[Luận văn]nghiên cứu ảnh hưởng của yếu tố mùa vụ, phương pháp khai thác đến kết quả thu tế bào trứng và môi trường nuôi cấy, đông lạnh đến kết quả thụ tinh ống nghiệm trứng bò

Thông tin tài liệu

Luận văn, thạc sỹ, tiến sĩ, cao học, kinh tế, nông nghiệp

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI -& - PHÙNG MINH NGUYỆT NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA YẾU TỐ MÙA VỤ, PHƯƠNG PHÁP KHAI THÁC ĐẾN KẾT QUẢ THU TẾ BÀO TRỨNG VÀ MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY, ĐÔNG LẠNH ĐẾN KẾT QUẢ THỤ TINH ỐNG NGHIỆM TRỨNG BỊ LUẬN VĂN THẠC SĨ NƠNG NGHIỆP Chuyên ngành: THÚ Y Mã số: 60.62.50 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS TRẦN TIẾN DŨNG HÀ NỘI - 2008 Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………i LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình riêng tôi, số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Mọi giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn thơng tin trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc Tác giả luận văn Phùng Minh Nguyệt i LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành gửi tới Ban Giám hiệu trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội, Ban chủ nhiệm khoa Sau Đại Học, Khoa Thú Y thầy cô giáo trường lời cảm ơn sâu sắc Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành sâu sắc tới PGS.TS Trần Tiến Dũng giảng viên Bộ môn Ngoại - Sản, khoa Thú Y - Trường Đại học Nơng Nghiệp Hà Nội tận tình bảo, hướng dẫn suốt thời gian học tập giúp đỡ tơi hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành tới cô, chú, anh, chị em phịng Thí nghiệm Trọng điểm Tế bào Động vật, Viện chăn nuôi Quốc gia bạn bè đồng nghiệp, đặc biệt tới Thạc sĩ Nguyễn Thị Thoa nhiệt tình giúp đỡ, góp ý, tạo điều kiện cho tơi q trình thực để luận văn hồn thành Cuối tơi xin bày tỏ lịng cảm ơn tới gia đình, anh em, bạn bè, đồng nghiệp động viên, khích lệ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt q trình hồn thành luận văn Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 20 tháng 10 năm 2008 Học viên Phùng Minh Nguyệt ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục biểu đồ viii MỞ ĐẦU i 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu ý nghĩa 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tình hình nghiên cứu thụ tinh ống nghiệm nước 2.2 Đặc điểm sinh lý sinh dục bò 2.2.1 Chu kỳ động dục bò 2.2.2 Thần kinh thể dịch điều tiết hoạt động sinh sản bò 2.2.3 Cấu tạo buồng trứng tế bào trứng 2.3 Thu tế bào trứng bị 12 2.4 Ni tế bào trứng thành thục ống nghiệm 14 2.4.1 Môi trường nuôi thành thục tế bào trứng ống nghiệm 14 2.4.2 Đánh giá thành thục tế bào trứng nuôi ống nghiệm 16 2.5 Hoạt hoá tinh trùng 17 2.5.1 Khái niệm 17 2.5.2 Các kỹ thuật kiện toàn lực thụ tinh tinh trùng TTON 19 2.6 Sinh lý trình thụ tinh 20 2.6.1 Quá trình thụ tinh 20 2.6.2 Đặc điểm phôi giai đoạn đầu 22 iii 2.7 Tạo phôi tế bào trứng thu từ bị sống 23 2.8 Ni phơi ống nghiệm 25 2.9 Đông lạnh phôi 26 2.9.1 Cơ chế đông lạnh phôi 27 2.9.2 Những chất bảo vệ sinh học lạnh thông dụng 29 2.9.3 Phương pháp đông lạnh 31 2.9.4 Giải đông phôi 33 2.10 Ảnh hưởng mùa vụ đến khả sinh sản bò 34 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 36 3.1 Vật liệu nghiên cứu 36 3.2 Nội dung nghiên cứu 36 3.3 Phương pháp nghiên cứu 36 3.3.1 Thu tế bào trứng từ buồng trứng bò lò mổ 36 3.3.2 Ni tế bào trứng bị thành thục ống nghiệm 38 3.3.3 Hoạt hố kiện tồn lực thụ tinh tinh trùng 38 3.3.4 Nuôi hợp tử ống nghiệm 39 3.3.5 Đông lạnh giải đông phơi bị 40 3.3.6 Ni cấy in-vitro để đánh giá chất lượng phơi bị sau đơng lạnh giải đơng 44 3.4 Phương pháp xử lý số liệu 44 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 45 4.1 Kết thu tế bào trứng phân loại chất lượng tế bào trứng bò 45 4.1.1 Ảnh hưởng phương pháp thu trứng tới số lượng tế bào trứng bò thu 46 4.1.2 Ảnh hưởng mùa vụ thu trứng tới số lượng tế bào trứng bò thu 47 iv 4.1.3 Ảnh hưởng phương pháp thu trứng tới chất lượng tế bào trứng bò thu 49 4.1.4 Ảnh hưởng mùa vụ thu trứng tới chất lượng tế bào trứng bị thu 52 4.2 Kết ni tế bào trứng bò thành thục ống nghiệm 53 4.3 Kết thụ tinh ống nghiệm trứng bò 57 4.4 Kết nuôi hợp tử ống nghiệm 60 4.5 Kết đơng lạnh giải đơng phơi bị 66 4.5.1 Kết phân loại phơi bị trước đơng lạnh 67 4.5.2 Kết chất lượng phơi bị sau giải đông 69 4.6 Kết phát triển phôi bị sau giải đơng 74 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 78 5.1 Kết luận 78 5.2 Đề nghị 79 TÀI LIỆU THAM KHẢO 80 PHỤ LỤC 88 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT v OPU Ovum Pick Up B2 Menezo’s B2 medium BO Brackett and Oliphan BSA Bovine Serum Albumin CR1 Milieu de Rosekrans DMSO Dimethyl Sulfoxide DPBS Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline EGF Epidermal Growth Factor FCS Foetal Calf Serum FSH Follicle Stimulating Hormone GnRH Gonadotropin Releasing Hormone IVM In vitro Matured LH Luteining hormone OCO Cumulus- Oocyte Complex PBS Photphate Buffered Saline PCR Polymerase Chain Reaction TCM 199 Tissue Culture Medium 199 Vero Cellules de rein singe vert TTON Thụ tinh ống nghiệm vi DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1 Kết thu tế bào trứng bò từ lò mổ 45 Bảng 4.2 Ảnh hưởng phương pháp thu trứng tới số lượng tế bào trứng bò 46 Bảng 4.3 Ảnh hưởng mùa vụ thu trứng tới số lượng tế bào trứng bò 48 Bảng 4.4 Ảnh hưởng phương pháp thu tới chất lượng tế bào trứng bò 49 Bảng 4.5 Ảnh hưởng mùa vụ thu trứng tới chất lượng tế bào trứng bò 52 Bảng 4.6 Kết ni thành thục trứng bị ống nghiệm 54 Bảng 4.7 Ảnh hưởng chất lượng tế bào trứng bò tới tỷ lệ trứng thành thục 55 Bảng 4.8 Kết thụ tinh trứng bò ống nghiệm 57 Bảng 4.9 Ảnh hưởng chất lượng tế bào trứng bò đến kết thụ tinh ống nghiệm 58 Bảng 4.10 Kết nuôi hợp tử ống nghiệm 61 Bảng 4.11 Ảnh hưởng môi trường nuôi tới phát triển hợp tử 62 Bảng 4.12 Kết phân loại phơi bị sau thu hoạch 67 Bảng 4.13 Chất lượng phơi bị trước đơng lạnh 68 Bảng 4.14 Kết đánh giá chất lượng phôi sau giải đông 70 Bảng 4.15 Ảnh hưởng phương pháp đông lạnh đến chất lượng phôi giải đông 72 Bảng 4.16 Ảnh hưởng phương pháp đơng lạnh tới phát triển phơi bị sau đông lạnh-giải đông vii 75 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 4.1 Kết chất lượng trứng bò thu theo hai phương pháp giải phẫu nang trứng hút dịch nang trứng 50 Biểu đồ 4.2 Kết chất lượng trứng bò thu theo mùa vụ 53 Biểu đồ 4.3 Kết phát triển hợp tử môi trường nuôi cấy 63 Biểu đồ 4.4 Kết phát triển phơi bị sau giải đơng 76 viii MỞ ĐẦU 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ Cùng với bùng nổ dân số yêu cầu cấp thiết an ninh lương thực, thực phẩm Làm để tăng nhanh số lượng chất lượng thực phẩm đất đai dành cho trồng trọt chăn nuôi ngày bị thu hẹp? Một giải pháp để giải vấn đề áp dụng cơng nghệ sinh học đại vào sống Công nghệ phôi công nghệ sinh học đại, hiểu tổ hợp kỹ thuật sinh sản, di truyền, sinh học tế bào phân tử nhằm sử dụng hợp lý nguồn nguyên liệu mang thông tin di truyền Sự kết hợp ứng dụng kỹ thuật vào chăn ni giúp nâng cao suất sinh học vật nuôi, tạo động vật có tiềm di truyền cao phục vụ mục đính đặc biệt người Cơng nghệ phơi đồng thời góp phần bảo tồn đa dạng nguồn gen thông qua việc thành lập ngân hàng tế bào sống Mặt khác công nghệ phôi mở hàng loạt kỹ thuật thụ tinh ống nghiệm, xác định giới tính, nhân vơ tính, đơng lạnh phơi, ghép phơi, chuyển gen Thụ tinh ống nghiệm (TTON) trình kết hợp tinh trùng (giao tử đực) với tế bào trứng (giao tử cái) để tạo hợp tử ngồi thể mẹ (trong phịng thí nghiệm) mơi trường nhân tạo có điều kiện thích hợp giống thể mẹ nhiệt độ, độ ẩm, áp suất thẩm thấu Đây kỹ thuật nhằm tạo lượng phôi lớn để phục vụ nghiên cứu khác công nghệ phôi Trên giới, thụ tinh ống nghiệm nghiên cứu từ năm đầu kỷ trước thỏ đời kỹ thuật vào năm ... đến kết thụ tinh ống nghiệm trứng bò? ?? 1.2 MỤC TIÊU VÀ Ý NGHĨA Mục tiêu: - Xác định ảnh hưởng phương pháp khai thác, yếu tố mùa vụ đến kết thu tế bào trứng bò - Xác định ảnh hưởng môi trường nuôi. .. lượng tế bào trứng bò thu 46 4.1.2 Ảnh hưởng mùa vụ thu trứng tới số lượng tế bào trứng bò thu 47 iv 4.1.3 Ảnh hưởng phương pháp thu trứng tới chất lượng tế bào trứng bò thu 49 4.1.4 Ảnh hưởng mùa. .. trứng bò ống nghiệm 54 Bảng 4.7 Ảnh hưởng chất lượng tế bào trứng bò tới tỷ lệ trứng thành thục 55 Bảng 4.8 Kết thụ tinh trứng bò ống nghiệm 57 Bảng 4.9 Ảnh hưởng chất lượng tế bào trứng bò đến kết

Ngày đăng: 08/08/2013, 21:36

Xem thêm: [Luận văn]nghiên cứu ảnh hưởng của yếu tố mùa vụ, phương pháp khai thác đến kết quả thu tế bào trứng và môi trường nuôi cấy, đông lạnh đến kết quả thụ tinh ống nghiệm trứng bò , [Luận văn]nghiên cứu ảnh hưởng của yếu tố mùa vụ, phương pháp khai thác đến kết quả thu tế bào trứng và môi trường nuôi cấy, đông lạnh đến kết quả thụ tinh ống nghiệm trứng bò