguchiM., ShodaS., MuraseT., FushiyaS., OhtaT (2005), "The liquid culture filtrates of Paecilomyces tenuipes (Peck) Samson (= Isaria japonica Yasuda) and Paecilomyces cicadae (Miquel) Samson (= Isaria sinclairii (Berk.) Llond) regulate Th1 and Th2 cytokine response in murine Peyer's patch cells in vitro and ex vivo", International immunopharmacology, 5(5), p 903-916 68 Ukai S., KihoT., HaraC., MoritaM., GotoA., ImaizumiN., HasegawaY (1983), "Polysaccharides in fungi XIII Antitumor activity of various polysaccharides isolated from Dictyophora indusiata, Ganoderma japonicum, Cordyceps cicadae, Auricularia auricula-judae, and Auricularia species",Chemical and pharmaceutical bulletin, 31(2), p 741-744 69 Wang H., ZhangJ., SitW.H., LeeC.Y J., WanJ M.F (2014), "Cordyceps cicadae induces G2/M cell cycle arrest in MHCC97H human hepatocellular carcinoma cells: a proteomic study",Chinese medicine, 9(1), p 15-27 70 Wang Y., GuoY., ZhangL., Cordyceps cicadae WuJ (2012), "Characterizations of a new isolate and production of adenosine and cordycepin",Brazilian Journal of Microbiology, 43(2), p 449-455 71 Wang Y., ZhaoX., TangF (2001), "Primary exploring on pharmic effect of Cordyceps cicadae",Zhejiang J Chin Tradit Med, 36, p 219-220 72 Wang Y., Gai Y., Jin J Y., Sun C S (2014),The new application of Cordyceps cicadae China patent No 102846675 73 Wen L T Y., Zhang P (2006), "Comparative analysis of active ingredients among Cordyceps cicadae, Cordyceps sinensis and Cordyceps militaris",Jiangsu Journal of Traditional Chinese Medicine, 27, p 45-46 74 Weng S.C., ChouC.J., LinL.C., TsaiW.J., KuoY.C (2002), "Immunomodulatory functions of extracts from the Chinese medicinal fungus Cordyceps cicadae", Journal of ethnopharmacology, 83(1), p 79-85 75 75 White T J., BrunsT., LeeS., TaylorJ (1990), "Amplification and direct sequencing of fungal ribosomal RNA genes for phylogenetics",PCR protocols: a guide to methods and applications, 18(1), p 315-322 76 Wirth-Dzięciołowska E., KaraszewskaJ., PyśniakK., SmolińskaM., GajewskaM (2009), "Selected peripheral blood cell parameters in twelve inbred strains of laboratory mice",Animal Science Papers and Reports, 27(1), p 69-77 77 Wongsa P., TasanataiK., WattsP., Hywel-JonesN (2005), "Isolation and in vitro cultivation of the insect pathogenic fungus Cordyceps unilateralis",Mycological research, 109(8), p 936-940 78 Wu F., YanH., MaX., JiaJ., ZhangG., GuoX., GuiZ (2011), "Structural characterization and antioxidant activity of purified polysaccharide from cultured Cordyceps militaris", African Journal of Microbiology Research, 5(18), p 2743-2751 79 Xiaolan M (2000), The macrofungi in China, Henam Technical and Science Publication House 80 Xiao J.H., XiaoD.M., SunZ.H., XiaoY., ZhongJ.J (2011), "Antioxidative potential of polysaccharide fractions produced from traditional Chinese medicinal macrofungus Cordyceps jiangxiensis in vitro", African Journal of Biotechnology, 10(34), p 6607-6615 81 Yan C W., ChenH., QinJ Z (2003), "Studies on liquid inoculum filtration and cultivated condition of Flammulina velutipes",Edible Fungi of China, 22(1), p 35-36 82 Yang J., ZhuoJ., ChenB., JinL., LiL (2008), "Regulating effects of Paecilomyces cicadae polysaccharides on immunity of aged rats",China journal of Chinese materia medica, 33(3), p 292-295 83 Yoo H.S., ShinJ.W., ChoJ.H., SonC.G., LeeY.W., ParkS.Y., ChoC.K (2004), "Effects of Cordyceps militaris extract on angiogenesis and tumor growth", Acta Pharmacologica Sinica, 25(5), p 657-665 76 84 Yu H M., WangB.S., HuangS C., DuhP.D (2006), "Comparison of protective effects between cultured Cordyceps militaris and natural Cordyceps sinensis against oxidative damage",Journal of Agricultural and Food Chemistry, 54(8), p 3132-3138 85 Yu Y S., Liu G M (1991),"Experimental research on regulative effect of adenosine on blood pressure controlling",Chinese Journal of Anesthesiology, 11, p 259-261 86 Zeng W.B., YuH., GeF., YangJ.Y., ChenZ.H., WangY.B., DaiY.D., AdamsA (2014), "Distribution of nucleosides in populations of Cordyceps cicadae", Molecules, 19(5), p 6123-6141 87 Zhang C B., WangY L., YiM., DongD C., SuX Q (2013), "Identification and phylogenetic analysis of the strain isolated from infected Platylomia pieli in Mopan Mountain, Tianwang Town, Jiangsu province",Guangdong Agricultural Sciences, 15, p 152-154 88 Zhang Z., WangF., WangX., LiuX., HouY., ZhangQ (2010), "Extraction of the polysaccharides from five algae and their potential antioxidant activity in vitro",Carbohydrate Polymers, 82(1), p 118-121 89 Zheng P., XiaY., XiaoG., XiongC., HuX., ZhangS., ZhengH., HuangY., ZhouY., WangS (2011), "Genome sequence of the insect pathogenic fungus Cordyceps militaris, a valued traditional Chinese medicine",Genome biology, 12(11), p 116-137 90 Zhou X., GongZ., SuY., LinJ., TangK (2009), "Cordyceps fungi: natural products, pharmacological functions and developmental products", Journal of Pharmacy and Pharmacology, 61(3), p 279-291 91 Zhu R., ChenY P., DengY Y., ZhengR., ZhongY F., WangL., DuL P (2011), "Cordyceps cicadae extracts ameliorate renal malfunction in a remnant kidney model",Journal of Zhejiang University Science B, 12(12), p 1024-1033 77 92 Zhu R., ZhengR., DengY., ChenY., ZhangS (2014), "Ergosterol peroxide from Cordyceps cicadae ameliorates TGF-β1-induced activation of kidney fibroblasts", Phytomedicine, 21(3), p 372-378 78 DANH MỤC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN Dƣơng Nghĩa Bình, Nguyễn Thu Giang, Lê Thị Lý, Đỗ Thị Tuyến, Vũ Xuân Tạo, Lê Hồng Điệp (2017), Phân lập nuôi trồng thành công nấm dƣợc liệu Cordyceps cicadae Việt Nam, Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Công nghệ, 33(1S), tr: 28-33 Đỗ Thị Tuyến , Dƣơng Nghĩa Bình, Nguyễn Thu Giang, Vũ Hồng Hà, Vũ Xuân Tạo, Ảnh hƣởng dịch chiết thể nấm dƣợc liệu Cordyceps cicadae lên chuột nhắt trắng Swiss, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ- Đại học Thái Nguyên, (Đã đƣợc chấp nhận đăng tập 177 số 01 năm 2018) 79 ...ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Dƣơng Nghĩa Bình NGHIÊN CỨU ĐIỀU KIỆN NI TRỒNG VÀ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA NẤM Cordyceps cicadaePHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM Chuyên... để đánh giá, khai thác nguồn gen quý nƣớc ta Từ sở lý luận khoa học thực tiễn nói trên, tiến hành đề tài Nghiên cứu điều kiện ni trồng đánh giá hoạt tính sinh học nấm Cordyceps cicadae phân lập. .. nhận nghiên cứu thức nghiên cứu điều kiện nuôi trồng đánh giá tiềm ứng dụng y dƣợc loài C cicadae đƣợc phân lập từ tự nhiên Việt Nam Gần đây, nhóm nghiên cứu tìm đƣợc chủng nấm ký sinh vùng rừng