Nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hóa học của cây mài gừng (dioscorea zingiberensis c h wright), họ củ nâu ( dioscoreaceae) ở quảng ngãi

118 343 0
Nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hóa học của cây mài gừng (dioscorea zingiberensis c h wright), họ củ nâu ( dioscoreaceae) ở quảng ngãi

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

BỘ GIÁO DỤC ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGÔ THANH MAI NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY MÀI GỪNG (Dioscorea zingiberensis C.H.Wright), HỌ CỦ NÂU (Dioscoreaceae) QUẢNG NGÃI LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC HÀ NỘI 2018 BỘ GIÁO DỤC ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGÔ THANH MAI NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY MÀI GỪNG (Dioscorea zingiberensis C.H.Wright), HỌ CỦ NÂU (Dioscoreaceae) QUẢNG NGÃI CHUYÊN NGÀNH: DƢỢC LIỆU - DƢỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 8720206 Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Hoàng Tuấn HÀ NỘI 2018 LỜI CẢM ƠN Trong q trình nghiên cứu hồn thành luận văn nhận đƣợc nhiều giúp đỡ quý báu thầy cô giáo, chuyên gia lĩnh vực đồng nghiệp gia đình Trƣớc hết, tơi xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu, phòng Sau Đại học, thầy giáo, kỹ thuật viên môn Dƣợc liệu, Dƣợc học cổ truyền Thực vật- Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho q trình học tập nghiên cứu Tiếp theo, tơi xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu cán đồng nghiệp Khoa Dƣợc trƣờng Cao đẳng Y tế Bắc Ninh tạo điều kiện cho yên tâm học tập hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Hồng Tuấn ngƣời thầy tận tình hƣớng dẫn, quan tâm bảo tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Tôi xin cám ơn PGS.TS Nguyễn Thị Kiều Anh - Viện Công nghệ Dƣợc phẩm Quốc gia PGS.TS Đỗ Thị Hà ThS Nguyễn Thị Thu, khoa Hóa thực vật - Viện Dƣợc liệu tận tình giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi nghiên cứu hoàn thành luận văn Xin chân thành cám ơn bạn tập thể chuyên ngành Dƣợc liệuDƣợc học cổ truyền lớp CH21 động viên, giúp đỡ tơi hồn thiện luận văn Cuối lời cảm ơn sâu săc nhất, muốn gửi tới gia đình, ngƣời thân bạn bè - ngƣời bên cạnh ủng hộ trình học tập nghiên cứu Bắc Ninh, ngày 30 tháng năm 2018 Ngô Thanh Mai MỤC LỤC Trang DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng TỔNG QUAN 1.1 Chi Dioscorea L 1.1.1 Vị trí phân loại 1.1.2 Đặc điểm thực vật phân bố 1.1.2.1 Đặc điểm thực vật 1.1.2.2 Phân bố 1.1.3 Các nghiên cứu phân loại thực vật chi Dioscorea L Việt Nam 1.1.4 Các nghiên cứu hóa học chi Dioscorea 1.1.5 Ứng dụng chi Dioscorea 1.1.5.1 Ứng dụng đời sống 1.1.5.2 Ứng dụng y học 1.2 Cây Mài gừng 1.2.1 Đặc điểm thực vật 1.2.2 Phân bố, sinh thái 1.2.3 Thành phần hóa học 10 1.3 Các loài Dioscorea dùng làm nguyên liệu chiết xuất diosgenin 10 1.4 Diosgenin 12 1.4.1 Công thức cấu tạo, tính chất lý, hóa học 12 1.4.2 Ứng dụng diosgenin 13 1.5 Các phƣơng pháp định lƣợng diosgenin 14 1.5.1 Phƣơng pháp cân 14 1.5.2 Phƣơng pháp đo quang 14 1.5.3 Phƣơng pháp sắc ký khí 15 1.5.4 Phƣơng pháp sắc ký lớp mỏng hiệu cao (HPTLC) 15 1.5.5 Phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 15 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 16 2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu 16 2.1.2 Hóa chất, thiết bị dùng nghiên cứu 16 2.1.2.1 Hóa chất 16 2.1.2.2 Dụng cụ 17 2.1.2.3 Thiết bị 17 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 2.2.1 Nghiên cứu thực vật 18 18 2.2.1.1 Đặc điểm hình thái 18 2.2.1.2 Nghiên cứu đặc điểm hiển vi 18 2.2.1.3 Giám định tên khoa học mẫu nghiên cứu 18 2.2.2 Nghiên cứu thành phần hóa học 19 2.2.2.1 Định tính số hợp chất hữu dƣợc liệu phản ứng hóa học 2.2.2.2 Sắc ký lớp mỏng 19 19 2.2.2.3 Chiết xuất, phân lập hợp chất tinh khiết thân rễ Mài gừng 19 2.2.3.4 Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập đƣợc 2.2.4 Định lƣợng diosgenin thân rễ Mài gừng Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 19 20 22 3.1 Đặc điểm thực vật, dƣợc liệu 22 3.1.1 Mô tả đặc điểm thực vật, đặc điểm dƣợc liệu giám định tên khoa học Mài gừng 22 3.1.1.1 Mô tả đặc điểm thực vật 22 3.1.1.2 Giám định tên khoa học 24 3.1.1.3 Mơ tả phận dùng 26 3.1.2 Hình ảnh, đặc điểm vi phẫu lá, cuống lá, thân, thân rễ Mài gừng 26 3.1.2.1 Đặc điểm vi phẫu 26 3.1.2.2 Đặc điểm vi phẫu cuống 27 3.1.2.3 Đặc điểm vi phẫu thân 29 3.1.2.4 Đặc điểm vi phẫu thân rễ 30 3.1.3 Đặc điểm bột lá, thân, thân rễ Mài gừng 31 3.1.3.1 Đặc điểm bột 31 3.1.3.2 Đặc điểm bột thân 32 3.1.3.3 Đặc điểm bột thân rễ 32 3.2 Thành phần hóa học 33 3.2.1 Định tính nhóm chất hữu phản ứng hóa học 33 3.2.2 Định tính sắc ký lớp mỏng 39 3.2.3 Chiết xuất, phân lập hợp chất saponin có thân rễ Mài gừng 40 3.2.4 Xác định cấu trúc hợp chất 43 3.3 Định lƣợng diosgenin thân rễ Mài gừng 54 3.3.1 Khảo sát điều kiện sắc ký 54 3.3.1.1 Lựa chọn cột sắc ký 54 3.3.1.2 Lựa chọn tốc độ dòng 54 3.3.1.3 Lựa chọn pha động 54 3.3.2 Thẩm định phƣơng pháp định lƣợng diosgenin thân rễ Mài gừng theo tiêu chuẩn AOAC 55 3.3.2.1 Độ thích hợp hệ thống 55 3.3.2.2 Độ chọn lọc 56 3.3.2.3 Khoảng tuyến tính 58 3.3.2.4 Độ 59 3.3.2.5 Độ xác 60 3.3.2.6 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lƣợng (LOQ) 3.3.3 Định lƣợng diosgenin mẫu thân rễ Mài gừng 62 63 Chƣơng BÀN LUẬN 64 4.1 Về thực vật 64 4.2 Về hóa học 65 4.3 Về định lƣợng diosgenin thân rễ Mài gừng 69 KẾT LUẬN 72 KIẾN NGHỊ 73 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT 13 C-NMR : Carbon Nuclear Magnetic Resonance 16-DPA : 16-dehydro pregnennolon acetat : Proton Nuclear Magnetic Resonance H-NMR aff : affinis APCI-MS : Atmospheric pressure chemical ionization-Mass spectrometry BuOH : Butanol d : doublet D : Dioscorea DEPT : Detortionless enhancement by polarisationtrasfer EtOAc : Ethyl acetat EtOH : Ethanol HMBC : Heteronuclear multilpe bond cerelation HPLC : High performance liquid chromatography HPTLC : High performance thin layer chromatography HSQC : Heteronuclear single quantum corelation J : Hằng số tƣơng tác (đơn vị Hz) LOD : Limit of detection LOQ : Limit of quantitation m/z : Khối lƣợng/điện tích ion NMR : Nuclear Magnetic Resonance Rf : Hệ số di chuyển RSD : Relative standard deviation (Độ lệch chuẩn tƣơng đối) s : singlet S/N : Signal to noise ratio (Tỷ lệ tín hiệu nhiễu) SKLM : Sắc ký lớp mỏng STT : Số thứ tự UV-VIS : Ultra violet-Visible v/v : Thể tích/ thể tích δ : Độ dịch chuyển hóa học (đơn vị ppm) ν : Số sóng (cm-1) DANH MỤC CÁC BẢNG Tên bảng Trang Bảng 1.1 Số lƣợng loài chi Dioscorea L Việt Nam Bảng 1.2 Một số loài Dioscocrea L Việt Nam Bảng 1.3 Các loài Dioscorea quan trọng đƣợc sử dụng để sản xuất diosgenin công nghiệp 11 Bảng 3.1 So sánh đặc điểm thực vật Mài gừng với lồi có đặc điểm gần thuộc chi Dioscorea L., họ Củ nâu (Dioscoreaceae) 24 Bảng 3.2 Kết định tính nhóm chất thân rễ Mài gừng 38 Bảng 3.3 Hàm lƣợng cao phân đoạn chiết xuất từ thân rễ Mài gừng 42 Bảng 3.4 Phổ 1D-NMR 2D1 dioscin 48 Bảng 3.5 Phổ 1D-NMR 2E1 deltonin 53 Bảng 3.6 Khảo sát độ thích hợp hệ thống sắc ký 56 Bảng 3.7 Kết đo diện tích pic mẫu diosgenin chuẩn 58 Bảng 3.8 Kết khảo sát độ 60 Bảng 3.9 Kết khảo sát độ lặp lại phƣơng pháp 61 Bảng 3.10 Kết khảo sát độ xác trung gian 62 Bảng 3.11 Kết xác định hàm lƣợng diosgenin mẫu dƣợc liệu Mài gừng 63 Phụ lục 2.7 Phổ HSQC (500/125 MHz, pyridine-d5) PHỤ LỤC 3: DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT 2E1 Hợp chất 2E1 Phụ lục 3.1 Phổ IR Phụ lục 3.2 Phổ APCI-MS Phụ lục 3.3 Phổ 1H-NMR (500 MHz, pyridine-d5) Phụ lục 3.4 Phổ 13C-NMR (125 MHz, pyridine-d5) Phụ lục 3.5 Phổ DEPT Phụ lục 3.6 Phổ HMBC (500/125 MHz, pyridine-d5) Phụ lục 3.7 Phổ HSQC (500/125 MHz, pyridine-d5) Phụ lục 3.1 Phổ IR Phụ lục 3.2 Phổ APCI-MS Phụ lục 3.3 Phổ 1H-NMR (500 MHz, pyridine-d5) Phụ lục 3.4 Phổ 13C-NMR (125 MHz, pyridine-d5) Phụ lục 3.5 Phổ DEPT Phụ lục 3.6 Phổ HMBC (500/125 MHz, pyridine-d5) Phụ lục 3.7 Phổ HSQC (500/125 MHz, pyridine-d5) PHỤ LỤC SẮC KÝ ĐỒ HPLC Phụ lục 4.1 Sắc ký đồ HPLC (độ thích hợp hệ thống) Phụ lục 4.2 Sắc ký đồ HPLC (khoảng tuyến tính) Phụ lục 4.3 Sắc ký đồ HPLC (độ đúng) Phụ lục 4.4 Sắc ký đồ HPLC (độ lặp lại) Phụ lục 4.1 Sắc ký đồ HPLC (độ thích hợp hệ thống) Phụ lục 4.2 Sắc ký đồ HPLC (Khoảng tuyến tính) Sắc ký đồ dung dịch diosgenin chuẩn 0,1247 mg/ml Sắc ký đồ dung dịch diosgenin chuẩn 0,1871 mg/ml Sắc ký đồ dung dịch diosgenin chuẩn 0,2495 mg/ml Sắc ký đồ dung dịch diosgenin chuẩn 0,3119 mg/ml Sắc ký đồ dung dịch diosgenin chuẩn 0,3742 mg/ml Sắc ký đồ dung dịch diosgenin chuẩn 0,4366 mg/ml Phụ lục 4.3 Sắc ký đồ HPLC (độ đúng) Sắc ký đồ mẫu thử thêm chuẩn 110% Sắc ký đồ mẫu thử thêm chuẩn 120% Sắc ký đồ mẫu thử thêm chuẩn 130% Phụ lục 4.4 Sắc ký đồ HPLC (độ lặp lại) Sắc ký đồ mẫu thử Sắc ký đồ mẫu thử Sắc ký đồ mẫu thử Sắc ký đồ mẫu thử Sắc ký đồ mẫu thử Sắc ký đồ mẫu thử ... vậy, th c đề tài: Nghiên c u đ c điểm th c vật thành phần h a h c Mài gừng (Dioscorea zingiberensis C. H. Wright), h C nâu (Dioscoreaceae) Quảng Ngãi với m c tiêu: - Nghiên c u đ c điểm th c vật, ... D C VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI H C DƢ C H NỘI NGÔ THANH MAI NGHIÊN C U Đ C ĐIỂM TH C VẬT VÀ THÀNH PHẦN H A H C CỦA C Y MÀI GỪNG (Dioscorea zingiberensis C. H. Wright), H C NÂU (Dioscoreaceae). .. đến thành phần saponin rễ c thành phần thƣờng đƣ c coi hoạt chất C c nghiên c u mặt h a h c h C nâu trƣ c cho thấy c saponin steroid [48], [56], [63] C c cơng trình nghiên c u nhà khoa h c

Ngày đăng: 14/06/2018, 12:20

Từ khóa liên quan

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan