BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH KHOA NƠNG HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƯỞNG THỰC VẬT VÀ MỘT SỐ CHẤT HỮU CƠ TRONG NUÔI CẤY IN VITRO SÂM NGỌC LINH (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) Sinh viên thực hiện: THÂN THỊ MINH PHƯƠNG Ngành: NƠNG HỌC Niên Khóa: 2007 – 2011 TP Hồ Chí Minh, tháng 08/2011   KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƯỞNG THỰC VẬT VÀ MỘT SỐ CHẤT HỮU CƠ TRONG NUÔI CẤY IN VITRO SÂM NGỌC LINH (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) Tác giả Thân Thị Minh Phương Khóa luận đệ trình để đáp ứng yêu cầu cấp Kỹ sư ngành Nông học GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN: TS Phạm Thị Minh Tâm Th.S Hà Thị Loan TP Hồ Chí Minh, tháng 08/2011 i   LỜI CẢM ƠN Con xin thành kính cơng ơn sinh thành, giáo dưỡng bố mẹ nuôi khôn lớn Anh chị em, người thân gia đình động viên tinh thần, hỗ trợ tạo điều kiện tốt cho học tập Chân thành cảm ơn: O Ban Giám hiệu trường đại học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh, Ban chủ nhiệm khoa Nơng học quan tâm giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình học tập trường O Q thầy khoa Nơng học tận tình dạy bảo kiến thức quý báu suốt trình học tập O Anh Quân, chị Thảo, chị Vy (các kỹ thuật viên Trung tâm Công Nghệ Sinh Học Tp.HCM) tận tình giúp đỡ tạo điều kiện tốt cho tơi suốt q trình thực đề tài O Tập thể lớp Nông học 33 bạn bè giúp đỡ động viên thời gian học tập thực đề tài O Anh Phạm Thanh – Trung tâm Chuyển giao cơng nghệ Kon Tum tận tình giúp đỡ tơi thời gian thực đề tài Em xin gởi lời tri ân sâu sắc đến cô Phạm Thị Minh Tâm Th.S Hà Thị Loan (Trung tâm Công nghệ Sinh Học Tp.HCM) tận tình hướng dẫn giúp đỡ em hồn thành khóa luận Tp HCM, tháng 08 năm 2011 THÂN THỊ MINH PHƯƠNG ii   TÓM TẮT Thân Thị Minh Phương, Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh, tháng 08 năm 2011 Đề tài “Khảo sát ảnh hưởng số chất điều hòa sinh trưởng thực vật số chất hữu nuôi cấy in vitro sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.)” Giáo viên hướng dẫn: TS Phạm Thị Minh Tâm Th.S Hà Thị Loan Đề tài thực Phòng Cơng nghệ Sinh học Thực vật thuộc Trung tâm Cơng nghệ Sinh học thành phố Hồ Chí Minh từ tháng 2/2011 đến tháng 6/2011.Với mục tiêu tìm nồng độ thích hợp chất điều hòa sinh trưởng thực vật bổ sung vào môi trường để tạo mô sẹo, tăng trưởng phôi, tái sinh chồi tăng trưởng chồi sâm Ngọc Linh in vitro Đề tài gồm bốn thí nghiệm: Thí nghiệm 1: Nghiên cứu ảnh hưởng 2,4-D TDZ đến khả tạo mô sẹo từ cuống sâm Ngọc Linh Thí nghiệm 2: Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BA kết hợp với nồng độ NAA bổ sung vào môi trường nuôi cấy đến tăng trưởng phôi sâm Ngọc Linh Thí nghiệm 3: Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BA kết hợp với nồng độ NAA đến tái sinh chồi từ đoạn thân sâm Ngọc Linh Thí nghiệm 4: Nghiên cứu ảnh hưởng thành phần hữu gồm khoai tây nước dừa đến tăng trưởng chồi sâm Ngọc Linh Các thí nghiệm bố trí theo kiểu hồn tồn ngẫu nhiên Kết đạt sau: Thí nghiệm 1: Đối với cuống sâm Ngọc Linh, 2,4-D có tác dụng tạo mơ sẹo tốt TDZ Mơi trường MS có bổ sung mg 2,4-D/l MS tạo mô sẹo tốt nhất, sau 30 ngày ni cấy mơ sẹo tạo có đường kính 15,33 mm trọng lượng tươi 441,67 mg Thí nghiệm 2: Trong mơi trường MS có bổ sung mg BA/l 0,5 mg NAA/l tốt cho tăng trưởng phôi sâm Ngọc Linh in vitro Sau 60 ngày ni cấy, đường kính phơi đạt 22,00 mm tăng 2,75 lần sau 60 ngày nuôi cấy, trọng lượng phôi đạt 833,33 mg tăng 3,17 lần sau 60 ngày ni cấy iii   Thí nghiệm 3: Trong hầu hết tiêu theo dõi, mơi trường MS có bổ sung thêm mg BA/l khơng có NAA tốt cho tái sinh chồi sâm Ngọc Linh in vitro Sau 60 ngày nuôi cấy chồi tái sinh có chiều cao 25,33 mm đạt trọng lượng tươi 331,67 mg Thí nghiệm 4: Thành phần hữu nước dừa khoai tây có ảnh hưởng tốt đến tăng trưởng chồi sâm Ngọc Linh Ở nồng độ 10 ml nước dừa/l MS tốt nhất, sau 30 ngày nuôi cấy, chồi đạt trọng lượng tươi 225,00 mg tăng 2,81 lần sau 30 ngày nuôi cấy iv   MỤC LỤC Nội dung trang Trang tựa i Lời cảm ơn ii Tóm tắt iii Mục lục v Danh sách chữ viết tắt viii Danh sách bảng ix Danh sách hình ảnh viii Chương MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích, yêu cầu 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu 1.3 Giới hạn đề tài Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu tổng quan sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 2.1.1 Phân loại sâm 2.1.2 Nguồn gốc, phân bố sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 2.1.3 Đặc điểm hình thái sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 2.1.4 Đặc điểm sinh thái nhân sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 2.1.5 Giá trị dược liệu giá trị kinh tế sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 2.2 Tình hình trồng sâm Ngọc Linh Việt Nam 2.3 Một số nghiên cứu nuôi cấy in vitro sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 10 v   2.3.1 Sơ lược phương pháp nuôi cấy in vitro 10 2.3.2 Các nghiên cứu nuôi cấy in vitro sâm Ngọc Linh 13 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Nội dung nghiên cứu 16 3.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 16 3.3 Vật liệu nghiên cứu 16 3.4 Các thí nghiệm tiến hành 18 3.4.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng 2,4-D TDZ đến tạo mô sẹo từ cuống sâm Ngọc Linh in vitro 18 3.4.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BA kết hợp với nồng độ NAA đến tăng trưởng phôi sâm Ngọc Linh in vitro 19 3.4.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BA kết hợp với nồng độ NAA đến tái sinh chồi sâm Ngọc Linh in vitro 21 3.4.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ khoai tây, nước dừa đến tăng trưởng chồi sâm Ngọc Linh in vitro 23 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng 2,4-D TDZ đến tạo mô sẹo cuống sâm Ngọc Linh in vitro 25 4.1.1 Ảnh hưởng 2,4-D TDZ đến cảm ứng tạo mô sẹo từ cuống sâm Ngọc Linh 25 4.1.2 Ảnh hưởng 2,4-D TDZ đến trọng lượng đường kính mơ sẹo sâm Ngọc Linh 26 4.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BA kết hợp với nồng độ NAA đến tăng trưởng phôi sâm Ngọc Linh in vitro 28 4.2.1 Ảnh hưởng nồng độ BA kết hợp với nồng độ NAA đến tăng đường kính phơi sâm Ngọc Linh 28 vi   4.2.2 Ảnh hưởng nồng độ BA kết hợp với nồng độ NAA đến trọng lượng tươi phôi sâm Ngọc Linh 29 4.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BA kết hợp với nồng độ NAA đến tái sinh chồi sâm Ngọc Linh in vitro 31 4.3.1 Ảnh hưởng nồng độ BA kết hợp với NAA đến tái sinh chồi sâm Ngọc Linh in vitro qua giai đoạn 31 4.3.2 Ảnh hưởng nồng độ BA kết hợp với nồng độ NAA đến số lá/chồi tái sinh sâm Ngọc Linh in vitro 34 4.3.3 Ảnh hưởng nồng độ BA kết hợp với nồng độ NAA đến chiều cao chồi tái sinh trọng lượng tươi chồi tái sinh sâm Ngọc Linh in vitro 36 4.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ khoai tây, nước dừa đến tăng trưởng chồi sâm Ngọc Linh in vitro 39 4.4.1 Ảnh hưởng nồng độ khoai tây, nước dừa đến tăng chiều cao chồi trọng lượng chồi sâm Ngọc Linh 39 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận 42 5.2 Đề nghị 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO 43 PHỤ LỤC 1: GIÁ TRỊ CHUYỂN ĐỔI SỐ LIỆU 46 PHỤ LỤC 2: KẾT QUẢ XỬ LÝ THỐNG KÊ 49 vii   DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt Viết đầy đủ 2,4-D : 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid BA : – Benzyladenine CV : Coefficient of Variation (Hệ số biến động) CW : Coconut Water EDTA : Ethylene Diamino Tetra Acetic Acid IAA : Indole-3-Acetic Acid MS : môi trường Murashige Skoog (1962) NAA : α – napthylacetic acid NSC : Ngày sau cấy NT : Nghiệm thức PO : Potato TB : Trung bình TDZ : N-phenyl1-1,2,3-thiadiazol-5ylurea UV : Ultra-Violet viii   DANH SÁCH CÁC BẢNG Nội dung trang Bảng 3.1 Môi trường MS (Murashige Skoog, 1962) 17 Bảng 4.1 Tỷ lệ tạo mô sẹo sâm Ngọc Linh qua giai đoạn 25 Bảng 4.2 Đường kính trọng lượng mơ sẹo sâm Ngọc Linh sau 30 ngày nuôi cấy 26 Bảng 4.3 Đường kính phơi sâm Ngọc Linh sau 60 ngày nuôi cấy 28 Bảng 4.4 Trọng lượng phơi trung bình sâm Ngọc Linh sau 60 ngày nuôi cấy 30 Bảng 4.5 Tỷ lệ mẫu tái sinh chồi sâm Ngọc Linh in vitro qua giai đoạn nuôi cấy 32 Bảng 4.6 Số trung bình/chồi tái sinh sâm Ngọc Linh qua giai đoạn nuôi cấy 35 Bảng 4.7 Chiều cao chồi tái sinh chồi tái sinh sâm Ngọc Linh sau 60 ngày nuôi cấy 37 Bảng 4.8 Trọng lượng tươi chồi tái sinh sâm Ngọc Linh sau 60 ngày nuôi cấy 38 Bảng 4.9 Chiều cao chồi trọng lượng chồi sâm Ngọc Linh sau 30 ngày nuôi cấy 39    ix   B B B B B A A A C C C 0.81650 BA2NAA1 0.81423 BA2NAA3 0.80960 BA1NAA3 0.70710 BA2NAA2 0.70710 BA1 TỶ LỆ TÁI SINH CHỒI SÂM NGỌC LINH 30 NSC Class Levels Values BA 2 NAA 0.1 0.5 Source DF Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F Model 0.09628018 0.01375431 67.83 F BA NAA BA*NAA 3 0.00370265 0.04114713 0.05143040 0.00370265 0.01371571 0.01714347 18.26 67.64 84.54 0.0006