BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI NGUYỄN THÀNH CƯỜNG NGHIÊN CỨU TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG VI SINH VẬT CHỊU MẶN CÓ HOẠT LỰC PHÂN HỦY MẠNH CÁC CHẤT GÂY Ô NHIỄM HỮU CƠ ĐỂ TẠO CHẾ PHẨM VI SINH VẬT ỨNG DỤNG TRONG QUÁ TRÌNH XỬ LÝ BÙN ĐÁY TẠI ÂU THUYỀN THỌ QUANG – ĐÀ NẴNG LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT Người hướng dẫn: PGS.TS Tăng Thị Chính PGS.TS Trần Liên Hà HÀ NỘI 2017 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc BẢN XÁC NHẬN CHỈNH SỬA LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên tác giả luận văn: Nguyễn Thành Cường Đề tài luận văn: Nghiên cứu tuyển chọn số chủng vi sinh vật chịu mặn có hoạt lực phân hủy mạnh chất gây ô nhiểm hữu để tạo chế phẩm vi sinh vật ứng dụng trình xử lý bùn đáy Âu Thuyền Thọ Quang – Đà Nẵng Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số SV: CA150044 Tác giả, Người hướng dẫn khoa học Hội đồng chấm luận văn xác nhận tác giả sửa chữa, bổ sung luận văn theo biên họp Hội đồng ngày 27/04/2017 với nội dung sau: Bổ sung số liệu thực trạng ô nhiễm môi trường biển Âu Thuyền Thọ Quang - Đà Nẵng mục 1.1.2 phần tổng quan luận văn Sắp xếp lại mục phần tổng quan: mục 1.2 lồng vào 1.1.2 Lược bỏ số mục phần tổng quan Viết lại xác bổ sung trích dẫn nguồn tài liệu tham khảo phương pháp nghiên cứu sử dụng Thống thuật ngữ đường kính vịng phân giải Bổ sung thêm hình ảnh vịng phân giải chủng VSV tuyển chọn Bổ sung thêm bình luận kết đạt Chỉnh sửa lại phần kết luận luận văn Sắp xếp lại tài liệu tham khảo theo thứ tự Sửa lỗi trùng lặp tài liệu tham khảo Chỉnh sửa lỗi tả, lỗi đánh máy Ngày 24 tháng 05 năm 2017 Giáo viên hướng dẫn PGS TS Tăng Thị Chính Giáo viên hướng dẫn PGS TS Trần Liên Hà Tác giả luận văn Nguyễn Thành Cường CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG PGS TS Tô Kim Anh LỜI CAM ĐOAN Tên là: Nguyễn Thành Cường Mã số học viên: CA150044 Lớp: 2015ACNSH Chun ngành: Cơng nghệ sinh học Khóa học: 2015A Tơi xin cam đoan luận văn tơi thực hướng dẫn PGS TS Tăng Thị Chính PGS.TS Trần Liên Hà với đề tài nghiên cứu: “Nghiên cứu tuyển chọn số chủng vi sinh vật chịu mặn có hoạt lực phân hủy mạnh chất gây ô nhiểm hữu để tạo chế phẩm vi sinh vật ứng dụng trình xử lý bùn đáy Âu Thuyền Thọ Quang – Đà Nẵng” Đây đề tài nghiên cứu mới, phần nghiên cứu đề tài cấp Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam “Nghiên cứu giải pháp ứng dụng hệ vi sinh vật phân hủy đáy để xử lý mùi phát sinh bùn nước mặt khu vực Âu thuyền Thọ Quang thành phố Đà Nẵng”, không trùng lặp với đề tài luận văn trước đây, đó, khơng phải chép luận văn Nội dung luận văn thể theo quy định Các số liệu luận văn điều tra, trích dẫn đánh giá Việc tham khảo nguồn tài liệu (nếu có) thực trích dẫn ghi nguồn tài liệu tham khảo quy định Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm nội dung tơi trình bày luận văn Hà Nội, ngày …… tháng …… năm 2017 NGƯỜI VIẾT CAM ĐOAN Nguyễn Thành Cường LỜI CÁM ƠN Trước hết em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc tới PGS.TS Tăng Thị Chính, Trưởng phịng Vi sinh vật môi trường – Viện Công nghệ môi trường – Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam tận tình hướng dẫn tạo điều kiện thuận lợi để em hoàn thành tốt đề tài nghiên cứu Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới PGS.TS Trần Liên Hà - Viện Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm, Trường ĐHBK HN giúp đỡ bảo tận tình cho em trình học tập nghiên cứu khoa học Em xin cảm ơn cán Phòng vi sinh vật môi trường – Viện Công nghệ Môi Trường giúp đỡ hết lòng giảng dạy em trình học tập nghiên cứu phịng Em xin chân thành cảm ơn thầy, cô Viện đào tạo sau đại học – Đại học Bách Khoa Hà Nội, lãnh đạo Viện Công nghệ môi trường tạo điều kiện giúp đỡ em trình học tập nghiên cứu Trường Viện Cuối em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới gia đình, bạn bè, người thân u ln động viên, ủng hộ tạo điều kiện vật chất tinh thần cho em hoàn thành tốt luận văn tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn ! Hà Nội, ngày… tháng… năm 2017 Học viên Nguyễn Thành Cường MỤC LỤC MỞ ĐẦU .1 CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan tình hình nhiễm ven biển Âu thuyền Thọ Quang 1.1.1 Tình hình nhiễm mơi trường vùng ven biển nước ta .3 1.1.2 Tổng quan Âu thuyền Thọ Quang – Đà Nẵng .6 1.1.2.1 Các nguyên nhân gây ô nhiễm Âu thuyền Thọ Quang 1.1.2.2 Chất lượng nước bùn đáy Âu thuyền Thọ Quang 11 1.2 Công nghệ vi sinh xử lý bùn đáy 17 1.2.1 Giới thiệu vi sinh vật chịu mặn 17 1.2.2 Một số cơng nghệ điển hình ngồi nước xử lý bùn đáy công nghệ vi sinh 19 CHƯƠNG II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 Vật liệu, dụng cụ thiết bị nghiên cứu 24 2.1.1 Nguyên vật liệu 24 2.1.2 Hóa chất nghiên cứu 24 2.1.3 Dụng cụ, thiết bị nghiên cứu 25 2.2 Phương pháp nghiên cứu: .25 2.2.1 Phương pháp đánh giá khả tổng hợp enzyme ngoại bào VSV cách xác đường kính vịng phân giải 25 2.2.1.1 Phương pháp cấy chấm điểm [10] .25 2.2.1.2 Phương pháp đục lỗ thạch [10] 26 2.2.3 Phương pháp xác định mật độ VSV 26 2.2.3.1 Xác định thành phần số lượng VSV phương pháp pha loãng [10] 26 2.2.3.2 Phương pháp đo mật độ quang [10] 27 2.2.4 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ muối đến sinh trưởng, phát triển khả tổng hợp enzyme ngoại bào chủng VSV tuyển chọn 27 2.2.5 Phương pháp đánh giá đối kháng chủng vi sinh vật [10] .27 2.2.6 Xác định số đặc điểm sinh học chủng VSV tuyển chọn [10] 27 2.2.7 Sử dụng kit sinh hóa API 50 CHB định danh chủng vi sinh vật .28 2.2.8 Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ đến sinh trưởng, phát triển khả tổng hợp enzyme ngoại bào chủng VSV tuyển chọn 28 2.2.9 Khảo sát ảnh hưởng pH đến sinh trưởng, phát triển khả tổng hợp enzyme ngoại bào chủng VSV tuyển chọn 29 2.2.10 Khảo sát ảnh hưởng nguồn dinh dưỡng đến sinh trưởng, phát triển khả tổng hợp enzyme ngoại bào chủng VSV tuyển chọn29 2.2.10.1 Phương pháp xác định nguồn dinh dưỡng thích hợp .29 2.2.10.2 Phương pháp xác định nồng độ thích hợp nguồn dinh dưỡng 29 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 31 3.1 Phân lập tuyển chọn chủng vi sinh vật chịu mặn có khả tổng hợp enzyme xenlulaza, kitinaza, amylaza, proteaza .31 3.1.1 Phân lập chủng VSV chịu mặn 31 3.1.2 Tuyển chọn .33 3.1.2.1 Tuyển chọn chủng có khả tổng hợp enzyme ngoại bào phương pháp cấy chấm điểm 33 3.1.3 Đánh giá khả chịu mặn chủng VSV tuyển chọn .39 3.1.4 Đánh giá đối kháng chủng VSV tuyển chọn .43 3.2 Nghiên cứu đặc điểm sinh lý, sinh hóa định danh chủng VSV tuyển chọn 44 3.2.1 Xác định số đặc điểm sinh học chủng VSV tuyển chọn 44 3.2.2 Định tên chủng VSV tuyển chọn kit sinh hóa API 50 CHB .45 3.3 Nghiên cứu ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy đến sinh trưởng, phát triển tổng hợp enzyme ngoại bào chủng VSV tuyển chọn 46 3.3.1 Nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ đến sinh trưởng, phát triển tổng hợp enzyme ngoại bào chủng VSV tuyển chọn 46 3.3.2 Ảnh hưởng pH đến sinh trưởng phát triển chủng VSV tuyển chọn 49 3.3.3 Ảnh hưởng nguồn dinh dưỡng đến sinh trưởng, phát triển khả tổng hợp enzyme ngoại bào chủng VSV tuyển chọn 52 3.3.3.1 Ảnh hưởng nguồn cacbon đến sinh trưởng, phát triển khả tổng hợp enzyme ngoại bào chủng VSV tuyển chọn 52 3.3.3.2 Ảnh hưởng nguồn nito đến sinh trưởng, phát triển khả tổng hợp enzyme ngoại bào chủng VSV tuyển chọn 56 3.3.3.3 Ảnh hưởng nguồn khoáng đến sinh trưởng, phát triển khả tổng hợp enzyme ngoại bào chủng VSV tuyển chọn 60 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 66 TÀI LIỆU THAM KHẢO 68 PHỤ LỤC 72 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT TN : Tổng nito TP : Tổng photpho MPB : Malt-Peptone-Broth (môi trường dịch thể) MPA : Malt-Peptone-Agar (môi trường phân lập VSV hiếu khí) OD : Optical density- mật độ quang CFU/ml : Colony Forming Unit/ml- số đơn vị khuẩn lạc ml mẫu VSV : Vi sinh vật KPH : Không phát BQL : Ban quản lý DVTS : Dịch vụ thủy sản TXLNT : Trạm xử lý nước thải KCN : Khu công nghiệp BĐT : Bột đậu tương XK : Xạ khuẩn VK : Vi khuẩn DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Lượng nước thải phát sinh từ tàu cá cập cảng [7] 10 Bảng 1.2: Vị trí địa điểm lấy mẫu Âu thuyền Thọ Quang [5] .12 Bảng 1.3: Kết phân tích chất lượng trầm tích Âu thuyền [5] .14 Bảng 1.4: Kết phân tích chất lượng khơng khí Âu thuyền [5] 15 Bảng 3.1: Các chủng VSV phân lập từ mẫu bùn nghiên cứu 31 Bảng 3.2: Tỉ lệ đường kính vịng phân giải chủng VSV phân lập .34 Bảng 3.3: Khả tổng hợp enzyme ngoại bào chủng VSV 37 Bảng 3.4: Mật độ tế bào chủng VSV nồng độ muối khác 40 Bảng 3.5a: Đặc điểm sinh lý, sinh hoá chủng VSV tuyển chọn 44 Bảng 3.5b: Kết phân loại chủng kit API 50 CHB .45 Bảng 3.6: Mật độ tế bào chủng VSV chịu mặn mức nhiệt độ khác 47 Bảng 3.7: Mật độ tế bào chủng VSV chịu mặn mức pH khác 49 Bảng 3.8: Mật độ tế bào chủng VSV chịu mặn nuôi cấy mơi trường có nguồn cacbon khác (CFU/ml) 53 Bảng 3.9: Mật độ tế bào chủng VSV mơi trường có bổ sung rỉ đường nồng độ khác 54 Bảng 3.10:Mật độ tế bào chủng VSV chịu mặn nuôi cấy môi trường có nguồn nitơ khác (CFU/ml) .57 Bảng 3.11: Mật độ tế bào chủng VSV môi trường có bổ sung BĐT nồng độ khác 58 Bảng 3.12: Mật độ tế bào chủng VSV chịu mặn ni cấy mơi trường có nguồn khoáng khác (CFU/ml) 61 Bảng 3.13: Ảnh hưởng nồng độ KH2PO4 đến khả sinh trưởng chủng VSV chịu mặn 62 Phụ lục 1: Thành phần số môi trường sử dụng 72 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Từ kết nghiên cứu đưa số kết luận sau: Từ mẫu bùn lấy âu thuyền Thọ Quang, TP Đà Nẵng bùn ao nuôi tôm Vườn quốc gia Xuân Thủy, tuyển chọn chủng VSV TQ10, TQ12, TQ21, ĐN13 có khả chịu mặn lên đến 7%, sinh trưởng tốt môi trường nồng độ muối 3% có khả sinh tổng hợp đồng thời loại enzyme ngoại bào xenlulaza, amylaza, proteaza, kitinaza tốt Cả chủng VSV tuyển chọn trực khuẩn, bắt màu gram dương có khả sinh bào tử chủng định tên đến lồi kit sinh hóa API 50 CHB kết quả: chủng ĐN13 thuộc loài Bacillus subtilis chủng TQ10, TQ12, TQ12 thuộc loài Bacillus amyloliquefaciens (tỉ lệ giống loài đạt 99% ĐN13, TQ12, TQ21 ; đạt 98,5% TQ10) Bốn chủng TQ10, TQ12, TQ21, ĐN13 tuyển chọn sinh trưởng, phát triển tổng hợp enzyme ngoại bào tốt mơi trường có điều kiện pH 6-8, nhiệt độ thích hợp từ 25oC-35oC Về mặt dinh dưỡng, chủng VSV sinh trưởng, phát triển tổng hợp enzyme ngoại bào tốt môi trường chứa hàm lượng nguồn dinh dưỡng cacbon thích hợp rỉ đường với nồng độ 5%, nguồn nitơ thích hợp bột đậu tương với nồng độ 5%, nguồn khống thích hợp KH2PO4 với nồng độ 0,5% 66 Kiến nghị Từ kết nghiên cứu đạt được, đưa kiến nghị sau: - Đánh giá hiệu xử lý bùn đáy nước mặt chế phẩm sinh học VSV Âu thuyền Thọ Quang – Đà Nẵng - Tối ưu hóa điều kiện sản xuất, hồn thiện quy trình sản xuất chế phẩm VSV - Cần tiếp tục nghiên cứu xây dựng quy trình sản xuất chế phẩm quy mơ lớn thử nghiệm chế phẩm mơ hình ngồi trường để đánh giá hoàn thiện sản phẩm - Đánh giá hiệu kinh tế chế phẩm sử dụng chế phẩm VSV 67 TÀI LIỆU THAM KHẢO Cao Thị Thu Trang, Trần Đức Thạnh, Lê Xuân Sinh, (2013), Đánh giá tải lượng ô nhiễm môi trường nhiễm đưa vào khu vực Phá Tam Giang- Cầu Hai dự báo đến năm 2020, Viện Tài Nguyên Môi Trường Biển Lê Thị Hiền, Đinh Văn Lợi, Vũ Thị Vân, Nguyễn Văn Giang, (2013), Phân lập tuyển chọn chủng xạ khuẩn đối kháng gây bệnh nấm, Tạp chí Khoa học Phát triển, Vol 12, no 5, pp 656-664 Đặng Đình Kim (2008), Nghiên cứu ứng dụng công nghệ hút bùn CHLB Đức để ổn định phục hồi môi trường số hồ Hà Nội, Đề tài khoa học cấp Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Đỗ Văn Mạnh (2015), Đánh giá trạng xử lý nước thải chế biến thủy sản số doanh nghiệp khu công nghiệp Thọ Quang, thành phố Đà Nẵng, Đề tài sở chọn lọc, Viện CNMT- Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Huỳnh Đức Long, (2016), Báo cáo khoa học nghiên cứu giải pháp ứng dụng hệ VSV phân hủy đáy để xử lý mùi phát sinh bùn đáy nước mặt khu vực âu thuyền Thọ Quang thành phố Đà Nẵng, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Huỳnh Văn Phương, (2015), Báo cáo cung cấp thông tin, liệu công tác vệ sinh môi trường Âu thuyền Thọ Quang từ năm 2011-2014, Ban quản lý Âu thuyền Thọ Quang Huỳnh Văn Phương, (2015), Báo cáo Tổng quan Âu thuyền Thọ Quang; BQL Âu thuyền Thọ Quang, Ban quản lý Âu thuyền Thọ Quang Kiều Thị Kính, (2003), Khảo sát đánh giá trạng môi trường đề xuất mơ hình quản lý chất lượng nguồn nước khu vực âu thuyền Thọ Quang, quận Sơn Trà, thành phố Đà Nẵng; Luận văn thạc sĩ, Đại học Đà Nẵng Nguyễn Phú Tuân, (2010), Nghiên cứu xây dựng quy trình tổng hợp ứng dụng xứ lý nhiễm nước hồ Trúc Bạch, Đề tài thuộc Bộ KH-CN Việt Nam, 2010 68 10 Nguyễn Lân Dũng, (1983), Thực tập Vi sinh vật học, NXB Đại học trung học chuyên nghiệp Hà Nội 11 Nguyễn Quang Vinh, (2012), Báo cáo việc cung cấp thông tin, liệu tình hình hoạt động KCN Dịch vụ thủy sản Thọ Quang; Công ty phát triển khai thác hạ tầng KCN Đà Nẵng 12 Nguyễn Viết Đại, (2015), Đánh giá trạng đề xuất giải pháp nâng cao hiệu quản lý môi trường Khu công nghiệp Dịch vụ thủy sản Thọ Quang, Đà Nẵng, Luận văn thạc sỹ, Đại học quốc gia Hà Nội 13 Phạm Đình Đơn, Ơ nhiễm mơi trường ni trồng chế biến thủy sản Đồng sông Cửu Long, tạp chí mơi trường số 6/20 14 Phạm Văn Tho, (2014), Nghiên cứu thực nghiệm tách dầu mỡ chất rắn lơ lửng nước mặt chế biến thủy sản KCN dịch vụ thủy sản Thọ Quang phương pháp tuyển 15 Tăng Thị Chính Và Cộng Sự, (2013), Xây dựng mơ hình xử lý ao hồ bị ô nhiễm nước thải sinh hoạt chăn nuôi vùng nông thôn chế phẩm vi sinh (Biomix 2), hóa chất thân thiện mơi trường thủy sinh Hà Nam, Đề tài khoa học cấp Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam 16 Trần Đức Thạnh, Nguyễn Hữu Cử, Đỗ Công Trung, Thanh Đặng Ngọc Trung, (2009), Vũng vịnh ven bờ biển Việt Nam tiềm sử dụng; NXB Khoa Học Tự Nhiên Và Công nghệ 17 Nguyễn Thị Minh Hằng, Đỗ Văn Bút, (2013), Phân lập tuyển chọn chủng xạ khuẩn Actinomycetes phân giải Xenluloza từ đất rừng, Hội nghị khoa học toàn quốc, vol 8, pp 1-7 18 Phạm Văn Khánh, (2015), Hà Nội nhân rộng ứng dụng công nghệ sinh học xử lý ô nhiễm môi trường, Tạp chí Mơi trường, vol 8, pp 8-15 19 Atreyee Sims, (2013), Toward the development of microbial indicators for wetland assessment, Water Research, vol 47, no 5, pp 1711-1725 20 Huiluo Cao, (2011), Ammonia/Ammonium- "Responses Oxidizing of Aerobic Microorganisms and to Anaerobic Anthropogenic Pollution in Coastal Marine Environments," Methods in Enzymology, vol 496, pp 35-62 69 21 J.N.Galloway et al, (2004), Nitrogen cycles: past, present, and future, Biogeochemistry, vol 70, pp 153-226 22 R.Marino, R.W.Howarth, (2006) , Nitrogen as the limiting nutrient for eutrophication in coastal marine ecosystems: evolving views over three decades, Limnology and Oceanography, vol 51, pp 364-376 23 S.Seitzinger et al, (2006), Denitrification across landscapes and waterscapes: a synthesis, Ecological Applications, vol 16, pp 2064-2090 24 T.E.Jordan et al, (2007), Comparing functional assessment of wetlands to measurenments of soil characteristics and nitrogen processing, Wetlands, vol 27, pp 479-497 25 W.R Boynton et al, (2008), Nutrient budgets and management actions in the Patuxent River estuary, Maryland, Estuaries and Coasts, vol 31, pp 623651 26 S.S Kaushal et al, (2008), Effects of stream restoration on denitrification in an urbanizing watershed, Ecological Application, vol 18, pp 789-804 27 T.E.Tomqvist et al, (2006), How stable is the Mississippi Delta, Geology, vol 34, pp 697-700 28 J.M.Coleman et al, (2008), Wetland loss in world deltas, Journal of Coastal Research, vol 24, pp 1-14 29 P.A.Keddy et al, (2008), The wetlands of Lakes Pontchartrain and Maurepas: past, present and future, Environmental Reviews, vol 15, pp 4377 30 J.W.Day et al, (2000), Pattem and process of land loss in the Mississippi Delta: a spatial and temporal analysis of wetland habitat change, Estuaries, vol 23, pp 425-438 31 Hugo Ribeiro, (2013), Influence of natural rhizosedimants on hydrocarbons degradation potential of microorganisms associated to Juncus maritimus roots, Interbational Biodeterioration & Biodegradation, vol 84, pp 86-96 32 M.L.Andrade, E.F.Covelo, F.A.Vega, (2004), Effect of the Prestige oil spill on salt marsh soils on the coast of Galicia (northwestern Spain), Journal of Environmental Quality, vol 33, pp 2003-2110 70 33 L.A.Boorman, (1999), Salt marshes e present functioning and future change, Mangroves and Salt Marshes, vol 3, pp 227-241 34 J.L.Barredo, (2005), Microbial Enzymes adn Biotransfomation, Humana Press, pp 151-180 35 W.H.Larsen, (1986), Halophilic and halotolerant mocroorganism: an overview historical perspective, FEMS Microbiol Biotechnol, vol 24, pp 2235-2241 71 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Thành phần số môi trường sử dụng *Môi trường phân giải xeluloza *Môi trường phân giải protein (NH4)2SO4 : 1.5 g NaCl :3g KH2PO4 : 0.5 g K2HPO4 : 1.5 g K2HPO4 : 0.5 g KH2PO4 : 0.5 g MgSO4 : 0.4 g Casein :2g MnSO4 : vết Dextrin : 0.05 g FeSO4 : vết Cao thịt :2g Bột giấy :2g Thạch : 20 g Thạch : 20 g Nước biển : 1000 ml Nước biển : 1000 ml *Môi trường tinh bột *Môi trường kitin Tinh bột :1g Kitosan : 1-3 g Pepton :7g (NH4)3PO4 :5g Thạch : 20 g Cao nấm men :1g Nước biển : 1000 ml MgSO4 : 0,5 g CaCl2 : 0,5 g FeSO4 : 0,1 g MnSO4 : 0,1 g K2HPO4 : 0,1 g 72 *Môi trường giữ giống (MT MPA) Thạch : 20 g Cao thịt :3g Nước biển : 1000 ml Pepto :5g NaCl :5 g Thạch : 20 g Nước biển : 1000 ml *Môi trường dịch thể MPB: mơi trường MPA khơng có thạch *Môi trường sở: Pepton : g/l NaCl : 20 g/l 73 Phụ lục 2: Ảnh hưởng nồng độ rỉ đường lên khả sinh tổng hợp enzyme ngoại bào Chủng Đường kính phân giải xenluloza D-d (mm) Đường kính phân giải tinh bột D-d (mm) Đường kính phân giải protein D-d (mm) Đường kính phân giải kitin D-d (mm) Nồng độ TQ10 TQ12 TQ21 ĐN13 0% 29±0,5 28±0,3 30±0,3 29±0,5 1% 32±0,4 30±0,5 33±0,4 33±0,4 3% 37±0,3 37±0,4 36±0,5 34±0,4 5% 40±0,5 39±0,5 38±0,3 41±0,4 7% 36±0,4 38±0,3 34±0,5 36±0,4 10% 32±0,4 34±0,5 31±0,4 32±0,3 0% 26±0,5 28±0,4 27±0,5 29±0,4 1% 28±0,5 31±0,4 30±0,5 31±0,5 3% 32±0,3 34±0,5 33±0,5 34±0,4 5% 38±0,5 37±0,4 36±0,5 39±0,4 7% 33±0,5 36±0,5 33±0,5 33±0,5 10% 28±0,4 31±0,3 27±0,5 28±0,4 0% 27±0,5 28±0,4 28±0,4 27±0,4 1% 29±0,3 30±0,3 28±0,5 29±0,4 3% 35±0,5 33±0,4 36±0,5 31±0,4 5% 38±0,4 39±0,5 40±0,4 38±0,5 7% 35±0,5 36±0,5 39±0,4 36±0,4 10% 31±0,4 30±0,4 30±0,5 41±0,4 0% 29±0,4 28±0,5 30±0,4 29±0,4 1% 31±0,5 32±0,4 30±0,5 34±0,5 3% 36±0,4 35±0,5 34±0,4 37±0,4 5% 38±0,5 39±0,4 37±0,5 39±0,4 7% 35±0,4 36±0,5 35±0,5 38±0,4 10% 33±0,4 35±0,5 32±0,4 36±0,5 74 Phụ lục 3: Ảnh hưởng nồng độ bột đậu tương lên khả sinh tổng hợp enzyme ngoại bào Chủng Đường kính phân giải xenluloza D-d (mm) Đường kính phân giải tinh bột D-d (mm) Đường kính phân giải protein D-d (mm) Đường kính phân giải kitin D-d (mm) Nồng độ TQ10 TQ12 TQ21 ĐN13 0% 27±0,5 28±0,6 28±0,5 29±0,4 1% 32±0,4 31±0,5 30±0,5 28±0,4 3% 35±0,6 36±0,4 32±0,4 33±0,5 5% 39±0,4 38±0,5 38±0,6 37±0,4 7% 37±0,5 34±0,4 37±0,6 35±0,5 10% 34±0,4 32±0,4 35±0,5 33±0,4 0% 27±0,5 28±0,5 28±0,3 29±0,4 1% 31±0,4 32±0,6 32±0,5 33±0,4 3% 35±0,5 37±0,4 35±0,6 36±0,4 5% 38±0,4 40±0,5 37±0,5 38±0,4 7% 36±0,5 38±0,6 35±0,4 37±0,5 10% 34±0,4 35±0,5 33±0,4 34±0,6 0% 27±0,5 28±0,3 28±0,5 29±0,5 1% 30±0,6 31±0,5 31±0,5 30±0,3 3% 35±0,3 35±0,5 37±0,3 32±0,5 5% 38±0,5 37±0,5 39±0,6 37±0,5 7% 36±0,5 34±0,3 36±0,5 35±0,3 10% 34±0,6 32±0,5 34±0,6 32±0,5 0% 27±0,5 28±0,5 28±0,3 29±0,3 1% 30±0,3 30±0,5 29±0,5 32±0,6 3% 34±0,5 35±0,6 35±0,3 36±0,5 5% 38±0,3 37±0,5 39±0,4 38±0,5 7% 36±0,5 34±0,5 37±0,5 35±0,4 10% 32±0,6 33±0,5 31±0,4 32±0,5 75 Phụ lục 4: Ảnh hưởng nồng độ KH2PO4 lên khả sinh tổng hợp enzyme ngoại bào Chủng Đường kính phân giải xenluloza D-d (mm) Đường kính phân giải tinh bột D-d (mm) Đường kính phân giải protein D-d (mm) Đường kính phân giải kitin D-d (mm) Nồng độ 0% TQ10 28±0,5 TQ12 30±0,4 TQ21 27±0,5 ĐN13 29±0,6 0.1% 31±0,3 30±0,5 29±0,6 30±0,5 0.2% 0.3% 0.4% 34±0,3 36±0,6 38±0,5 32±0,6 34±0,5 35±0,6 33±0,5 36 38±0,3 33±0,6 34±0,3 36±0,3 0.5% 0.7% 1.0% 0% 0.1% 39±0,4 38±0,5 36±0,6 28±0,4 29±0,6 38±0,5 37±0,6 35±0,3 29±0,5 30±0,3 39±0,6 36±0,3 32±0,5 27±0,4 28±0,6 38±0,6 37±0,6 34±0,6 28±0,6 29±0,5 0.2% 0.3% 0.4% 32±0,5 33±0,6 35±0,5 31±0,6 32±0,5 34±0,4 31±0,3 33±0,5 36±0,5 33±0,6 35±0,6 38±0,3 0.5% 0.7% 1.0% 37±0,4 36±0,4 35±0,5 37±0,3 35±0,5 33±0,3 38±0,4 36±0,3 34±0,5 36±0,5 35±0,4 31±0,4 0% 27±0,4 28±0,5 27±0,4 28±0,5 0.1% 28±0,3 29±0,3 30±0,4 29±0,5 0.2% 0.3% 0.4% 31±0,4 35±0,5 36±0,3 30±0,5 32±0,4 37±0,4 33±0,4 35±0,4 37±0,5 31±0,4 33±0,3 38±0,4 0.5% 0.7% 1.0% 0% 39±0,4 37±0,3 34±0,5 28±0,4 40±0,5 36±0,5 32±0,4 29±0,5 38±0,4 35±0,3 31±0,5 27±0,3 41±0,3 37±0,5 35±0,4 29±0,4 0.1% 29±0,4 30±0,4 29±0,5 30±0,5 0.2% 0.3% 0.4% 32±0,3 34±0,4 36±0,3 31±0,5 35±0,5 36±0,5 33±0,4 37±0,5 38±0,4 32±0,4 34±0,4 37±0,3 0.5% 0.7% 1.0% 37±0,5 35±0,4 33±0,5 37±0,3 34±0,5 31±0,3 40±0,5 38±0,3 34±0,4 39±0,4 36±0,4 35±0,4 76 Phụ lục 5: Ảnh hưởng nồng độ NaCl lên sinh tổng hợp enzyme ngoại bào Nồng độ TQ10 TQ12 TQ21 ĐN13 0% 33±0,6 30±0,4 23±0,4 25±0,4 Đường kính phân 1% 34±0,5 32±0,3 25±0,5 27±0,3 giải xenluloza 3% 37±0,3 35±0,5 27±0,3 29±0,4 D-d (mm) 5% 33±0,3 31±0,4 24±0,4 26±0,4 7% 29±0,5 27±0,3 21±0,5 23±0,3 0% 28±0,3 29±0,3 26±0,5 25±0,3 Đường kính phân 1% 31±0,3 32±0,4 29±0,3 28±0,5 giải tinh bột 3% 33±0,5 36±0,5 31±0,3 32±0,4 D-d (mm) 5% 30±0,4 33±0,3 28±0,3 29±0,3 7% 26±0,5 30±0,5 25±0,4 26±0,3 0% 30±0,3 32±0,3 29±0,3 27±0,4 Đường kính phân 1% 33±0,3 34±0,3 33±0,5 30±0,3 giải protein 3% 36±0,5 35±0,3 37±0,3 32±0,3 D-d (mm) 5% 34±0,3 31±0,5 33±0,4 28±0,3 7% 31±0,3 29±0,4 30±0,5 25±0,3 0% 26±0,5 24±0,3 23±0,3 29±0,5 Đường kính phân 1% 29±0,4 30±0,3 27±0,5 33±0,3 giải kitin 3% 33±0,3 34±0,4 31±0,5 36±0,3 D-d (mm) 5% 30±0,5 29±0,5 28±0,3 33±0,4 7% 24±0,3 25±0,3 24±0,5 29±0,3 Chủng NaCl 77 Phụ lục 6: Ảnh hưởng nhiệt độ lên sinh tổng hợp enzyme chủng VSV chịu mặn Nhiệt độ TQ10 TQ12 TQ21 ĐN13 15oC 25±0,3 23±0,5 21±0,4 24±0,4 Đường kính phân 20oC 29±0,5 27±0,3 24±0,4 27±0,4 giải xenluloza 25oC 36±0,4 31±0,5 27±0,5 29±0,4 (D-d) mm 30oC 34±0,5 29±0,3 31±0,4 32±0,4 35oC 25±0,4 23±0,4 22±0,3 24±0,3 15oC 23±0,3 27±0,4 21±0,5 20±0,4 Đường kính phân 20oC 25±0,4 30±0,3 24±0,4 23±0,4 giải tinh bột 25oC 30±0,4 34±0,4 27±0,3 26±0,5 (D-d) mm 30oC 29±0,4 32±0,3 29±0,5 31±0,4 35oC 24±0,3 27±0,5 23±0,3 27±0,3 15oC 27±0,4 25±0,3 23±03 20±0,4 Đường kính phân 20oC 29±0,4 28±0,3 27±0,4 23±0,3 giải protein 25oC 33±0,3 32±0,5 30±0,3 26±0,4 (D-d) mm 30oC 28±0,3 30±0,4 34±0,3 30±0,5 35oC 24±0,4 26±0,3 29±0,5 25±0,5 15oC 24±0,4 25±0,4 23±0,4 27±0,3 Đường kính phân 20oC 27±0,4 29±0,3 27±0,4 30±0,4 giải kitin 25oC 33±0,3 31±0,4 29±0,3 32±0,4 (D-d) mm 30oC 27±0,5 29±0,4 33±0,5 36±0,4 35oC 24±0,4 23±0,5 26±0,3 31±0,4 Chủng 78 Phụ lục 7: Ảnh hưởng pH lên sinh tổng hợp enzyme chủng VSV chịu mặn pH TQ10 TQ12 TQ21 ĐN13 pH5 29±0,4 25±0,5 21±0,3 24±0,5 Đường kính phân pH6 34±0,3 28±0,3 24±0,5 26±0,5 giải xenluloza pH7 37±0,5 33±0,3 30±0,5 28±0,3 (D-d) mm pH8 33±0,3 30±0,4 34±0,4 30±0,5 pH9 28±0,5 26±0,3 21±0,5 27±0,3 pH5 23±0,3 25±0,4 21±0,3 24±0,5 Đường kính phân pH6 25±0,3 28±0,3 24±0,3 26±0,3 giải tinh bột pH7 30±0,4 35±0,5 29±0,4 27±0,3 (D-d) mm pH8 24±0,3 28±0,5 30±0,3 29±0,5 pH9 19±0,3 23±,4 26±0,3 25±0,3 pH5 25±0,5 23±0,3 26±0,4 28±0,5 Đường kính phân pH6 29±0,3 27±0,5 30±0,3 28±0,3 giải protein pH7 33±0,4 31±0,4 32±0,3 33±0,3 (D-d) mm pH8 27±0,3 28±0,5 36±0,3 35±0,4 pH9 24±0,4 25±0,3 33±0,4 31±0,5 pH5 27±0,3 25±0,3 24±0,4 28±0,3 Đường kính phân pH6 30±0,5 29±0,3 27±0,4 31±0,5 giải kitin pH7 32±0,5 34±0,3 29±0,5 33±0,3 (D-d) mm pH8 29±0,3 30±0,4 32±0,5 36±0,5 pH9 26±0,4 25±0,5 28±0,5 30±0,5 Chủng 79 Phụ lục 8: Ảnh hưởng nồng độ rỉ đường đến khả sinh enzyme amylaza chủng TQ21 Phụ lục 9: Ảnh hưởng nồng độ BĐT đến khả sinh enzyme proteaza chủng TQ21 80 ... nghiên cứu: ? ?Nghiên cứu tuyển chọn số chủng vi sinh vật chịu mặn có hoạt lực phân hủy mạnh chất gây ô nhiểm hữu để tạo chế phẩm vi sinh vật ứng dụng trình xử lý bùn đáy Âu Thuyền Thọ Quang – Đà Nẵng? ??... chịu mặn có hoạt lực phân hủy mạnh chất gây nhiểm hữu để tạo chế phẩm vi sinh vật ứng dụng trình xử lý bùn đáy Âu Thuyền Thọ Quang – Đà Nẵng? ?? Mục tiêu đề tài: Tuyển chọn 2-3 chủng VSV chịu mặn có. .. chịu mặn có hoạt lực phân hủy mạnh chất gây ô nhiểm hữu để tạo chế phẩm vi sinh vật ứng dụng trình xử lý bùn đáy Âu Thuyền Thọ Quang – Đà Nẵng Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số SV: CA150044